参莲提取物通过调控Nrf2/Keap1信号通路减轻TNF-α诱导的ECV304损伤

探讨参莲提取物对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的血管内皮细胞(ECV304)损伤的干预作用及可能的作用机制。以TNF-α诱导ECV304细胞损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存活力;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;生化法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;通过Western blot法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)、半胱天冬酶3(caspase-3)、半胱天冬酶9(caspase-9)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。结果显示,与对照组相比,50μg·L~(-1)的TNF-α能够导致ECV304细胞活力显著下降(P0.01),引起ECV304细胞ROS产生增加,SOD活性降低,MDA、NO、ET-1、IL-1β含量显著增加(P0.01),Keap1、caspase-9、Bax蛋白表达显著上调,NQO1、Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.05);与模型组比较,参莲提取物可以提高ECV304细胞存活率,抑制细胞ROS产生,提高SOD活性,降低MDA、NO、ET-1、IL-1β含量(P0.01或P0.05),下调Keap1、caspase-3、caspase-9、Bax蛋白表达水平,提高Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2蛋白表达(P0.01或P0.05)。提示参莲提取物可能通过调控Nrf2/Keap1信号通路降低TNF-α诱导的ECV304细胞氧化应激损伤,减少炎症反应和细胞凋亡。     

雷公藤红素通过活性氧诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的研究

目的研究雷公藤红素通过细胞内活性氧(Reactive oxidative species,ROS)诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用机制。方法通过MTT比色法检测雷公藤红素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用;通过Hoechst 33258染色荧光显微镜观察SKOV3细胞凋亡的形态学变化;通过流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡及ROS水平;Western blot法检测凋亡相关蛋白bcl-2、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白的表达。结果雷公藤红素对卵巢癌SKOV3细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈时间/剂量依赖关系(P0.05);雷公藤红素可显著增加细胞内ROS水平,诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡,并上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白的表达,下调抗凋亡蛋白bcl-2的表达(P0.05)。结论雷公藤红素可通过提高细胞内ROS水平,诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡,为卵巢癌治疗及预后方面的研究提供了新思路。     

糖络宁含药血清对高糖环境下RSC96细胞Keap1/Nrf2/Bcl-2途径的作用机制研究

目的针对糖尿病周围神经病变氧化应激的核心发病机制,以Keap1/Nrf2/Bcl-2途径为切入点,观察糖络宁对高糖环境下雪旺细胞的氧化应激和细胞凋亡的影响,探讨糖络宁防治DPN的可能作用机制。方法采用150 mmol/L葡萄糖培养雪旺细胞,随机分为空白对照组(Control)、高糖组(High Glucose)、α-硫辛酸含药血清组(ALA)、糖络宁含药血清组(TLN)。干预36 h后,应用流式细胞仪检测高糖环境下雪旺细胞超氧自由基和细胞凋亡,应用JC-1探针观察高糖环境下雪旺细胞线粒体膜电势(MMP),应用高内涵分析(HCA)法和Western Blot分析高糖环境下雪旺细胞Keap1/Nrf2通路中Keap1、Nrf2、HO-1和γGCS蛋白表达的变化及细胞凋亡调节蛋白Bcl-2、Bax、Cyto C和Caspase-3的蛋白表达的变化。结果高糖干预36 h后,与空白对照组比较,高糖组细胞凋亡、ROS含量增加,MMP降低(P<0.01);与高糖组比较,糖络宁组能够降低细胞凋亡和ROS含量,增加MMP(P<0.05或P<0.01)。HCA和Western Blot分析结果显示,与空白对照组比较,高糖组Keap1、Nrf2、HO-1和γGCS增加(P<0.01或P<0.05);与高糖组比较,糖络宁组能进一步增加Keap1、Nrf2、HO-1和γGCS蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。与空白组比较,高糖组Bcl-2、Bax、Cyto C和Caspase-3蛋白表达增加(P<0.01或P<0.05);与高糖组比较,糖络宁组能够增加Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Cyto C和Caspase-3蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。结论糖络宁能够抑制高糖环境下雪旺细胞的氧化应激和细胞凋亡,与上调Keap1/Nrf2通路的蛋白表达对抗氧化应激,调控Bcl-2相关细胞凋亡通路的蛋白表达从而抑制细胞凋亡有关。     

