生长因子对骨骼肌肌源性干细胞增殖的影响★

背景：单纯应用差速贴壁法获得的原代肌源性干细胞数量少，生长速度较慢，不利于获取满足实验及将来临床所需的细胞数量。 目的：观察碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子1在体外对体外培养肌源性干细胞增殖的作用，探索体外大量培养肌源性干细胞的方法和条件。 设计、时间及地点：观察对比实验，于2007-09/2008-04在武汉大学人民医院泌尿外科实验室完成。 材料：2周龄体质量50~80 g的SD大鼠20只。 方法：采用改良差速贴壁培养法分离大鼠骨骼肌肌源性干细胞：取新生大鼠肌肉标本分离细胞；维持总的贴壁时间基本不变，减少贴壁次数，取第2代肌源性干细胞进行体外成肌分化。 主要观察指标：以免疫细胞化学法及免疫荧光法鉴定肌源性干细胞。以MTT 比色实验检测5，10，20，40，80 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1及胰岛素样生长因子1+碱性成纤维细胞生长因子对肌源性干细胞增殖的影响。以流式细胞仪检测碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1 和胰岛素样生长因子1+碱性成纤维细胞生长因子对细胞周期的影响。 结果：肌源性干细胞原代培养70 h后开始贴壁，呈规则的圆形。1周后细胞数量增多，细胞展开呈纺锤性。免疫细胞化学染色法和细胞免疫荧光法显示肌源性干细胞呈结蛋白、干细胞抗原1和CD34阳性。传代细胞加入碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1后肌源性干细胞的增殖活性增强，两种细胞因子作用强度相近，随着两种细胞因子浓度的提高促细胞增殖作用逐渐提高,在达到有效浓度后作用趋于饱和。两种细胞因子作用机制不同，碱性成纤维细胞生长因子主要是增加G2M期的细胞比例，通过缩短细胞周期达到增殖作用, 胰岛素样生长因子1则主要增加S期细胞的比例，通过活化由G0期到G1期转化的进入有丝分裂细胞来达到增殖作用。 结论：胰岛素样生长因子1 和碱性成纤维细胞生长因子都具有刺激肌源性干细胞增殖的作用，两者联合作用既可以增加早期由G0期进入G1期的数量，又可以减短细胞有丝分裂周期，从而达使促增殖效果更快、更强。     

全骨髓贴壁并差速传代分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞：与密度梯度离心法的比较*☆

背景：目前国内外分离纯化骨髓间充质干细胞有两种主要方法：密度梯度离心法及全骨髓贴壁法,前者步骤较复杂,后者简单易操作,但纯化效果不理想。 目的：在全骨髓贴壁分离骨髓间充质干细胞基础上,并用差速传代消化法,建立大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养纯化方法。 方法：全骨髓贴壁培养法分离并差速消化传代大鼠骨髓间充质干细胞,利用间充质干细胞在消化传代过程中较其他骨髓细胞消化悬浮速度快,以及贴壁快的特点,代替密度梯度离心操作来分离纯化间充质干细胞,对其形态学特征进行观察,并与密度梯度离心法比较两种分离培养法的细胞生长增殖情况;观察碱性磷酸酶及油红染色情况,验证骨髓间充质干细胞的分化能力;检测细胞表面标记物,验证免疫特性及检测其纯度。 结果与结论：全骨髓贴壁培养法分离并差速传代大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞鉴定、成骨成脂肪培养结果显示其细胞免疫特性、纯度、分化能力与密度梯度离心法无显著差异,但细胞活力,增殖能力有明显提高。     

