桑色素-Cu2+配位分子印迹聚合物制备及其固相萃取应用

目的 制备桑色素-Cu²⁺配位分子印迹聚合物,对桑枝中桑色素进行分离富集。方法 在Cu²⁺存在下,丙烯酰胺为功能单体,在水-甲醇极性溶剂中制备桑色素-Cu²⁺配位分子印迹聚合物,以该聚合物为填料固相萃取桑枝中桑色素。结果 所制备配位分子印迹聚合物对桑色素具有较强的特异性、选择性吸附,最大吸附量82 μmol/g,远大于以氢键为作用力的传统印迹聚合物及非印迹聚合物;对桑色素结构类似物大豆素、儿茶素的分离因子分别为4.81、4.02。对比桑枝固相萃取淋洗液、洗脱液组成,所制备配位印迹聚合物对桑枝中桑色素表现出明显的富集效果。结论 制备的桑色素配位分子印迹聚合物环境适应性好,选择性吸附能力强,是适用于天然产物有效成分桑色素分离富集的良好材料。     

以水杨酸为假模板制备印迹聚合物对银杏酸的吸附性能研究

目的研究银杏酸吸附分离的新方法。方法采用分子印迹技术,以水杨酸为假模板分子,4-乙烯基吡啶为功能单体,通过分子自组装印迹技术合成对银杏酸具有高吸附性的印迹聚合物,运用核磁共振氢谱、红外光谱分析研究聚合物的印迹机制,扫描电镜考察聚合物的结构表征,HPLC和紫外检测法监测聚合物对总银杏酸的吸附结合特性。结果加入模板分子合成分子印迹聚合物(MIP)具备更好的三维空间结构和吸附性能,其中模板分子与功能单体以非共价键结合。在银杏外种皮提取液中MIP对银杏酸的吸附率达到95.9%;根据Scatchard分析聚合物,存在2种不同的结合位点,其中高亲和力结合位点饱和结合位点数(Q_(max1))=30 mg/g;低亲和力结合位点饱和结合位点数(Q_(max2))=80 mg/g。聚合物的吸附动力学为准二级动力学吸附。结论以水杨酸为模板制备MIP对银杏酸有很强的吸附性能,在银杏酸的分离精制中具有很好的推广应用前景。     

旋覆代赭汤及其拆方对RE大鼠血浆Na~+-K~+-ATP酶及Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性的影响

[目的]探讨反流性食管炎(RE)食管黏膜血浆细胞能量代谢与黏膜损伤的关系以及旋覆代赭汤治疗RE的作用机制。[方法]将120只Wistar大鼠按照随机数字法随机分为10组,每组12只,即正常组、模型组、旋覆代赭汤全方组(全方组)、苦降组、甘升组、升降相因组、去苦降组、去甘升组、去升降相因组和西药组;除正常组外,其余9组行"4.2 mm幽门夹+胃底2/3结扎术"造模。治疗14 d后,即造模后第22天处死,检测各组大鼠血浆Na~+-K~+-ATP酶及Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的活性。[结果]实验后各模型组大鼠ATP酶活性低于正常组;全方组、西药组酶活性较好,与正常组差异无统计学意义(P0.05),与模型组相比有统计学差异(P0.05);苦降组及去甘升组与模型组相比,差异无统计学意义(P0.05),与全方组及西药组比较差异有统计学意义(P0.05);正常组与其他各组比较,均有统计学差异(P0.05);西药组与全方组比较,差异无统计学意义。[结论]旋覆代赭汤全方组能提高模型大鼠血浆Na~+-K~+-ATP酶及Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的活性,改善模型大鼠食管黏膜组织形态学病变,且作用优于各拆方组。     

槲皮素分子印迹聚合物的合成及表征

目的利用分子印迹技术制备槲皮素分子印迹聚合物(MIPs)。方法以槲皮素为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,分别在无水乙醇和四氢呋喃为致孔剂的作用下,采用沉淀聚合法、本体聚合法制备槲皮素MIPs;利用紫外光谱、红外光谱选择模板分子与功能单体间的最佳配比;通过扫描电镜(SEM)考察了MIPs的微观结构。采用平衡和等温吸附实验对2种方法制备的MIPs的吸附平衡时间和最大吸附量进行考察,并对特异性吸附能力进行研究。结果沉淀聚合法制备的槲皮素MIPs具有均匀规则的球状结构,在吸附动力学和等温吸附实验中发现有较快的吸附速度和较大的吸附量,在芦丁和槲皮素的选择性吸附过程中聚合物对槲皮素具有较高的特异性识别能力。结论沉淀聚合法制备的MIPs以吸附量大、选择性强,为中药黄酮类复杂化学成分的分离、富集提供一种新的研究方法,同时也为其他中药化学成分的研究提供借鉴。     

