转化生长因子β1与体外血管外膜成纤维细胞的增殖和迁移*

背景：近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用。当血管损伤后,转化生长因子β1在局部水平上调激活下游多种信号途径,其对血管外膜成纤维细胞参与新生内膜增生过程中所起的作用尚不十分清楚。 目的：观察转化生长因子β1对体外血管外膜成纤维细胞增殖和迁移的影响 方法：体外培养大鼠胸主动脉成纤维细胞,分别以0,3,5,10,15 μg/L的转化生长因子β1刺激成纤维细胞0,2,12,24,48,72 h。以MTT法检测细胞增殖活性,Transwell Chamber测试细胞迁移。 结果与结论：转化生长因子β1能诱导血管外膜成纤维细胞增殖,随着转化生长因子β1质量浓度、作用时间的增加,诱导血管外膜成纤维细胞增殖能力增强(P < 0.05),其中10 μg/L转化生长因子β1作用48 h增殖较对照组增强最为明显(P < 0.01)。不同剂量转化生长因子β1刺激后迁移的细胞数目随转化生长因子β1质量浓度增加而增加,促进作用逐渐增强,呈剂量依赖关系。     

转化生长因子β1对长波紫外线照射皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子表达的影响*☆

背景：研究认为衰老和光老化状态下生长因子的表达不一定一致,生长因子与皮肤老化的关系越来越受到重视。 目的：验证转化生长因子β1对长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、角质细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子表达的影响 。 设计、时间及地点：以体外培养细胞为观察对象,随机重复实验,于2006-07/2008-03在解放军第四军医大学全军整形外科研究所进行。 材料：成纤维细胞来自解放军第四军医大学整形外科门诊患者包皮,采用组织块法培养获得。 方法：通过酶联免疫法(ELISA)使用不同剂量长波紫外线 (0,5 ,10,20 J/ cm2)照射体外培养的皮肤成纤维细胞,测定上清液中胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、 血管内皮细胞生长因子的质量浓度;以长波紫外线15 J/ cm2为照射剂量,选择不同剂量转化生长因子β1即小剂量组(0.1 μg/L)、中剂量组(1 μg/L)、大剂量组(10 μg/L)对培养的皮肤成纤维细胞进行干预。 主要观察指标：不同剂量长波紫外线照射、以及转化生长因子β1处理后皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、血管内皮细胞生长因子、角质形成细胞生长因子的表达。 结果：长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞导致胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子分泌水平下降,血管内皮细胞生长因子分泌升高;转化生长因子β1处理后,转化生长因子β1剂量依赖性地提高长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞分泌的3种细胞因子的水平。转化生长因子β1大剂量组胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子含量明显高于长波紫外线照射组(P < 0.01)。 结论：长波紫外线照射抑制体外培养成纤维细胞中胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子表达, 促进血管内皮细胞生长因子表达。转化生长因子β1可提高长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞分泌胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子3种细胞因子的水平,有利于真皮内结构的恢复和重建。     

蛇床子素干预人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及转化生长因子β1的表达

背景：蛇床子素对体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和细胞分泌的转化生长因子β1有抑制作用,但其具体作用机制尚待进一步研究。 目的：体外观察蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及对细胞转化生长因子β1的影响。 方法：体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于成纤维细胞,观察细胞形态的变化,应用MTT法和生长曲线法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响。免疫组织化学检测细胞转化生长因子β1的表达。 结果与结论：蛇床子素能明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长。MTT法检测的IC50为(15.2±2.0) μmol/L,可以明显下调细胞转化生长因子β1的表达(P < 0.05)。说明蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以下调转化生长因子β1的表达。     

