脑损伤并股骨骨折愈合患者骨痂中骨形态发生蛋白2和胰岛素样生长因子1的表达

背景：临床观察及基础研究发现,合并颅脑损伤可加速骨折愈合,但具体机制尚不明确。 目的：观察脑损伤后SD大鼠股骨骨折愈合过程中骨痂骨形态发生蛋白2和胰岛素样生长因子1的表达,探讨脑损伤对大鼠股骨骨折愈合的影响及其作用机制。 设计、时间及地点：随机对照,基因水平动物实验,于2007-05/2008-03在华北煤炭医学院骨科实验室完成。 材料：SPF级10周龄雄性SD大鼠48只。 方法：48只SD大鼠随机分成2组,每组24只。参考文献建立大鼠单纯股骨骨折模型和脑损伤合并股骨骨折模型。于术后7,14,28 d分批处死动物,行X射线摄片后,取股骨骨痂,分别用于提取总RNA进行实时荧光定量聚合酶链反应。 主要观察指标：以X射线摄片观察骨折愈合情况;以苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色观察骨痂组织骨形态发生蛋白2和胰岛素样生长因子1的表达。 结果：X射线摄片示,与单纯骨折组相比,骨折合并脑损伤组骨痂出现早,同一时间骨痂更大。免疫组织化学显示,造模7,14 d脑损伤合并股骨骨折组骨形态发生蛋白2、胰岛素样生长因子1的平均阳性细胞百分率高于单纯骨折组。实时荧光定量聚合酶链反应结果发现,脑损伤合并股骨骨折组7,14 d骨形态发生蛋白2基因mRNA表达高于单纯骨折组,7,14,21 d胰岛素样生长因子1基因mRNA表达高于单纯骨折组。　 结论：与单纯骨折组相比,骨折合并脑损伤组大鼠骨折愈合加速,骨痂中骨形态发生蛋白2和胰岛素样生长因子1的表达显著性升高,提示脑损伤促进了骨折愈合的机制可能与此有关。     

胰岛素样生长因子1在糖尿病骨折大鼠骨痂组织中对成骨细胞增殖和骨钙素表达的影响☆

背景：有研究表明,糖尿病患者骨折愈合过程中局部骨痂组织胰岛素样生长因子1明显降低,成骨细胞增殖能力下降。 目的：观察以胰岛素样生长因子1治疗糖尿病大鼠骨折愈合过程中骨痂组织成骨细胞增殖和骨钙素表达,分析胰岛素样生长因子1在糖尿病大鼠骨折愈合过程中的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-09/12在昆明医学院动物实验中心完成。 材料：40只SD雄性大鼠,30只腹腔内注射链脲佐菌素破坏胰岛细胞诱导为糖尿病大鼠后,随机分为胰岛素样生长因子1组、胰岛素组、模型对照组,10只为正常对照大鼠,腹腔内注射等容量生理盐水。 方法：4组大鼠右胫骨上段骨折后,胰岛素样生长因子1组用胰岛素样生长因子1治疗,30 μg/kg ,胰岛素组用胰岛素治疗,6~8 U,模型对照组及正常对照组未进行治疗。 主要观察指标：伤后第1,2,4,6周X射线片观察骨折愈合情况,光镜下观察骨痂内成骨细胞数量,免疫组织化学测定血清骨钙素表达。 结果：胰岛素样生长因子1组、胰岛素组X射线片显示骨痂生成量多,骨折愈合程度明显优于模型对照组(P < 0.05),胰岛素样生长因子1组、胰岛素组差异无显著性意义。光镜观察显示,胰岛素样生长因子1组、胰岛素组成骨细胞数量明显多于模型对照组,但低于正常对照组。各组血清骨钙素均呈上升趋势,在第2周达到峰值,第4周下降,至第6周进一步下降。模型对照组骨钙素升高幅度明显低于正常对照组(P < 0.01),并且低于胰岛素样生长因子1组、胰岛素组。胰岛素样生长因子1组、胰岛素组、正常对照组的骨钙素差异无显著性意义。 结论：糖尿病大鼠骨折愈合过程中,用胰岛素样生长因子1治疗可提高骨钙素水平,促进成骨细胞增殖,与胰岛素治疗效果相当。     

颅脑伤合并复合伤动物模型的研究进展

近年来由于交通事故伤和坠落伤以及自然灾害的加剧(地震、海啸、泥石流等),创伤性颅脑损伤已成为人类高致死率和高致残率的重要原因之一和当今威胁人类生命健康的重要疾患之一[1,2].通过临床工作发现,在外伤中有相当一部分属颅脑损伤合并胸腹伤、四肢伤及休克.因此,颅脑损伤合并复合伤动物模型的制备对颅脑损伤相关研究具有重要意义. 一、脑损伤合并骨折实验模型 1.开放骨折并落体撞击脑损伤模型:杨运发等[3,4 ]建立兔骨折合并脑外伤模型研究发现,肌注相应时段兔骨折合并脑外伤模型血清能明显加速鼠单纯骨折模型的骨折愈合.孙良智等[5,6]建立大鼠脑损伤和股骨骨折模型研究发现,骨折合并脑损伤骨折愈合速度较单纯骨折快,脑损伤组及骨折脑损伤组血清中胰岛素生长因子-Ⅰ高于对照组,骨痂阳性细胞表达强于单纯骨折组,提示脑损伤可以增强骨折局部胰岛素生长因子-Ⅰ,促进骨折愈合.     

