不同浓度富硒温泉水对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响*

背景：临床研究证实,富硒温泉水对增生性瘢痕有明显的抑制作用。 目的：观察富硒温泉水对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。 方法：组织块法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,取第3~5代细胞,用含10%,20%,30%富硒温泉水及自来水和蒸馏水的培养基培养48 h,测细胞增殖情况。 结果与结论：富硒温泉水培养的人增生性瘢痕成纤维细胞数量减少,突起不同程度的变短或者缺失,细胞质及胞核浓缩。不同浓度的富硒温泉水、自来水、蒸馏水均对成纤维细胞的增殖有抑制作用,以富硒温泉水培养基的抑制作用最明显 (P < 0.05),且随浓度的升高,抑制率增大。说明富硒温泉水可以剂量依赖性地抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。     

原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节

背景：体外实验常采用外源性转化生长因子β1刺激来观察细胞增殖变化，易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1的影响。 目的：检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞(L929)自分泌转化生长因子β1的浓度和细胞增殖的变化。 方法： Elisa试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1水平。 结果与结论：纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而升高，原代成纤维细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而降低；两种细胞培养上清转化生长因子β1浓度均随时间而上升，但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞 (P < 0.01)，峰值时达到原代成纤维细胞的20倍；两种细胞增殖曲线在72 h内均随时间而显著增高(P < 0.01)，同一时间点比较，纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞。提示自分泌转化生长因子β1具有促进细胞增殖的作用，不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1反应不同的重要原因。     

转化生长因子β1与体外血管外膜成纤维细胞的增殖和迁移*

背景：近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用。当血管损伤后,转化生长因子β1在局部水平上调激活下游多种信号途径,其对血管外膜成纤维细胞参与新生内膜增生过程中所起的作用尚不十分清楚。 目的：观察转化生长因子β1对体外血管外膜成纤维细胞增殖和迁移的影响 方法：体外培养大鼠胸主动脉成纤维细胞,分别以0,3,5,10,15 μg/L的转化生长因子β1刺激成纤维细胞0,2,12,24,48,72 h。以MTT法检测细胞增殖活性,Transwell Chamber测试细胞迁移。 结果与结论：转化生长因子β1能诱导血管外膜成纤维细胞增殖,随着转化生长因子β1质量浓度、作用时间的增加,诱导血管外膜成纤维细胞增殖能力增强(P < 0.05),其中10 μg/L转化生长因子β1作用48 h增殖较对照组增强最为明显(P < 0.01)。不同剂量转化生长因子β1刺激后迁移的细胞数目随转化生长因子β1质量浓度增加而增加,促进作用逐渐增强,呈剂量依赖关系。     

转化生长因子β1和胰岛素样生长因子Ⅰ及其协同作用对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

背景：皮肤成纤维细胞注射移植为颜面部皱纹及微小凹陷等治疗提供了一种全新的方法,然而成纤维细胞的获取及体外快速扩增往往需要较长时间,以至于不能满足临床需要。 目的：观察转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ及两者协同作用对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响。 方法：人皮肤成纤维细胞原代培养,取第3代细胞种入96孔板,加入不同质量浓度的转化生长因子β1或胰岛素样生长因子Ⅰ作用于细胞,分别作用3,6,9 d采用MTT法检测细胞增殖情况。同法设4个组,分别为：阴性对照组、转化生长因子β1最佳效应浓度组、胰岛素样生长因子Ⅰ最佳效应浓度组、两者最佳效应浓度联用组,作用3,6,9 d采用MTT法检测增殖情况。 结果与结论：作用6 d和9 d,10.0 μg/L转化生长因子β1、50.0 μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ组与对照组相比均有促细胞增殖效应(P < 0.05),此即为各生长因子最佳效应浓度。作用6 d和9 d,转化生长因子β1与胰岛素样生长因子Ⅰ各浓度实验组与相应对照组相比,差异均有显著性意义(P < 0.05)。10.0 μg/L转化生长因子β1与50.0 μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ联合作用9 d可显著促进细胞增殖,与其他组相比,差异有显著性意义(P < 0.05)。提示转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ均可体外促进人皮肤成纤维细胞增殖,最佳效应浓度联用促增殖效果优于各自单独使用。     