转化生长因子β1和胰岛素样生长因子Ⅰ及其协同作用对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

背景：皮肤成纤维细胞注射移植为颜面部皱纹及微小凹陷等治疗提供了一种全新的方法,然而成纤维细胞的获取及体外快速扩增往往需要较长时间,以至于不能满足临床需要。 目的：观察转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ及两者协同作用对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响。 方法：人皮肤成纤维细胞原代培养,取第3代细胞种入96孔板,加入不同质量浓度的转化生长因子β1或胰岛素样生长因子Ⅰ作用于细胞,分别作用3,6,9 d采用MTT法检测细胞增殖情况。同法设4个组,分别为：阴性对照组、转化生长因子β1最佳效应浓度组、胰岛素样生长因子Ⅰ最佳效应浓度组、两者最佳效应浓度联用组,作用3,6,9 d采用MTT法检测增殖情况。 结果与结论：作用6 d和9 d,10.0 μg/L转化生长因子β1、50.0 μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ组与对照组相比均有促细胞增殖效应(P < 0.05),此即为各生长因子最佳效应浓度。作用6 d和9 d,转化生长因子β1与胰岛素样生长因子Ⅰ各浓度实验组与相应对照组相比,差异均有显著性意义(P < 0.05)。10.0 μg/L转化生长因子β1与50.0 μg/L胰岛素样生长因子Ⅰ联合作用9 d可显著促进细胞增殖,与其他组相比,差异有显著性意义(P < 0.05)。提示转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ均可体外促进人皮肤成纤维细胞增殖,最佳效应浓度联用促增殖效果优于各自单独使用。     

丹参酮ⅡA对心脏成纤维细胞转化生长因子β1/Smads信号通路的作用

背景：转化生长因子β1通过Smads信号通路刺激心脏成纤维细胞增殖与分化是心肌纤维化最重要的发生机制之一。 前期研究证实丹参酮ⅡA能有效抑制心肌纤维化,但是否通过阻断转化生长因子β1/Smads信号通路起作用尚不清楚。目的：观察丹参酮ⅡA对大鼠心脏成纤维细胞内转化生长因子β1信号转导的影响。 方法：采用胰酶消化法和差速贴壁法获取新生SD大鼠心脏成纤维细胞,应用5 μg/L转化生长因子β1刺激及不同浓度丹参酮ⅡA (10-6,10-5和10-4 mol/L)。用反转录聚合酶链反应法和免疫蛋白印迹法分别检测转化生长因子β1刺激后6,12和24 h纤维连接蛋白的表达,免疫蛋白印迹法检测转化生长因子β1刺激后15,30,60和120 min的Smads蛋白表达。 结果与结论：纤维连接蛋白mRNA和蛋白表达量在转化生长因子β1刺激6 h后开始呈现上升趋势,至作用24 h时分别增加1.3倍和1.8倍(P < 0.01);磷酸化Smad2/3 蛋白表达量在转化生长因子β1刺激15 min后开始上升,1 h达到高峰,2 h后虽有所下降,但仍较刺激前增加3.9倍(P < 0.01)。丹参酮ⅡA(10-5和10-4 mol/L)预处理可下调纤维连接蛋白和磷酸化Smad2/3表达(P < 0.05或P < 0.01),而且效应呈剂量依赖性。由此可知,转化生长因子β1在一定范围内以时间依赖方式诱导纤维连接蛋白及其mRNA 和磷酸化Smad2/3表达。丹参酮ⅡA抗心肌纤维化作用可能与其抑制转化生长因子β1诱导的Smad2/3磷酸化,阻断心脏成纤维细胞内转化生长因子β1/Smads信号通路有关。     

胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子、转化生长因子β1对

背景：生长因子可调整椎间盘细胞的增殖、分化及基质代谢,用于椎间盘退变的生物学治疗,既往的研究偏重于成骨性生长因子对髓核细胞的作用,对纤维环细胞的研究相对较少。 目的：观察体外培养条件下胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子、转化生长因子β1对人退变纤维环细胞生物学活性的影响。 设计、时间及地点：对照观察实验,于2007-11/2008-12在解放军南京军区福州总医院完成。 材料：腰椎间盘手术患者的纤维环组织。 方法：结合酶消化法和组织块培养法,体外单层培养人退变纤维环原代细胞。传代后通过免疫组织化学染色鉴定细胞。对传3代细胞分别采用不同生长因子干预,分为 100 μg/L胰岛素样生长因子1组、10 μg/L 血小板源性生长因子组、10 μg/L 转化生长因子β1组、100 μg/L 胰岛素样生长因子 1+ 10 μg/L 血小板源性生长因子组、100 μg/L 胰岛素样生长因子1+ 10 μg/L 转化生长因子β1组、10 μg/L 血小板源性生长因子+10 μg/L 转化生长因子β1组、100 μg/L 胰岛素样生长因子1+10 μg/L血小板源性生长因子+10 μg/L 转化生长因子β1组,以不加生长因子为对照组。 主要观察指标：免疫组织化学染色观察传3代细胞。干预3,6 d后,采用MTT法测定传3代细胞增殖,ELISA法测定细胞培养上清液中Ⅰ、Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖质量浓度。 结果：传3代细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性。胰岛素样生长因子1促进人退变纤维环细胞增殖,轻度抑制细胞合成Ⅰ型胶原,促进合成Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖,促Ⅱ型胶原合成作用轻度强于转化生长因子β1。血小板源性生长因子促进细胞增殖,作用强于胰岛素样生长因子1,其抑制细胞合成Ⅰ型胶原,轻度促进合成Ⅱ型胶原,无促合成聚集蛋白聚糖作用。转化生长因子β1抑制细胞增殖,促进合成Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖,促聚集蛋白聚糖合成作用强于胰岛素样生长因子1。多种因子联合作用较单种未见明显优势,未能呈现协同效应。 结论：胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子、转化生长因子β1明显改变人退变纤维环细胞的生物学活性,可应用于对人类椎间盘退变的生物学治疗。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型的改变

背景：近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用,但对于引起血管外膜成纤维细胞表型转化的机制尚不十分清楚。 目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)γ激动剂对转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变,同时检测对Ⅰ胶原蛋白表达的作用。 设计、时间及地点：随机分组设计,对比观察,于2007-07/2008-10在上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程实验室完成。 材料：鼠龄2个月的健康雄性SD大鼠,体质量约120 g,用于体外培养大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞;转化生长因子β1由美国GenWay Biotech公司提供;罗格列酮粉剂为北京高盟化工有限公司产品。 方法：实验分为3组：转化生长因子β1诱导组：以不同质量浓度的转化生长因子β1(3,5,10,15 μg/L)诱导成纤维细胞48 h;罗格列酮干预组：用不同浓度的PPAR-γ激动剂罗格列酮(5,10,30,50 μmol/L)干预成纤维细胞45 min后,加入转化生长因子β1 10 μg/L共同培养48 h;对照组：不添加任何干预措施。 主要观察指标：①免疫组织化学α-平滑肌肌动蛋白检测不同浓度转化生长因子β1、罗格列酮干预后成纤维细胞的表型改变。②蛋白免疫印迹检测成纤维细胞中平滑肌α2肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白的表达。 结果：不同质量浓度转化生长因子β1诱导成纤维细胞48 h后,与对照组相比,5 μg/L转化生长因子β1可明显刺激成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达,10 μg/L转化生长因子β1刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达最明显(P < 0.05),随后转化生长因子β1再增加至15 μg/L,与10 μg/L转化生长因子β1浓度组相比,其刺激细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达不再增加(P > 0.05)。不同浓度罗格列酮干预10 μg/L转化生长因子β1诱导的成纤维细胞48 h后,与对照组相比,30 μmol/L可明显抑制成纤维细胞表型改变及细胞中平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达(P < 0.05)。 结论：PPAR-γ激动剂罗格列酮能抑制转化生长因子β1诱导体外血管外膜成纤维细胞表型改变及平滑肌α2肌动蛋白和Ⅰ型胶原蛋白的表达。     