姜黄素对Nrf2基因干扰下PC12细胞抗Aβ氧化损伤的影响北大核心CSCD

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)通路在姜黄素对阿尔茨海默病模型细胞氧化损伤保护中的作用。方法将Nrf2小干扰RNA(siRNA)转染入PC12细胞,并Aβ;处理干预,分为5组:正常对照组、模型组、模型+姜黄素组、siNrf2模型组和siNrf2模型+姜黄素组。透射电镜观察各组细胞线粒体形态结构,采用细胞增殖毒性检测法(CCK-8)检测细胞存活率,利用细胞凋亡试剂盒和活性氧试剂盒流式测定细胞凋亡率和活性氧(ROS)水平,Western Blot法检测细胞中Nrf2、血红素氧合酶1(HO1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)表达。结果透射电镜下正常对照组细胞线粒体丰富,结构完整,线粒体嵴排列整齐,双层膜完整。与正常对照组比较,模型组和siNrf2模型组线粒体肿胀和空泡化明显,线粒体结构破坏,变形、消失。模型+姜黄素组和siNrf2模型+姜黄素组两组细胞较模型组两组细胞的线粒体稍丰富,部分线粒体空泡化,结构较完整。与正常对照组比较,模型组和siNrf2模型组细胞存活率降低,细胞凋亡率和ROS水平升高(P<0.05),模型组和siNrf2模型组Nrf2和HO1表达均降低(P<0.01);与模型组比较,模型+姜黄素组和siNrf2模型+姜黄素组细胞存活率升高(P<0.05)以及细胞凋亡率和ROS水平降低(P<0.05),模型+姜黄素组Nrf2表达升高(P<0.01),模型+姜黄素组和siNrf2模型+姜黄素组HO1和NQO1表达升高(P<0.05);与siNrf2模型组比较,siNrf2模型+姜黄素组细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率和ROS水平均降低(P<0.05),siNrf2模型+姜黄素组Nrf2、HO1和NQO1表达升高(P<0.05)。结论 Nrf2基因干扰后的细胞对Aβ;氧化损伤的抗氧化能力显著降低,进一步加速细胞凋亡和坏死。姜黄素可能通过增加Nrf2表达,上调抗氧化蛋白HO1和NQO1的表达,维持细胞线粒体结构完整性,加强细胞线粒体抗氧化能力,从而抑制Aβ;对细胞的损伤。     

栝楼桂枝颗粒激活Nrf2信号通路减轻脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激损伤作用

目的:探讨栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激的保护作用及分子机制。方法:建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,栝楼桂枝颗粒灌胃给药后,核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测大鼠脑梗死面积,化学荧光法测定脑组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,水溶性四唑蓝法(WST)测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,紫外法测定过氧化氢酶(catalase,CAT)和比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR法(Realtime PCR)分别检测脑组织中核转录因子-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2),细胞质中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1),醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]及Kelch样ECH联合蛋白1(Kelch-like ECHassociated protein1,Keap1)的蛋白表达和mRNA相对含量。结果:栝楼桂枝颗粒能够明显减小大鼠脑梗死面积,减少ROS和MDA的产生(P0.01),增加SOD,CAT和GSH-Px活力(P0.01)。此外,栝楼桂枝颗粒能够上调脑组织中Nrf2,HO-1,NQO1及Keap1的表达。结论:栝楼桂枝颗粒可能通过上调Nrf2信号通路,从而抑制脑缺血再灌注损伤引起的氧化应激反应。     