RhoA/ROCK-I信号通路与增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子的表达

背景：前期实验表明增生性瘢痕中RhoA和ROCK-I基因表达较正常皮肤高,提示RhoA/ROCK-I信号通路可能参与了增生性瘢痕的发生,但其在病理性瘢痕中的作用尚不清楚。 目的：研究RhoA/ROCK-I信号通路在增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达调控中的作用。 方法：分离培养人增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞,应用转化生长因子β1及Rho激酶的特异抑制剂Y-27632对细胞进行干预实验。采用实时荧光定量PCR及免疫荧光细胞化学方法检测瘢痕成纤维细胞中RhoA,ROCK-I及CTGF mRNA与蛋白的表达。 结果与结论：给予转化生长因子β1后,增生性瘢痕成纤维细胞中RhoA,ROCK-I及CTGF mRNA与蛋白表达明显增多(P < 0.01);而Y-27632能阻碍转化生长因子β1的作用;但单独给予Y-27632并不引起瘢痕成纤维细胞中RhoA,ROCK-I及CTGF的mRNA与蛋白表达改变。说明转化生长因子β1可通过RhoA/ROCK-I信号通路调控CTGF mRNA与蛋白的表达,即RhoA/ROCK-I信号通路参与了瘢痕成纤维细胞CTGF的表达调控,阻断RhoA下游通路是增生性瘢痕治疗靶点之一。     

基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达

背景：与瘢痕疙瘩和增生性瘢痕发生机制相关的基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1信号传递通路研究多集中在体外成纤维细胞的培养上,而在组织中的相关研究少见报道。 目的：观察瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1蛋白的表达。 方法：取自2004/2008唐山市工人医院烧伤整形科手术患者,瘢痕疙瘩54例,增生性瘢痕42例。选取同期45例因非感染手术切除的正常瘢痕组织作为对照组,选取同期45例正常皮肤组织作为正常对照组。应用流式细胞仪检测4组中基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1的表达,分析两者的相关性。 结果与结论：瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中转化生长因子β1的表达明显高于正常瘢痕组织和正常皮肤组织;正常瘢痕组织中转化生长因子β1的表达明显则高于正常皮肤组织,而基质金属蛋白酶13的表达与之相反。瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常瘢痕组织中基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1表达呈负相关。由此推测基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1在瘢痕组织中异常表达,二者可能具有协同负向作用,共同参与病理性瘢痕的发生发展。     

槟榔提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用

背景：目前有关槟榔成分对成纤维细胞增殖的影响存在两种截然不同的结果。有学者用较低浓度的槟榔碱能促进成纤维细胞增殖,另有实验显示槟榔碱在高于15.6 mg/L时对成纤维细胞的直接作用是抑制成纤维细胞生长和胶原合成。 目的：进一步验证槟榔提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。 设计、时间及地点：分组对比观察,于2002年在解放军总医院烧伤研究所完成。 材料：槟榔生药为北京同仁堂提供。手术中取下的2例增生性瘢痕患者组织,年龄30岁以下,病程半年~2年,患者对治疗及研究均知情同意。 方法：体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,分别加入15.63,31.25,62.5,125,250,500 mg/L不同剂量的槟榔提取物作用。 主要观察指标：24 h后观察细胞形态学,以乳酸脱氢酶为指标观察细胞毒性,以四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性。 结果：加入不同剂量提取物作用24 h后,培养上清液中乳酸脱氢酶与对照组无显著性差异(P > 0.05);不同浓度的槟榔提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在500 mg/L以下无明显的细胞毒作用。 结论：槟榔提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。     

Effects of basic fibroblast growth factor on expressions of collagen and fibronectin in normal skin and hypertrophic scar fibroblasts**☆◆

背景：碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)可以调控皮肤创面愈合,但其调控机制尚未阐明。 目的：研究bFGF在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中的作用和机制。 方法：从5例进行瘢痕修复手术患者身上同时取正常皮肤和增生性瘢痕组织,分离培养正常人皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞。应用RT-PCR和酶联免疫吸附法检测两种成纤维细胞胶原、纤维连接蛋白（FN）基因表达和蛋白合成。采用JC-1染色和流式细胞术测定成纤维细胞线粒体膜电位改变,采用化学发光法检测细胞内ATP水平改变。观察bFGF队两种细胞的上述指标的影响。 结果与结论：不同浓度bFGF可减慢增生性瘢痕成纤维细胞生长,抑制增生性瘢痕成纤维细胞I型胶原表达和合成(P<0.05)。bFGF对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞III型胶原表达和合成均无影响。然而可上调正常皮肤成纤维细胞表达FN(P<0.05)。此外,10、100 ng/ml bFGF处理后增生性瘢痕成纤维细胞线粒体膜电位改变显著高于正常皮肤成纤维细胞(P<0.05),正常皮肤成纤维细胞中ATP水平显著增高(P<0.05)。结果表明,bFGF在正常皮肤创面愈合和增生性瘢痕形成中可能有不同的作用和机制。     

