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1.
背景:富血小板血浆是经过特殊方法提取的血小板含量丰富的血浆,相较普通血清含有更丰富的细胞因子,如血小板衍生因子、转化生长因子β、血管内皮生长因子等。 目的:观察富血小板血浆对成骨诱导人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响,拟探讨促进人骨髓间充质干细胞的增殖与诱导成骨细胞的培养方法。 设计、时间及地点:配对样本对比观察,于2007-03/2008-03在中山大学组织工程实验室完成。 对象:18名健康志愿者,男12名,女6名,平均年龄27.5岁。随机分为3组:富血小板血浆组、胎牛血清组、无血清对照组,每组6人。 方法:抽取18名健康志愿者自体外周静脉血获取富血小板血浆。采用密度梯度离心法获取健康志愿者骨髓间充质干细胞,常规原代培养,传代诱导培养时根据分组情况,分别采用10%AB型血清、10%自体富血小板血浆与无血清,配比高糖DMEM培养基、50 mg/L抗坏血酸、10-8 mol/L地塞米松、10-3 mol/L β-甘油磷酸钠。 主要观察指标:倒置相差显微镜、扫描电镜观察各组细胞形态,MTT法检测细胞增殖情况,细胞碱性磷酸酶活性、骨钙素水平。 结果:3组细胞均在接种后12~24 h开始贴壁,并由圆形逐步变化为梭型、多角形、有多个突起的不规则形状等。细胞传代诱导培养后,富血小板血浆组与胎牛血清组细胞生长迅速,明显快于无血清对照组(P < 0.05)。从传代培养第2、4、6代的细胞生长看,随着培养时间的延长富血小板血浆组细胞增殖明显快于胎牛血清组。3组细胞碱性磷酸酶活性与骨钙素随诱导时间的延长而增高,培养第3,6,9,12天胎牛血清组碱性磷酸酶活性较富血小板血浆组低,培养第15天两组无明显差异。培养第3,6,9天富血小板血浆组细胞内骨钙素含量与胎牛血清组无明显差别,12 d后明显高于胎牛血清组。无血清对照组碱性磷酸酶活性及骨钙素含量较富血小板血浆组变化程度明显减小,并且各时间点碱性磷酸酶活性与骨钙素含量均低于富血小板血浆组(P < 0.01)。 结论:自体富血小板血浆能够有效加快人骨髓间充质干细胞的增殖,并能有效促进诱导培养的人骨髓间充质干细胞成骨特性表达。  相似文献   

2.
背景:富血小板血浆内含多种高浓度的生长因子,具有促进新骨生成,加速愈合的作用,对牵张成骨的作用尚无公识性结论。 目的:观察自体富血小板血浆对兔上颌骨牵张成骨的影响。 设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/08在中山大学北校区何母实验楼生理实验室完成。 材料:3~5月龄健康家兔16只,雌雄各半,体质量1.4~1.7 kg,随机分为实验组和对照组,每组8只。自制上切牙带环、外置式前牵引面具、牵引橡皮圈。凝结剂由1 000 U牛凝血酶溶于1 mL 100 g/L 氯化钙制成。 方法:分别在家兔左侧前颌缝的两侧置入钛钉(直径1.5 mm),戴自制前牵引装置,试验组在牵张开始时,注射V(富血小板血浆)∶V(凝结剂)= 9∶1混合的凝胶样物质至左侧前颌缝内。两组分别持续牵引1周和3周,每个时间点4只家兔。 主要观察指标:牵引结束后测量骨缝两侧钛钉间距离的增加值以及组织学观察结果。 结果:对照组和试验组家兔上颌均向前移位。同对照组相比,实验组骨缝标志钉间距离增加值较大,新骨生成与矿化较快,血管分布较多,牵张间隙中骨小梁较为粗壮和成熟。 结论:富血小板血浆有助于骨组织再生,对兔上颌牵张成骨具有促进作用。  相似文献   