大鼠肌源性干细胞的分离、纯化和培养☆

背景：要获得满足临床需要的肌源性干细胞,体外筛选和扩增已成为关键环节。 目的：拟建立稳定高效的成年大鼠肌源性干细胞的分离培养、纯化方法。 方法：成年SD大鼠麻醉后,无菌条件下取骨骼肌,采用XI型胶原酶、Dispase和胰酶消化法获得肌源性干细胞,以密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化。记录细胞生长曲线,MTT比色法观察不同接种密度对细胞生长的影响,采用免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定。 结果与结论：原代肌源性干细胞体积较小,贴壁缓慢,折光性较好,多呈球形、梭形或纺锤形,增殖缓慢。传代培养后,加入含体积分数为20%血清浓度的完全培养基,以1×109 L-1密度接种时活细胞数量最多,为适宜接种密度,传1~4代细胞生长状态良好。免疫细胞化学染色结果为desmin(+),CD34(+),CD45(-),Sca-1(+),证实通过体外原代培养获得了高纯度的肌源性干细胞,并成功扩增。     

诱导人眼轮匝肌来源肌源干细胞向许旺细胞样细胞的分化*☆

背景：肌源干细胞的优越性引导学者们尝试从人眼轮匝肌中分离该细胞，同时进行许旺细胞方向的诱导分化，为周围神经的修复提供新的种子细胞来源。 目的：诱导人肌源干细胞向具有许旺细胞特性的细胞分化。 方法：①收集重睑成形术中切除的上睑眼轮匝肌，经酶消化和细胞筛过滤，贴壁培养分离人肌源干细胞，予细胞特异标记物以免疫组织化学染色。②取大鼠坐骨神经分离培养许旺细胞，收集许旺细胞条件培养液。③将人肌源干细胞与许旺细胞条件培养液共培养，观察转化细胞的形态和免疫组织化学染色的变化。 结果与结论：①原代培养4周时可见人肌源干细胞，与传代培养之人肌源干细胞同样呈现明显的小圆形形态，折光性强，少量细胞呈现短梭形。所有人肌源干细胞表现为Desmin阳性，Sca-1染色阳性。②分离培养大鼠坐骨神经来源许旺细胞，S100染色阳性率为(97.4±0.7)%。③经与许旺细胞条件培养液共培养，人肌源干细胞分化后细胞表达许旺细胞特异标记物S100，GFAP和p75。结果提示分离获得人肌源干细胞与许旺细胞条件培养液共培养，可以诱导人肌源干细胞表达许旺细胞特异标记物，初步证实了人肌源干细胞可分化为许旺细胞样细胞。     

5-溴脱氧尿嘧啶核苷体外标记肌源性干细胞：最佳浓度及时间

肌源性干细胞移植入动物体内可以修复骨、肌肉、软骨或神经系统的损伤，但要了解其在体内的迁移、增殖及分化的情况，还需要一种有效、安全的标记方法来追踪其在体内的变化。 目的：观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞的效果，探讨其最佳标记浓度和时间。 方法：采用差速贴壁法体外分离SD大鼠肌源性干细胞，免疫细胞化学染色法鉴定第2代细胞并进行细胞计数。以终浓度5，10，15，20 μmol/L的5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞，检测其最佳标记浓度，免疫细胞化学染色法分析其标记率；通过MTT法、锥虫蓝排斥实验观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷对细胞增殖的影响。 结果与结论：免疫细胞化学染色显示肌源性干细胞呈Desmin阳性，阳性率为(85.7±6.0)%；经5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记的肌源性干细胞与未进行标记细胞在活力和增殖上相比未见明显差异(P > 0.05)，标记后的肌源性干细胞活细胞率可达(92.3±2.1)%。其中浓度为10，15，20 μmol/L标记组标记效果均优于5 μmol/L标记组，10 μmol/L为最佳工作浓度，最佳标记时间为3 d，标记率为(70.9±4.5)%，随时间延长无明显变化。证实应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记肌源性干细胞后，对细胞的活力及增殖情况无影响，标记率也能达到细胞移植对其示踪的要求。     

