PTEN在肝癌中表达缺失的意义及其体外转染对人肝癌细胞系的作用

目的探讨PTEN表达与肝细胞癌发生、发展的关系,观察体外转染外源性PTEN对肝癌细胞的生长、细胞周期和超微结构的影响。方法检测PTEN在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达缺失情况,以观察该基因与肝癌病理分级、转移和预后的关系。将含PTEN的反转录病毒载体及空载体转入人肝癌细胞系HHCC,观察转染前后细胞的生长、超微结构、细胞周期及裸鼠致瘤能力改变情况。结果肝癌中PTEN表达缺失率为30.16%(19/63),显著高于正常肝组织0(0/8)和肝硬化组织7.15%(1/14)。随着恶性程度的增高,PTEN表达缺失率随之增加。PTEN表达缺失与转移及预后显著相关。PTEN在人肝癌细胞系hHCC中也不表达。将抑癌基因PTEN转入后,hH-CC细胞生长明显受到抑制,细胞超微结构失去部分恶性表型特征,细胞周期由G1→S0期受抑制,并出现凋亡峰,体外成瘤能力下降。结论抑癌基因PTEN失表达多见于肝细胞肝癌进展期,并与肝细胞肝癌分化程度、是否转移以及临床预后相关;体外PTEN的转入可以明显地抑制HHCC生长、体外成瘤能力。     

FTEN在肝癌中表达缺失的意义及其体外转染对人肝癌细胞系的作用

目的探讨PTEN表达与肝细胞癌发生、发展的关系,观察体外转染外源性PTEN对肝癌细胞的生长、细胞周期和超微结构的影响.方法检测PTEN在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达缺失情况,以观察该基因与肝癌病理分级、转移和预后的关系.将含PTEN的反转录病毒载体及空载体转入人肝癌细胞系HHCC,观察转染前后细胞的生长、超微结构、细胞周期及裸鼠致瘤能力改变情况.结果肝癌中PTEN表达缺失率为30.16%(19/63),显著高于正常肝组织0(0/8)和肝硬化组织7.15%(1/14).随着恶性程度的增高,PTEN表达缺失率随之增加.PTEN表达缺失与转移及预后显著相关.PTEN在人肝癌细胞系hHCC中也不表达.将抑癌基因PTEN转入后,hH-CC细胞生长明显受到抑制,细胞超微结构失去部分恶性表型特征,细胞周期由G1→S0期受抑制,并出现凋亡峰,体外成瘤能力下降.结论抑癌基因PTEN失表达多见于肝细胞肝癌进展期,并与肝细胞肝癌分化程度、是否转移以及临床预后相关;体外PTEN的转入可以明显地抑制HHCC生长、体外成瘤能力.     

转PTEN 基因对人结肠癌细胞的抑制作用

  目的 探讨PTEN基因转染对结肠癌LoVo细胞的抑制作用. 方法 将人野生型及突变型PTEN cDNA通过脂质体导入结肠癌细胞LoVo中,并用RT-PCR、Western blot、流式细胞术检测细胞的PTEN mRNA和蛋白质表达.用流式细胞仪、DNA梯形带和MTT法分析5-Fu对转染前后LoVo细胞抑制周期和诱导凋亡的能力. 结果 转染野生型PTEN基因可明显增强结肠癌LoVo细胞的PTEN表达,5-Fu对转染后的LoVo细胞抑制细胞周期和诱导凋亡的作用明显增强.突变型在结肠癌细胞LoVo中有表达但无明显抑制作用. 结论 转染的PTEN基因可显著上调结肠癌LoVo细胞的PTEN表达,促进细胞凋亡,联合应用PTEN基因转染和5-Fu可获得协同的细胞毒作用.     

