用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应(PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)的磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,缩写为tim)基因进行特异性扩增,结果扩增出1条683bp的DNA片段.此方法的特异性可高达100%,而其它DNA样本,如日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、旋毛虫(Trichinella spiralis)和阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis),以及人体血细胞等均未出现扩增反应.本法的敏感性也很高,可检测到0.4pg贾第虫包囊的DNA.13株来自不同地理位置和/或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生1条长为683bp的目的片段.上述结果表明本实验建立的检测贾第虫的PCR方法有效.     

用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应 (PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫 (Giardialamblia)的磷酸丙糖异构酶 (triosephosphateisomerase ,缩写为tim)基因进行特异性扩增 ,结果扩增出 1条 6 83bp的DNA片段。此方法的特异性可高达10 0 % ,而其它DNA样本 ,如日本血吸虫 (Schistosomajaponicum)、刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)、微小隐孢子虫 (Cryptosporidiumparvum)、溶组织内阿米巴 (Entamoebahistolytica)、旋毛虫 (Trichinellaspiralis)和阴道毛滴虫 (Trichomonasvaginalis) ,以及人体血细胞等均未出现扩增反应。本法的敏感性也很高 ,可检测到0 4pg贾第虫包囊的DNA。 13株来自不同地理位置和 或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生 1条长为 6 83bp的目的片段。上述结果表明本实验建立的检测贾第虫的PCR方法有效     

实验感染C57 BL/6N小鼠粪内蓝氏贾第鞭毛虫tim基因检测

建立蓝氏贾第鞭毛虫感染动物模型 ,用PCR技术对感染动物粪内该虫tim基因进行检测 ,探讨蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法。用人源蓝氏贾第鞭毛虫河北株 (CD)和江苏株 (XZ)的包囊分别接种两组C5 7BL 6N小鼠 ,于接种后第 6天、1 0天和 1 4天收集粪便标本 ,采用酚 氯仿法提取总DNA。将提取液分别按 1 0 0 、 1 0 - 1 、 1 0 - 2 和 1 0 - 3稀释并纯化。根据该虫磷酸丙糖异构酶 (Triosephosphateisomerase,tim)基因合成 1对特异性引物 ,采用PCR技术分别扩增各个稀释度的样本。结果贾第虫阳性样本均被扩增出相应基因的 1条 683bp长的片段 ,纯化后的各个稀释度样本的PCR检测阳性率随稀释倍数的增加而增高。本研究结果为贾第虫感染基因检测方法的进一步研究提供了实验资料。     

蓝氏贾第鞭毛虫基因分型—磷酸丙糖异构酶(tim)基因序列分析

蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）细胞内的磷酸丙糖异构酶（ｔｉｍ）基因编码磷酸丙糖异构酶。对扩增后的ｔｉｍ基因做序列分析，可对来源于不同地理位置和／或不同宿主的贾第虫株进行基因分型，并以此确定它们之间的遗传学关系。为了确定中国虫株的基因型，我们对分离自北京（Ｃ１），四川（Ｃ２）和福建（Ｃ３）３株人源贾第虫ｔｉｍ基因序列进行了分析。结果表明，Ｃ１和Ｃ２具有相同的遗传学特性，可划归为目前公认的分型系统中的第３型（ＧＳ）。Ｃ３含有两种不同的遗传学类型，即第１型（ＷＢ）和第３型（ＧＳ），表明Ｃ３可能为两种不同遗传学类型的混合株。本研究结果进一步表明，用ｔｉｍ基因扩增和序列分析方法，可探寻世界范围内贾第虫株之间的遗传学关系。     

蓝氏贾第鞭毛虫基因分型—磷酸丙糖异构酶（tim）基因序列 …

蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）细胞内的磷酸丙糖异构酶（ｔｉｍ）基因编码磷酸丙糖异构酶。对扩增后的ｔｉｍ基因做序列分析，可对来源于不同地理位置和／或不同宿主的贾第虫株进行基因分型，并以此确定它们之间的遗传学关系。为了确定中国虫株的基因型，我们对分离自北京（Ｃ１），四川（Ｃ２）和福建（Ｃ３）３株人源贾第虫ｔｉｍ基因序列进行了分析。结果表明，Ｃ１和Ｃ２具有相同的遗传学特性，可划归为目前公认的分型系统中的第     