脑损伤合并骨折与单纯骨折患者血管内皮生长因子的表达及其临床意义

背景：临床发现,脑损伤合并骨折有些部位骨痂过度生长,出现异位骨化,骨折愈合明显加快。 目的：对比观察脑损伤合并骨折与单纯骨折两组患者骨折愈合过程骨痂中血管内皮生长因子的表达及分布,探讨临床意义及其作用机制。 设计、时间及地点：分组对照观察,于2006-02/2007-07在解放军第四军医大学西京医院完成。 对象：合并脑损伤组与单纯骨折组骨痂病理标本各50例。合并脑损伤组：男41例,女9例,年龄19~55岁;单纯骨折组：男36例,女14例,年龄17~52岁。 方法：取两组患者各50例受伤7~10,11~15,16~20,21~27,28~35 d的骨痂标本,用免疫组织化学方法,检测两组患者不同时期骨痂标本中血管内皮生长因子含量高低,观察骨折愈合速度。 主要观察指标：①X射线观察结果。②免疫组织化学染色图像分析。 结果：在骨折愈合的不同阶段,两组骨痂内表达血管内皮生长因子的细胞来源一致,合并脑损伤组骨祖细胞、成骨细胞、软骨细胞中早期表达程度明显高于单纯骨折组,骨祖细胞增殖,成骨细胞、软骨细胞分化明显增加,7~10 d达到高峰,高峰持续30 d后逐渐减少;单纯骨折组在11~15 d出现高峰,高峰在20 d开始下降,峰值明显低于合并脑损伤组,配对t检验两组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。合并脑损伤组在伤后4周即可见X射线片长骨骨折处大量骨痂生长,单纯骨折组在伤后7~9周才见到大量骨痂生长。 结论：脑损伤合并骨折患者骨折愈合早期血管内皮生长因子表达显著强于单纯骨折患者,持续时间明显延长;血管内皮生长因子促进骨祖细胞增殖,成骨细胞、软骨细胞分化明显高于单纯骨折组;骨祖细胞增殖、成骨细胞及软骨细胞快速大量分化,是骨折快速愈合机制之一。     

合并脑损伤时骨折愈合过程中血管内皮细胞生长因子的表达

背景：大量临床病例显示,骨折合并脑损伤患者骨痂量明显增多,骨折愈合速度明显加快。但对合并脑损伤时骨折愈合过程中血管内皮细胞生长因子的表达及作用机制缺乏前瞻性对照研究,对其潜在的机制尚未阐明。 目的：对比观察SD大鼠在骨折合并脑损伤以及单纯骨折时骨折愈合过程中骨痂内血管内皮细胞生长因子的表达变化。 方法：将SD大鼠以数字表法随机分为3组：正常对照组、单纯骨折组、骨折合并脑损伤组。脑损伤模型采用改进的Marmarou自由落体装置撞击大鼠颅骨制作弥漫性中度脑损伤模型;于左侧胫骨髁间处钻孔,插入无菌克氏钢针,在胫骨中上1/3处横向折断胫骨,制作骨折模型。术后X射线摄片观察骨折修复过程和效果;RT-PCR检及免疫组化染色观察骨痂标本血管内皮细胞生长因子表达。 结果与结论：骨折后3,7,14 d,单纯骨折组、骨折合并脑损伤组X射线表现无明显差别。与单纯骨折组相比,骨折后 24 d脑损伤合并骨折组骨折线变得模糊,形成较多骨痂量;42 d后骨折线消失,伤肢基本愈合。单纯骨折组骨痂中血管内皮细胞生长因子骨折后7 d开始出现,表达逐渐增强,约3周时达高峰,42 d已经不见血管内皮细胞生长因子表达;脑损伤合并骨折后3 d即可见血管内皮细胞生长因子表达,两三周达高峰期,其表达高峰提前且持续时间较长。说明脑损伤后大鼠骨折愈合加速,骨痂量增多,表明脑损伤对骨折愈合有促进作用,这可能与脑损伤后大鼠体内生长因子血管内皮细胞生长因子表达高峰提前且持续时间较长有关。     