siRNA表达载体介导的RNA干扰对肝癌细胞周期蛋白E1表达抑制研究

目的探讨经载体介导的RNA干扰对肝癌细胞周期蛋白E1表达抑制效率。方法针对周期蛋白E1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段，连接到pSilencer1．0-U6载体上构建siRNA真核表达载体；脂质体转染法将上述重组质粒转人BEL-7402肝癌细胞株。RT—PCR分析周期蛋白E1表达抑制率；流式细胞术测细胞周期S期和凋亡细胞比率；MTT比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线。结果重组载体介导肝癌细胞BEL-7402周期蛋白E1抑制率达62％；转染重组质粒32h测得S期细胞为19％，空载体转染对照为27％；转染重组质粒96h流式细胞术测得凋亡细胞为13．1％，高于空载体对照的6．6％；细胞生长曲线作图表明，重组载体转染组细胞生长明显减缓。结论肝癌细胞周期蛋白E1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰成功抑制，进而导致细胞生长受抑并诱导凋亡；本研究为探索肝癌的RNAi治疗提供了初步的实验依据。     

PTEN依赖其磷酸酶活性诱导肝癌细胞发生失巢凋亡机制的探讨

目的 研究抑癌基因PTEN对人肝癌SMMC-7721细胞失巢凋亡的影响并探讨其可能的机制。方法 将携有野生型PTEN基因及无磷酸活性的突变型C124A-PTEN基因的真核表达载体转染SMMC-7721细胞,利用Western印迹杂交法,检测PTEN蛋白表达与蛋白激酶B(PKB／Akt)、焦点黏附激酶(FAK)磷酸化水平的变化,并应用流式细胞仪技术和激光共聚焦显微镜技术,分析各种细胞在黏附与失黏附状态下的凋亡。结果 与对照细胞相比,转染野生型PTEN的SMMC-7721细胞中,FAK和Akt的磷酸化水平分别降低了65．2％和89．1％,且失巢凋亡率由9．5％增至31．3％;而转染C124A-PTEN的SMMC-7721细胞中,FAK和Akt的磷酸化水平及失巢凋亡率均无明显变化。结论 抑癌基因PTEN可依赖其磷酸酶活性抑制FAK和Akt的磷酸化,并诱导肝癌细胞发生失巢调亡。     

稳定转染HBx基因的HepG2细胞株的建立及其对p53-p21途径的影响

目的 将构建的乙型肝炎病毒X基因的真核表达载体稳定转染HepG2细胞株, 并研究转染后对p53-p21途径的影响。 方法 用基因转染的方法将已构建的载体pcDNA3.1-HBx 转染入肝癌细胞HepG2中, G418筛选出稳定转染X基因的细胞株。细胞生长曲线、平板克隆形成实验检测转染后肝癌细胞的恶性表型,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,Western blot检测p53蛋白的表达,RT-PCR检测p21基因。结果 成功筛选出pcDNA3.1-HBx稳定转染的HepG2细胞株;细胞生长实验、平板克隆形成实验显示稳定转染乙型肝炎病毒X基因的肝癌细胞恶性表型增高;流式细胞仪结果显示,转染后的细胞株凋亡率增高,G₁/G₀期细胞减少,G₂期细胞增多;Western blot 和RT-PCR分别显示,转染株p53蛋白表达增高,且下调p21基因水平。 结论 乙型肝炎病毒X蛋白可刺激肝癌细胞生长, 稳定转染X基因的细胞株可能通过p53-p21途径增加肝癌细胞的恶性表型。     

Raf激酶抑制蛋白对HepG2肝癌细胞生物学特性影响的研究

目的：Raf激酶抑制蛋白（RKIP）是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族的重要成员,近来的一些研究表明RKIP基因的蛋白产物在人类肝癌组织中表达显著下调。本研究旨在探讨RKIP基因对于肝癌细胞增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等恶性表型的影响,以初步阐明其功能意义。方法：将RKIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-RKIP真核表达载体。脂质体转染肝癌细胞系HepG2建立稳定转染细胞系（Hep-RKIP）,而后使用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞仪,细胞迁徙实验法等方法分析稳定表达株相关生物学特性变化。同时设立空载体转染组和空白细胞组为对照。结果：与转染pcDNA3.1空载体及空白HepG2肝癌细胞相比,转染PC-RKIP载体的稳定表达细胞株生长有显著减慢,后两组之间亦无显著差异,平板克隆形成实验结果显示PC-RKIP转染组平均克隆形成率显著低于其它两组（P〈0.05）,细胞周期检测显示PC-RKIP转染组处于G0/G1期的细胞比例显著高于未处理的HepG2细胞和转染pcDNA3.1空载体的HepG2细胞（P〈0.05）,而处于G2-M期的细胞比例显著均低于其它两组（P〈0.05）,其它各期细胞比例均无显著差异。流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示PC-RKIP转染组调亡比例为6.4%左右,显著高于对照组（P〈0.05）。细胞迁徙实验结果提示PC-RKIP转染组穿膜率与其它两组相比显著降低（P〈0.05）。结论：RKIP基因可能具有抑制细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期及细胞凋亡,对肝癌细胞侵袭转移能力可能有一定抑制作用,对抑制细胞恶性表型有一定意义。     