淫羊藿素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制及促凋亡作用

基于PI3K/Akt信号通路,观察人卵巢癌SKOV3细胞在不同浓度淫羊藿素(icaritin)干预下的增殖与凋亡变化过程,探讨可能存在的分子机制。研究对象为人卵巢癌细胞SKOV3,设置空白对照组和淫羊藿素不同浓度组(5,10,20μmol·L^-1),药物干预48 h,采用cell counting kit-8(CCK-8)法检测淫羊藿素对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制效果;通过EdU试验检测SKOV3细胞增殖能力;采用Hoechst 33342荧光染色法观察各组SKOV3细胞凋亡形态变化,通过流式细胞术检测各组细胞周期分布状况和细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR)法检测各组细胞中PTEN,PI3K,Akt基因的表达情况;Western blot法检测PTEN,PI3K,Akt,p-Akt蛋白的表达情况。结果显示,与空白对照组比较,各浓度淫羊藿素组SKOV3细胞增殖抑制率升高(P<0.05),Edu阳性细胞率均降低(P<0.05),SKOV3细胞均呈现凋亡形态学改变,SKOV3细胞凋亡率均显著上升(P<0.05),SKOV3细胞G0/G1期细胞比例均降低(P<0.05),S期细胞比例均升高(P<0.05),SKOV3细胞中PTEN的基因和蛋白表达升高,PI3K和Akt的基因表达下降,PI3K和p-Akt的蛋白表达下降(P<0.05)。结果表明,淫羊藿素可能通过调控PI3K/Akt信号通路,抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、诱导细胞发生凋亡并影响细胞周期分布。     

莪术醇诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡及对PI3K/Akt信号通路相关蛋白的影响

目的观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡作用及对PI3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt信号通路相关蛋白的影响。方法采用MTT法检测不同浓度莪术醇以及临床常用抗肿瘤药物顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率及对细胞周期的影响;Western blotting法检测莪术醇、顺铂及其两者联合诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡过程中PI3K/Akt信号通路蛋白(PI3K、p-PI3K、Akt、pAkt)的表达。结果莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞具有生殖抑制作用,其生殖抑制作用呈剂量-时间正效应关系;莪术醇可以促进人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡,细胞凋亡率随着莪术醇浓度增大而增强;不同质量浓度莪术醇处理SKOV3细胞48 h后,细胞周期分布发生明显改变,药物的作用将肿瘤细胞的生长阻止在G0/G1和S期;莪术醇、顺铂及其两者联合在诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡时,下调了PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平,且莪术醇和顺铂联合应用时具有协同效应,联合组p-PI3K、p-Akt蛋白表达下调最为明显。结论莪术醇可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活来阻滞人卵巢癌SKOV3细胞周期,诱导细胞凋亡,进而阻止肿瘤细胞的生长或诱导其分化。     

哈巴苷对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞毒性的保护作用

目的探讨哈巴苷对β淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞毒性的影响。方法 PC12细胞以哈巴苷(20、40、80μmol/L)预孵育3 h后以Aβ25-35(30μmol/L)损伤24 h;MTT法检测细胞增殖;检测细胞上清液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;检测活性氧(ROS)的生成;Western blotting法检测Akt、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,Aβ25-35使PC12细胞的存活率显著降低(P0.01),细胞上清液中MDA水平显著升高(P0.01)、GSH和SOD水平显著降低(P0.01),细胞内ROS水平显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著增加(P0.01),细胞内p-Akt、Bcl-2蛋白表达下调(P0.01),Bax蛋白表达显著上调(P0.01);哈巴苷预孵育PC12细胞3 h,使细胞上清液中的MDA水平降低,GSH和SOD水平显著升高(P0.05、0.01);明显剂量依赖性抑制细胞凋亡;上调p-Akt和Bcl-2蛋白表达(P0.05、0.01),并下调Bax蛋白表达(P0.05、0.01)。结论哈巴苷改善Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性,可能通过激活PI3K/Akt信号通路和上调细胞内SOD水平发挥作用。     