骨折愈合过程中降钙素基因相关肽表达与脑损伤的影响

背景：临床观察及实验研究发现合并中枢神经损伤的骨折愈合加速,但其具体机制尚未明确。 目的：观察股骨骨折合并脑损伤大鼠骨痂中降钙素基因相关肽及其mRNA的表达变化,探讨脑损伤对骨折愈合的影响及作用机制。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-01/10在华北煤炭医学院骨科实验室完成。 材料：健康12周龄雌性SD大鼠64只,建立大鼠开放骨折模型。 方法：骨折造模后64只SD大鼠随机数字法分为骨折合并脑损伤组和单纯骨折组,每组32只,骨折合并脑损伤组接着制备脑损伤模型。造模后7,14,21,28 d分批麻醉并处死动物,苏木精-伊红染色观察骨折愈合情况,免疫组织化学染色及原位杂交检测降钙素基因相关肽及其mRNA的表达变化。 主要观察指标：①造模后28 d大鼠右侧股骨X射线平片表现。②造模后不同时间点两组大鼠骨痂苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及原位杂交结果。 结果：64只SD大鼠均进入结果分析。①X射线平片显示与单纯骨折组相比,骨折合并脑损伤组骨折端骨痂形成早,骨痂量多。②苏木精-伊红染色示单纯骨折组呈典型骨折愈合过程,而骨折合并脑损伤组骨痂形成及改造提前,骨折愈合加速。免疫组织化学染色显示骨折愈合过程中内皮细胞、骨祖细胞、软骨细胞及成骨细胞表达降钙素基因相关肽。骨折合并脑损伤组造模后各时间点阳性细胞数均高于单纯骨折组,差异有显著性意义(P < 0.05)。原位杂交检测示骨折合并脑损伤组造模后7,14,21 d表达降钙素基因相关肽mRNA的成骨细胞数均高于单纯骨折组,差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：脑损伤对骨折愈合有促进作用,可能与合并脑损伤后降钙素基因相关肽及其mRNA表达水平升高有关。     

大鼠胫骨骨折愈合过程中Ⅰ，Ⅱ型胶原蛋白的表达：失神经状态下Western blot方法测定

背景: 近年来大量的实验及临床观察均证实神经因素对骨折愈合有调节和支配作用。Ⅰ型胶原是促成骨细胞分化和增强成骨细胞黏附能力主要因素，是组成骨构架的基质蛋白；而Ⅱ型胶原由软骨细胞产生。 目的：观察失神经状态下骨折愈合过程中Ⅰ，Ⅱ型胶原蛋白表达的变化规律。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2005-05/12在解放军第二军医大学动物实验室及细胞生物教研究室完成。 材料：选用3月龄健康雄性SD大鼠40只，采用随机数字表法分为2组，单纯胫骨骨折组与脊髓损伤并胫骨骨折组各20只。 方法：单纯胫骨骨折组大鼠于从左胫骨平台前缘插入1根φ0.8 mm克氏针，制成胫骨骨折模型。脊髓损伤并胫骨骨折组在植备上述模型的基础上，横断切除T10 段脊髓约0.3 cm，制成T10脊髓完全性损伤大鼠胫骨骨折模型。 主要观察指标：分别于伤后1，2，4，5周采用Western blot法检测两组大鼠骨折断端骨痂中Ⅰ，Ⅱ型胶原的蛋白表达。 结果：伤后第1周两组大鼠骨折断端骨痂中Ⅰ，Ⅱ型胶原均有表达，脊髓损伤并胫骨骨折组两种胶原的表达程度均高于单纯胫骨骨折组(P < 0.05)；伤后第2周脊髓损伤并胫骨骨折组Ⅱ型胶原的表达量达到峰值，高于单纯胫骨骨折组(P < 0.05)；伤后第4周单纯胫骨骨折组Ⅰ型胶原表达量达峰值，高于脊髓损伤并胫骨骨折组(P < 0.05)，脊髓损伤并胫骨骨折组Ⅱ型胶原仍有高表达；伤后第5周两组Ⅰ，Ⅱ型胶原表达量均下降。 结论：失神经状态下骨折愈合过程中Ⅰ、Ⅱ胶原的分泌规律与正常骨折愈合一致，区别在于各时间点尤其是在峰值点上表达量有明显差异。     

骨密度与骨折合并颅脑损伤患者骨折愈合的评价

背景：颅脑损伤患者下肢骨折愈合过程中,骨折周围新生骨形成加速现象在临床上较为常见。这种快速形成的骨痂或异位骨化是否是颅脑损伤合并下肢骨折患者的常见并发症,至今仍有争论。 目的：利用骨密度检测来评估创伤性脑损伤对股骨干骨折愈合的影响。 方法：纳入创伤性脑损伤合并股骨干骨折患者和单纯股骨干骨折患者各25例,以切开复位后钢板螺钉内固定。术后第6,12周行X射线测量骨痂体积。术后1,3,5周利用双能X射线骨密度测定仪测定两组患者骨折区骨密度值。 结果与结论：单纯股骨干骨折患者术后第12周较第6周骨痂体积明显增加。合并颅脑损伤患者术后第6,12周骨痂体积均有明显增加,且大于单纯骨折组骨痂体积。在第1,3,5周时骨折区骨密度值逐渐增大,并且高于同时间点单纯骨折组骨折区骨密度值。说明创伤性脑损伤可增加股骨干骨折愈合时的骨痂体积,提高骨折区骨密度值,缩短骨折愈合时间。     