Raf激酶抑制蛋白对HepG2肝癌细胞生物学特性影响的研究

目的 Raf激酶抑制蛋白(RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族的重要成员,近来的一些研究表明RKIP基因的蛋白产物在人类肝癌组织中表达显著下调.本研究旨在探讨RKIP基因对于肝癌细胞增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等恶性表型的影响,以初步阐明其功能意义.方法 将RKIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-RKIP真核表达载体.脂质体转染肝癌细胞系HepG2建立稳定转染细胞系(Hep-RKIP),而后使用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞仪,细胞迁徙实验法等方法分析稳定表达株相关生物学特性变化.同时设立空载体转染组和空白细胞组为对照.结果 与转染pcDNA3.1空载体及空白HepG2肝癌细胞相比,转染PC- RKIP载体的稳定表达细胞株生长有显著减慢,后两组之间亦无显著差异,平板克隆形成实验结果显示PC- RKIP转染组平均克隆形成率显著低于其它两组(P<0.05),细胞周期检测显示PC- RKIP转染组处于G0/G1期的细胞比例显著高于未处理的HepG2 细胞和转染 pcDNA 3.1空载体的HepG2细胞(P<0.05),而处于G2-M期的细胞比例显著均低于其它两组(P<0.05),其它各期细胞比例均无显著差异.流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示PC-RKIP转染组调亡比例为6.4%左右,显著高于对照组(P<0.05).细胞迁徙实验结果提示PC-RKIP转染组穿膜率与其它两组相比显著降低(P<0.05).结论 RKIP基因可能具有抑制细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期及细胞凋亡,对肝癌细胞侵袭转移能力可能有一定抑制作用,对抑制细胞恶性表型有一定意义.     

PTEN 表达载体的构建及转染食管鳞癌细胞系EC9706

 目的 筛选稳定表达野生型PTEN基因的食管鳞癌细胞株EC9706。方法 提取胎盘总RNA，设计引物，PCR扩增人野生型PTEN基因，经测序鉴定后，连接于pcDNA3．1（＋）真核表达载体，构建pcDNA3．1-PTEN，用脂质体介导的方法将其转染EC9706。而后加抗生素G418筛选稳定表达株，用RT-PCR方法检测稳定表达株PTEN基因的mRNA水平，通过绘制生长曲线观察细胞生长情况。结果 PCR产物的电泳结果显示，在1500bp左右有一明显亮带，测序结果与GenBank上PTEN序列完全一致；稳定表达PTEN基因的细胞株RT-PCR结果显示，PTEN的mRNA水平比对照细胞株相比明显升高；生长曲线结果显示，转染后的细胞生长速度明显减慢。结论 所扩基因为野生型PTEN基因，所构建的载体为野生型PTEN基因真核表达载体，并筛选出PTEN基因稳定表达的食管鳞癌细胞株。     

miR-214通过PTEN调控AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞凋亡CSCD

目的探讨miR-214通过PTEN调控下游AKT信号通路激活对鼻咽癌细胞凋亡的影响。方法miR-214抑制剂转染鼻咽癌5-8F和6-10B细胞。MTT法评估细胞增殖情况。Annexin-V/PI染色法检测两种鼻咽癌细胞凋亡情况。Western blot和real-time PCR检测miR-214抑制剂对PTEN基因转录和蛋白表达以及对AKT信号通路和凋亡相关蛋白表达水平的影响。检测shRNA沉默PTEN基因转录和蛋白表达后,miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞凋亡影响。结果miR-214抑制剂可抑制鼻咽癌细胞生长,诱导5-8F和6-10B细胞凋亡。miR-214通过靶向3'-UTR区域调控PTEN基因转录和蛋白表达。抑制miR-214可促进PTEN的表达,抑制AKT信号通路激活,进而调控下游细胞周期和凋亡相关蛋白表达。沉默PTEN基因转录和蛋白表达可逆转miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞AKT信号通路活性和凋亡的影响。结论miR-214可通过直接靶向PTEN基因转录促进AKT信号通路激活抑制鼻咽癌细胞凋亡。     