Ⅳ型胶原快速黏附法体外分选人胎儿表皮干细胞

背景：发育生物学研究表明，表皮干细胞是皮肤及其附属器发生、修复、重建的关键性源泉，如何从皮肤组织中分离获得更多的表皮干细胞，并在体外培养过程中保持干细胞特性是其在皮肤组织工程中应用的重要前提。 目的：观察Ⅳ型胶原快速黏附法分选的人胎儿表皮干细胞体外生长状态及克隆形成情况，并与角质细胞进行对照。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2008-01/06在南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成。 材料：因创伤等原因致意外流产的妊娠24~26周龄胎儿皮肤标本，由南昌大学第一附属医院产科提供。Ⅳ型胶原为美国Sigma公司产品，角质细胞无血清培养基为美国Gibco公司产品。 方法：将Ⅳ型胶原用磷酸盐缓冲液稀释成100 mg/L，均匀涂被培养板后于超净工作台中风干备用。无菌条件下取胎儿皮肤标本，剪成3.0 mm×5.0 mm皮条片，4 ℃胰蛋白酶+EDTA联合消化8~10 h，表皮真皮分离，用角质细胞无血清培养基将表皮反复吹打，获得单细胞悬液接种于预处理好的Ⅳ型胶原培养板，置37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中，20 min后吸去培养液和未黏附细胞，加入含体积分数为0.1的胎牛血清、10 μg/L表皮生长因子及角质细胞无血清培养基的表皮干细胞培养液，细胞约70%~80%融合后传代扩增；将未黏附细胞接种于另一培养板中，相同条件下作为角质细胞对照培养。 主要观察指标：表皮干细胞的形态变化、免疫细胞化学染色鉴定结果及克隆形成率。 结果：经贴壁筛选的表皮干细胞接种后呈圆形，折光性较强；1 d后细胞略伸展为扁平的多角形，胞质近中央处有圆形核；3 d时出现表皮干细胞克隆；5 d时克隆数量明显增多，细胞之间紧密衔接，呈铺路石状；14 d 左右细胞基本融合。分离培养的人表皮干细胞克隆β1整合素、角蛋白19、p63均呈阳性表达。表皮干细胞克隆形成率明显高于角质细胞克隆形成率（t=1.972，P < 0.05）。 结论：采用Ⅳ型胶原快速黏附法成功筛选出纯度较高的人胎儿表皮干细胞，且呈明显克隆性生长，具有典型的干细胞生物学特性。     

克隆筛选纯化在大鼠脂肪源性干细胞原代培养中的作用

背景：研究中发现从成体的脂肪组织中可以分离出一种间质干细胞，即脂肪源性干细胞，但传统的分离方法仍存在一些问题需要改进。 目的：在脂肪源性干细胞传统的分离方法的基础上进行改进，克隆筛选纯化脂肪源性干细胞。 方法：消化离心法分离Lewis大鼠脂肪源性干细胞，有限密度稀释法克隆化及条件培养基筛选，进行原代培养，以克隆筛选的脂肪源性干细胞为实验组，未克隆筛选的脂肪源性干细胞为对照组，观察细胞形态，对比生长曲线、倍增时间，流式细胞仪鉴定脂肪源性干细胞表面标记CD49d、CD29、CD44。 结果与结论：经克隆筛选的脂肪源性干细胞与未经克隆筛选的脂肪源性干细胞相比，前者形态均一，生长力旺盛，倍增时间短，多代培养后生长曲线无明显改变，通过流式细胞仪鉴定，实验组与对照组在3~6代之间均表达表面标记CD49d、CD29、CD44。结果证实克隆筛选的纯化方法是脂肪源性干细胞原代培养的有效、经济的纯化方法。     