转化生长因子β1在大鼠房水中的药物浓度

背景：研究证实,转化生长因子β1滴眼液具有促进角膜损伤愈合的作用。 目的：观察转化生长因子β1滴眼液表面应用后在房水中的药物浓度,验证其在预防和治疗角膜移植排斥反应中的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-04/07在珠江医院中心实验室完成。 材料：成年雌性SPF级SD大鼠32只,体质量200~250 g。干粉状转化生长因子β1为美国SANTA公司产品。 方法：将32只大鼠随机分为4组,空白对照组,转化生长因子β1 0.5,1,2 mg/L组,每组各8只。分别给予生理盐水、0.5,1,2 mg/L转化生长因子β1滴眼液,3次/d,用药1周。 主要观察指标：①观察眼部刺激症状。②应用酶联免疫吸附法定量测定房水中的转化生长因子β1质量浓度。 结果：大体与裂隙灯显微镜观察,实验前后和实验过程中,各组大鼠眼均无结膜分泌物、球结膜充血、角膜水肿、角膜后沉着物、前房炎性反应及晶状体混浊改变。空白组和3种不同浓度的转化生长因子β1滴眼液滴眼后房水中药物质量浓度分别是(0.429±0.187),(0.964±0.284),(2.127±0.673),(2.282±0.745) μg/L。 结论：1 mg/L和2 mg/L转化生长因子β1滴眼液能有效提高大鼠眼房水中转化生长因子β1的质量浓度(P < 0.05),具有良好的角膜穿透性,在房水中可以达到有效的治疗浓度。转化生长因子β1滴眼液能够在局部发挥药物的作用,避免药物全身应用的不良反应。     

碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖与分化的影响

背景: 体外培养软骨细胞经历多次传代后，其增殖能力将逐渐退化。实验表明，碱性成纤维细胞生长因子可促进软骨细胞增殖，并可能影响软骨细胞的表型与分化。 目的：观察碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖和分化的影响，并筛选其用于体外软骨细胞培养的最佳剂量。 设计、时间及地点：以细胞为观察对象的观察对比实验，于2004-10/2005-02在暨南大学医学院生化教研室组织工程实验室完成。 材料：选用12只新西兰白兔用于分离软骨细胞，碱性成纤维细胞生长因子由英国PeproTech公司生产。 方法：分离并在低血清条件下培养兔生长板软骨细胞。根据实验需要加入0，1，2.5，5，10，25，50及100 μg/L 8个剂量的碱性成纤维细胞生长因子，进行各项指标观察。 主要观察指标：应用改良四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖倍数；应用羟脯氨酸法测定软骨细胞胶原产量；应用酶动力学方法测定碱性磷酸酶活性。 结果：①碱性成纤维细胞生长因子剂量在5~100μg/L范围内可以促进软骨细胞增殖，并以25 μg/L时刺激效果最为显著。②当碱性成纤维细胞生长因子剂量高于 25 μg/L时，软骨细胞的胶原合成被抑制。③当碱性成纤维细胞生长因子剂量高于 1 μg/L时，软骨细胞的碱性磷酸酶活性被抑制。 结论：碱性成纤维细胞生长因子可以刺激生长板软骨细胞增殖，并在剂量高于25 μg/L时抑制生长板软骨细胞的分化。     

转化生长因子β1对长波紫外线照射皮肤成纤维细胞线粒体DNA 4 977 bp缺失的影响

背景：长波紫外线与人体皮肤光老化关系密切,线粒体的损伤是细胞衰老和死亡的分子基础。 目的：观察长波紫外线照射对体外培养的皮肤成纤维细胞的线粒体脱氧核糖核酸缺失损伤的影响,以及转化生长因子β1对长波紫外线引起的线粒体DNA缺失有无保护作用。为皮肤光老化研究提供实验依据。 设计、时间及地点：实验于2007-03/2008-04于解放军第四军医大学西京医院全军整形外科研究所完成。 材料：转化生长因子β1为 PerProtech公司产品;线粒体DNA 4 977 bp引物由上海生工合成;长波紫外线光源为北京光学仪器厂生产;紫外线辐照计为北京师范大学光电仪器厂生产。 方法：收集20~23岁成年男性包皮环切术后的皮肤组织12 例,体外培养成纤维细胞。将细胞分组为对照组、长波紫外线累计照射达到30,60,90 J/cm2组,半定量PCR检测DNA 4 977 bp缺失情况。不同质量浓度转化生长因子β1(0.1,1,10 μg/L)干预长波紫外线累积照射达90 J/cm2的皮肤成纤维细胞。 主要观察指标：观察不同累积照射剂量产生的DNA 4 977 bp缺失;观察累积照射剂量90 J/cm2后不同浓度转化生长因子干预对DNA4 977 bp缺失的影响。 结果：体外培养的皮肤成纤维细胞经长波紫外线照射,长波紫外线累积剂量为长波紫外线60 J/cm2后发生线粒体DNA 4 977 bp 缺失,长波紫外线90 J/cm2时缺失加重。吸光度值和PCR产物电泳及条带密度扫描结果显示,在照射前2 h加入不同剂量转化生长因子处理后,大剂量组(10 μg/L)线粒体DNA表达降低,中、小剂量组与长波紫外线照射组比较,差异无显著性意义。 结论：一定剂量(10 μg/L)转化生长因子对体外培养的成纤维细胞线粒体DNA缺失起到保护作用。     