野生型p14ARF基因转染对人肺癌细胞生长抑制的这实验研究

目的 探讨外源性p14ARF基因能否对体内外生长的肺癌细胞起抑制增殖的作用。方法 选择4株具有不同基因背景的肺癌细胞系,转染人的野生型p14ARF基因。通过RT-PCR、免疫组化及Westernblot杂交检测,筛选出同时表达p14ARF mRNA及蛋白的阳性克隆。以母细胞及转染空载体细胞为对照,比较它们的增殖、细胞周期分布、裸鼠体内成瘤性以及形态学上的差异。结果 三株具有野生型p53基因的肺癌细胞在转染p14ARF基因后,细胞周期被显著阻滞于G1或G1/G2期,增殖受到抑制。结论 外源性野生型p14ARF基因转染能抑制人肺癌细胞的增殖,p14ARF基因是人体肺癌基因治疗的理想侯选基因。     

Regulatory effects of PTEN gene transfection on vascular endothelial growth factor (VEGF) in leukemia cells北大核心

Objective: To investigate the effects of wild type tumor-suppressing gene PTEN (phosphatase and tensin hemology deleted on chromosome ten gene) on vascular endothelial growth factor (VEGF) and VEGF receptor 1 (VEGFR1) in leukemia cells and elucidate the mechanism. Methods: The recombinant adenovirus containing wild type PTEN and green fluorescent protein (GFP) (Ad-PTEN-GFP) or empty vector (Ad-GFP) was transfected into K562 leukemia cells. PTEN, VEGF, and VEGFR1 mRNA expression levels were detected using quantitative PCR and the protein expression levels were detected using Western blotting. Transwell invasion test was used to examine the invasion ability of the leukemia cells. Human umbilical vein endothelial cells ECV304 were also transfected with or without PTEN gene. Then the proliferation and apoptosis were measured using MTT assay and flow cytometry (FCM), respectively. Chick chorioallantoic membrane (CAM) test was used to determine the effect of PTEN gene transfection on angiogenesis. Results: The expressions of VEGF and VEGFR1 were significantly inhibited after transfection of Ad-PTEN-GFP compared with the control group transfected with empty Ad-GFP. The inhibitory effects were in a dose-dependent manner. The invasion capability of K562 cells was markedly weakened after transfection of Ad-PTEN-GFP. PTEN gene transfection inhibited the proliferation and induced apoptosis of vascular endothelial ECV304 cells. The cells were arrested at S phase. CAM test showed that PTEN gene inhibited the angiogenesis in vivo. Conclusion: Tumor suppressor gene PTEN inhibited the growth of endothelial cells and the invasion of leukemia cells. The action mechanism may be related with down-regulation VEGF expression and angiogenesis of leukemia cells.     

Phenotypic effects of overexpression of the MMAC1 gene in prostate epithelial cells

The prostate cancer cell lines PC3 and LNCaP have been shown to lack expression of the tumour suppressor gene MMAC1/PTEN, in contrast to the immortalized non-tumorigenic epithelial lines PNT1a and PNT2. We have measured the effects of reintroduction of wild type (wt) and mutant MMAC1 genes on to these genetic backgrounds, using gene constructs expressing either wt MMAC1 or various mutants deficient in the dual specificity phosphatase domain of the protein. Over-expression of wild type PTEN protein induced cell shrinkage and rounding, but did not result in increased levels of classical apoptosis. Permanently transfected lines containing the MMAC1 gene could only be obtained from the PNT cells, as PTEN expression resulted in rapid loss of both tumour lines. In contrast, mutation of the phosphatase domain resulted in partial attenuation of the phenotypic effects of MMAC1 after transient transfection, and also allowed the derivation of permanent tumour cell lines containing the mutated MMAC1 gene. The results suggest that re-expression of wt PTEN is incompatible with survival of human prostate cancer cells in vitro, and that the full biological activity of this common tumour suppressor requires functions additional to the established protein and lipid phosphatase activities in epithelial systems.     

