银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平

背景：课题组在前期研究中发现银屑病患者骨髓造血细胞活性存在异常。 目的：观察银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平。 设计、时间及地点：病例-对照观察,于2007-10/2008-08在太原市中心医院皮肤科实验室完成。 对象：选择太原市中心医院皮肤科临床及病理确诊为寻常型银屑病的门诊患者24例,男16例,女8例;年龄16~59岁;另取血液科骨穿后经筛选的正常骨髓20例作为对照组,性别、年龄与银屑病患者匹配。 方法：采用密度梯度离心法分离银屑病患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞,收集传了3代后又培养72 h的骨髓基质细胞及培养上清。 主要观察指标：流式细胞仪检测细胞表面标志并用ELISA法检测上清液中干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平。 结果：流式细胞仪检测结果显示,90%以上细胞表面抗原高表达CD29,而CD34、CD45及HLA-DR表达阴性,即骨髓基质细胞纯度在90%以上。银屑病组骨髓基质细胞培养上清液的干细胞因子和粒细胞集落刺激因子表达均显著高于对照组 (P < 0.01)。 结论：银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子存在异常,提示银屑病患者骨髓造血微环境发生了改变。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转染的骨髓基质细胞治疗脑梗死的疗效及机制研究

目的探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因转染的骨髓基质细胞(BMSCs)治疗脑梗死的疗效及机制。方法 135只SD大鼠随机分为假手术组(30只)、对照组(30只)、BMSCs组(30只)和GM-CSF-BMSCs组(45只)。采用线栓法制作短暂性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,24 h后分别将α-MEM培养基、BMSCs和GM-CSF基因转染的BMSCs植入到对照组、BMSCs组和GM-CSF-BMSCs组大鼠缺血脑组织周边区域(IBZ)。移植后第3 d、7 d和21 d进行神经损伤严重程度评分(NSS),并检测大鼠脑梗死体积及IBZ区域凋亡神经细胞数目。GM-CSF-BMSCs组采用荧光免疫组化染色方法检测植入细胞在大鼠IBZ局部的存活与分化。结果与对照组比较,BMSCs组细胞移植后21 d时NSS及脑梗死体积占半球体积百分值(HLV)明显下降(均P<0.05),细胞移植后3 d、7 d和21 d时凋亡细胞数明显下降(均P<0.05);GM-CSF-BMSCs组细胞移植后7 d、21 d时NSS及HLV明显下降(P<0.05~0.01),细胞移植后3 d、7 d和21 d时凋亡细胞数明显下降...     

粒细胞集落刺激因子研究进展

粒细胞集落刺激因子(GCSF)主要用于各种原因引起的粒细胞减少症。近年来的研究表明GCSF可应用于心肌保护和神经保护等领域。本文主要描述GCSF在神经保护研究中的进展。大鼠脑内存在GCSF及其受体的表达。GCSF可以减小脑缺血动物模型的缺血灶,并可减轻脑出血动物模型和实验性变态反应性脑炎的炎症。其作用机制可能包括抗凋亡、抗炎症、促进血管生成及促进神经祖细胞分化等多种途径。     

粒细胞集落刺激因子治疗脑梗死研究进展

粒细胞集落刺激因子（G-CSF）主要用于各种原因引起的粒细胞减少症。近年来的研究表明G-CSF 可用于心肌保护和神经保护等领域。本文主要对G-CSF 的由来、结构、来源、信号传导途径及神经保护作用机制进行综述。大鼠脑内存在G-CSF 及其受体表达，G-CSF 可以减小脑缺血动物模型的梗死灶，促进神经功能恢复，其作用机制可能包括抗炎症、抗凋亡、促进血管生成及神经发生等多种机制。     