Effect of antisense suppression of transforming growth factor-beta3 gene on lactotropic cell proliferation

The mechanism by which oestrogen regulates lactotropic cell proliferation is not well understood. Recently it has been shown that a transforming growth factor beta (TGF-beta) gene-related peptide, TGF-beta3, is produced in the lactotropes and stimulates lactotropic cell proliferation in vitro. In this study, the role of this growth factor in oestrogen-induced lactotropic cell proliferation was determined in vitro using oligonucleotide designed to inhibit TGF-beta3 gene expression. We used the oligonucleotide in an antisense orientation, which is complementary to regions in the TGF-beta3 message. Oligonucleotides in sense and missense orientation were also used. We found that the antisense sequence that was effectively incorporated into pituitary cells produced a marked inhibition of the stimulatory action of oestrogen on lactotropic cell proliferation. Sense and missense oligonucleotides produced no significant effects on oestrogen-stimulated lactotropic cell proliferation. The growth-inhibitory effect of antisense oligonucleotide was blocked by TGF-beta3 peptide. These results suggest that TGF-beta3 may be involved in the processes that mediate oestrogen-regulated lactotropic cell proliferation.     

Regulation of FLRG expression in rat primary astroglial cells and injured brain tissue by transforming growth factor-beta 1 (TGF-beta 1)

Follistatin-related gene (FLRG) is a member of the follistatin family of proteins and interacts with transforming growth factor (TGF) superfamily proteins like follistatin. To understand the expression level of FLRG in brain tissue, we examined whether primary neurons and glial cells from rat embryos express FLRG mRNA and produce its protein product. FLRG and follistain mRNAs were mainly expressed in astroglial cells, while activin A mRNA was abundant in primary neurons. TGF-beta1 highly enhanced expression levels of FLRG mRNA in astroglial cells, compared with those of follistatin and activin A mRNAs. Particularly, TGF-beta1 facilitated the secretion of FLRG protein from primary astroglial cells in a dose-dependent manner. Moreover, changes in expression levels of FLRG mRNA and protein in brain tissue were also analyzed after a penetrating injury, using quantitative polymerase chain reactin (PCR) and immunohistochemical methods. Expression levels of FLRG mRNA were significantly increased in damaged regions after penetrating injury together with those of activin A and TGF-beta1 mRNAs. Immunohistochemical observations showed that positive signals of FLRG protein were colocalized in glial fibrillary acidic protein-positive reactive astroglial cells located in damaged regions after a penetrating injury. The expression of follistatin mRNA rather decreased in damage regions after the brain injury. These results suggest that FLRG is synthesized in and secreted from astroglial cells. In particular, FLRG, but not follistatin, may play a role in the regulation of activin A in brain wound healing in response to TGF-beta1.     

Expression of transforming growth factor-beta 1 in periventricular leukomalacia.

The expression of transforming growth factor-beta 1, which has neurotrophic effects, was investigated in 25 neonates with periventricular leukomalacia using immunohistochemistry. In controls, transforming growth factor-beta 1 immunoreactivity was not detected in the cerebral white matter or cortex. Of the 25 cases of periventricular leukomalacia, transforming growth factor-beta 1 immunoreactivity was found in 16, and was distributed mainly in the cytoplasm of astrocytes, being prominent around necrotic foci in the white matter. The immunoreactivity was negative or weak at the acute stage of periventricular leukomalacia, and increased at the subacute stage and then decreased or was absent at the chronic stage. Astrocytes that were moderately or markedly positive for transforming growth factor-beta 1 were not found before 27 weeks' gestation, but were observed after 32 weeks' gestation in the white matter of the brains of neonates with periventricular leukomalacia. Transforming growth factor-beta 1 expression tended to be more obvious in focal periventricular leukomalacia than in widespread or diffuse periventricular leukomalacia. Our results suggest that transforming growth factor-beta 1 could be involved in the delayed glial response rather than the initial glial activation, and could play a role in the inhibition and repair of injury in periventricular leukomalacia. Exogenous transforming growth factor-beta 1 could have therapeutic potential for periventricular leukomalacia.     

