分选后晚G1期凋亡细胞CyclinE表达分析

目的 以G1期细胞凋亡为模型,检测细胞周期察Cyelin E是否与凋亡相关.方法 收获紫外线照射后的人类急性淋巴细胞性白血病细胞,一部分采用流式细胞术将凋亡诱导后的细胞进行Cyclin E/DNA双参数分析和细胞周期特异性细胞凋亡API双参数分析;一部分利用流式细胞分选术将凋亡诱导后的细胞分为凋亡组和未凋亡组,Westernblot法检测并比较两组细胞Cyclin E蛋白表达情况.结果 Cyclin E/DNA双参数分析观察到凋亡诱导后细胞周期阻滞过程中细胞Cyclin E表达水平明显升高.分选后Western blot检测观察到凋亡组Cyclin E表达明显低于未凋亡组.结论 Cyclin E表达水平的升高可能对晚G1期细胞的凋亡起到保护作用.     

利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白

目的 利用已经构建好的四环素诱导细胞周期素B1 (Cyclin B1)表达的单克隆细胞株,探索可能与Cyclin B1相互作用的蛋白.方法 加入四环素的单克隆细胞株能表达带有Myc和His标签的Cyclin B1.将未诱导和用四环素诱导48 h的细胞裂解后,分别加入10μg Myc的单克隆抗体,用免疫沉淀法(immune precipitation,IP)沉淀可能和Cyclin B1相作用的蛋白,将蛋白混合物行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色法和银染法明确差异蛋白,再用质谱(mass spectrometry,MASS)行蛋白鉴定.结果 用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cyclin-dependent kinase 1,CDK1),细胞周期素依赖蛋白激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2),有丝分裂阻滞缺失样蛋白1(Mitotic arrest deficient-like protein 1,MAD1-like 1,MAD1L1)和热休克蛋白8(heat shock 70kD protein 8 isoform 1).结论 除Cyclin B1和CDK1直接相互作用外,Cyclin B1与CDK2、MAD1L1和热休克蛋白8都可能有直接或间接的相互作用.     

中药金克通过G1期阻滞和诱导凋亡抑制HL-60细胞增殖

目的 研究中药金克对体外HL-60细胞系细胞周期调控方面的影响.方法 使用MTT比色法检测HL-60细胞活力,使用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,使用Western blot检测细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达. 结果金克能通过G1期阻滞和诱导凋亡使HL-60细胞活性降低.金克作用于HL-60细胞引起剂量和时间依赖性凋亡.金克阻滞HL-60细胞在G1期的原因是CDKI蛋白(p19INK4,p21Cip/waf1 和 p27Kip1)表达增高,同时CDK2,CDK4,CDK6,Cyclin D1和Cyclin E表达降低.金克也引起凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达.结论 首次证明了金克通过G1期阻滞和诱导凋亡抑制HL-60细胞的增殖,这表明金克是一个细胞周期特异性的抗癌药物.     

他克莫司对5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制的初步探讨

目的:观察他克莫司(FK506)对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨.方法:体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721;应用流式细胞仪检测5-FU及联合FK506对细胞凋亡和细胞周期的影响;TransAM NF-κB核转录因子活性检测试剂盒检测NF-κB p65活性;细胞免疫组织化学检测NF-κB p65激活后入核情况;免疫印迹分析Cyclin D1蛋白表达差异.结果:5-FU可诱导肝癌细胞凋亡,其作用随浓度的增加而增强(P<0.05);随着5-FU用药浓度的增加,S期细胞比例和细胞增殖指数(PI)也增加; 5-FU可激活NF-κB而入核,Cyclin D1蛋白的表达逐渐增强.FK506预处理增强了5-FU诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,同时S期细胞比例和PI也减少; FK506预处理可抑制NF-κB入核,并可下调Cyclin D1基因的表达.结论:FK506能够协同5-FU诱导肝癌细胞株凋亡,增强肝癌细胞株对5-FU的敏感性,这种作用可能是通过抑制NF-κB活性进而下调Cyclin D1基因的表达,导致G0/G1期停滞而实现.     

薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响

目的研究薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响。方法培养人宫颈癌细胞株Hela,不同浓度的薯蓣皂苷元干预24、48、72h,采用MTF、EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,WesternBlot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1。结果薯蓣皂苷元在20μmol／L浓度时抑制Hela细胞活力（P〈0．01）,呈现量效和时效特征;薯蓣皂苷元作用后EdU阳性细胞明显减少,薯蓣皂苷元引起G0／G1期细胞阻滞,减少S期细胞,降低Cyclin D1蛋白表达,而对Cyclin B1蛋白表达没有明显影响。结论薯蓣皂苷元通过阻滞细胞G0／G1期来抑制人宫颈癌Hela细胞株的增殖。     

泰山照山白金丝桃苷诱导人乳腺癌细胞的细胞周期阻和凋亡的机制研究

目的 观察泰山照山白金丝桃苷（Hyperin）对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期及凋亡影响及其机制.方法 体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,加入不同金丝桃苷浓度处理,运用MTT法检测细胞生长、流式细胞术PI染色检测细胞周期,western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase 2,CDK2）、细胞周期蛋白A （Cyclin A）及caspase3的表达.结果 与对照组相比,经金丝桃苷处理后细胞生长呈时间及浓度依赖性抑制;MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,该期细胞比例增多;CDK2、Cyclin A蛋白水平的表达与对照组相比明显下降而caspase3蛋白水平的表达明显升高.结论 通过细胞周期的G2/M期阻滞诱导细胞凋亡可能是金丝桃苷发挥抗肿瘤作用的可能机制之一.     

大鼠脑缺血后神经元凋亡的细胞周期特异性和相关基因表达

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的细胞周期特异性分布以及相关基因表达之间的内在关系。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,利用流式细胞分选和原位末端标记及RT-PCR技术,检测正常组和缺血后大鼠脑组织中的神经元凋亡的细胞周期特征,及其Cyclin D1和Cyclin B1基因的表达规律。结果:神经元凋亡可以发生在细胞周期的各个时相,细胞凋亡多发生在G0/G1期,而且神经元也可在S期甚至到达G2期发生凋亡。正常脑组织中神经元表达Cyclin D1,缺血后表达增加;Cyclin B1在正常脑组织的神经元中不表达,缺血后呈现弱表达。结论:脑缺血后神经元可以重新进入细胞周期,其细胞凋亡是多点启动的,可发生在细胞周期的各个时相。Cyclin D1和Cyclin B1的异常激活可能参与了缺血后神经元凋亡的细胞周期调控过程。     

DBC2基因诱导乳腺癌细胞周期G1期阻滞的机制

目的 研究肿瘤抑癌基因DBC2(deletion in breast cancer 2)抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖的可能机制.方法 野生型DBC2基因的真核表达载体pEBG-DBC2瞬时转染MDA-MB-435S细胞72 h,RT-PCR方法证实DBC2基因的过表达;流式细胞术检测DBC2的瞬时过表达对MDA-MB-435S细胞周期的影响,Western blot检测DBC2的过表达对细胞周期蛋白Cyclin D1表达的作用.结果 DBC2基因在MDA-MB-435S细胞中瞬时转染72 h后,其mR-NA表达水平即可成倍增加,同时DBC2基因的过表达可诱导该乳腺癌细胞周期的G1期阻滞,并随着时间的延长出现细胞凋亡.结论 DBC2基因体外抑制乳腺癌细胞生长的功能,可能通过抑制Cyclin D1的表达并使细胞停滞于G1期,以及诱导细胞凋亡等机制实现.     