腺体组织损伤后体外分离下颌下腺干/祖细胞后的克隆化培养**

背景：体外构建组织工程化人工涎腺需获得分化增殖良好、数量充足的种子细胞，但正常下颌下腺中很难分离出成体干细胞。 目的：利用腺体组织损伤动物模型体外分离下颌下腺干/祖细胞，并进行克隆化培养。 设计、时间和地点：细胞学体外观察，于2006-03/2007-01在遵义医学院贵州省细胞工程实验室完成。 材料：8周龄雄性SD大鼠10只，由解放军第三军医大学动物中心提供。 方法：10只大鼠采用结扎下颌下腺主导管、抑制腺体分泌来建立组织损伤模型，1周后切取腺体组织，酶消化法体外分离下颌下腺干/祖细胞，原代培养10~14 d后，挑取培养皿中形成的小的类圆形、类上皮细胞集落予以纯化，传代后进行单克隆培养。 主要观察指标：下颌下腺干/祖细胞免疫细胞化学染色及免疫荧光染色结果，通过绘制生长曲线分析下颌下腺干/祖细胞体外增殖能力。 结果：实验获得表达层粘蛋白的细胞具有干细胞特征，CD29呈阳性表达表明其具有高黏附、高增殖等组织干细胞特性，角蛋白19的阳性表达提示下颌下腺干/祖细胞呈上皮源性。其生长曲线近似“S”形，体外培养增殖活跃。 结论：实验结果显示，下颌下腺干/祖细胞具有组织干细胞的特征，有望成为组织工程化人工涎腺构建的一类种子细胞来源。     

改良Nash差速贴壁联合阿糖胞苷法体外分离培养大鼠嗅球及嗅黏膜源性嗅鞘细胞*☆

背景：目前常用的嗅鞘细胞培养方法有差速贴壁法、化学抑制法、抗体亲和吸附法、补体法等,各自均存在优缺点,单一使用某种方法时细胞纯化率较低。 目的：拟采用改良Nash差速贴壁+阿糖胞苷法体外分离纯化大鼠嗅球及嗅黏膜来源的嗅鞘细胞。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察,于2007-11/2008-05在武汉大学人民医院骨科实验室和消化内科实验室完成。 材料：10周龄Sprague-Dauley大鼠10只,由武汉大学人民医院实验动物中心提供,阿糖胞苷由武汉大学人民医院制备。 方法：完整取大鼠双侧嗅球及剪取鼻中隔后1/3嗅黏膜,剪碎后胰酶消化,制成单细胞悬液,按1×109 L-1密度接种于未包被的25 cm2玻璃培养瓶中,18~20 h后将细胞悬液转移至另一未包被的25 cm 2玻璃培养瓶中（第1次差速贴壁）,24 h后再将细胞悬液转移至经多聚右旋赖氨酸包被的25 cm2塑料培养瓶或经多聚右旋赖氨酸包被的6孔培养板中（第2次差速贴壁）,接种培养48 h后半量换液以去除杂细胞。在差速贴壁培养后二三天,加入3.0~5.0 pmol/L阿糖胞苷去除残余成纤维细胞。 主要观察指标：嗅鞘细胞的形态观察、分裂增殖情况、免疫荧光染色鉴定结果及纯度测定。 结果：体外培养24 h嗅球源性嗅鞘细胞即可贴壁,而嗅黏膜源性嗅鞘细胞多在培养四五天后贴壁,两种来源的嗅鞘细胞形态相似,以双极或梭形细胞为主,少量为3极及多突起形多级细胞,同时夹杂扁平、煎鸡蛋形细胞。纯化培养10 d的嗅鞘细胞,胶质纤维酸性蛋白、神经生长因子受体p75免疫荧光染色及神经生长因子受体p75+hoechs免疫荧光双染后大部分双极或多极细胞膜、胞体、突起呈阳性,细胞纯度可达90%以上。 结论：改良Nash差速贴壁+阿糖胞苷法可在体外成功分离培养出高纯度的嗅球及嗅黏膜源性嗅鞘细胞,嗅球源性嗅鞘细胞贴壁时间及分裂增殖程度优于嗅黏膜源性嗅鞘细胞。     