3.
背景:近年来的研究发现,结合组织工程技术利用经诱导转化的骨髓基质干细胞能成功地在动物体内再生出骨组织,并在大型哺乳动物负重骨缺损的修复实验中取得了较好的修复效果。 目的:观察富血小板血浆诱导培养人骨髓基质干细胞在体内的成骨特性,探讨采用富血小板血浆诱导培养的人骨髓基质干细胞与珊瑚羟基磷灰石材料体内异位成骨的可行性。 设计、时间及地点:配对样本观察,于2007-10/2008-04在中山大学组织工程实验室完成。 材料:4周龄BALB/C裸鼠14只,体质量22~24 g,麻醉后将裸鼠两侧股部切开,于股部肌间隙内制成肌袋模型。 方法:14只裸鼠左侧肌袋内植入珊瑚羟基磷灰石复合富血小板血诱导培养的人骨髓基质干细胞,作为实验组;右侧背部肌袋内植入单纯珊瑚羟基磷灰石材料为对照组。 主要观察指标:分别于植入后4,8,12周对比观察两组裸鼠活动及进食情况;X射线平片观察阻射率;苏木精-伊红染色观察骨形成情况。 结果:14只裸鼠均进入结果分析。①植入材料后裸鼠活动及进食均正常,伤口愈合良好。材料随植入时间的延长无明显吸收,而材料周围的肌肉组织等软组织由外向内逐渐长入材料孔隙内有所增多。②随时间延长两组X射线平片阻射影像密度逐步增加。植入材料后4,8,12周实验组与对照组相比,差异有非常显著性意义(P < 0.01)。③植入材料后4周,实验组可见珊瑚羟基磷灰石表面有细胞生长,孔隙内有结缔组织长入;对照组仅见珊瑚羟基磷灰石表面有细胞生长。8周时珊瑚羟基磷灰石表面有新生骨形成,孔隙内和孔隙边缘可见骨样组织沉积和少量软骨样组织形成;对照组仅见少量纤维结缔组织长入。12周时珊瑚羟基磷灰石材料表面有较多成熟编织骨形成,部分区域可见髓腔样结构形成,并有血管长入;对照组仍未见新骨及骨样组织形成。 结论:富血小板血浆诱导培养人骨髓基质干细胞与珊瑚羟基磷灰石材料在裸鼠体内能够良好的成骨,随时间的延长,成骨特性越明显;体内采用肌袋包裹的方法能有效增加血运及促进组织工程骨血管化生成,促进成骨。  相似文献   

4.
背景:随着富血小板血浆(PRP)技术逐渐向临床应用的转化,其应用范围变得越来越广泛。 目的:为了避免误解和误用,有必要对PRP分类等相关概念和存在问题加以说明和论述,使其制备和应用技术等更加清晰和明确。 方法:以platelet rich plasma和preparation为检索词,检索PubMed数据库(1995/2010-09),文献检索语种限制为英语。将近年发表的针对性强的文章纳入研究范围,同一领域的文献则选择近期发表或权威杂志的文章。排除与富血小板血浆相关性不强、以及内容重复、陈旧的文献。结合自身的研究经验和纳入排除标准,对查阅到的最新研究成果详细分析并加以总结概括。 结果与结论:初次检索到156篇文献,剔除不合入选标准的文献,最终将30篇文献纳入研究。根据所含白细胞的多少可以将PRP分为贫白细胞的PRP和富白细胞的PRP;根据应用形式又可以分为未激活PRP和激活的PRP,后者又可以分为PRP凝胶和PRP释放物。被视为第二代血小板浓缩物的富血小板纤维蛋白与PRP都含有高浓度的血小板,但两者在制备方法,凝胶形成方式等方面有根本的区别。由于其安全性和易于制备,PRP在医学领域的应用将会越来越多,但临床应用还要保持谨慎,因为PRP在多个方面还缺乏相关研究。  相似文献   