Ischemia induced neural stem cell proliferation and differentiation in neonatal rat involved vascular endothelial growth factor and transforming growth factor-beta pathways

Brain ischemia is a leading cause of mortality and morbidity in premature infants. Knowing the fate of neural stem cells in the subventricular zone (SVZ) after ischemia and the mechanisms that determine this fate would be useful in manipulating neural stem cell proliferation and differentiation and possibly in reversing ischemic damage. We sought to identify the genes involved in the proliferation and differentiation of neural stem cells after exposure to ischemia in a 3-day-old rat model that approximates ischemia in premature infants. Proliferating cells were labeled by bromodeoxyuridine (BrdU) through intraperitoneal injection. Using immunfluorescence assays, we observed the proliferation and differentiation of neural stem cells. Genes were identified with GeneChip and real-time quantitative polymerase chain reaction analysis. Ischemic rats had more BrdU-positive cells in the SVZ at all four time points and more neural stem cells differentiation into neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. GeneChip analysis showed a 3- to 10-fold increase in the mRNA expression of vascular endothelial growth factor, transforming growth factor-beta, and their receptors in the SVZ. PCR assays and Western blot analyses confirmed these results, indicating that vascular endothelial growth factor and transforming growth factor-beta might be two of the factors that involve post-ischemic neural stem cell proliferation and differentiation.     

转化生长因子β1对大鼠肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1表达的影响★

目的：已知转化生长因子β1与肾脏组织纤维化形成有密切关系。拟进一步探讨转化生长因子β1对大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）中基质细胞衍生因子1表达的影响。 方法：实验于2006-03/2007-05在四川大学生物治疗国家重点实验室神经分子生物实验室完成。①实验材料：大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK52E，由澳大利亚Monash医学中心肾内科实验室提供；转化生长因子β1由cytolab公司提供。②实验分组：将大鼠近端肾小管上皮细胞分为正常对照组：无转化生长因子β1 干预；实验组：又分为在同一转化生长因子β1浓度(2 μg/L)下，培养6，12，24 h；在不同的转化生长因子β1浓度(2，5，10 μg/L)下，培养24 h。③利用免疫细胞化学技术对同一转化生长因子β1浓度(2 μg/L)干预不同时间后的大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子１的蛋白表达进行半定量分析，选择出最佳的作用时间点；通过反转录-聚合酶链反应、Western-Blotting以检测大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1在不同转化生长因子β1浓度干预下培养24 h后的mRNA、蛋白表达变化情况。 结果：①培养12，24 h时,大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1的蛋白表达比0 h增高(P < 0.05)；24 h时表达略高于12 h (P > 0.05)。提示，基质细胞衍生因子1的表达到达一平台期，24 h为最佳的作用时间点。②从mRNA水平和蛋白水平均证实，2 μg/L转化生长因子β1干预24 h后的大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1的表达高于正常对照组 (P < 0.05)；随着转化生长因子β1的浓度增大，表达呈下降趋势，10 μg/L时表达低于2 μg/L时的表达(P < 0.05)。 结论：基质细胞衍生因子1在正常的大鼠近端肾小管上皮细胞中呈低表达状态，对转化生长因子β1的干预表现出一定的时间、剂量依赖性，基质细胞衍生因子1可能参与了肾间质纤维化的发生、发展。     