当归补血汤载药血清干预后骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌

背景：实验表明,当归补血汤的有效成分多糖对造血干细胞和造血祖细胞的增殖分化存在显著的促进作用,对造血微环境具有重要的调控作用。 目的：观察当归补血汤载药血清干预后小鼠骨髓基质细胞中粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的分泌状况。 方法：分离骨髓基质细胞,于96孔板培养,在相差显微镜下观察细胞形态和生长状况;将细胞分4组,加含有不同剂量的当归补血汤载药血清进行干预,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性,ELISA法检测粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3的表达情况。 结果与结论：当归补血汤载药血清可明显促进骨髓基质细胞的增殖,促进骨髓基质细胞分泌粒细胞集落刺激因子和白细胞介素3,呈剂量依赖性,含等效剂量载药血清组促增殖作用和促分泌作用优于其他各组,浓度过高可减弱细胞的增殖分泌效应。     

粒细胞集落刺激因子与血液病

摘要：粒细胞集落刺激因子是一种糖基化的多肽链细胞生长因子,能特异地调节粒系祖细胞的增殖与分化,并能增强成熟中性粒细胞的功能。粒细胞集落刺激因子功能的发挥有赖于与效应细胞表面的特异性受体的结合。随着基因克隆技术的发展,粒细胞集落刺激因子重组产品已广泛应用于临床,为血液系统疾病的治疗提供了有力手段。目前在临床上广泛用于白细胞减少性疾病。近年来在化疗基础上联用粒细胞集落刺激因子的预激方案也取得良好疗效,为难治、复发、老年急性髓系白血病的治疗创造了机会。目前,粒细胞集落刺激因子是临床上应用最成功的几种造血调控因子之一。     

重组人粒细胞集落刺激因子动员急性心肌缺血大鼠自体骨髓干细胞归巢

背景：骨髓中存在多潜能干细胞,利用其多向分化和归巢的能力,已成为近年来多种疾病治疗的研究方向。 目的：观察重组人粒细胞集落刺激因子动员急性心肌梗死大鼠骨髓干细胞归巢于缺血心肌的高度选择性,并评价其短期安全性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2006-09/2007-04在吉林大学基础医学院病理生理实验室完成。 材料：选取清洁级SD大鼠82只,雌雄各半,体质量250~300 g, 62只大鼠结扎冠状动脉前降支制成急性心肌梗死模型,20只作为假手术组。 方法：造模成功41只,分为模型组(n=20)和动员组(n =21)。模型组：皮下注射生理盐水2 mL/d,连续7 d;动员组：皮下注射生理盐水稀释至浓度2.5 mg/L重组人粒细胞集落刺激因子15 μg/(kg•d),连续7 d。假手术组：在相应冠状动脉结扎部位穿线,不结扎,其余操作步骤相同,皮下注射生理盐水2 mL/d,连续7 d。 主要观察指标：1周后计数3组大鼠外周血白细胞及单个核细胞百分比,4周后比较3组大鼠在体心功能。并取大鼠心脏、肺脏、肝脏、骨骼肌组织制切片行苏木精-伊红染色及CD34免疫组织化学染色观察心脏组织病理改变,毛细血管密度和CD34+细胞归巢情况。 结果：①造模1周后动员组大鼠的外周血白细胞及单个核细胞百分比较动员前明显增加(P < 0.05),且动员组大鼠的外周血白细胞计数及微核细胞率明显高于模型组(P < 0.05)。②造模1周时,动员组较模型组大鼠心肌梗死区可见较多CD34+细胞(P < 0.05);4周时,动员组和模型组均未见CD34+细胞。各组大鼠肝脏、肺脏及骨骼肌各个时段则均无明显差异。造模后4周,动员组心功能各项指标均优于模型组(P < 0.05),梗死面积明显小于模型组(P < 0.05),毛细血管密度明显高于模型组(P < 0.05)。 结论：重组人粒细胞集落刺激因子动员心肌梗死后大鼠自体骨髓干细胞到外周血循环并归巢于梗死心肌,并可分化成心肌样细胞及毛细血管内皮细胞,减少心肌梗死范围,改善心功能。短期观察重组人粒细胞集落刺激因子对肺脏、肝脏、骨骼肌无明显组织学影响。     