地黄益智方对APP/PS1双转基因小鼠海马神经元凋亡和Nrf2通路蛋白的影响

目的观察地黄益智方对APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡及Nrf2/ARE通路蛋白表达的影响。方法以APP/PS1双转基因小鼠为阿尔茨海默病模型动物,给予盐酸多奈哌齐（西药组）和地黄益智方干预12周,TUNEL染色检测细胞凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性,ELISA检测血清核因子E₂相关因子2（Nrf2）,血红素加氧酶1（HO-1）和醌氧化还原酶1（NQO1）。结果 TUNEL染色发现模型组细胞核皱缩,神经元凋亡多于正常组（P<0.001）;西药组及地黄益智方各剂量组凋亡神经元均少于模型组（P<0.01）。模型组Caspase-3活性高于正常组（P<0.001）,西药组及地黄益智方各剂量组Caspase-3活性较模型组降低（P<0.05）。模型组Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达均低于正常组,西药组及地黄益智方各剂量组Nrf2、HO-1和NQO1水平升高（P<0.05）。结论地黄益智方可以抑制APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠海马神经元凋亡,其机制可能与调控Nrf2/ARE信号通路,上调HO-1和NQO1,抑制Caspa...     

基于Keap1/Nrf2通路介导的自噬探讨紫草素对膀胱上皮癌BUC细胞化疗敏感性的影响

目的基于Kelch样ECH相关蛋白1/核因子E2相关因子2(Kelch-likeECH-associated protein-1/nuclearfactor E2-related factor 2,Keap1/Nrf2)通路介导的自噬探讨紫草素对膀胱上皮癌BUC细胞化疗敏感性的影响。方法体外培养人BUC细胞BIU-87,CCK-8法检测不同质量浓度(10、20、40、80、160μg/mL)顺铂和不同浓度(2、4、8、16、32μmol/L)紫草素+顺铂(40μg/mL)对BIU-87细胞增殖的影响。细胞转染实验,设置对照组、顺铂组(40μg/mL)、紫草素组(40μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素)和NC组(转染negative control-Nrf2+40μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素)和Nrf2组(转染hsa-Nrf2mimic+40μg/mL顺铂+8μmol/L紫草素),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测转染后BIU-87细胞中Nrf2 mRNA表达情况;CCK-8法检测各组BIU-87细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组BIU-87细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测BIU-87细胞中Keap1、Nrf2、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)?、LC3II蛋白表达情况。结果与对照组相比,10、20、40、80、160μg/mL顺铂可显著抑制BIU-87细胞增殖(P0.05);2、4、8、16、32μmol/L紫草素联合顺铂可显著抑制BIU-87细胞增殖(P0.05)。细胞转染实验中,与对照组相比,顺铂组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Nrf2和LC3II蛋白表达水平显著升高,细胞中Keap1、LC3?蛋白表达水平显著降低(P0.05);与顺铂组相比,紫草素组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Keap1和LC3?蛋白表达水平显著升高,Nrf2和LC3II蛋白表达水平显著降低(P0.05);紫草素组、NC组以上指标差异不具有统计学意义(P0.05);与NC组相比,Nrf2组BIU-87细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Keap1、LC3?蛋白表达水平显著降低,Nrf2蛋白和mR NA及LC3II蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论紫草素可能通过抑制Keap1/Nrf2通路介导的自噬反应,增强BUC细胞BIU-87对顺铂的敏感性。     

