多药耐药基因的表观遗传调控与消化系肿瘤

消化系统恶性肿瘤细胞多药耐药基因过度表达p-糖蛋白，降低细胞内药物浓度，产生多药耐药是化疗失败的重要原因，MDR1的转录表达受多种因素的影响，其中表观遗传调控为肿瘤分子治疗提供新思路，MDR1基因甲基化和RNA干扰可通过转录抑制而逆转多药耐药性。     

逆转MDR—l基因相关的消化系统肿瘤多药耐药

消化系统恶性肿瘤细胞多药耐药是导致化疗失败的重要原因。多药耐药基因(MDR—1)过度表达P—糖蛋白(p-gp)是产生耐药的主要机制。逆转MDR—l基因相关的消化系统肿瘤多药耐药，提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的方式有两类：一是直接抑制p-gp的药泵功能；二是干扰MDR—l基因的表达。     

食管鳞癌中MDR1基因的表达与多药耐药的关系

目的探讨MDR1基因与食管鳞癌多药耐药的关系。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测80例食管鳞癌、不典型增生及正常食管组织中MDR1基因的表达水平,并比较食管鳞癌组织中MDR1基因表达与不同临床参数之间的关系。利用阿霉素(ADM)药物浓度递增细胞培养方法建立食管癌多药耐药细胞Eca109/ADM,利用RT-PCR、流式细胞术及激光共聚焦显微镜检测Eca109/ADM细胞中MDR1基因及蛋白表达水平。结果 MDR1基因在食管鳞癌中的表达水平显著高于不典型增生及正常食管组织(P<0.05)。食管鳞癌中MDR1基因表达与食管癌细胞分化程度、有无淋巴结转移及浸润深度密切相关(P<0.05)。Eca109/ADM细胞中MDR1基因及蛋白表达水平显著高于其亲代细胞Eca109中的表达水平(P<0.05)。结论 MDR1基因在食管鳞癌中的异常高表达可能参与了多药耐药的形成。     

JNK信号通路介导MDR1/P-gp调控人结肠癌多药耐药

目的:探讨在人结肠癌多药耐药细胞株HCT8/V中JNK信号传导通路与多药耐药1(MDR1)基因表达的关系.方法:MTT法检测人结肠癌多药耐药细胞株HCT8/V及其敏感株HCT8细胞对多种抗肿瘤药物的敏感性;抑制JNK信号通路的激活后,采用双荧光素酶活性报告基因检测MDR1启动子转录活性的表达;实时荧光定量PCR检测MD...     

MRP1与肺癌耐药

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,约80％的患者就诊时已属中、晚期,化疗成为其主要治疗手段,而多药耐药现象的产生是目前影响化疗效果的主要原因。多药耐药(multidrug resistance,MDR)是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药的同时,对结构和作用机制迥然不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药的现象。典型的MDR机制是指MDR1基因编码的P—gP致药物外流而产生的多药耐药,但多数学者发现它们在肺癌中的表达水平并不高,     

RNA干扰对胃癌耐药细胞MDR1及P-gP表达的影响

目的 寻找逆转胃癌细胞多药耐药的有效方法.方法 根据多药耐药基因1(MDR1)的基因序列,设计并体外转录合成2条siRNA,用脂质体转染将其导入人胃癌多药耐药BGC-823细胞内.应用MTT法检测转染后癌细胞生长增殖情况及对阿霉素(ADM)的敏感性,流式细胞仪检测细胞膜表面P-糖蛋白(P-gp)表达和细胞内Rh123的潴留情况.结果 转染sh-MDR1-1和sh-MDR1-2后,BGC-823细胞对ADM的IC50均降低,敏感性提高;BGC-823细胞MDR1 mRNA和P-gP表达均显著降低,细胞内Rh123稳态积累量均明显增高;上述效果均以转染sh-MDR1-1序列为著.结论 sh-MDR1-1特异性siRNA可抑制BGC-823细胞MDR1表达,此为寻找逆转胃癌细胞多药耐药有效方法奠定了基础.     