Ad-PTEN增强LY294002对人胶质瘤细胞系U251的生长抑制作用

目的在体外实验中,利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒（Ad—PTEN）和P13K的小分子抑制剂LY294002联合抑制P13K／AKT信号通路,观察两者联合对人胶质瘤细胞系U251生长有无正向协同作用及探讨产生这种作用的机制。方法15251细胞按处理方式不同分为4组：DMSO对照组、空载病毒对照组、LY294002组和联合组（LY294002＋Ad—PTEN组）。在U251细胞系中导入LY294002并转染Ad—PTEN病毒后,提取总蛋白,用Westernblotting检测PTEN表达状态及P13K、AKT表达情况;用MTT法检测Ad—PTEN和LY294002对U251生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期、AnnexinV法检测细胞凋亡,观察导人LY294002和转染Ad—PTEN后U251增殖能力的改变;用划痕实验、Transwell实验观察LY294002及Ad—PTEN对U251迁移和侵袭能力的影响;Westernblotting检测P13K／AKT信号通路下游相关蛋白表达水平变化。结果Westernblotting显示：与DMSO组和空载病毒组相比,LY294002组P13K、AKT蛋白表达水平明显降低,联合组（LY294002＋Ad—PTEN）的WEN蛋白明显上调,而P13K、AKT蛋白下降水平比LY294002组更为显著。联合组与LY294002组、空载病毒组、DMSO组相比细胞周期阻滞在G0／G1期;联合组凋亡率比其他三组明显增加;自培养第2天起,联合组细胞增殖速率呈下降趋势。联合组侵袭和迁移细胞的相对数少于LY294002组、空载病毒组和DMSO组。Westernblotting结果证明位于P13K／AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF—KB、FAK蛋白表达水平显著下调。结论小分子抑制剂LY294002能够有效抑制U251中P13K、AKT蛋白的表达,联合转染Ad—PTEN后不仅能提高PTEN蛋白的表达水平,对P13K、AKT的抑制更为显著。在体外实验中,联合Ad—PTEN和LY294002能够有效地通过阻滞细胞周期、减少细胞凋亡来抑制U251的增殖能力,并能够抑制细胞的侵袭和迁移能力,两者联合使用具有正向协同作用。联合Ad—PTEN和LY294002对U251的生长与侵袭的抑制作用与P13K／AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF—KB、FAK蛋白表达水平下调有关。联合腺病毒转染技术和小分子抑制剂调控P13K／AKT信号通路是治疗胶质瘤的新途径。     

稳定转染HBx基因的HepG2细胞对raf-1表达的影响

 【摘要】　目的　探讨乙型肝炎病毒x（HBx）蛋白致癌变的分子机制。方法　构建HBx 基因真核表达载体pCDNA3.1(+)-x，脂质体转染入HepG2 细胞（HepG2X 细胞），以pCDNA3.1空载体为对照（HepG2X0细胞），G418选择培养，克隆扩增转染细胞，并用Western blot检测X蛋白的表达；MTS实验检测细胞增生情况；流式细胞仪检测细胞周期变化；检测转染组及对照组raf-1的表达变化。结果　转染组X细胞在相对分子质量为21×103位置有X蛋白的表达，而对照组HepG2X0细胞及未处理的HepG2细胞未见X蛋白的表达。MTS结果显示X细胞增生能力显著高于其他两株细胞（P＜0.01）。流式细胞仪结果显示转染后的细胞系凋亡率增高，G1／G0期细胞减少，G2期细胞增多。Western blot结果示转染组X细胞raf-1表达明显较其他两组细胞增高。结论　HBx 有推进细胞周期的作用，使细胞快速进入G2期。其机制可能是HBx增加细胞周期蛋白raf-1的表达。     