胰岛素样生长因子1基因转染成肌细胞促小鼠胫骨骨折愈合的作用

背景：随着基因治疗的研究发展,将转有胰岛素样生长因子1基因的细胞移植入损伤区,达到该基因在体内的持续表达已可行,并有可能解决骨折患者骨不连及骨延迟愈合等难题。 目的：观察携带人胰岛素样生长因子1基因的成肌细胞体内局部多点注射对C57BL/6J小鼠胫骨骨折愈合的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-01/2008-04在汕头大学医学院完成。 材料：8周龄雄性C57BL/6J小鼠42只,体质量22~25 g,建立左胫骨骨折的动物模型。 方法：42只小鼠随机数字表法分为2组,每组21只。实验组于骨折处周围肌肉中多点注射0.3 mL转人胰岛素样生长因子1基因成肌细胞悬液;对照组注射0.3 mL生理盐水。分别在造模后2,3,4周每组各随机取7只小鼠处死,取材,行苏木精-伊红染色。 主要观察指标：各组动物骨折部位形成骨痂面积的大小和组成成分的变化;外源性细胞在体内存活及表达人胰岛素样生长因子1情况;各组动物骨密度及骨痂细胞生长情况。 结果：①实验组转基因成肌细胞BrdU及人胰岛素样生长因子1免疫组织化学染色均阳性,4周实验组平均灰度值虽稍高于2周实验组,但差异无显著性意义(P > 0.05)。②携人胰岛素样生长因子1基因的成肌细胞移植入C57BL/6J小鼠胫骨骨折处周围肌肉中可存活4周以上,并能稳定地分泌人胰岛素样生长因子1。③实验组造模后各时间点外骨痂中小梁骨占骨痂总面积的百分比均高于对照组,其中第3,4周经F检验差异有显著性意义(P < 0.05);4周实验组骨痂骨密度高于对照组(P < 0.05)。④电镜观察可见实验组骨生成细胞的数量、活跃程度和胶原纤维的数量、分布均优于对照组。 结论：局部注射转人胰岛素样生长因子1基因的成肌细胞可以促进C57BL/6J小鼠胫骨骨折的愈合。     

血管内皮生长因子在卵巢切除大鼠骨折愈合骨痂中的表达

背景：血管内皮生长因子在骨折愈合过程中起着重要作用,研究发现去卵巢大鼠影响骨折愈合,但其作用机制尚未明确。 目的：观察去卵巢大鼠股骨骨折愈合中骨痂组织学变化以及血管内皮生长因子的表达与分布,探讨骨质疏松对大鼠骨折修复的影响与血管内皮生长因子对其的作用。 方法：取12周龄雌性Sprague-Dawley 大鼠20只,随机分成假手术组和去卵巢组。制造股骨骨折模型,于术后4周处死,各组截取大鼠右侧股骨标本后行计算机X射线摄像仪摄片观察骨折愈合情况,并应用双能X射线骨密度仪测量右股骨骨密度,苏木精-伊红染色观察骨痂生长情况及其组织形态,免疫组织化学染色测定血管内皮生长因子表达。 结果与结论：骨折后4周,去卵巢组形成的骨痂中含有的软骨骨痂比例高与假手术组。去卵巢组中表达血管内皮生长因子的成骨细胞数目少于假手术组。提示骨质疏松大鼠骨折愈合形成的骨痂质量较差,血管内皮生长因子在成骨细胞中的表达减少是骨质疏松骨折愈合质量下降的可能因素之一。 关键词：骨质疏松;骨折愈合;血管内皮生长因子;雌激素;组织构建;组织工程     

