嗅粘膜嗅鞘细胞修复脊髓损伤研究进展

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后功能的恢复一直是医学界的难题,自从1928年Cajal断言哺乳动物中枢神经没有再生能力以来,脊髓损伤功能重建方面的研究停滞不前。近年来研究发现：嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）能够促进轴突再生,引导再生的轴突重新进入中枢神经系统,并与靶器官形成新的功能连接,促进神经功能的恢复。     

嗅鞘细胞的研究进展

神经损伤与再生研究是当今神经科学领域的热点,在众多研究方法之中,细胞移植为一种理想的研究治疗手段.选择的移植材料是否理想,直接关系到神经再生及其功能恢复.近年来,对嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的研究呈现出如火如荼的局面,对于神经损伤的修复及病变的治疗显示出了广阔的临床应用前景.研究发现,OECs终身具有神经再生功能,还能够释放多种神经营养因子,神经粘附分子等,被认为是髓鞘化能力最强的胶质细胞,它具有星型胶质细胞和雪旺细胞的特点,并迁徙于周围神经和中枢神经,具有促进损伤神经轴突再生的能力,还能帮助神经轴突穿越损伤的瘢痕区域到达损伤的靶细胞,帮助加速神经功能的恢复.本文就近些年OECs的研究进行了综述.     

大鼠嗅鞘细胞的培养和纯化

目的　建立一种可行的培养和纯化嗅鞘细胞的方法以对其进行研究。方法　利用显微外科技术 ,从新生大鼠脑中取出嗅球的嗅神经组织 ,去除脑膜和微血管 ,消化后细胞以 1× 10 6个细胞 /ml接种在含有 10 %的DMEM/F12 ( 1∶1)培养液中于体外进行培养 ,利用阿糖胞苷Arac和Thy1.1单抗去除成纤维细胞 ,胰酶传代时通过仔细的监测将星形胶质细胞去掉 ,通过纯化获得大量的嗅鞘细胞。结果　嗅鞘细胞较容易培养 ,其增殖速度较快 ,污染的星形胶质细胞和成纤维细胞可有效地被去除 ,显微镜下嗅鞘细胞有卵圆形的胞体和长的、细的突触 ,为双级或多级的细胞 ;透射电镜显示细胞具有锯齿状的核 ,伴有大块染色体和电子密度的胞浆及散在的纤维。形态学和超微结构显示我们获得了较纯的细胞。结论　所建立的培养方法可行 ,适宜从新生大鼠中获得嗅鞘细胞。     

嗅鞘细胞联合移植治疗脊髓损伤现状

脊髓损伤（spinalcordinjury,SCI）的治疗一直是医学界难题,随着人们对SCI病理生理过程认识的不断深入,各种治疗方法不断取得进展。近年来,细胞移植以其针对继发性损伤的有效性,在SCI治疗的研究中日益深入,显示出良好的应用前景。     

嗅鞘细胞移植治疗脑出血的实验研究

目的研究OECs移植治疗大鼠脑出血的疗效。方法制作大鼠脑出血模型，3d后OECs移植，记录对照组和移植组的大鼠运动功能，及神经前体细胞及移植细胞在体内存活、分化和迁徙的情况。结果OECs组的神经前体细胞比对照组多，运动功能的改善显著好于对照组，免疫细胞化学方法证实OECs移植后能存活、迁徙。结论OECs移植后可以增加神经前体细胞的数量。改善脑出血运动功能。     

嗅鞘细胞和骨髓基质细胞的联合培养研究

目的探讨体外联合培养嗅鞘细胞(OECs)和骨髓基质细胞(BMSCs)的可行性及形态学观察。方法将原代培养的OECs和BMSCs消化制成细胞悬液,以相同比例接种,接种密度为104/ml。10 d后将联合培养的细胞置于倒置相差显微镜下进行形态学观察,并于鉴定前2 d加入细胞掺入剂BrdU,应用P75抗体和BrdU抗体对联合培养的细胞进行免疫荧光鉴定。结果联合培养的细胞在24 h内均完全贴壁,培养5 d后镜下可见细胞形态主要有3种:①双极、三极或多极形;②短梭形,突起较短;③扁圆形或不规则形。到第10天时部分细胞相互编织成网,部分细胞生长呈条索状,相互平行。荧光鉴定显示:荧光双标阳性者(既发红色荧光又发绿色荧光)为OECs,只发红色荧光而不发绿色荧光者为BMSCs。结论OECs与BMSCs在体外可以很好的联合培养,生物学特性均保持不变,为体内联合移植奠定了基础。     