骨髓基质细胞移植治疗大鼠实验性脑梗死的疗效分析及组织病理学观察

目的 观察大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠脑内移植骨髓基质细胞fBMSCs)的治疗作用,分析植入梗死灶不同区域的BMSCs的存活、迁移情况以及植入细胞的行为与脑内微环境中GFAP阳性细胞的形态关系.方法 75只成年SD大鼠采用随机数字表法分为MCAO组(n=50)和BMSCs移植组(n=25),所有动物均采用线栓法制作MCAO 1 h模型,24 h后BMSCs移植组脑内注射BrdU标记的同种异体BMSCs(2x106个),MCAO组注射等量PBS.MCAO前及MCAO后第1(移植前)、3、5、7、10、14天应用加速转轮试验和贴纸去除试验检测神经功能缺损情况;第14天处死动物,取脑组织切片应用HE染色观察两组的缺血病灶范围,行BrdU和GFAP免疫组化染色观察BMSCs在不同区域和不同胶质细胞环境下的存活和迁移情况.结果 BMSCs移植组MCAO后7 d加速转轮试验结果优于MCAO组,差异有统计学意义(P＜0.05);组织学观察发现植入缺血半暗带区的细胞存活数量最多,且向病变方向放射状迁移,植入缺血病灶核心的细胞甚少存活,且无迁移现象.结论 BMSCs脑内移植可改善MCAO后大鼠神经运动功能;活化的星形胶质细胞构成适合植入细胞存活、迁移的环境,而胶质瘢痕阻碍了细胞的迁移.     

人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)治疗急性脑梗死的短期评估

目的通过随机、安慰剂对照的临床研究,对人重组粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)治疗急性脑梗死的有效性及安全性进行客观评价。方法将50例发病1周的急性脑梗死患者随机分为rhG-CSF治疗组和对照组。其中rhG—CSF治疗组为25例,给予rhG—CSF皮下注射2μg／kg,连续使用5d。对照组25例,按同样方式给予安慰剂。评定的终点指标包括急性脑梗死治疗后第10天、第20天的神经功能缺损评分NIHSS评分以及副作用。结果经治疗后,rhG-CSF治疗组第20天NIHSS评分与治疗前有显著性差异(P=0．004,P<0．01)、第20天治疗组和对照组两组间差异有显著性(P=0．007,P<0．01)。结论 rhG—CSF治疗急性脑梗死在短时间内观察有效,未见不良反应。其在适应证、治疗剂量及用药时限等方面与临床疗效的关系有待进一步研究。     

粒细胞集落刺激因子对脑出血大鼠星型胶质细胞可塑性的影响

目的通过研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠脑出血(ICH)后星型胶质细胞可塑性的影响,探讨G-CSF在ICH中的神经保护作用。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组。断尾取自体血法制备大鼠ICH模型,治疗组于造模1h后腹腔注射重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)60μg/kg。3组大鼠于术后6h、24h、48h、72h、7d、10d进行神经功能障碍评分,免疫组化检测血肿周围GFAP的动态变化。结果治疗组各时间点神经功能评分明显高于模型组(P<0.05)。假手术组未见GFAP阳性细胞表达;模型组6h出现少量GFAP阳性细胞表达,48h增多,72h大量表达,7d达高峰,10d表达减弱;治疗组GFAP阳性细胞表达6h与模型组相似,24h、48h、72h、7d、10d较模型组明显减少(P<0.05)。结论 ICH后G-CSF可抑制星形胶质细胞过度活化,改善ICH大鼠神经功能。     

Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transfected bone marrow stromal cells for the treatment of ischemic stroke

Adult,male,Sprague-Dawley rats were injected with granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transfected bone marrow stromal cells(GM-CSF-BMSCs) into the ischemic boundary zone at 24 hours after onset of middle cerebral artery occlusion.Results showed reduced infarct volume,decreased number of apoptotic cells,improved neurological functions,increased angiogenic factor expression,and increased vascular density in the ischemic boundary zone in rats that underwent GM-CSF-BMSCs transplantation compared with the BMSCs group.Experimental findings suggested that GM-CSF-BMSCs could serve as a potential therapeutic strategy for ischemic stroke and are superior to BMSCs alone.     