小柴胡颗粒激活Nrf2通路抗TAA致大鼠急性肝损伤的机制探讨

目的:观察小柴胡颗粒对硫代乙酰胺(TAA)致大鼠急性肝损伤(ALI)的治疗作用,探讨核转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)抗氧化损伤通路在其中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组,模型组,小柴胡颗粒低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg-1),大鼠给予250 mg·kg-1TAA腹腔注射2 d制备肝损伤模型,从第3天各组分别给予等量双蒸水和不同剂量小柴胡颗粒,灌胃2周。末次给药后24 h取材,肝组织行苏木素-伊红(HE)染色;比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2通路相关mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2通路相关蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组ALT,AST,MDA水平显著增高,T-SOD活性明显降低(P 0. 05,P 0. 01),病理学呈现大片炎性浸润表现,肝脏组织Nrf2,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),醌氧化还原酶1(NQO1),血红素加氧酶-1(HO-1),谷氨酸半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC),谷氨酸半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM) mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,小柴胡颗粒各剂量组ALT,AST,MDA水平均明显降低,T-SOD活性明显升高(P 0. 05,P 0. 01),病理结果示大鼠肝脏病变范围与严重程度均有不同程度改善,肝脏组织Nrf2,Keap1,NQO1,HO-1,GCLC,GCLM的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:小柴胡颗粒可能通过上调Nrf2信号通路上下游分子的表达,对TAA致急性肝损伤大鼠起到治疗作用。     

蝎毒多肽对卵巢癌抑制作用机制研究

目的研究蝎毒多肽抑制卵巢癌裸鼠肿瘤生长的作用机制,为恶性肿瘤临床治疗提供理论依据。方法制备人SKOV3裸鼠异种移植瘤模型,蝎毒多肽高、低剂量(20、10 mg/kg)ig给药2周,绘制肿瘤体积增长曲线,并计算抑瘤率;HE染色法观察各组肿瘤组织病理变化;免疫组化法检测肿瘤组织中PTEN、PI3K、p-Akt的表达水平;ELISA法检测各组裸鼠血清中PTEN、PI3K、p-Akt水平。结果蝎毒多肽高、低剂量组的抑瘤率分别为50.8%和31.5%。与对照组相比,蝎毒多肽高、低剂量组裸鼠肿瘤组织中PI3K和p-Akt的表达明显下调(P0.05、0.01),PTEN的表达明显上调(P0.05、0.01);血清中各因子的变化与免疫组化结果一致。结论蝎毒多肽可抑制卵巢癌肿瘤的生长,其机制可能与抑制肿瘤微环境中PI3K、p-Akt的表达,上调PTEN的表达有关。     

苓桂术甘汤与茵陈蒿汤合方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠Nrf2/ARE信号通路的影响

目的:从氧化应激的角度,观察苓桂术甘汤与茵陈蒿汤合方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠的干预效应,并通过Nrf2/ARE信号通路探讨合方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠的作用机制。方法:将SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,合方组(6.93 g·kg~(-1)),苓桂术甘汤组(3.465 g·kg~(-1)),茵陈蒿汤组(3.465 g·kg~(-1)),莱菔硫烷组(0.5 mg·kg~(-1)),采用高脂饲料法建立NASH模型;高脂饲料饲养8周并同时给药,取材检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)以及血脂总胆固醇(total cholesterol,TC),甘油三酯(triglyceride,TG),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein,HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein,LDL-C)水平,取部分肝组织进行苏木素-伊红(HE)染色,蛋白质免疫印迹(Western blot)与逆转录PCR(RT-PCR)法测定肝脏细胞质接头蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1),核因子E2-关联因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2),醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase-1,NQO1),血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白与mRNA表达水平。结果:给药后,与正常组比较,模型组大鼠血脂TC,TG,HDL-C,LDL-C及血清ALT,AST水平升高,肝脏脂肪变明显,肝脏Keap1表达量降低,Nrf2,NQO1,HO-1蛋白与mRNA表达量升高(P0.05);与模型组比较,各给药组血脂TC,TG,HDL-C,LDL-C及血清ALT,AST水平有不同程度降低,肝脏病理学也有不同程度改善,除茵陈蒿汤组变化不明显外,各给药组大鼠肝脏Nrf2,NQO1,HO-1蛋白与mRNA表达量均有不同程度升高(P0.05,P0.01);但对于Keap1的表达无明显作用。结论:苓桂术甘汤以及合方可能通过激活Nrf2/ARE信号通路,从而达到改善氧化应激,防治非酒精性脂肪性肝炎的目的。     