5.
富血小板血浆是自体血离心后的产物,目前已广泛用于整形外科和口腔颌面外科。近年来研究发现富血小板血浆可以促进骨再生,血管发生,软组织修复以及和干细胞复合用于骨科领域和组织工程,这使得富血小板血浆成为热门的研究课题。另有报道富血小板血浆具有促进难愈合伤口的作用。文章简要叙述了富血小板血浆的主要组成成分、临床应用、对骨愈合和软组织修复等方面的作用机制以及富血小板血浆的最新研究进展,并讨论其目前临床应用上主要存在的问题。  相似文献   

6.
背景:用于修复骨缺损的方法有直接植入、复合细胞植入以及加入生长因子植入。近年来,复合细胞植入和加入生长因子植入的研究受到比较广泛的关注。 目的:观察复合骨髓间充质干细胞和富血小板血浆的煅烧骨修复颌骨缺损的作用。 设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-04在青岛大学医学院附属医院中心实验室及口腔研究室完成。 材料:取成年牛长骨骨骺端,经脱脂、脱蛋白、煅烧处理后制得煅烧骨。将第3代的骨髓间充质干细胞悬液加到煅烧骨上制备煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体。将富血小板血浆因子滴加到将要植入的煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体上,制得含富血小板血浆因子的煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体。 方法:用牙钻在Wistar大鼠左侧下颌骨下缘备出1.0 cm×0.8 cm大小缺损,将30只大鼠随机分为3组,每组10只。对照组:将煅烧骨直接植入大鼠下颌骨缺损中。复合骨髓间充质干细胞组:将煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体植入大鼠下颌骨缺损中。复合骨髓间充质干细胞+富血小板血浆组:将含富血小板血浆因子的煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体植入大鼠下颌骨缺损中。 主要观察指标:观察各组煅烧骨在4,8,12周的成骨情况。 结果:复合骨髓间充质干细胞+富血小板血浆组煅烧骨在4,8,12周3个时间点的成骨情况明显优于对照组煅烧骨及复合骨髓间充质干细胞组煅烧骨(P < 0.01),对照组和复合骨髓间充质干细胞组之间的成骨情况差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论:复合骨髓间充质干细胞和富血小板血浆的煅烧骨可以促进下颌骨缺损修复,增加血管化与骨化。  相似文献   

7.
背景:已有研究发现富血小板血浆可以影响骨髓间充质干细胞和脂肪干细胞的生长和分化。 目的: 观察富血小板血浆对体外培养的骨骼肌干细胞增殖与诱导成骨的影响,探讨富血小板血浆影响骨骼肌干细胞的机制。 设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-06/10在上海交通大学附属第六人民医院中心实验室完成。 材料:普通级新西兰大白兔9只,体质量2.5~3 kg,年龄1岁左右,雌雄不限。 方法:取兔右后肢比目鱼肌体外培养新西兰大白兔骨骼肌干细胞。取兔耳中央动脉血,经离心处理后制备富血小板血浆。将细胞分为实验组与对照组,实验组以含12.5%自体富血小板血浆的条件培养液干预,对照组不进行富血小板血浆干预。 主要观察指标:①细胞形态学观察。②以四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性。③以碱性磷酸酶钙钴法染色、碱性磷酸酶活性测定、茜素红染色和骨钙素免疫荧光染色检测细胞成骨活性。 结果:四甲基偶氮唑盐法显示富血小板血浆诱导实验组较对照组增殖明显(P < 0.01);碱性磷酸酶活性较对照组增高明显(P < 0.01)。富血小板血浆诱导实验组碱性磷酸酶染色阳性,骨钙素免疫荧光染色阳性,茜素红染色可见钙结节形成。 结论: 富血小板血浆对体外培养的骨骼肌干细胞增殖与成骨分化活性具有显著的促进作用。  相似文献   