天鹅记忆接骨器对实验性骨折愈合过程中局部胰岛素样生长因子Ⅰ含量的影响

背景：天鹅记忆接骨器能对长骨干形成三维立体固定，保证骨折端稳定，并在骨折端间产生持续动态的压应力。胰岛素样生长因子Ⅰ对于骨生长代谢、细胞分化和有丝分裂都有调节作用，在骨折愈合过程中能促进细胞增生，刺激骨和软骨形成。 目的：定量检测天鹅记忆接骨器与传统固定方式动力加压接骨板内固定下骨折局部胰岛素样生长因子Ⅰ的表达变化。 设计、时间及地点：对照观察动物实验，于2007-01/05在解放军第二军医大学长海医院骨科实验室完成。 材料：天鹅记忆接骨器为含镍50%~53%的镍钛合金板材，形状恢复温度为（33±2）℃，由兰州西脉生物医疗器械公司定制。 方法：选用成年新西兰白兔30只，随机选择兔一侧肱骨，截骨后用天鹅记忆接骨器固定；对侧肱骨同法截骨后，在相应位置用动力加压接骨板固定。内固定后第2，3，4，6，8，12周分别处死5只动物，以骨折线两侧 0.5 cm范围内为取材区，标本按内固定物分为天鹅记忆接骨器组和动力加压接骨板组。 主要观察指标：天鹅记忆接骨器、动力加压接骨板内固定后2，3，4，6，8，12周兔骨折局部胰岛素样生长因子Ⅰ含量。 结果：天鹅记忆接骨器组骨折局部胰岛素样生长因子Ⅰ含量在内固定后2周逐渐增高，6周时达到顶峰，8~12周逐渐下降。动力加压接骨板组骨折局部胰岛素样生长因子Ⅰ含量在内固定后2周逐渐增高，8周时达到顶峰，12周下降。内固定后2，8，12周，两组骨折局部胰岛素样生长因子Ⅰ含量差异无显著性意义（P > 0.05）；内固定后3，4，6周，天鹅记忆接骨器组骨折局部胰岛素样生长因子Ⅰ含量明显高于动力加压接骨板组（P < 0.05），4周时差异最大。 结论：与传统固定方式动力加压接骨板相比，天鹅记忆接骨器独特的持续动态加压应力和三维立体固定能明显促进骨折局部胰岛素样生长因子Ⅰ的分泌，促进骨折愈合。     

中药骨康含药血清对骨质疏松性骨折愈合过程中血小板衍生生长因子表达的影响

背景：成骨细胞的同种异体移植，促进骨折愈合的研究正引起重视。中药在促进骨折愈合方面已有确切疗效。将二者结合起来所发挥的综合优势还需要进一步证实。 目的：探讨中药骨康含药血清培养成骨细胞移植促进骨质疏松性骨折愈合的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006-07/2007-02在广州中医药大学附属骨伤科医院实验室和广州中医药大学第一附属医院骨科实验室完成。 材料：1 d龄SD乳鼠用于分离原代成骨细胞；4月龄SD雌性大鼠36只用于制备含药血清；4月龄SD雌性大鼠63只用于实验造模和标本取材，中药骨康为水煎剂，由补骨脂、淫羊藿、熟地等组成，含生药量1.43 kg/L。 方法：将SD大鼠63只，随机分成3组，成骨细胞+骨康血清组、成骨细胞+罗盖全血清组、成骨细胞+蒸馏水血清组，每组21只。建立骨质疏松性骨折动物模型，用相应含药血清培养的成骨细胞移植到骨折端部位。于模型建立后第7，14，28天，3组动物麻醉下各处死7只动物，截取股骨。 主要观察指标：采用免疫组织化学法动态检测血小板衍生生长因子A和血小板衍生生长因子αR的表达。 结果：骨折后7 d，血肿、骨膜增殖细胞、肉芽组织中的成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞和新形成的软骨细胞血小板衍生生长因子表达阳性；骨折后14 d，骨折断端附近的骨外膜下编织骨表面成骨细胞血小板衍生生长因子强阳性表达，肥大的软骨细胞也呈阳性表达；骨折后28 d，外骨痂中编织骨基质与表面细胞血小板衍生生长因子表达阳性，已成熟的骨小梁表面成骨细胞表达较弱，软骨细胞血小板衍生生长因子表达阳性。成骨细胞+骨康血清组及成骨细胞+罗盖全血清组的血小板衍生生长因子表达均较成骨细胞+蒸馏水血清组明显。 结论：运用骨康含药血清培养的成骨细胞进行移植，能增强骨痂中血小板衍生生长因子A和血小板衍生生长因子αR的表达，促进实验性骨质疏松性骨折的愈合。     

失神经状态下胫骨骨折断端骨痂成骨的组织学变化

摘要 背景：有研究表明神经系统在骨折的修复重建中发挥重要的作用，但其具体机制尚未阐明，中枢神经及神经生长因子对骨痂中成骨的影响至今少有报道。 目的：观察失神经状态下胫骨骨折断端骨痂成骨的组织学变化。 方法：用SD大鼠建立左胫骨闭合骨折髓内固定大鼠模型，建模成功后随机为3组，左胫骨骨折组；T10脊髓横断组：于左胫骨骨折后，横断切除T10段脊髓约0.3 cm，制成T10脊髓完全性损伤大鼠胫骨骨折模型；神经生长因子治疗组：建立T10脊髓完全性损伤大鼠胫骨骨折模型后，肌注神经生长因子。术后各组均用苏木精伊红染色法观察骨组织形态变化，骨钙素免疫组织化学法观察骨痂中成骨情况，透射电镜观察成骨细胞内微结构变化。 结果与结论：T10脊髓横断组大鼠在失神经状态下，骨痂中成骨细胞的数量减少，骨钙素表达减少，成骨细胞内细胞器功能低下。神经生长因子治疗组的以上各组织学观察指标均较T10脊髓横断组均有不同程度的改善。结果显示，神经生长因子可部分改善脊髓横断失神经状态下的骨组织再生情况。     