三氧化二砷对恶性B淋巴瘤细胞Raji的抑制作用

目的 研究三氧化二砷对B淋巴瘤细胞Raji的抑制作用和周期阻滞作用.方法 用MTT比色法检测不同浓度AS2O3对Raji 细胞的体外增殖抑制率.用流式细胞仪检测AS2 O3作用72小时后Raji细胞p21的表达变化和细胞周期的变化.结果 与对照组相比,各实验组细胞增殖明显下降.AS2 O3可使Raji细胞周期阻滞于G0/G 1期,并上调P21WAF1/CIP1的表达.结论 AS2O3可使Raji细胞阻滞于G 0/G1期,其诱导周期阻滞的机制可能是通过上调P21 WAF1/CIP1的表达.     

DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响.方法：采用MTT、细胞计数检测DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响;应用流式细胞仪检测DADS对HepG2细胞周期和细胞凋亡率的影响.结果：DADS使细胞增殖明显受抑制且抑制率呈药物浓度时间依赖性（P＜0.05）,DADS组细胞的倍增时间延长（P＜0.05）.与对照组比较DADS处理组G2/M期细胞比例显著增加,而G0/G1期细胞比例则明显下降,细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05）.结论;DADS对人肝癌细胞株具有抗增殖作用,且与药物浓度及作用时间相关.DADS能阻滞细胞周期在G2/M期,并诱导细胞凋亡.     

AMPK激动剂AICAR通过阻滞细胞周期于G0/G1期抑制肺动脉平滑肌细胞增殖

目的 建立PDGF-BB诱导的原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary vascular smooth muscle cells,PASMCs)的增殖细胞模型,通过AMPK激动剂AICAR干预,探讨AICAR对PASMCs细胞周期和增殖的影响及其机制,为肺血管重构防治寻找靶点。方法 通过20ng/ml PDGF-BB刺激诱导PASMCs增殖建立细胞模型,采用AICAR(0.5mmol/L)干预PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,Western blot法检测总的和磷酸化的AMPK, CCK-8检测PASMCs增殖,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达。结果 Western blot法检测表明AICAR可以活化AMPK,CCK-8检测结果表明AICAR能够抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖;流式细胞仪检测结果表明AICAR能够抑制细胞周期于G₀/G₁期,RT-PCR结果表明AICAR可以抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK4和CDK6的mRNA的表达。结论 AICAR通过抑制cyclinD1、cyclinE、CDK2/4/6 的mRNA表达阻滞细胞周期于G₀/G₁~S期,抑制PASMCs增殖。     

G0S2基因在NSCLC中的表观遗传性改变

目的 检测G₀S₂基因在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中的甲基化率及表达量,并探讨其成为NSCLC早期诊断和预后预测特异性分子标志物的可能性。方法 采用焦磷酸测序法测定组织细胞中G₀S₂基因甲基化率,荧光定量PCR测定组织细胞中G₀S₂基因mRNA的表达量,根据NSCLC患者的人数平均分为两组后,cut-off值为0.2,以此分为G₀S₂基因高表达组与低表达组,并对G₀S₂基因表达量的影响因素进行单因素分析,并分析该基因表达量与患者预后之间的关系。结果 在NSCLC患者中G₀S₂基因存在高甲基化率（40%）,并且该基因在正常组织中的表达量与肿瘤组织中的表达量比较差异有统计学意义（P=0.000）;在单因素分析中发现NSCLC患者的年龄、性别、吸烟史、肿瘤的病例类型、分期分级对G₀S₂基因的表达量均无明显影响（P>0.05）;G₀S₂基因的表达量与NSCLC患者的预后无明显相关性（P>0.05）。结论 检测G₀S₂基因的表达情况对NSCLC患者早期诊断有一定的作用,但在后续指导肺癌分期、预测患者预后等方面无明显参考价值。     

卫生事业管理专业课程体系改革需求的调查研究

【】 本文对三所院校的研究生进行问卷调查,采用SPSS21.0对相关资料进行分析,研究目的：了解当前卫生事业管理专业的生源状况以及培养目标、培养能力与研究课程体系改革的需求,为卫生事业管理专业课程体系改革提供依据。     