Smad3和转化生长因子β1在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤中的表达：48∶40∶40例标本病理检测

目的：与病理性瘢痕发生机制相关的Smad3/转化生长因子β1信号传递通路研究多集中在体外成纤维细胞的培养上,在瘢痕疙瘩中的表达少见报道。检测病理性瘢痕中Smad3和转化生长因子β1蛋白的表达,探讨其在病理性瘢痕发生及发展中的作用。 方法：实验标本均来自2004-06/2008-06河北医科大学附属唐山工人医院烧伤整形科手术患者,瘢痕疙瘩48例,年龄16~52岁;增生性瘢痕40例,年龄18~56岁;选取同期因其他手术切除的正常皮肤组织40例作为对照组。应用流式细胞术检测48例瘢痕疙瘩、40例增生性瘢痕及40例正常皮肤组织Smad3和转化生长因子β1的表达。 结果：Smad3和转化生长因子β1在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达明显高于正常皮肤组织中的表达(P < 0.05),Smad3和转化生长因子β1在瘢痕疙瘩和增生瘢痕中的表达差异无显著性意义(P > 0.05)。瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中Smad3和转化生长因子β1表达呈正相关(r=0.489 2, P=0.000 4;r=0.471 0,P=0.002 2),Smad3和转化生长因子β1在正常皮肤组织中的表达未见明显相关性(P=0.471 4)。 结论：Smad3和转化生长因子β1在病理性瘢痕中高表达,Smad3和转化生长因子β1的协同作用可能参与病理性瘢痕的发生发展。     

血管紧张素Ⅱ受体在增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成中的作用

背景:最新研究发现，血管紧张素Ⅱ与皮肤纤维化病变的发生和发展有关，然而有关血管紧张素Ⅱ受体在人增生性瘢痕成纤维细胞中的表达及作用鲜见报道。 目的:观察血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体在人增生性瘢痕成纤维细胞中的表达，并探讨它们在成纤维细胞胶原合成中的作用。 设计、时间及地点:对比观察，于2006-08/ 2007-11在解放军广州军区广州总医院医学实验中心完成。 对象:取住院患者增生性瘢痕18例，男10例，女8例，年龄19~47岁，将增生性瘢痕标本分为两组，每组各9例。正常皮肤7例，取自增生性瘢痕切除患者的正常皮肤。所有取材部位未经任何治疗，标本经无菌取材后分成2份，其中一份用40 g/L多聚甲醛固定后用于免疫组织化学检测，另一份用于成纤维细胞培养。 方法:采用免疫组织化学的方法和放射性配体受体结合测定法观察人增生性瘢痕组织中成纤维细胞血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体的表达，并用体外细胞培养技术观察2种受体在人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成中的作用。 主要观察指标:2种受体在增生性瘢痕组织成纤维细胞中的表达及在人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成中的作用。 结果:①在增生性瘢痕的成纤维细胞可见1型受体和2型受体表达，阳性染色信号较强。放射性配体受体结合测定法显示在培养的增生性瘢痕的成纤维细胞有1型受体和2型受体，受体密度分别为(10.69±2.15)，(4.9±1.05) fmol/106个细胞。②在培养的人增生性瘢痕成纤维细胞，血管紧张素Ⅱ明显促进成纤维细胞胶原的合成，1型受体阻断剂Valsartan明显抑制血管紧张素Ⅱ的这种促进作用，2型受体拮抗剂PD123319明显增强血管紧张素Ⅱ的这种作用。 结论:在增生性瘢痕的成纤维细胞表达血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体，血管紧张素Ⅱ通过激活2种受体对成纤维细胞胶原的合成产生相反的作用，血管紧张素Ⅱ产生和受体表达比例的变化可能影响瘢痕的形成和成熟。