脑损伤并胫骨骨折大鼠骨痂中神经肽的分布及意义*☆

目的: 研究证明，含有P物质、降钙素基因相关肽、血管活性肠肽、神经肽Y和酪氨酸羟化酶等神经肽的肽能神经共同存在于骨组织中，主要分布于骨代谢活跃的区域，表明这些肽能神经与骨的生长、发育密切相关。观察脑损伤后大鼠胫骨骨痂中神经肽的表达。 方法：实验于2007-02/05在广西医科大学实验动物中心完成。①实验分组：雄性Wistar大鼠130只，体质量450~550 g，随机数字表法分为单纯骨折组（n =60），脑损伤合并骨折组（n =60），正常对照组（n =10）。②实验方法：麻醉后显露大鼠右颅顶骨，中线旁2 mm 处开直径5 mm 骨窗，液压打击致中度脑损伤，并制备大鼠胫骨骨折模型，其中单纯骨折组头部只做颅骨开窗，正常对照组不做任何处理。③实验评估：术后3，7，14，21，28，35 d 苏木精-伊红染色和神经肽免疫组织化学染色观察神经肽在大鼠胫骨中的分布及胫骨骨折骨痂的连续性及骨折愈合情况。计算机X射线摄像仪（CR）摄片测定术后14，21，28 d 脑损伤合并骨折组及单纯骨折组骨痂面积大小。 结果：纳入大鼠130只，均进入结果分析。①脑损伤合并骨折组早期形成大量纤维骨痂和软骨骨痂，骨痂中神经肽免疫阳性神经纤维较多，明显增厚的骨膜内层骨祖细胞、幼稚的软骨细胞胞质内降钙素基因相关肽、P物质、血管活性肠肽、酪氨酸羟化酶、神经肽Y强阳性表达。②脑损伤合并骨折组14 d 纤维骨痂中的软骨细胞团增大，骨膜下软骨细胞层增厚；21 d 小梁骨明显增厚，软骨岛增大；28 d 仍可见大量的纤维骨痂和软骨骨痂，软骨细胞团周边有少量结构稀疏的编织骨形成。单纯骨折组骨膜反应轻，纤维骨痂量少，骨内成骨和软骨内成骨并存，以前者为主，骨折愈合过程明显晚于脑损伤合并骨折组。③14，21 d 脑损伤合并骨折组骨痂面积较单纯骨折组大（P < 0.01）；21，28 d 脑损伤合并骨折组骨痂面积变化明显快于单纯骨折组，提示骨痂塑性快（P < 0.01）。CR摄片发现，各骨折组大鼠骨折端均未发现不愈合现象，单纯骨折组骨折线清晰，骨痂量较少；脑损伤合并骨折组骨性愈合较好，骨痂量较多，骨折线模糊。 结论：正常大鼠骨生长活跃区有丰富的肽能神经支配。脑损伤后骨痂中神经肽有显著改变，并引起骨痂量和质的改变，骨折愈合加速。     

神经生长因子对大鼠胫骨骨折愈合的影响

背景：临床中发现失神经可导致骨折断端骨痂过度生长甚至在肌肉中出现异位骨化 ,这一现象提示神经因素对骨折愈合有影响。 目的：探讨神经生长因子对大鼠胫骨骨折愈合的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2005-06/2006-03在解放军第二军大学动物实验中心完成。 材料：健康雄性3个月龄SD大鼠120只，体质量250~300 g，随机分为单纯左胫骨骨折组和神经生长因子治疗组，每组60只。注射用神经生长因子由厦门北大之路生物工程有限公司提供。 方法：两组大鼠制备单纯胫骨骨折，神经生长因子治疗组肌注2 000 AU(1.4 g)，1 次/ d,分别注射两侧腓肠肌，连续肌注2周。伤后第4周对2组大鼠骨折断端行断层CT，测量骨折断端最大横截面及计算骨痂灰度值，行生物力学3点折弯试验。 主要观察指标：①骨组织形态计量学、骨密度测定。②骨痂组织形态学的观察。③免疫组化法测定骨痂组织骨钙素的表达。④观察2组大鼠骨痂中成骨细胞的超微结构变化。⑤Western印迹检测Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达。 结果：神经生长因子治疗组3点折弯试验各项生物力学参数均优于单纯左胫骨骨折组(P < 0.05)。形态学及超微结构观察见神经生长因子治疗组骨折愈合优于单纯左胫骨骨折组。神经生长因子治疗组Ⅰ型胶原蛋白表达明显高于单纯左胫骨骨折组(P < 0.05)；而单纯左胫骨骨折组骨痂Ⅱ型胶原蛋白的表达明显高于神经生长因子治疗组(P < 0.05)。 结论：生物力学测试及Ⅰ型胶原蛋白表达和成骨细胞微观结构均说明神经生长因子对骨折断端的骨化有促进作用，其途径有可能在骨痂生长的不同时期通过调节Ⅰ、Ⅱ型胶原的量来调控骨折的愈合。     