昆明小鼠3.5 d和4 d囊胚不同分离方法的比较*

背景：远交系的昆明小鼠作为中国自然科学研究主要实验动物,其胚胎干细胞建系的成功率一直很低。 目的：探讨昆明小鼠胚胎干细胞体外分离培养的最佳方法和最适合的采胚时间。 方法：采集孕3.5 d和4 d的囊胚分别以免疫外科法和全胚培养法在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上分离和克隆昆明小鼠胚胎干细胞集落。 结果与结论：免疫外科法和全胚法培养3.5 d囊胚的内细胞团贴壁率和原代克隆形成率差异均不显著(P > 0.05);全胚法培养4 d囊胚的内细胞团贴壁率显著高于免疫外科法(P < 0.05),但原代克隆形成率显著低于免疫外科法(P < 0.05);全胚法培养4 d囊胚的原代克隆形成率显著高于3.5 d囊胚(P < 0.05);免疫外科法分离4 d囊胚内细胞团的贴壁率和原代克隆形成率显著高于以同样方法分离培养的3.5 d囊胚(P < 0.05)。结果显示用免疫外科法分离4 d囊胚更适合于昆明小鼠胚胎干细胞的体外分离培养。     

A quantitative technique for growing human adult skeletal muscle in culture starting from mononucleated cells

A quantitative and reproducible technique for establishing primary surface cultures from normal and diseased human muscle is described. Successful cultures were prepared from both fresh muscle and that stored up to 96 hr at 4 °C. The CPK activity of the muscle cells ranged between 0.5–3.0 μmoles creatine per min per mg protein at 30 °C, thus indicating a high degree of differentiation. Spontaneous contractions were observed in 4 out of the 22 cultures established. Nerve cells were not required to achieve this level of differentiated function.No gross differences in plating efficiency, rate of myotube formation or CPK specific activity were found for the diseased muscle cells cultured so far. However, a 5–10-fold higher cell yield was obtained from muscles of patients with an inflammatory myopathy.The advantages of this technique for carrying out comparative studies on normal and dystrophic muscle cells are discussed.     

Shorter telomeres in dystrophic muscle consistent with extensive regeneration in young children

Muscular dystrophies are characterised by continuous cycles of degeneration and regeneration resulting in an eventual diminution of the muscle mass and extensive fibrosis. In somatic cells chromosomal telomeres shorten with each round of cell division and telomere length is considered to be a biomarker of the replicative history of the cell. We have previously shown that human myoblasts have a limited proliferative capacity, and that normal skeletal muscle has a very low level of nuclear turnover. However, in patients suffering from muscular dystrophy the satellite cells will be forced to make repeated rounds of cell division, driving the cells towards senescence. In this study we have used the telomere length to quantify the intensity of the muscle cell turnover in biopsies from dystrophic patients of different ages. Our results show that as soon as the first clinical symptoms become apparent the muscle has already undergone extensive regeneration and the rate of telomere loss is 14 times greater than that observed in controls. This confirms that the decline in regenerative capacity is due to the premature senescence of the satellite cells induced by their excessive proliferation during muscle repair.     

血管组织工程种子细胞原代培养技术的改良**★

背景：如何获取高质量的种子细胞是构建组织工程血管的先决问题。 目的：改良血管组织工程种子细胞原代培养技术并观察其生物学特性。 设计、时间及地点：以细胞为培养对象，观察性实验，于2006-12/2008-03在江西省分子医学重点实验室完成。 材料：新西兰家兔，体质量2 kg左右，用于血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的原代培养。 方法：以胶原酶胰酶序贯消化法获得血管内皮细胞、快捷贴壁法培养血管平滑肌细胞。 主要观察指标：免疫细胞化学法对两者进行鉴定；流式细胞术检测第2代和第6代血管内皮细胞的增殖指数。 结果：培养的种子细胞符合各自特征，免疫细胞化学鉴定其为血管内皮细胞和血管平滑肌细胞。内皮细胞第2代和第6代细胞增殖指数分别为(20.87±2.05)%和(9.75±1.76)%。 结论：胶原酶胰酶序贯消化法和快捷贴壁法可以较稳定地获取血管内皮细胞及血管平滑肌细胞；第2代的内皮细胞较第6代更适用于构建组织工程血管。     