小鼠心肌转化生长因子β1表达与依普利酮的影响☆

目的：观察高选择性醛固酮受体拮抗剂依普利酮对鸟苷酸环化酶偶联受体-A基因敲除小鼠心肌转化生长因子β1表达的影响，并对其逆转心室重构的分子机制进行探讨。 方法：实验于2005-06/2006-04 在河北省人民医院心内科、日本奈良县立医科大学第一内科完成。①实验材料：鸟苷酸环化酶偶联受体-A基因敲除小鼠20只由日本国立循环器病中心岸本一郎教授馈赠，雄性，12周龄，基因背景为清洁级C57BL/6小鼠，随机数字表法分为空白对照组6只、依普利酮组7只、肼苯哒嗪组7只。另取同龄野生型小鼠7只作为野生组。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：依普利酮组每天通过饲料给予100 mg/kg依普利酮，肼苯哒嗪组每天通过饮用水给予10 mg/kg肼苯哒嗪，均给药4周。空白对照组与野生组不进行任何干预。③实验评估：每周检测小鼠尾动脉收缩压及体质量。各组小鼠于16周龄时采用腹主动脉抽血法处死，称取心脏重量，计算心脏重量与体质量的比值。心脏切片行Masson三色染色，并利用图像分析系统测量心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积和管腔面积之比。实时定量PCR法检测心室胶原纤维Ⅰ、胶原纤维Ⅲ 、心肌转化生长因子β1 mRNA在心肌组织的表达。 结果：①心室重构指标检测：与野生组比较，空白对照组收缩压、心脏重量/体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积/管腔面积均显著升高（P < 0.01）。与空白对照组比较，依普利酮组上述4项指标均显著下降（P < 0.05或0.01）；肼苯哒嗪组收缩压明显下降（P < 0.01），心脏重量/体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积/管腔面积则明显升高（P < 0.05）。②心肌纤维化情况： 与空白对照组比较，依普利酮治疗4周后小鼠心肌纤维化得到改善，心脏重量/体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积/管腔面积3项量化指标均降低；肼苯哒嗪治疗４周后表现为心肌纤维化加重，3项量化指标相应增加。③心肌胶原纤维Ⅰ、胶原纤维Ⅲ及心肌转化生长因子β1 mRNA的表达：与空白对照组比较，依普利酮治疗4周后小鼠胶原纤维Ⅰ、胶原纤维Ⅲ及心肌转化生长因子β1的mRNA表达均下降；肼苯哒嗪治疗4周后三者mRNA的表达均升高。 结论：依普利酮可独立于血压改善小鼠心肌纤维化和心室重构，其作用机制可能与抑制心室肌高表达的心肌转化生长因子β1有关。     

Isoform-specific role of transforming growth factor-beta2 in the regulation of proliferation and differentiation of murine adrenal chromaffin cells in vivo

Chromaffin cells, the neuroendocrine cells of the adrenal medulla, play an important role in molecular, cellular, and developmental neurobiology. Unlike the closely related sympathetic neurons, chromaffin cells are able to proliferate throughout their whole life span. Proliferation of chromaffin cells in vivo is thought to be regulated by the interaction of neurogenic and hormonal signals. Previous studies have shown that chromaffin cells synthesize and release transforming growth factor-betas (TGF-betas). In the present study, effects of TGF-betas on proliferation and differentiation of chromaffin cells in mouse adrenal chromaffin cells were investigated in a genetic mouse model. We observed a significant increase in the total number of tyrosine hydroxylase-positive (TH(+)) cells in Tgfbeta2(-/-) knockout mouse embryos at embryonic day (E) 18.5 compared with wild-type animals (Tgfbeta2(+/+)), but no changes in the number of TH(+) cells were observed in Tgfbeta3(-/-) mouse mutants. At E15.5, but not at E18.5, there was a marked increase in the number of proliferative cell nuclear antigen-positive chromaffin cells in Tgfbeta2(-/-) knockout embryos compared with the wild-type group. On the other hand, there was a clear decrease in the ratio of total number of phenylethanolamine-N-methyltransferase-positive cells to the total TH(+) in Tgfbeta2(-/-) mice embryos at E18.5 compared with wild-type animals. This is the first documentation of the physiological significance of the TGF-beta2, an isoform that has been suggested to play a role in the regulation of chromaffin cells proliferation and differentiation based on in vitro experiments.