骨髓基质细胞及血管内皮祖细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复的影响

目的 观察经静脉移植骨髓基质细胞(BMSCs)及血管内皮祖细胞(EPCs)后,缺血性脑损伤大鼠神经系统功能恢复情况.方法 40只健康成年Wistar大鼠按随机数字表法分为模型组、移植BMSCs组、移植EPCS组、移植BMSCs/EPCs组,每组10只.线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.造模后24h取1 mLBMSCs、EPCs、BMSCs/EPCs细胞悬液(3×10~6个/mL)分别经尾静脉注射移植入后3组大鼠.模型组大鼠注射等量生理盐水.移植前、移植后1、7、14、28 d,采用旋转试验、躯体感觉试验、神经系统功能评分(NSS)评估各组大鼠神经功能的恢复情况.移植后28d,免疫荧光染色检测各组大鼠缺血脑组织的微血管密度(MVD).结果 移植后第7天,旋转试验显示移植BMSCs/EPCs组大鼠旋转时间长于其他3组,躯体感觉试验和NSS评分分别显示移植BMSCs/EPCs组大鼠移物时间和NSS评分低于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);移植后28 d,免疫荧光染色检测结果显示缺血脑组织MVD明显高于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 静脉BMSCs/EPCS联合移植可增强缺血性脑损伤功能的恢复.     

脑源性神经营养因子诱导的骨髓间质干细胞治疗脑缺血再灌注大鼠后的形态学改变

目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)诱导的骨髓间质干细胞(MSCs)移植治疗大鼠脑缺血冉灌注模型后的形态学改变。以探讨BDNF诱导的MSCs移植治疗脑缺血的可行性。方法以BDNF诱导或末诱导的MSCs移植治疗大鼠脑缺血再灌注模型2周及4周后。用患侧脑重量与对侧脑重量的比值来比较各组脑萎缩程度，电子显微镜下观察各组脑梗死灶边缘超微结构。结果移植诱导或未诱导MSCs的患侧脑／对侧脑重量比值均较未移植组高。但诱导组和未诱导组间比较无显著差异。移植BDNF诱导或未诱导MSCs可显著减少腑梗死灶边缘神经元坏死和凋亡，移植BDNF诱导MSCs还可减少血管内皮细胞凋亡。结论BDNF诱导或未诱导的MSCs移植治疗脑缺血再灌注可减轻脑萎缩程度，减少神经元和血管内皮细胞凋亡、坏死，具有潜在的临床应用价值。     

转染肝细胞生长因子的骨髓间质细胞治疗大鼠缺血性脑卒中

目的探讨转染肝细胞生长因子（HGF）的骨髓间质细胞（MSCs）治疗大鼠脑缺血的效果。方法制备大鼠一过性大脑中动脉缺血（MCAO）模型。MCAO后24h分别将磷酸盐溶液（PBS）、MSCs和转染HGF的MSCs（MSC—HGF）通过立体定向技术植人缺血脑组织。通过改良神经功能严重性评分（mNSS）评价神经功能,应用免疫组织化学染色分析脑组织HGF表达、缺血脑组织边缘带细胞凋亡及存活神经元。结果治疗后2周,MSC—HGF组mNSS明显低于PBS组和EMCs组（P〈0.05）。治疗后第1天MSC—HGF组病变脑组织中HGF蛋白表达明显高于PBS组和EMCs组（P〈0．05）。治疗后1周,与PBS组和EMCs组相比,MSC—HGF组在梗死边缘带凋亡细胞的百分比明显减少（P〈0．05）,存活神经元的百分比明显增加（P〈0.05）。结论转染HGF的MSCs治疗缺血性脑卒中具有抗细胞凋亡、神经保护作用。     