大鼠肌源性干细胞植入糖尿病鼠胰腺后的存活能力及血糖调节

背景：肌源性干细胞易于提取、分离及扩增，在特定条件下可分化为骨软骨、肌肉等中胚层组织细胞，还可以跨胚层分化为神经细胞等。 目的：观察糖尿病鼠胰腺内植入的肌源性干细胞存活情况，及其调节血糖的效果。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-04/09在辽宁医学院科学实验中心完成。 材料：SPF/VAF级新生5 d龄SD大鼠31只，由辽宁医学院实验动物中心提供。造模使用的链脲佐菌素为星隆达公司产品。 方法：取5只大鼠的前肢肱三头肌与后肢腓肠肌，采用差速贴壁法纯化扩增大鼠肌源性干细胞，传至第3代用于移植，临用前以携带绿色荧光蛋白的腺病毒悬液进行转染。取20只大鼠，通过尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，15只成功造模，取12只随机均分为2组：细胞移植组胰腺被膜下移植肌源性干细胞约2×106个，模型对照组同法给予等量不含细胞的培养液。余6只大鼠作为正常对照组。 主要观察指标：肌源性干细胞移植至胰腺后的存活情况，移植后大鼠血糖浓度的变化。 结果：移植后1周，胰腺组织呈网架样结构，表达较强的黄绿色荧光；4周后仍有荧光表达，但强度减弱。与模型对照组比较，移植前2 d细胞移植组大鼠血糖浓度无明显差异（P > 0.05）；移植后4，8 d，大鼠血糖浓度一直处于较高水平；至移植后第4，8周大鼠血糖浓度明显下降（t=-2.416~8.372，P < 0.01）。 结论：肌源性干细胞移植后能在糖尿病模型鼠的胰腺部位存活，且一定程度上可下调大鼠血糖浓度。     

Research progress in muscle-derived stem cells Literature retrieval results based on international database