蛋白聚糖-Aggrecan G1区诱导小鼠脊柱炎和骶髂关节炎模型的建立

目的 建立强直性脊柱炎BALB/c小鼠实验动物模型,探讨人Aggrecan G₁区纯化蛋白在脊柱炎和骶髂关节炎发病中的作用。方法 人Aggrecan G₁纯化蛋白和弗氏佐剂免疫BALB/c小鼠,诱导产生脊柱炎和骶髂关节炎,建立强直性脊柱炎实验动物模型。采用Micro-CT对小鼠骨骼进行3D重建和组织病理学方法鉴定脊柱炎小鼠的发病程度和病理学特征。结果 用人Aggrecan G₁区纯化蛋白和弗氏完全佐剂免疫后,实验小鼠脊柱炎和骶髂关节炎的发生率分别为46%和9%。组织病理学显示,椎间盘间隙变窄,局部大量软骨细胞聚集,骨赘形成。micro-CT 3D重建显示,椎间盘间隙变窄,骶髂关节面骨侵蚀。结论 成功建立和鉴定了人Aggrecan G₁区纯化蛋白诱导的小鼠脊柱炎实验动物模型,为深入研究强直性脊柱炎的发病机制奠定实验基础。     

Oncol2012: 乳腺癌临床病理分型与个体化治疗

目的 探讨乳腺癌临床病理分型在浸润性乳腺癌个体化治疗中的价值。方法 对2010年1月至12月北京大学第一医院乳腺疾病中心收治的浸润性乳腺癌病人进行回顾性分析。依据2011年St.Gallen乳腺癌分型标准,复检其雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER-2)及Ki-67表达水平,将乳腺癌分为Luminal A、Luminal B、HER-2阳性和三阴型四个亚型,并分析各亚型与TNM分期、病理组织分级的关系。结果 共213例浸润性乳腺癌病人入组,其中Luminal A型53例(24.9％),Luminal B型112例(52.6％),HER-2阳性型22例(10.3％),三阴型26例(12.2％)。Luminal A型病人中病理组织学分级I级39例,占同型病人73.6% (39/53),III级病人0例;Luminal B型病人中I级24例,占同型病人21.4%（24/112）,III级25例,占同型病人22.3%（25/112）;三阴型病人中I级2例,占同型病人7.7%（2/26）,III级17例,占同型病人65.4%（17/26）;HER-2阳性型病人I级仅1例,占同型病人4.5%（1/22）,III级11例,占同型病人50.0%（11/22）。各亚型间病理组织分级存在差异（P﹤0.001）。分析各亚型TNM分期发现,Luminal A型病人I期比例最高,占同型病人54.7%（29/53）。HER-2阳性型III期病例比例最高,占同型病例27.3%（6/22）。不同亚型TNM分期分布具有差异性（P﹤0.001）。结论 不同亚型乳腺癌其病理组织分级及TNM分期具有差异性, 在TNM分期及病理组织分级基础上联合临床病理分型分析是个体化治疗的重要内容。     

宁波地区幽门螺杆菌耐药谱分析及敏感抗生素的筛选

正幽门螺杆菌(helicobacter pylori,HP)是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃癌及胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的主要致病因素,而且与多种心血管疾病、缺铁性贫血、原发性血小板减少性紫癜等疾病有关。HP胃炎京都共识提出除非有抗衡因素(如伴存疾病的限制、社区高再感染率、医疗资源优先度安排等),否则所有HP感染者都应该接受根除治疗[1]。我国成年人HP感染率达到40~60%。本研究在胃镜     