重组人粒细胞集落刺激因子对局灶性脑缺血大鼠的抗凋亡作用

The neuroprotective effects of granulocyte colony-stimulating factor in cerebral ischemia/reperfusion injury are currently contentious. The present study examined the effects of subcutaneous injection of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (50 μg/kg) over 5 days in a model of cerebral ischemia/reperfusion with intraluminal filament occlusion in rats. The results indicated that recombinant human granulocyte colony-stimulating factor reduced brain infarct volume following cerebral ischemia/reperfusion injury in rats, down-regulated the expression of caspase-3 mRNA (a key protease for apoptosis in the cerebral ischemia zone), lowered the rate of neuronal apoptosis in the cerebral ischemia zone, and notably ameliorated neurological function. These results indicate that recombinant human granulocyte colony-stimulating factor has anti-apoptotic effects on neurons following focal cerebral ischemia/reperfusion injury, and exerts neuroprotective effects.     

Bone marrow stromal cells enhance inter- and intracortical axonal connections after ischemic stroke in adult rats

We investigated axonal plasticity in the bilateral motor cortices in rats after unilateral stroke and bone marrow stromal cell (BMSC) treatment. Rats were subjected to permanent right middle cerebral artery occlusion followed by intravenous administration of phosphate-buffered saline or BMSCs 1 day later. Adhesive-removal test and modified neurologic severity score were performed weekly to monitor limb functional deficit and recovery. Anterograde tracing with biotinylated dextran amine injected into the right motor cortex was used to assess axonal sprouting in the contralateral motor cortex and ipsilateral rostral forelimb area. Animals were killed 28 days after stroke. Progressive functional recovery was significantly enhanced by BMSCs. Compared with normal animals, axonal density in both contralateral motor cortex and ipsilateral rostral forelimb area significantly increased after stroke. Bone marrow stromal cells markedly enhanced such interhemispheric and intracortical connections. However, labeled transcallosal axons in the corpus callosum were not altered with either stroke or treatment. Both interhemispheric and intracortical axonal sprouting were significantly and highly correlated with behavioral outcome after stroke. This study suggests that, after stroke, cortical neurons surviving in the peri-infarct motor cortex undergo axonal sprouting to restore connections between different cerebral areas. Bone marrow stromal cells enhance axonal plasticity, which may underlie neurologic functional improvement.     

骨髓基质细胞静脉移植治疗大鼠短暂性局灶性脑缺血

目的探讨骨髓基质细胞静脉移植治疗大鼠短暂性局灶性脑缺血的可行性及其机制。方法将大鼠骨髓基质细胞在体外纯化、扩增并经BrdU标记后,经尾静脉移植到局灶性脑缺血大鼠体内,通过神经缺损评分观察移植后大鼠神经行为学改善情况,通过组织学方法观察移植到脑内的骨髓基质细胞表达脑源性神经营养因子、缺血灶周围细胞凋亡及脑微血管密度的变化。结果骨髓基质细胞移植组大鼠的神经缺损评分显著低于对照组(P<0.05);移植到脑内的骨髓基质细胞主要选择性分布于缺血灶周围区域并表达BDNF;骨髓基质细胞移植组大鼠梗死灶周围的凋亡细胞明显少于对照组(P<0.01)、微血管密度显著高于对照组(P<0.001)。结论经静脉注射移植骨髓基质细胞能够明显促进局灶性脑缺血大鼠的神经行为功能恢复;抗凋亡及促微血管增生可能是骨髓基质细胞移植治疗局灶性脑缺血的机制之一。