新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的纯化方法研究

目的 探讨新生大鼠嗅球嗅鞘细胞（OECs）的体外培养和纯化方法，为研究脊髓损伤后神经再生获得丰富OECs来源奠定基础。方法 用原代培养的方法分离、培养新生大鼠嗅球OECs，比较p75抗体吸附、阿糖胞苷抑制、差速贴壁三种方法的纯化效果，根据GFAP免疫细胞化学染色结果统计所得OECs的纯度，同时在相差显微镜下对不同培养时期的OECs的形态进行观察。结果 体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三级细胞，其突起细长。未经纯化的OECs则成纤维细胞生长迅速而占优势，三种纯化方法均能使接种14d后的OECs纯度均值大于75％。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法的纯化率均值略高于差速贴壁法。结论 新生大鼠嗅球OECS的原代培养中细胞纯化是必要的；在脊髓损伤再生研究中，较之p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法，差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。     

嗅鞘细胞与大鼠尾状核神经元共培养的实验研究

目的观察嗅鞘细胞对大鼠尾状核神经元生长的影响.方法嗅鞘细胞与大鼠尾核神经元在无血清培养液中共培养,观察神经元生长变化.结果神经元与嗅鞘细胞共培养下神经元生长良好,轴突延长并形成网络状.结论嗅鞘细胞与大鼠尾状核神经元共培养可促进神经元生长.     

嗅鞘细胞修复脊髓损伤的研究进展

对嗅鞘细胞的生物学特性及其对脊髓损伤的研究进展进行回顾，总结嗅鞘细胞的研究和应用成果，为探讨脊髓损伤的修复对策提供指导和实验方法，以期为改善脊髓损伤的临床治疗效果提供新的思路和方法．     

嗅鞘细胞移植治疗帕金森病动物模型的相关研究

目的 利用大鼠同种异体嗅鞘细胞移植的方式对帕金森病模型大鼠进行治疗,初步探究在PD模型大鼠脑内移植嗅鞘细胞能否成为治疗帕金森病的一种有效手段。方法 提取和培养原代OECs,利用6-OHDA两点注射法建立帕金森病动物模型,通过APO诱导方式验证模型及检测治疗效果,通过HE染色进行大鼠黑质细胞形态学观察,利用抗TH荧光染色细胞计数对比治疗前后TH阳性神经元表达情况差异。结果 从嗅鞘细胞移植后的第4周开始,PD模型的行为学诱导旋转圈数明显减少。HE染色结果示:PD模型大鼠毁损侧的黑质致密部的神经元变性明显,且TH阳性神经元数量降低,经OECs治疗后的帕金森大鼠的患侧黑质部位神经元变性改善,且TH阳性神经元含量明显增高。结论 嗅鞘细胞能够改善帕金森模型大鼠的行为学变化。嗅鞘细胞能够提高帕金森模型大鼠患侧黑质部位多巴胺神经元含量。     

大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞的分裂增殖和免疫细胞化学特性

目的:体外培养大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs),观察其形态、分裂增殖和免疫细胞化学特性,探索自体嗅黏膜嗅鞘细胞作为OECs来源的可能性。方法:采用差时贴壁的方法分离培养成年大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞,相差显微镜下观察细胞形态和分裂增殖;用免疫组化方法观察GFAP、NGFRp75、S鄄100、NGF、BDNF、NT鄄3的表达。结果:培养的细胞根据形态来分,可分为双极、多极和偏平状;细胞分裂时先回缩成球形,分裂成两个子球,再伸出突起,变成梭形或多极形。GFAP、NGFRp75、S鄄100、BDNF和NT鄄3表达阳性。结论:在含血清培养基上,大鼠嗅黏膜嗅鞘细胞能正常分裂增殖和分泌神经营养因子。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的进展

脊髓损伤的治疗一直是医学界的难题.脊髓损伤后神经元无法依靠自身再生修复,轴突再生困难,同时神经胶质瘢痕阻碍再生轴突的通过,因此脊髓损伤后减少神经细胞坏死,促进轴突再生,减少胶质瘢痕的形成是临床治疗的关键.许多研究发现嗅鞘细胞是神经系统中具有促进神经轴突再生,引导轴突正确生长的独特细胞,为脊髓损伤的修复带来了希望,但临床结果很不理想,为了提高其修复神经和正确引导轴突生长的能力,目前许多研究将基因工程技术和组织工程技术应用于其种植过程中,取得了一定的成果.     