天麻粉预防痴呆小鼠模型发病及其对抗氧化作用的影响

目的:研究长期灌胃天麻粉是否可以改善APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力以及延缓AD进程,这些作用是否与调控Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)抗氧化应激通路有关,进一步探讨天麻粉的神经保护作用机制以及对AD预防和治疗的作用。方法:APP/PS1双转基因小鼠模型,将实验小鼠分为5组,正常组,正常给药组,模型组,天麻粉预防组,天麻粉治疗组。正常给药组,天麻粉预防组在小鼠8周龄时每日灌胃同等剂量的天麻粉(1.5 g·kg^-1);正常组、模型组同时期给予等量的生理盐水,直至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,天麻粉治疗组待小鼠22周龄时,连续2周每天灌胃同等剂量天麻粉(1.5 g·kg^-1),灌胃至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠穿越平台次数、逃避潜伏期及平台停留时间;提取小鼠海马组织RNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2,HO-1,Keap1的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马组织中Nrf2,HO-1,Keap1蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,水迷宫检测结果显示,模型组小鼠的学习记忆能力显著降低(P<0.01);与模型组比较,天麻粉预防组、天麻粉治疗组小鼠学习记忆能力显著提高(P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,天麻粉预防组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的增高(P<0.05,P<0.01),天麻粉治疗组Nrf2,HO-1 mRNA水平显著增高(P<0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平变化差异无统计学意义,各组间Keap1的mRNA及蛋白水平变化无统计学差异。结论:Morris水迷宫及其他结果显示天麻粉能够改善APP/PS1小鼠的学习和记忆能力,且其可能通过调控Keap1-Nrf2/HO-1通路,增强下游抗氧化基因的表达发挥抗氧化功能,进而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。     

小续命汤改善心肺复苏后大鼠神经功能及脑保护作用

[目的]研究小续命汤对心肺复苏后大鼠的脑保护作用及机制研究。[方法]将63只SPF级SD雄鼠按照随机数字表分为对照组(8只)和建模组(55只)。建模大鼠使用经皮心外膜电刺激法建立大鼠心脏骤停模型,将建模成功大鼠进行心肺复苏,当大鼠恢复自主循环表示大鼠心肺复苏建模成功。将建模成功的大鼠随机分为5组,小续命汤高、中、低剂量组、二甲基亚砜(DMSO)组和模型组。大鼠心肺复苏后10 min,小续命汤高、中、低剂量组灌胃300、150、75 mg/kg小续命汤。DMSO组灌胃100 mg/kg的DMSO,模型组和对照组均灌胃等体积生理盐水,每日1次,治疗7 d。治疗前后对大鼠神经功能进行评分;通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠脑海马组织病变;用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组大鼠脑海马组织氧化应激指标脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)浓度;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测大鼠脑海马组织胞浆蛋白伴侣分子(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)mRNA表达水平;通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠脑海马组织中Keap1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。[结果]大鼠治疗后神经功能评分,模型组高于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);对照组脑海马区组织神经元无明显病变,模型组可见神经元排列稀疏且凌乱,神经元出现明显水肿,细胞核肿胀,胞浆空泡样变,DMSO组、小续命汤高、中、低剂量组病变均出现好转;大鼠脑海马组织MDA含量模型组高于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);SOD含量模型组低于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均高于模型组(P<0.05);Keap1 mRNA和蛋白相对表达量模型组均低于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白相对表达量模型组高于对照组(P<0.05),DMSO组、小续命汤高、中、低剂量组均高于模型组(P<0.05)。[结论]小续命汤可改善心肺复苏大鼠神经功能,减轻脑海马组织损伤,抑制氧化应激,推测其机制可能与激活Keap1-Nrf2/HO-1信号通路,下调Keap1 mRNA和蛋白表达,上调Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白表达水平有关。     