OBJECTIVE: To identify global research trends of muscle-derived stem cells (MDSCs) using a bibliometric analysis of the Web of Science, Research Portfolio Online Reporting Tools of the National Institutes of Health (NIH), and the Clinical Trials registry database (ClinicalTrials.gov). DATA RETRIEVAL: We performed a bibliometric analysis of data retrievals for MDSCs from 2002 to 2011 using the Web of Science, NIH, and ClinicalTrials.gov. SELECTION CRITERIA: Inclusion criteria: (1) Web of Science: (a) peer-reviewed articles on MDSCs that were published and indexed in the Web of Science. (b) Type of articles: original research articles, reviews, meeting abstracts, proceedings papers, book chapters, editorial material and news items. (c) Year of publication: 2002-2011. (d) Citation databases: Science Citation Index-Expanded (SCI-E), 1899-present; Conference Proceedings Citation Index-Science (CPCI-S), 1991-present; Book Citation Index-Science (BKCI-S), 2005-present. (2) NIH: (a) Projects on MDSCs supported by the NIH. (b) Fiscal year: 1988-present. (3) ClinicalTrials.gov: All clinical trials relating to MDSCs were searched in this database. Exclusion criteria: (1) Web of Science: (a) Articles that required manual searching or telephone access. (b) We excluded documents that were not published in the public domain. (c) We excluded a number of corrected papers from the total number of articles. (d) We excluded articles from the following databases: Social Sciences Citation Index (SSCI), 1898-present; Arts & Humanities Citation Index (A&HCI), 1975-present; Conference Proceedings Citation Index - Social Science & Humanities (CPCI-SSH), 1991-present; Book Citation Index - Social Sciences & Humanities (BKCI-SSH), 2005-present; Current Chemical Reactions (CCR-EXPANDED), 1985-present; Index Chemicus (IC), 1993-present. (2) NIH: (a) We excluded publications related to MDSCs that were supported by the NIH. (b) We limited the keyword search to studies that included MDSCs within the title or abstract. (3) ClinicalTrials.gov: (a) We excluded clinical trials that were not in the ClinicalTrials.gov database. (b) We excluded clinical trials that dealt with stem cells other than MDSCs in the ClinicalTrials.gov database. MAIN OUTCOME MEASURES: (1) Type of literature; (2) annual publication output; (3) distribution according to journals; (4) distribution according to country; (5) distribution according to institution; (6) top cited authors over the last 10 years; (7) projects financially supported by the NIH; and (8) clinical trials registered. RESULTS: (1) In all, 802 studies on MDSCs appeared in the Web of Science from 2002 to 2011, almost half of which derived from American authors and institutes. The number of studies on MDSCs has gradually increased over the past 10 years. Most papers on MDSCs appeared in journals with a particular focus on cell biology research, such as Experimental Cell Research, Journal of Cell Science, and PLoS One. (2) Eight MDSC research projects have received over US$6 billion in funding from the NIH. The current project led by Dr. Johnny Huard of the University of Pittsburgh-"Muscle-Based Tissue Engineering to Improve Bone Healing"-is supported by the NIH. Dr. Huard has been the most productive and top-cited author in the field of gene therapy and adult stem cell research in the Web of Science over last 10 years. (3) On ClinicalTrials.gov, "Muscle Derived Cell Therapy for Bladder Exstrophy Epispadias Induced Incontinence" Phase 1 is registered and sponsored by Johns Hopkins University and has been led by Dr. John P. Gearhart since November 2009. CONCLUSION: From our analysis of the literature and research trends, we found that MDSCs may offer further benefits in regenerative medicine.     

Induced pluripotent stem cell-derived neural stem cell therapies for spinal cord injury

The greatest challenge to successful treatment of spinal cord injury is the limited regenerative capacity of the central nervous system and its inability to replace lost neurons and severed axons following injury. Neural stem cell grafts derived from fetal central nervous system tissue or embryonic stem cells have shown therapeutic promise by differentiation into neurons and glia that have the potential to form functional neuronal relays across injured spinal cord segments. However, implementation of fetal-derived or embryonic stem cell-derived neural stem cell therapies for patients with spinal cord injury raises ethical concerns. Induced pluripotent stem cells can be generated from adult somatic cells and differentiated into neural stem cells suitable for therapeutic use, thereby providing an ethical source of implantable cells that can be made in an autologous fashion to avoid problems of immune rejection. This review discusses the therapeutic potential of human induced pluripotent stem cell-derived neural stem cell transplantation for treatment of spinal cord injury, as well as addressing potential mechanisms, future perspectives and challenges.     

大鼠胚胎脑皮层神经干细胞的分离和培养

目的探讨分离、培养、纯化大鼠胚胎神经干细胞(neuralstem cell,NSCs)的最佳条件,以获得充足的神经干细胞来源,用于中枢神经系统疾病的治疗.方法分离孕13～15 d胎鼠大脑皮层,在无血清含神经生长因子N2培养液中培养,利用有限稀释法单克隆培养和改良法连续传代纯化并扩增NSCs,免疫组织化学法对NSCs及分化细胞进行鉴定.结果可以通过体外培养获得大量神经源性干细胞,在体外经多次传代后仍具有很强的增殖能力和多向分化潜能.结论NSCs的存活和分裂依赖于神经生长因子和N2添加剂的浓度,胚胎脑组织和神经球分离方法影响NSCs的形成速度和数量.掌握NSCs的体外纯化培养和鉴定手段可为进一步研究NSCs生物学特性及神经系统损伤的治疗提供新方法.