2种聚合方法制备人参皂苷Rg1分子印迹聚合物分离材料的比较研究

为了从中药粗提物中定向分离人参皂苷Rg₁及其结构类似物,获得高选择性、高富集率、高吸附性能的人参皂苷Rg₁印迹聚合物分离材料,该研究分别采用沉淀聚合法和表面印迹法制备了分子印迹聚合物,并对其吸附性能做了对比研究,研究表明采用上述2种方法制备的人参皂苷Rg₁的分子印迹聚合物对模板分子都具有较高的吸附性,其最大表观吸附量可分别达到27.74,46.80 mg·g^-1;表面印迹法制备的聚合物的吸附性要明显高于沉淀聚合法制备的聚合物。试验结果表明,对于极性较强的人参皂苷Rg₁,采用表面印迹法所制备的分子印迹聚合物具有更高的选择性和更好的吸附性能,为其他极性强的活性分子制备吸附性能良好的印迹聚合物提供了重要参考。     

分子印迹聚合物定向分离分析药材中白术内酯Ⅲ的研究

 目的 建立一种新型高效的中药材中低含量活性成分的富集方法。方法 以白术内酯Ⅲ为模板分子、1-乙烯基咪唑为功能单体,采用沉淀聚合法制备了白术内酯Ⅲ分子印迹聚合物（MIPs）,再将其作为固相萃取柱（SPE）填料对中药白术和党参药材提取液中白术内酯Ⅲ及其结构相近的活性成分进行富集分离。结果 MIP-SPE和C₁₈ -SPE的富集因子（EF）分别为78.90和51.56 μg·g^-1,MIP对目标成分的选择性富集性能强于C₁₈吸附填料。白术内酯Ⅲ分子印迹固相萃取法加样回收率为102.2%,检测限为0.36 μg·mL^-1。结论 分子印迹固相萃取法可以作为定向富集低含量活性成分的有效方法。     

添加剂对喷雾干燥干扰素α-2b稳定机制的研究

 目的研究添加剂对蛋白质在喷雾干燥过程中的稳定机制。方法以乳糖或甘露醇作为赋形剂,并以聚山梨酯20、十二烷基硫酸钠、L-赖氨酸、羟丙基甲基纤维素或羟丙基-β-环糊精为添加剂将干扰素α-2b制成喷雾干燥粉末。用X光电子能谱分析研究干扰素α-2b的表面吸附现象,用圆二色谱测定该蛋白的二级结构。结果上述几种添加剂均能降低干扰素的表面吸附量;当以乳糖(而非甘露醇)为赋形剂时,添加剂的加入提高了该蛋白α螺旋结构的含量。结论蛋白质在喷雾干燥过程中的稳定性受载体结晶、表面富集和构象变化等多种机制影响。     

(E)-2-[2-(4-甲氧苄基)肼基]-4-苯基噻唑与人血清蛋白的相互作用

目的: 研究(E)-2-[2-(4-甲氧苄基)肼基]-4-苯基噻唑(MHP)与人血清蛋白(HSA)之间的相互作用,为揭示噻唑类衍生物与DNA作用的机制提供实验依据. 方法: 根据MHP与HSA相互作用的荧光敏化作用,利用Stern-Volmer方程,及非辐射能量转移理论处理实验数据,采用同步荧光光谱探讨了MHP对HSA构象的影响. 结果: 实验发现MHP可以使HSA的荧光增强,表明两者之间发生了能量转移,能量转移的机理是MHP与HSA结合形成了复合物.荧光增强(敏化)效应主要源于给体-受体间的偶极-偶极作用的能量转移. 结论: 能量转移的结果为内原发色基团的荧光被猝灭和外源发色基团荧光被敏化,计算得到其敏化常数为-2.620 8×10⁴.同步荧光光谱表明,相互作用引起HSA构象变化,提示结合位点更接近于色氨酸.     