坐骨神经和T10椎体部脊髓损伤对大鼠股骨干骨折早期骨痂生成的影响

背景：神经因素在骨折愈合过程中具有调解作用,但其具体机制不明,实验进一步观察了外周神经和中枢神经在骨折愈合过程中的作用。 目的：探讨失神经(坐骨神经和T10椎体部脊髓损伤)支配对Wistar大鼠股骨干骨折早期骨痂生成的影响。 方法：建立Wistar大鼠单侧股骨中段开放性横行骨折动物模型,然后分别进行同侧坐骨神经横断和或T10椎体部脊髓开放性横断,并设仅行骨折建模者为对照组。所有大鼠分别于建模后14和28 d后处死并于骨折部位取材,进行影像学测量及标本新生骨痂组织学观察。 结果与结论：建模14和28 d后,骨痂影像学测量结果均显示,坐骨神经横断组骨折愈合最快,对照组其次,T10椎体部脊髓横断组最慢,3组间差异均有显著性意义(P < 0.05);股骨标本骨痂组织学观察显示：对照组骨痂较成熟,坐骨神经横断组和T10椎体部脊髓横断组均生成不成熟骨痂。实验以此推断周围神经损伤加速骨折愈合,中枢神经损伤则延缓骨折愈合,失神经支配下骨痂的构成有明显缺陷,完整的神经支配是骨折愈合的必要条件。     

糖尿病骨折大鼠骨痂组织中成骨细胞增殖和骨钙素表达与骨形态发生蛋白2干预的关系☆

背景：有研究表明，糖尿病患者骨折愈合过程中局部骨形态发生蛋白2明显降低，成骨细胞增殖能力下降，骨折延迟愈合，或者不愈合。 目的：观察骨形态发生蛋白2治疗糖尿病大鼠骨折愈合过程中骨痂组织成骨细胞增殖和骨钙素的表达，分析骨形成蛋白在糖尿病大鼠骨折愈合过程中的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008-09/12在昆明医学院动物实验中心完成。 材料：SD雄性大鼠30只，20只腹腔内注射链脲佐菌素破坏胰岛细胞诱导为糖尿病大鼠后，随机均分为骨形态发生蛋白2组、模型对照组，另10只为正常对照大鼠，腹腔内注射等容量生理盐水。 方法：3组大鼠行右胫骨上段骨折建立大鼠胫骨骨折模型。骨形态发生蛋白2组用10 μg/kg骨形态发生蛋白2治疗，模型对照组及正常对照组给予等渗量生理盐水。 主要观察指标：伤后第1，2，4，6周X射线片观察骨折愈合情况，光镜下观察骨痂内成骨细胞数量，放射免疫法测定血清骨钙素表达。 结果：骨形态发生蛋白2、正常对照组X射线片显示骨痂生成量多，骨折愈合程度明显优于模型对照组(P < 0.01)。骨形态发生蛋白2组成骨细胞数量明显多于模型对照组，略低于正常对照组。各组血清骨钙素均呈上升趋势，在第2周达到峰值，第4周下降，至第6周进一步下降。模型对照组骨钙素升高幅度明显低于正常对照组(P < 0.01)，并且低于骨形态发生蛋白2组。骨形态发生蛋白2组、正常对照组的骨钙素差异无显著性意义。 结论：糖尿病大鼠骨折愈合过程中较正常大鼠，骨钙素水平降低，成骨细胞增殖下降，采用骨形态发生蛋白2治疗可提高骨钙素水平，促进成骨细胞增殖，促进骨折愈合。     