ATP结合盒式蛋白转运蛋白在结直肠腺癌中表达及其临床意义

目的探讨多药耐药基因(MDR)1、多药耐药相关蛋白(MRP)1及乳腺癌耐药蛋白(ABCG2)在结直肠腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用增强型二步法免疫组织化学方法检测MDR1、MRP1及ABCG2三个基因在116例结直肠腺癌组织中的表达,并分析其可能的临床预后价值。结果 MDR1、MRP1及ABCG2在结直肠腺癌的阳性表达率显著高于切端正常组织(P<0.05)。MDR1、MRP1及ABCG2的表达与病理学分级、淋巴结转移及Duke分期密切相关(P<0.05),而与年龄、性别及肿瘤发生部位无关(P>0.05)。在结直肠腺癌中MDR1、MRP1及ABCG2的表达呈显著正相关(P<0.05)。结论结直肠腺癌中存在原发性耐药现象,MDR1、MRP1及ABCG2可能在结直肠癌侵袭转移中存在协同作用。联合检测MDR1、MRP1及ABCG2在结直肠腺癌组织中的表达对化疗药物的选择、化疗方案优化及估计患者预后具有重要指导意义。     

多药耐药基因启动子高表达载体的构建与鉴定

目的克隆多药耐药基因(MDR1)启动子,构建并鉴定真核表达载体pcDNA3-MDR1启动子.方法采用PCR方法从白血病多药耐药K562-AO2细胞中扩增MDR1 启动子,克隆入T载体,酶切后与pcDNA3连接,电泳及DNA测序进行鉴定.结果 PCR克隆出 MDR1启动子,成功克隆入T载体,DNA测序证实序列正确,通过连接成功构建含正确目的基因的表达载体pcDNA3 -MDR1启动子.结论成功构建了MDR1启动子高表达载体,为靶向治疗耐药肿瘤构建载体提供了实验基础.     

卵巢癌耐药细胞株体外模型的建立及相关研究

目的探讨人卵巢癌细胞多药耐药（MDR）的发生机制。方法以浓度梯度诱导法建立卵巢癌阿霉素（ADM）耐药细胞亚株OVCAR／AR。人多药耐药基因（MDRl）转染OVCAR-3细胞建立多药耐药亚株OVCAR／MDR细胞。流式细胞术检测P-糖蛋白（P-gp）的表达,罗丹明试验检测P-gP的药物转运功能;MTT法检测细胞对化疗药的抵抗性。结果成功地建立了人卵巢癌MDR细胞株0VCAR／AR和OVCAR／MDR。与亲代细胞OVCAR-3相比,两株耐药细胞P-gP的表达水平显著增加,转运功能增强。OVCAR／AR细胞对ADM、泰素（TAX）和顺铂（DDP）产生交叉耐药,而0VCAR／MDR细胞只对前两者产生耐药。结论0VCAR／AR细胞和OVCAR／MDR细胞具有典型的MDR表型,其机制主要是MDR1基因过度表达致细胞内药物浓度减少。     

奥曲肽逆转肝细胞肝癌多药耐药的机制

目的 探讨生长抑素（SST）类似物奥曲肽逆转肝癌细胞多药耐药可能的机制。方法 应用MTT法分析肝癌细胞对化疗药物的敏感性；RT—PCR、流式细胞术检测肝癌细胞多药耐药基因多药耐药糖蛋白1（MDR1）、多药耐药相关蛋白2（MRP2）mRNA及其蛋白质的表达。结果 奥曲肽联合化疗药物可以显著降低化疗药物的IC50肝癌细胞有生长抑索受体2（SSTR2）、生长抑素受体3（SSTR3）、MDR1、MRP2的表达，奥曲肽可显著降低肝癌细胞表面MDR1、MRP2的表达。结论 SST可与肝癌细胞表面的SSTR结合，降低其表面MDR2、MRP2的表达，使细胞内细胞毒药物浓度增加，从而逆转肝癌细胞多药耐药。     

肺癌多药耐药的监测与评价

国内外研究表明多药耐药(MDR)的产生是导致肺癌化疗乏效的主要原因,试验研究证实,参与体内外肺癌细胞耐药机制主要有多药耐药基因(MDR1)及其编码的细胞膜蛋白P-糖蛋白(P-gp)过表达,多药耐药相关蛋白(MRP)表达增加,谷胱甘肽解毒酶系统活性增强,拓扑异构酶活性降低及结构异常,DNA损伤的修复能力增强等.因此充分了解耐药机制可为临床肺癌治疗提供决策.     

人肝癌多药耐药细胞模型的建立

目的:为研究肝癌多药耐药(MDR)机制,采用5种抗癌药物通过不同的诱导方式建立一组人肝癌MDR细胞模型。方法:利用RT-PCR、流式细胞术和四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定MDR细胞中5种MDR基因的表达及耐药倍数。结果:SMMC7721/DOX亚系由mdr_1基因介导耐药,SMMC7721/VCR亚系由MRP基因介导耐药,SMMC7721/CBP亚系由LRP基因介导耐药,SMMC7721/VP16亚系由TopoⅡα基因介导耐药,SMMC7721/MMC亚系由GST_(P1)基因介导耐药,多重MDR亚系SMMC7721/M的耐药涉及mdr_1、MRP、URP、TopoⅡα和GST_(P1)。结论:MDR细胞模型可用于耐药研究。     