靶向抑制miR-19a提高人宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的:研究miR-19a反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对人宫颈癌HeLa细胞对顺铂耐药性的影响,并进一步探讨其机制。方法:利用Lipofectamine 2000将 miR-19a-ASO瞬时转染HeLa细胞,实时定量PCR法检测miR-19a表达水平。MTT法检测顺铂对HeLa细胞存活率的影响。Western blot检测PTEN、AKT和p-AKT（Ser473）蛋白表达的变化。结果:miR-19a-ASO明显抑制HeLa细胞miR-19a的表达。MTT结果表明靶向抑制miR-19a能明显促进HeLa细胞对顺铂的敏感性。Western blot结果提示,与对照组比较,干扰miR-19a的HeLa细胞,PTEN表达水平升高,p-AKT（Ser473）表达水平降低。结论:沉默miR-19a可能通过抑制AKT通路提高宫颈癌细胞对顺铂的敏感性,从而为宫颈癌的治疗提供新靶点。     

p16基因抑制食管癌细胞生长的研究

目的 探讨ｐ１６基因对食管癌细胞生长的抑制作用,为食管癌致癌机理的研究和基因治疗提供理论基础。方法 我们采用基因转染技术,将全长野生型ｐ１６ ｃＤＮＡ转染到经亚硝胺诱发的人胎儿食管癌细胞系中,该细胞内源性ｐ１６基因已发生纯合性缺失。结果 转染ｐ１６基因的食管癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约４倍。对细胞周期分析表明,处在Ｇ０￣Ｇ１期的细胞由３３．７％增加到６８．６％。经Ｄｏｔ     

KAI1基因对乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用

目的研究KAI1基因对乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用。方法应用脂质体法将pCMV-KAI1质粒转染人高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,免疫印迹方法检测蛋白表达;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、平板克隆形成实验、体外黏附及侵袭力实验判断细胞增殖能力及黏附、侵袭力的变化。流式细胞术检测细胞生长周期的变化。结果获得了稳定表达KAI1基因的MDA- MB-231乳腺癌细胞克隆。MTT法显示,转染KAI1基因组的集落形成率(25.33%±2.36%)较转染前(43.17%±2.75%)明显降低(P<0.05)。体外黏附及侵袭力实验表明,转染组的细胞黏附侵袭能力低于未转染组和转染空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,转染KAI1后,G_0/G_1期细胞数量增高,从36.78%±0.61%升高至64.00%±7.56%;G_2/M期数量降低,由17.88%±0.76%降至7.63%±0.60%,差异有统计学意义。结论KAI1基因可以抑制乳腺癌细胞的增殖黏附和侵袭能力,并可能通过调节细胞周期来影响细胞的增殖。     

RNAi对肝癌细胞RhoA基因表达和侵袭转移影响的研究

目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默RhoA基因表达对肝癌细胞HHCC生物学特性的影响。方法:合成RhoA特异性小干扰RNA(siRNA),脂质体介导转染肝癌细胞株HHCC。检测RhoA mRNA和蛋白表达水平和RhoA活性的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架变化,Boyden小室测定细胞侵袭性变化。结果:RhoA siRNA能有效抑制HHCC细胞RhoA mRNA和蛋白的表达,致使RhoA活性显著下降(P<0.01),细胞侵袭能力明显降低(P<0.01),侵袭抑制率为26.2%。结论:RhoA siRNA能够显著下调HHCC细胞RhoA的表达和侵袭能力,表明RhoA可影响肿瘤细胞的转移和侵袭能力,抑制其功能可能为肝癌治疗提供新的靶点。     

人PTEN基因表达载体的构建及其在U251细胞中的表达

背景与目的:克隆人野生型和突变型PTEN的cDNA并构建其表达载体,探讨该表达质粒在人星形胶质瘤细胞U251中的表达情况.材料与方法:分别从新鲜胎盘组织和结肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增人野生型和突变型PTEN基因全长cDNA,分别克隆入pMD 18-T载体上,经PCR、酶切鉴定均为阳性的克隆,进行核苷酸序列分析.再分别将两段基因定向克隆入pcDNA3.1( )载体中构建表达载体,转染入U251细胞.结果:成功克隆了人野生型及突变型PTEN cDNA并成功构建其表达载体,发现突变型PTEN蛋白对细胞生长无明显抑制作用,而野生型PTEN蛋白对细胞生长有明显抑制作用.结论:PTEN可能能抑制肿瘤细胞生长,为后进一步开展PTEN对肿瘤相关功能的研究奠定基础.