降钙素基因相关肽神经生长因子与失神经支配兔骨折愈合

背景：骨折不愈合严重影响患者生活质量,神经生长因子用于骨不连的防治是重建外科领域研究的重点和方向。 目的：观察神经生长因子降钙素基因相关肽对失神经支配兔骨折愈合的影响。 方法：构建大白兔失神经支配腓骨骨折模型后,实验组骨折端局部注射降钙素基因相关肽10 μg,每2 d一次;对照组骨折端局部注射等量生理盐水。术后2,4,6周分别测定静脉血中肾上腺素和去甲肾上腺素的水平,并进行生物力学和组织学分析。 结果与结论：术后两组血清肾上腺素和去甲肾上腺素水平均有显著增高,在术后第4周达到最高峰,比术前高出1倍以上,第6周时出现下降,但仍然显著高于术前;术后2,4,6周,实验组肾上腺素和去甲肾上腺素血清水平较对照组显著增高,差异具有显著性意义(P < 0.05~0.01)。在三点弯曲实验中,实验组骨痂的抗弯强度明显高于对照组(P < 0.05~0.001);术后第6周时苏木精-伊红染色可见实验组骨痂中的透明软骨细胞已被成骨细胞替代,对照组骨痂中的软骨细胞仍没有完全成骨细胞化。提示神经生长因子降钙素基因相关肽对失神经支配兔骨折愈合具有明显的促进作用。 关键词：神经生长因子;降钙素基因相关肽;骨折愈合;生物力学;生物化学     

重组人骨形态发生蛋白2晚期自体骨痂成骨对血管内皮生长因子表达的影响

背景：重组人骨形态发生蛋白2和重组人骨形态发生蛋白7治疗骨缺损已经应用于多种实验动物模型。作者前期实验在兔自体髂骨与骨痂骨等长骨骨折治疗中应用，已取得满意效果。 目的：验证采用骨折断端周围晚期自体骨痂复合重组人骨形态发生蛋白2移植治疗骨缺损效果，并观察血管内皮生长因子对骨折愈合的影响。 设计、时间及地点：随机对照实验，于2008-08/2009-01在本溪市中心医院科研实验室和中国医科大学附属二院实验动物中心完成。 材料：2.0~2.5 kg的成年健康日本大耳白兔20只。 方法：将兔行双侧桡骨中段模拟骨折，12周后观察至明显骨痂生长随机分配实验Ⅰ组10只，实验Ⅱ组10只。在原骨折部位手术，切除骨痂备用，同时切除骨折端使之缺损1.5 cm，实验Ⅰ组，左桡骨移植复合重组人骨形态发生蛋白2骨痂为为骨形态发生蛋白2骨痂组，右桡骨移植髂骨为移植自体髂骨组，实验Ⅱ组，左桡骨移植晚期自体骨痂为移植晚期自体骨痂组，右桡骨空白对照为空白对照组。 主要观察指标：于术后14 d取标本检测各组兔血管内皮生长因子基因mRNA表达水平的。 结果：骨形态发生蛋白2骨痂组、移植髂骨组的血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达水平差异无显著性意义(P > 0.05)；移植晚期自体骨痂组、空白对照组血管内皮生长因子未见明显表达。骨形态发生蛋白2骨痂组、移植髂骨组的血管内皮生长因子蛋白表达及基因表达明显高于移植晚期自体骨痂组、空白对照组(P < 0.05)。 结论：骨折断端周围晚期自体骨痂复合重组人骨形态发生蛋白2明显促进血管内皮生长因子的合成分泌，对促进骨缺损愈合有积极意义。     

力生长因子对兔桡骨骨折愈合的作用

背景：目前对力生长因子的研究主要集中在肌肉、神经损伤修复方面,并证实其可明显促进肌肉细胞肥大和神经修复。关于其对骨折愈合的作用还不清楚。 目的：观察力生长因子对兔桡骨骨折愈合的作用。 方法：随机数字表法将新西兰大白兔分为空白对照组、力生长因子低、高剂量组。通过手术造成大白兔左侧桡骨中段 5 mm 完全缺损的骨折模型,术后第3天开始,各组分别予以PBS液及质量浓度为0.36,0.72 g/L的力生长因子各0.2 mL,经皮注射至骨折断端,连续注射5 d,1次/d。术后第4,6,8周X射线观察骨折愈合情况。于术后第8周组织学观察各组骨折部位细胞形态学变化。 结果与结论：术后第1天活动少,饮食量略减少,2 d后基本恢复正常活动与饮食。3 d内手术切口部位略有肿胀,少量渗血,无明显感染征象,12只兔全部进入结果分析。X射线显示,力生长因子高剂量组第4周时两骨折断端已基本结合在一起,骨皮质基本连续,骨折线模糊,第6周时骨髓腔已基本贯通,第8周时完全贯通,愈合时间较空白对照组、力生长因子低剂量组明显提前,愈合质量高。术后8周,空白对照组出现大量类骨组织,有少量编织骨形成,处于纤维性骨痂向骨性骨痂过度期;力生长因子低剂量组可见大量编织骨形成,处于骨性骨痂期;力生长因子高剂量组大量编织骨已改建为成熟的板层骨,已正处于骨痂改建期,与影像学结果一致。提示力生长因子具有明显促进骨折愈合的作用,并且在一定范围内随剂量的增大效果越明显。