8.
背景:富血小板血浆中的多种生长因子及带血管筋膜是否具有促进骨再生及血管化作用尚在争论之中。 目的:拟从组织影像学角度评价富血小板血浆及带血管筋膜对骨髓基质干细胞/脱钙骨基质复合的组织工程骨血管化作用效果。 设计、时间及地点:单一样本观察及动物同体对照实验,于2004-10/2007-11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。 材料:11~12月龄健康杂种犬12 只,体质量20~25 kg,雌雄各半。 方法:①采用密度梯度离心法从犬骨髓中分离骨髓基质干细胞,体外贴壁培养扩增、成骨诱导培养。取杂种犬的股骨制备脱钙骨基质,并与骨髓基质干细胞复合。②将每只犬的背部分为4个区,A,B区,植入加富血小板血浆的骨髓基质干细胞/脱钙骨基质复合体,C,D区,仅植入骨髓基质干细胞/脱钙骨基质复合体。A,C区植入物用背阔肌带血管肌筋膜包裹;B,D区植入物用背部不带血管的浅筋膜包裹。分别在4,8,12周各取4只,雌雄各半,麻醉后处死取标本。 主要观察指标:①采用倒置相差显微镜观察骨髓基质干细胞形态,四甲基偶氮唑盐法测定细胞生长曲线。②行改良钙钴法碱性磷酸酶染色,Von Kossa法、茜素红法,钙结节染色观察诱导成骨细胞形态特征。③应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察复合体的结构。④行大体标本、X射线数字影像及组织学观察评价。 结果:①诱导成骨分化的骨髓基质干细胞分泌的碱性磷酸酶及钙结节染色均呈阳性。②骨髓基质干细胞和成骨诱导细胞的生长曲线呈典型的S形。③同种异体脱钙骨基质与骨髓基质干细胞复合培养后,细胞上架率高,生长状态好,增殖迅速,能分泌大量细胞外基质。④各时间点A,B,C区在成骨的骨量、骨光学密度、血管化程度等方面均明显优于D组(P < 0.05)。 结论:经组织影像学观察证实,富血小板血浆和带血管肌筋膜均能促进组织工程骨的成骨和血管化,且两者具有协同作用。  相似文献   

9.
背景:富血小板血浆能否促进骨组织的修复再生存在一定的争议。目的:研究富血小板血浆/凝胶对拔牙窝骨愈合过程中新骨形成和骨量保持的可能调节作用,探讨富血小板血浆/凝胶与骨愈合的相互关系。方法:通过拔牙建立Beagle犬拔牙窝骨缺损模型,同期在拔牙窝导入富血小板血浆或复血小板凝胶,并设计对照组。术后2,4,8,12周分别进行大体观察、放射影像学检查、三维CT平扫+重建、组织学检查拔牙窝颊舌侧牙槽嵴高度差、CT值以及新生骨面积。结果与结论:与富血小板血浆组和对照组比较,影像学结果表明富血小板凝胶组在第2,4,8周新骨形成的面积最大(P < 0.01);组织学结果表明富血小板凝胶组在第2,4周新骨形成面积最大(P < 0.05);在所有时间点上富血小板凝胶组颊舌侧牙槽嵴高度差值最小(P < 0.05)。在第12周,富血小板凝胶组颊舌侧牙槽嵴高度仍有2 mm差值。提示,富血小板凝胶具有促进牙槽窝早期愈合的能力,但其单独使用时促进牙槽窝骨量保持的效能有限。  相似文献   

10.
背景:富血小板血浆中含有大量骨再生所需的生长因子,且各生长因子的比例是机体自身形成的,具有良好的协同作用。 目的:探讨富血小板血浆体外诱导犬骨髓间充质干细胞成骨的效果。 设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-02在中南大学湘雅医院中心实验室完成。 材料:健康12月龄雄性比格犬,由中南大学湘雅医学院实验动物部提供。 方法:收集第3代犬骨髓间充质干细胞,分为4组:对照组加入标准培养基;成骨诱导培养基组向培养板孔内加入含胎牛血清、地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C的高糖DMEM培养基;富血小板血浆组根据预实验结果,向培养板内加入含体积分数为6.25%富血小板血浆的低糖DMEM培养基;联合组向培养板内加入含地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C、体积分数为6.25%富血小板血浆的高糖DMEM培养基。 主要观察指标:细胞内碱性磷酸酶活性,免疫细胞化学染色检测Ⅰ型胶原的表达,改进Von Kossa染色标记钙结节形成情况,RT-PCR检测诱导后骨钙素mRNA的表达。 结果:各组碱性磷酸酶活性均随诱导时间的延长而逐渐增高,联合组升高幅度最为明显(P < 0.05)。诱导7,14 d后,成骨诱导培养基组、联合组Ⅰ型胶原均呈阳性表达,富血小板血浆组、对照组Ⅰ型胶原始终呈阴性表达。诱导14 d后,成骨诱导培养基组、联合组可见卵圆形钙结节。诱导7,14 d后,对照组与富血小板血浆组之间骨钙素mRNA表达水平无明显差异(P > 0.05),此2组骨钙素mRNA表达水平均明显低于成骨诱导培养基组、联合组(P < 0.05);成骨诱导培养基组骨钙素mRNA表达水平明显低于联合组(P < 0.05)。 结论:经成骨条件培养基诱导培养的骨髓基质干细胞,富血小板血浆能在体外显著诱导其成骨指标的表达。  相似文献   