加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移

目的 观察加味小陷胸汤水提物对转化生长因子-β₁（transforming growth factor-β₁,TGF-β₁）介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）及侵袭迁移能力的影响,探讨其调控Wnt5a/Ca²⁺/活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T-cells,NFAT）信号通路抑制MGC-803细胞EMT和侵袭转移的作用机制。方法 用TGF-β₁（10 μg·L^-1）诱导人胃癌MGC-803细胞EMT及侵袭转移模型,分别采用Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测细胞侵袭迁移能力,EMT标志蛋白表达和Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路关键蛋白表达以及细胞内Ca²⁺浓度。结果 TGF-β₁能够显著增强MGC-803细胞侵袭迁移能力（P<0.01）,下调上皮细胞黏附分子（E-cadherin）水平（P<0.01）,上调间质细胞标志蛋白（N-cadherin）,转录因子（Snail）和细胞骨架蛋白（Vimentin）表达（P<0.01）,并诱导细胞Wnt5a,钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）,活化T细胞核因子1（nuclear factor of activated T-cells1,NFAT1）总蛋白,磷酸化蛋白p-NFAT1和NFAT1核蛋白表达上调及Ca²⁺胞内蓄积（P<0.01）;而加味小陷胸汤（10,20,40 mg·L^-1）均可明显抑制这一现象,且40 mg·L^-1效果最佳（P<0.05,P<0.01）;Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路特异性抑制剂（R）-（+）-Bay-K-8644与加味小陷胸汤40 mg·L^-1均可明显抑制MGC-803细胞经TGF-β₁介导后的侵袭迁移,上调E-cadherin水平,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Wnt5a,CaN,NFAT1蛋白表达及减少Ca²⁺在胞内蓄积（P<0.05,P<0.01）,且（R）-（+）-Bay-K-8644协同加味小陷胸汤40 mg·L^-1抑制作用效果更强（P<0.05,P<0.01）。结论 以上结果提示加味小陷胸汤能通过Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路抑制TGF-β₁介导的EMT,进而降低MGC-803细胞侵袭迁移能力。     

松香骨架结构分子印迹聚合物的制备及其对竹节参皂苷IVa吸附性能研究

目的 为了减少非特异性结合位点,制备了松香大分子骨架的竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymers,MIPs)并研究其吸附性能,为开发选择性更高的竹节参皂苷IVa分离材料提供理论基础.方法 以脱氢枞酸丙烯酸乙二醇酯为功能单体制备了竹节参皂苷IVa分子印迹聚合物.使用红外光...     

远近部位穴位对脑缺血大鼠脑组织Ca^2＋、Na^＋、K^＋含量影响的比较

目的 比较不同部位穴位对实验性脑缺血疗效的影响。方法 采用大鼠大脑中动脉暂时性缺血模型,以脑组织Ca^2＋、Na^ 、K^ 含量为指标,比较电针近脑部的百会、人中穴和远脑部的环跳、昆仑穴对脑缺血的影响。结果 两组穴位对脑组织中异常升高的Ca^2 、Na^ 含量均有不同程度的降低,但两组之间无差别。结论 头部穴位组和肢体部穴位组均对脑缺血／再灌注损伤具有一定的保护作用,两组之间比较未见显著差别。     

人参皂苷Rg2注射液制备工艺的研究

目的确定人参皂苷R g2注射液的制备条件。方法采用正交试验法研究注射液的优化工艺条件。结果工艺条件是:选用25%1,2-丙二醇与25%聚乙二醇400为混合助溶剂,不加抗氧剂,调节注射液pH值为3.5~5.5。结论该制备工艺稳定、可靠,可作为人参皂苷R g2注射液的制备工艺。     

青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2+,Mg2+-ATP酶活性及[Ca2+]i的影响

目的考察青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性及[Ca2 ]i的影响。方法青龙衣多糖对S180小鼠ip给药7 d,比色法结合试剂盒测定S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,采用激光共聚焦显微镜结合Fluo-3/AM荧光探针测定红细胞内[Ca2 ]i。结果青龙衣多糖能提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性(P<0.05);降低S180小鼠红细胞[Ca2 ]i(P<0.05),并且青龙衣多糖的作用呈剂量依赖性,以高剂量组的作用最佳(P<0.01)。结论青龙衣多糖通过提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,排除离子跨膜转运障碍,稳定其能量代谢和物质代谢,有利于维持细胞内Ca2 的正常浓度。     