单纯后路360度椎管减压并重建治疗伴神经缺损的胸腰段脊柱旋转不稳爆裂骨折

Summary of Background Data Various treatment of neurologically involved unstable thoracolumbar burst fractures have been described, including anterior, posterior and combined anteroposterior surgery. Among these, the combination of anterior and posterior instrumentation provides the most stable reconstruction. However, the use of both approaches on a trauma patient may increase the morbidity. Methods　From March 2005 to January 2007, 6 patients (5 males, 1 females) with thoracolumbar burst fracture in our institution underwent a single stage posterior approach for spinal canal decompression in combination with circumferential reconstruction. The operation technique includes resection of the posterior elements, partial resection of the injured vertebra and disc, reconstruction of the anterior column with Titanium mesh cage, posterior instrumentation with pedicle screws, and posterior spinal fusion. Preoperative and postoperative X-ray films were reviewed and changes of Cobb angle of thoracolumbar spine were documented. Intraoperative, postoperative and general complications were registered. Results　The involved levels were L2 in 1 patient, L1 in 4 patients and T12 in 1 patient. According to the Frankel grading system, 1 patient had complete, 5 patients had incomplete neurologic deficits. The mean follow-up was 21.7±9.1 months (range, 14 to 48 months). The mean operation time was 248 minutes (range, 208-316 minutes), the average volume of intraoperative blood loss was 2453 ml (range, 1800-3480 ml), the average vertebral body height loss at the injured level was 56% (range, 48–70%), and the average Cobb angle in sagittal plane was improved from 39.8° before surgery (range, 34~46°) to 4.8° (range, -2 ~12°) immediately after surgery. Postoperatively, there was an epidural hematoma in one patient. Bony union after stabilization was obtained in all patients, without loosening or breakage of screws. Loss of correction (5°) was seen in 1 patient at the 6th month owing to the subsidence of the Titanium mesh cages into the vertebra. All patients with incomplete neurologic deficits improved at least 1 Frankel grade. Conclusion Single stage posterior vertebra resection in combination with circumferential reconstruction is a new option to manage severe thoracolumbar burst fracture.     

体质辨识在慢性阻塞性肺疾病稳定期合并抑郁症中的应用

正慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)所造成的患者心理精神疾病越来越受到关注~([1])。研究~([2-3])显示,COPD患者中抑郁焦虑的患病率高达50%,是普通人群患病率的3~5倍以上,对COPD合并抑郁患者的诊疗显得尤为重要。近年来,以王琦教授为代表的学者在前人的基础上提出中医体质学说~([4]),该学说以中医理论为指导,研究人类各种体质类型的生理病理特点,并以此分析疾病     

导尿诱发心脑血管严重不良事件5例报道并文献复习

目的 探讨导尿所诱发的迷走反射等心脑血管严重不良事件的原因和防治。方法 回顾5例尿潴留或经尿道操作后患者,导尿诱发心脑血管严重不良事件的临床诊治经过,结合文献分析病例特点和诊疗过程。结果 本组5例患者均为男性,分别于留置导尿过程中或之后即刻出现意识障碍、生命体征不稳定甚至猝死,3例考虑与迷走反射有关,其中2例抢救无效死亡;其余2例经积极抢救后治愈,无后遗症。 结论 导尿诱发的迷走反射等心脑血管不良反应较少见,严重时可威胁患者生命,应引起足够的重视及警惕,对于已发生的迷走反射,应及时终止经尿道操作的再刺激,警惕不良反应二次发作的可能。     

以心跳骤停为首发症状的蛛网膜下腔出血共同特征研究

<正>心跳骤停（cardiac arrest,CA）和蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）均是急诊科常见的急危重症,CA可见于多种疾病的各个阶段,复苏成功率不高,甚至造成CA的病因不甚明确。SAH典型表现为剧烈头痛、呕吐、脑膜刺激征,诊断并不困难。而以CA为首发症状的SAH,由于心肺复苏无法常规进行头颅CT检查,给诊断增加了困难。本文通过对16例以CA为首发症状的SAH患者进行回顾性研究,来提高SAH-CA的快速病因诊断,避免漏诊误诊。