移植嗅鞘细胞修复神经损伤作用的研究进展

近年来细胞移植治疗疼痛的研究已成为医学研究的热点,其中嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cell,OECs)最受关注,它具有中枢和外周神经胶质细胞的特性,既像雪旺氏细胞促进轴突的生长,又像星形胶质细胞那样能在中枢神经系统中存活,正是这种复合体性使其成为治疗神经损伤最佳候选细胞之一,本文对移植OECs修复神经损伤作用的研究进展进行综述。 更多还原     

嗅鞘细胞与脊髓损伤再生修复

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后再生修复困难,而嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植被认为是治疗SCI最有潜力、最希望的方法.本文就近年来关于OECs的生物学特性、在SCI中的应用及其机制研究方面作一简要介绍.     

免疫吸附法纯化人胚嗅鞘细胞的实验研究

目的:探索分离培养人胚嗅鞘细胞以及纯化的方法。方法:分离人胚嗅球,采用胰酶消化获取单细胞悬液,应用含Forskolin、BPE的DMEM/F12培养基,接种于p75包被的培养皿,培养2周后细胞行免疫组化染色鉴定。结果:培养细胞形态多为2￣4极细胞,成纤维细胞少,嗅鞘细胞纯度非常高,嗅鞘细胞标志物p75阳性。结论:嗅鞘细胞体外分离培养条件要求极高,应用p75免疫吸附纯化培养的嗅鞘细胞效果好。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

目的帮助广大神经外科医生系统地了解嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)和OECs移植治疗脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)的实验性研究和临床应用的最新进展,以提高对SCI治疗策略和技术的全新认识。方法结合近年来OECs的研究、OECs移植治疗SCI的相关文献资料,分别介绍了嗅鞘细胞的生物学特性、OECs移植治疗SCI的可能机制、嗅黏膜嗅鞘细胞的研究、OECs联合移植的研究、脊髓损伤OECs移植时机的选择和OECs移植治疗SCI的临床研究。结果 OECs能促进轴突再生、营养受损神经和血管并且使轴突再髓鞘化,OECs移植到损伤的脊髓会改善其功能。结论 OECs移植治疗SCI的实验研究和早期临床应用均已证实OECs移植治疗SCI的有效性,但临床应用长期随访机制尚不够健全,缺乏系统的、客观的远期疗效评价体系,其作用的具体机制有待进一步明了。     

嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

目的:研究嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用.方法:30只SD大鼠随机分为OECs组和对照组,每组15只; 切除3 mm右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的OECs和生理盐水; 术后4、8和12周分别行电生理和组织学检查.结果:术后4、8和12周,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0.05).结论:外源性OECs移植能明显促进大鼠坐骨神经再生.     

嗅鞘细胞移植促进脊髓损伤修复的研究进展

脊髓损伤是重要的致残因素,常遗留严重的残疾,包括运动功能丧失（瘫痪）、感觉障碍、膀胱排尿功能紊乱、肌痉挛、关节挛缩、疼痛、褥疮、心理障碍、性功能不全、甚至呼吸障碍。长期以来,国内外研究人员对脊髓损伤治疗手段的开发进行了大量的基础和临床试验,但迄今为止尚无特异性治疗方法,     

大鼠嗅球嗅鞘细胞的改良培养及耳蜗内植入的初步研究

目的 建立并改良大鼠嗅球嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的取材、纯化、培养、鉴定及示踪方法,并初步探讨OECs耳蜗内植入的可行性.方法 采用改良法分离新生3 d的SD大鼠嗅球OECs,用差速贴壁加抗有丝分裂法行纯化培养,观察培养细胞的形态特点及生长情况,利用低亲和力神经生长因子受体NGFRp75行免疫组化鉴定并评估细胞纯度.将纯化培养7 d后的OECs与5-溴-2′-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2′-deoxyuridine,BrdU)共同孵育48 h,以免疫荧光法观察OECs的增殖活性;同法标记供移植用的OECs.在成年大鼠耳蜗底周钻微孔,注入OECs悬液,24 h后作耳蜗冰冻切片行免疫荧光染色,观察移植的OECs在蜗内存活与分布情况.结果 用改良技术体外培养的OECs增殖速度快,于第9天细胞数量最多,且逐渐表现出典型的形态学特征;绝大部分培养的OECs NGFRp75免疫组化呈阳性反应,细胞纯度最高达85%.OECs与BrdU共同孵育48 h后,约90%的培养细胞免疫荧光呈阳性反应.初步建立了内耳OECs移植方法;经耳蜗底周注入OECs后24 h,BrdU阳性细胞主要分布于耳蜗的外淋巴腔,部分细胞附着于鼓阶外侧壁.结论 采用改良的嗅球OECs分离培养法可以获得高纯度、增殖活性良好的OECs;OECs耳蜗内植入后短期内可存活,初步提示耳蜗内OECs移植基本可行,值得进一步研究.