杜仲补天素胶囊改善环磷酰胺诱导的小鼠生精障碍研究

目的采用环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)诱导的小鼠生精障碍模型,探究杜仲补天素胶囊(Duzhong Butiansu Capsule,DBC)的生殖保护作用及其机制。方法采用昆明种小鼠ipCP(60mg/kg)制备生精障碍模型,连续5d,第8天起ig给予DBC高、低剂量(1.388、0.694 g/kg)干预4周,给药结束后检测各组小鼠体质量、脏器指数变化,HE染色检测睾丸病理结构变化,ELISA法测定血清睾酮(T)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;Western blotting及免疫组化法分析睾丸组织中转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、组蛋白脱乙酰基酶2(HDAC2)与磷酸化蛋白激酶C(p-PKC)表达。结果与模型组比较,DBC对小鼠体质量下降有极显著干预作用,能够增加睾丸、附睾及肾脏指数,改善睾丸病理形态损伤,增加精子数、提高精子活力、降低精子畸形率,提高T水平,降低LH、FSH水平,降低MDA含量,提高SOD、GSH-Px活性,提高Nrf2、HO-1、NQO1、HDAC2与p-PKC蛋白的表达水平(P0.05、0.01)。结论 DBC能够改善CP诱导的小鼠生精障碍,其机制可能与调节氧化应激相关的Nrf2/抗氧化作用元件(ARE)信号通路有关。     

基于PERK/Nrf2信号通路研究山豆根提取物诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制

目的 基于蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)/核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)通路探究山豆根提取物(Sophorae Tonkinensis Radix et Rhizoma extract,TSRE)诱导鼻咽癌细胞铁死亡作用机制。方法 为研究TSRE对鼻咽癌CNE1细胞的抑制作用,设置对照组和TSRE低、中、高剂量(100、200、400 mg/L)组;为研究铁死亡在TSRE致CNE1细胞增殖抑制中的作用以及PERK/Nrf2信号通路对铁死亡的影响,TSRE处理过程中分别用铁死亡抑制剂Fer-1、PERK抑制剂GSK2606414、Nrf2 siRNA进行干预。MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞周期;荧光探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化水平;比色法检测铁离子和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;Western blotting检...     

马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响

目的 研究马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1(migration and invasion enhancer 1,MIEN1)对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响。方法 采用qRT-PCR法检测宫颈癌SiHa、Hela、CasKi细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E7细胞中miR-3619-5p m RNA表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-3619-5p mimics上调miR-3619-5p的表达,给予马钱苷处理,采用CCK-8法分析细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell小室分析细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blotting法分析剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2)蛋白表达。生物信息学软件预测miR-3619-5p的靶基因,利用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在宫颈癌SiHa细胞中共转染miR-3619-5p mimics和MIEN1过表达载体...     

基于 Keap1-Nrf2-ARE 通路探讨加味天雄散调节弱精症大鼠精子活力的作用机制

目的基于Kelch样相关蛋白1-核因子E2相关因子-抗氧化反应元件信号通路(Keap1-Nrf2-ARE)及下游Maf、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、血红素加氧酶(HO-1)蛋白表达探讨加味天雄散调节弱精症大鼠精子活力的作用机制。方法清洁级SD雄性大鼠60只随机分为对照组、模型组、安慰剂组、治疗组,每组15只。采用腺嘌呤[100 mg/(100 g·d)]灌胃10天造模,对照组灌胃等量生理盐水。造模结束后治疗组予以加味天雄散中药灌服,安慰剂组给予等量生理盐水,连续灌胃30天。RT-PCR检测附睾组织Keap1、Nrf2 m RNA表达;Western Blot检测附睾组织Keap1、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达;检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。结果与对照组比较,模型组Keap1 m RNA及蛋白表达、MDA水平升高(P<0.01),Nrf2m RNA、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达及SOD水平降低(P<0.01)。与模型组和安慰剂组比较,治疗组Keap1m RNA及蛋白表达、MDA水平降低(P<0.01),Nrf2 m RNA、Nrf2、Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达及SOD水平升高(P<0.01)。结论加味天雄散能够通过调节弱精子症大鼠精子Keap1-Nrf2-ARE通路及下游Maf、γ-GCS、HO-1蛋白表达,调控氧化应激反应,从而改善精子活力。