实时荧光PCR检测蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫方法的建立

目的建立贾第鞭毛虫和隐孢子虫的基因检测方法。方法根据GenBank中贾第鞭毛虫和隐孢子虫相对保守序列,设计引物及其相应的Taqman探针。通过对引物和探针浓度、Taq酶以及反应条件等优化筛选后,建立检测贾第鞭毛虫和隐孢子虫的荧光PCR方法。结果贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测结果为阳性,对其它DNA样本如日本血吸虫、刚地弓形虫、溶组织内阿米巴、旋毛虫和阴道毛滴虫的检测均为阴性。本法的敏感性高,可检测到10～102copies/μl的DNA浓度。结论建立的基因检测方法,对贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测具有高度的特异性和敏感性,可用于饮用水和临床样本等的快速检测。     

国内蓝氏贾第鞭毛虫研究

蓝氏贾第虫鞭毛虫(GiardialambliaStile,1915,亦称G.intestinalis或G.duodenalis,简称贾第虫)是一种机会性致病肠道原虫,一种全球性的引起人和动物腹泻的常见病原体。以往国内对本虫的危害性及其在生物进化上的地位缺乏足够的重视,实验研究起步较晚,在七十年代以前几处于?..     

通过基因扩增产物的限制性内切酶分析划分肠道蓝氏贾？…

人们已经使用聚合酶链反应来扩增编码不同的变异性表面蛋白的基因片断。９个瑞士蓝氏贾第虫无菌虫株被用于基因分析。根据产量、大小和限制性片断长度的多态性分析鉴定３个基因型。其中有５个蓝氏贾第虫株（０１，Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３－１Ａ１和Ｃ１）被分类属于基因组Ⅰ。一个从人类获得的虫株（Ｈ２－１７Ａ）被分类属于基因组Ⅱ，它产生了一个特殊的ＶＳＰ１２６７的ＰＣＲ产物。这个虫株也产生了１．８ｋｇ ｔｓｐ１１和０．５２ｋ     

蓝氏贾第鞭毛虫病治疗的研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫病呈全球性分布,在发达国家和发展中国家均有感染,威胁着人类的健康和生命。目前治疗蓝氏贾第鞭毛虫病的药物主要是硝基咪唑类,如甲硝唑,随着长时间的临床应用,耐药虫株不断出现,但是新药的研究周期很长。近年来,如何更好地开发现有药物的新药理作用和研发新药,成为研究蓝氏贾第鞭毛虫病治疗的热点之一。本文就这些药物及其新近研究进展作一综述。     

人源性蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因的克隆及序列分析

目的克隆蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法根据蓝氏贾第鞭毛虫Elp3已知基因序列的特点设计引物,利用PCR技术扩增获得Elp3的核苷酸序列,连接到pET28a载体并测定序列。应用生物信息学方法分析Elp3基因的序列同源性与结构特征。结果扩增片段长度为1767bp,测序结果与蓝氏贾第鞭毛虫WB株（GL50830）同源性100%。可构建生物进化树,进行同源结构建模发现,71-362aa具有一个保守的S-腺甙基蛋氨酸区域,458-584aa具有组蛋白乙酰基转移酶区域。结论成功克隆了蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,生物信息学分析发现,其在进化上与其它物种不属同一起源,具有SAM和HAT的结构和功能,这些发现为进一步研究其生物学功能提供了依据和线索。     

蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定

丙酮酸磷酸双激酶（Pyruvatephos phate dikinase,PPDK）可能是蓝氏贾第鞭毛虫能量代谢中具有催化作用的关键酶桩一。为了进一步探讨该酶在贾第虫能量代谢中的作用,本文采用RNA draw软件分析贾第虫编码PPDK的基因序列并设计特异性反义锤头状核酶（Hammerheade ribozyme）,克隆该核酶序列并与犬贾第虫病毒（GCV）连接,构建了载有特异性锤头状核酶的贾第虫病毒重组载体pGCV634/H5/2174。该载体经线性化处理后进行体外转录,转录产物以电击方式转染对数生长期的贾第虫滋养体。提取转染后24h虫体总RNA,并以其为模板进行RT-PCR验证转染效果和对靶mRNA的切割效果。结果初步证实了该载体对虫体细胞内编码PPDK的mRNA具有切割作用。     