清胰汤对急性胰腺炎大鼠胰腺及肝细胞钙-镁ATP酶的影响

目的：研究急性胰腺炎（AP）大鼠胰腺及肝细胞钙－镁ATP酶的变化及清胰汤等药物对其影响,进一步探讨这些药物治疗AP的作用机制。方法：将81只SD大鼠分为正常对照组、AP组、AP后清胰汤（AP＋清胰汤）治疗组及粉防己碱（Tet,AP+Tet)治疗组共4组,在制备AP动物模型后1h、5h、10h活体取胰、肝组织,通过钙－镁ATP酶的酶组织化学染色检测其活性;同时通过逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）,测定其组织钙－镁ATP酶的表达。结果：钙－镁ATP酶酶组织化学染色阳性率ATP组低于正常对照组（P＜0.05),且AP组5h的阳性率低于1h;清胰汤、AP+Tet组的高于AP组（P＜0.05),且5h的阳性率高于1h。RT－PCR结果显示：胰腺组织钙－镁ATP酶的表达AP组最低,且AP组5h的表达低于1h;AP+清胰汤、AP+Tet组的表达高于AP组,且5h的表达高于1h;肝组织钙－镁ATP酶的表达各组均为阳性,各组间差异无显著性。结论：AP时大鼠胰腺及细胞钙－镁ATP酶活性降低,清胰汤、Tet可提高细胞钙－镁ATP酶活性,减轻细胞钙超载。     

毛细管电泳-激光诱导荧光法测定人参中铜和镉离子含量

目的:建立高效毛细管电泳-激光诱导荧光法(high performance capillary electrophoresis-laser induced fluorescence,HPCE-LIF)测定Cu~(2+)和Cd~(2+)含量的方法,并将其应用于中药材人参重金属的检测。方法:Cu~(2+)与Cd~(2+)通过与荧光络合剂异硫氰酸荧光素酯-偶氮乙二胺四乙酸(fluorescein isothiocyanate isomer I-Aminobenzyl ethylene diamine tetraacetic acid,FITCABEDTA)柱前络合后,以熔融石英毛细管柱(75μm×60.2 cm,有效长度50 cm)为分离通道,经1 mol·L~(-1)NaOH溶液调pH至9.3的0.1 mol·L~(-1)硼酸溶液-0.1 mol·L-1SDS溶液(38.5∶61.5)作为缓冲溶液,分离电压25 kV,检测波长520 nm,毛细管温度25℃,自动压力进样5 s。结果:人参样品中Cu~(2+),Cd~(2+)分离效果良好,并且对两者进行了标准曲线、精密度、重复性和加样回收率试验,在1~150,2~200μg·L~(-1)线性关系良好(r0.999 2),两者精密度RSD均2.0%,表明精密度良好;两者重复性RSD均3.7%,表明重复性良好;两者加样回收率分别为103.30%,100.33%,RSD 2.5%,2.8%。结论:采用毛细管电泳-激光诱导荧光法测定中药材人参中特定重金属,方法可行,很好地解决了中药材重金属离子含量低且不易分离的问题,为中药材重金属离子的检测提供一种新的方便快捷准确的方法,并且相信经过不断探索和改进研究,HPCE-LIF法可用于中药材中更多重金属离子的同时检测。     

肉桂油巴布剂的研制及体外经皮渗透性实验

目的:优选肉桂油巴布剂配方。方法:采用L9(34)正交试验,以初黏力、持黏力、物理性状为衡量指标,进行最佳基质配方筛选;采用Franz扩散池考察处方的体外经皮渗透性,以HPLC测定肉桂油主要成分桂皮醛的浓度,求其12h内的渗透量及稳态透皮速率。结果:优选肉桂油巴布剂主要基质配方为卡波姆1.3g、甘油30g、聚丙烯酸钠5.5g,稳态透皮速率J为13.44μg·cm-2·h-1。结论:优选的肉桂油巴布剂配方合理,具有较好的体外经皮渗透性能。     

硅胶表面高良姜素分子印迹聚合物的制备及其吸附性能

目的利用表面分子印迹技术制备硅胶表面高良姜素分子印迹聚合物(MIP)。方法采用(3-氨丙基)三甲氧基硅烷对硅胶进行改性,并以改性硅胶为载体,高良姜素为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,N,N′-亚甲基二丙烯酰胺(MBA)为交联剂,在优化实验条件下利用表面接枝聚合法合成高良姜素表面分子印迹聚合物(MIP)。采用红外光谱、扫描电镜对聚合物进行表征,静态吸附及竞争性吸附研究聚合物的吸附性能。结果最佳制备条件为高良姜素与MAA的物质的量比为1∶4,MAA与MBA的物质的量比为1∶7,反应温度40℃,反应时间12 h。红外光谱和扫描电镜结果显示,印迹聚合物成功接枝到硅胶表面上并出现了对高良姜素分子产生选择性识别的孔穴和位点。吸附实验表明,该MIP对高良姜素分子具有特异的识别性和较好的亲和性,相对于对照物灯盏花素和木犀草素,MIP对高良姜素的选择性系数分别为11.2和5.3。结论 MIP对高良姜素识别性好、选择性强,为中药中黄酮类化合物的分离、提取提供了一种新方法。