11.
间充质干细胞是可大量获取的肌腱组织工程种子细胞,但体外如何诱导其分化为功能化腱样细胞成为此项技术的关键。 目的:观察富血小板血浆对体外培养骨髓间充质干细胞分裂增殖和胶原产生的影响。 方法:分离培养兔骨髓间充质干细胞,并采用自体富血小板血浆对骨髓间充质干细胞进行干预(设立高、中、低剂量富血小板血浆组,并设空白对照组),每日计数细胞并绘制细胞生长曲线,用MTT比色法分析各组骨髓间充质干细胞的存活和增殖能力。以ELISA定量检测细胞的胶原产生,通过RT-PCR反应测定富血小板血浆干预前后细胞Ⅰ型胶原基因的表达。 结果与结论:高、中、低浓度富血小板血浆组骨髓间充质干细胞均保持较高的增殖活性,呈快速生长,曲线上升幅度大,与空白对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。培养时间越长作用越明显,培养一定时间后其作用具有剂量依赖性,较高剂量的富血小板血浆对细胞的增殖作用较为明显。富血小板血浆能明显促进骨髓间充质干细胞的Ⅰ和Ⅲ型胶原合成,剂量越大,刺激胶原产生的作用越明显。说明骨髓间充质干细胞具备组织工程化肌腱种子细胞的基本条件,富血小板血浆具有促进间充质干细胞向肌腱细胞转化的作用。  相似文献   

12.
杨民  王剑  王强 《中国神经再生研究》2011,15(40):7485-7488
背景:添加富血小板血浆可促进细胞体外成骨表型的快速转化,从而有效成骨。 目的:观察富血小板血浆对脂肪间充质干细胞体内和体外成骨能力的影响。 方法:第3代兔脂肪间充质干细胞进行成骨诱导培养,分为对照组和富血小板血浆组。细胞接种到钙磷陶瓷支架上后,体内外观察细胞/载体复合物的成骨情况。 结果与结论:两组细胞随着诱导时间的延长碱性磷酸酶活性增高,达到高峰值后随后逐渐下降,诱导后14 d时,富血小板血浆组即达到高峰值,对照组18 d达到高峰值。细胞/载体复合体切片Von Kossa染色显示两组载体的孔隙内衬面呈多层黑染状,有大量钙盐沉积。甲苯胺蓝染色显示载体的孔隙中可见成熟的骨质存在,周边区域较中心多。体外钙盐沉积对照组多,体内成骨面积富血小板血浆组多(P < 0.05)。说明,富血小板血浆可有效诱导脂肪间充质干细胞体内和体外成骨。  相似文献   

13.
Carpal tunnel syndrome (CTS) is a common and sometimes challenging condition, which causes pain; paresthesia; tingling of the thumb, index and long fingers; and even thenar weakness in the hands. The effectiveness of corticosteroid injections seems to be transient, and there is a lack of information around long-term effects in previous studies. In recent years, platelet-rich plasma (PRP) has proven to bean alternative as it encourages tissue regeneration. We hereby describe a patient with CTS showing significant improvements in electrophysiological parameters after receiving PRP injections. The results revealed significant improvements in the distal motor and sensory latencies as well as the sensory nerve action potential and compound muscle action potential amplitudes of the both median nerves. In summary, if patients are refractory to conservative treatments—such as splinting, oral medication, and corticosteroid injection—PRP may be used as an alternative before surgical intervention.  相似文献   

14.