蓝氏贾第鞭毛虫中国株组蛋白H2A基因的克隆与重组表达

目的获取蓝氏贾第鞭毛虫中国株GlH2A基因及重组蛋白。方法 PCR扩增获取GlH2A基因,连接至pMD-19T并进行测序分析。连接至pET28a构建表达载体,并转化宿主菌E.coli BL21（DE3）,然后进行异丙基硫代半乳糖苷酶（IPTG）诱导表达。表达产物进行亲和层析纯化,再用Western blotting进行免疫学鉴定。结果序列测定获得蓝氏贾第鞭毛虫中国株GlH2A基因的编码序列,与美国WB株H2A（GL50803_14256,Accession：NW_001844132）序列完全一致。该基因编码124个氨基酸,预测分子量13900Mr,保留了与核小体形成相关的重要氨基酸位点,在大肠埃希菌中获得表达,纯化后纯度达90%以上。Western blotting检测表明重组蛋白能够被抗His6标签抗体识别。结论克隆得到GlH2A基因编码序列;得到了重组GlH2A蛋白,并进行了纯化,为进一步研究组蛋白及其修饰酶在基因转录调控中的作用奠定了基础。     

人源蓝氏贾第虫病毒GLV1518-2322基因的表达及表达产物抗血清的制备

根据中国人源蓝氏贾第虫病毒 (GLV)全基因组测序结果 ,将其全基因组cDNA上编码贾第虫病毒部分衣壳蛋白的GLV1 5 1 8 2 3 2 2基因克隆到原核表达载体pET 2 8c ( +)上 ,构建了原核表达重组质粒pET 2 8c( +) GLV1 5 1 8 2 3 2 2。SDS PAGE分析表明 ,经IPTG诱导 ,3 2kDa蛋白基因在大肠杆菌BL2 1 (DE3 )pLysS中得到高效表达。以纯化的表达产物为抗原 ,免疫BalB c小鼠 ,同时用病毒粒子免疫BalB c小鼠 ,制备了中国人源蓝氏贾第虫病毒GLV1 5 1 8 2 3 2 2蛋白特异性抗血清 ,ELISA方法测得的纯化蛋白最适抗原包被浓度为1 40 0和病毒粒子抗血清最佳工作浓度为 1 2 0 0。     

用PCR检测难分类急性白血病基因重排

用ＰＣＲ检测难分类急性白血病基因重排王鲁群张明珙①宋素芹①马晓星迟翠芳（济南军区总医院，济南２５００３１）采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２例形态学和免疫学均难以分类急性白血病（ＵＡＬ）免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排，旨...     

用PCR扩增的人抗体重链Fd基因构建抗体重链基因库

用ＰＣＲ扩增的人抗体重链Ｆｄ基因构建抗体重链基因库万泽生，姜绍谆，马文煜（第四军医大学微生物学教研室，酉安７１００３２）王海涛（军事医学科学院微生物流行病研究所，北京１０００７１）我们以往报道了以人外周血Ｂ淋巴细胞的ＣＤＮＡ为模板，扩增出抗体重链可变...     

荧光定量PCR检测吉林地区NGU病原体基因

目的 用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR）技术准确定量检测非淋菌性尿道炎(NGU)中解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)基因，进一步了解UU、CT感染情况，为临床治疗提供依据。方法 采用FQ—PCR技术检测标本2553份，其中UUl072份、CT1481份。结果 UU阳性率为39．4％(42／1072)，其中，男性阳性率为11．1％(40/360)，女性阳性率为53．7％(382/712)。CT阳性率为10．1％(149／1481)，其个，男性阳性率为10．6％(34／322)，女性阳性率为9．9％(115／1159)。UU感染率在男女性别之间有高度显著性差别(P＜0．01)，CT感染率在性别之间无显著性差别(P＜0．05)。在男性中UU与CT感染率之间无显著性差异(P＞0．05)。在女性CT与UU感染率之间有高度显著性羞异(P＜0．01)。结论 FQ-PCR技术检测UU、CT基因具有简便、快捷、特异性高、定量准确等特点，其结果对诊断、治疗有一定指导意义。     

用非同位素PCR—SSCP方法检测石蜡包埋乳腺癌P53基因点突变

应用－非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测常规石蜡包埋乳腺癌组织中Ｐ５３基因点突变，结果显示６０例乳腺癌中，１４例有异常电泳带，表明这些病例相应ＤＮＡ片段中发生了点突变，其中４例位于第５－６外显子，３例位于第７外显子，７例位于第８外显子，免疫组化法检测突变型Ｐ５３蛋白的表达，１３例为阳性，其中１１例ＳＳＣＰ检测到异常电泳带，另２例突变可能发生在所检测的基因片段以外，而５例ＳＳＣＰ分析发现基因突变者，免