Background

The calibrated automated thrombogram (CAT) assay measures thrombin generation in plasma.

Objective

Use the CAT assay to detect endogenous tissue factor (TF) in recalcified platelet-rich plasma (PRP) and platelet-free plasma (PFP).

Methods

Blood from healthy volunteers was collected into citrate and incubated at 37 °C with or without lipopolysaccharide (LPS) for 5 hours. PRP and PFP were prepared and clotting was initiated by recalcification. Thrombin generation was measured using the CAT assay.

Results

The lag time (LT) was significantly shortened in PRP prepared from LPS-treated blood compared with untreated blood (10 ± 3 min versus 20 ± 6 min), and this change was reversed by the addition of inactivated human factor VIIa. LPS stimulation did not change the peak thrombin. Similar results were observed in PFP (21 ± 4 min versus 35 ± 5 min). LPS stimulation also significantly reduced the LT of PRP and PFP derived from blood containing citrate and a factor XIIa inhibitor. Finally, a low concentration of exogenous TF shortened the LT of PFP prepared from unstimulated, citrated blood without affecting the peak thrombin.

Conclusion

Changes in LT in the CAT assay can be used to monitor levels of endogenous TF in citrated plasma.  相似文献   

15.
16.
背景:小块组织工程骨植入动物体内后,早期依靠组织液的渗透可获得营养,但大块组织工程骨的营养仅靠组织液的渗透是远远不够的,必须通过血管再生来获得。 目的:观察转染血管内皮细胞生长因子表达载体骨髓间充质干细胞复合组织工程骨植入动物体内后的血管形成能力。 方法:制作日本大耳白兔双侧尺骨中段骨缺损模型,左侧尺骨缺损植入转染血管内皮细胞生长因子表达载体的自体骨髓间充质干细胞复合脱钙脱脂去蛋白的牛松质骨支架组织工程骨为实验组,右侧尺骨缺损植入自体骨髓间充质干细胞复合脱钙脱脂去蛋白的牛松质骨支架组织工程骨为对照组。术后12周行X射线摄片观察、大体标本观察、苏木精-伊红染色和Masson染色组织切片观察、MiFas图像分析系统定量分析。 结果与结论:实验组与对照组尺骨缺损处均有连续骨痂形成;组织切片经苏木精-伊红染色、Masson三色法染色及MiFas图像分析系统定量分析可见实验组和对照组均有大量的新生骨,但实验组新生血管明显多于对照组(P < 0.01),且血管较粗大,而且与新生骨接近。说明将转染血管内皮细胞生长因子表达载体的骨髓间充质干细胞复合在组织工程骨上植入动物体内可明显促进新生血管的形成。  相似文献   

17.
背景:临床上对大范围骨缺损还没有很有效的治疗手段,而纳米晶羟基磷灰石胶原复合材料与天然骨骼的结构类似,具有较好的生物相容性,可能为修复骨缺损提供新的途径。目的:观察纳米晶羟基磷灰石胶原材料复合骨髓间充质干细胞在修复骨缺损中的作用。方法:分离培养人骨髓间充质干细胞,与纳米晶羟基磷灰石胶原材料于体外联合培养;通过大体观察、组织学分析及电镜观察了解成骨情况,进一步临床应用于修复骨缺损。 结果与结论:人骨髓间充质干细胞在体外可以大量扩增,复合细胞的材料植入骨缺损处后,X射线摄片动态观察可见骨缺损处连接良好。说明骨髓间充质干细胞具有成骨细胞作用,纳米晶羟基磷灰石胶原材料是一种很好的构建组织工程骨的支架材料。关键词:骨髓间充质干细胞;羟基磷灰石;纳米材料;组织工程;骨  相似文献   

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