携多药耐药基因1反义RNA重组腺病毒逆转肝癌多药耐药细胞的实验研究

目的探讨携带多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)反义RNA重组腺病毒载体在裸鼠体内逆转肝癌多药耐药细胞HepG2/阿霉素(adriamycin,ADM)的疗效及作用机制。方法构建携带AFP和asmdr1的重组腺病毒载体Adeno-asmdr1,ADM分级诱导肝癌细胞HepG2为多药耐药细胞HepG2/ADM,建立HepG2/ADM裸鼠皮下移植瘤模型,Adeno asmdr1局部注射,观察移植瘤的体积、透射电镜检测移植瘤组织细胞凋亡、RT-PCR检测MDR1转录水平,评价Adeno-asmdr1的抗肿瘤活性。结果在Adeno-asmdr1 ADM组,移植瘤体积无增大,而PBS组、ADM组体积明显增大;RT-PCR检测移植瘤细胞1周和4周MDR1 mRNA水平, ADM组无明显变化,Adeno-amdr1 ADM组在4周时MDR1转录水平仅为单纯ADM组的20%,经ADM Adeno-asmdr1处理组,可见凋亡增加,ADM组和PBS处理组的裸鼠移植瘤组织中出现少量或没有凋亡。结论携带MDR1反义RNA重组腺病毒部分逆转HepG2/ADM的多药耐药,阻止肿瘤生长,下调MDR1转录水平,导致肿瘤细胞凋亡。     

溃疡性结肠炎多药耐药基因的表达及其与疾病行为间的关系

目的 探讨溃疡性结肠炎多药耐药基因（MDR1）产物P-gp和多药耐药相关蛋白（MRP）的表达及其与疾病行为间的关系.方法 应用多药耐药基因（MDR1）产物P-gp和多药耐药相关蛋白（MRP）单克隆抗体,对溃疡性结肠炎患者内镜活检组织进行免疫组化检测.结果 多药耐药基因（MDR1）产物P-gp和多药耐药相关蛋白（MRP）在溃疡性结肠炎病程12个月、18个月时表达率分别为40.5%、45.9%、48.6%和51.4%,分别与患病初期相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;P-gp和MRP在溃疡性结肠炎活动期和缓解期表达率分别为36.4%、18.6%和46.1%、25.4%,两期分别相比差异有统计学意义（P〈0.05）;P-gp和MRP活动期轻度、中度和重度之间差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 通过内镜活检组织P-gp和MRP检测可了解溃疡性结肠炎耐药情况,为临床治疗提供依据,方法安全可靠、简便可行.P-gp和MRP表达在活动期严重程度间无差异,不宜作为严重程度是否耐药判断指标.     

肺癌患者外周血中MDR1的表达及临床意义

目的 检测多药耐药基因-1（MDR1）在肺癌患者外周血中的表达,探讨MDR1的表达水平与肺癌病理类型及临床化疗进程之间的关系.方法 应用荧光定量PCR（qRT-PCR）技术,动态监测45例肺癌患者化疗前后外周血中MDR1的表达水平,并与48例健康者进行对照比较.结果 肺癌组化疗前MDR1的阳性率28.89%（13/45）,明显高于健康对照组2.08%（1/48）,差异显著（P〈0.05）;各种病理类型的肺癌随着化疗次数的增多MDR1的表达均增强;化疗前后各期MDR1的表达程度：非小细胞肺癌（NSCLC,肺鳞癌和肺腺癌）明显高于小细胞肺癌（SCLC）,差异具有统计学意义（P〈0.05）,而肺鳞癌和肺腺癌之间MDR1的表达程度相当,无显著差异,（P＞0.05）.结论 化疗可诱导各种病理类型肺癌MDR1表达增加;病理类型不同诱导化疗耐药的机制可能不同：NSCLC可能为原发性MDR,SCLC可能为获得性MDR;动态检测肺癌患者外周血中MDR1的表达水平,有利于进行肺癌耐药的监测与评价.     

多药耐药基因反义寡核苷酸逆转肝癌细胞耐药的研究

目的 观察反义硫代磷酸酯寡核昔酸(AsODN)联合逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)的作用。 方法 用人工合成互补于MDR1基因及MRP基因的反义20聚硫代磷酸寡核苷酸,以脂质体作载体,转染入耐阿霉素(ADM)肝癌细胞SMMC-7721/ADM,四甲基偶氮唑蓝法测定细胞对化学疗法药物的敏感性,流式细胞仪分析细胞相对荧光强度,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内Rhdaming123(Rh123)及柔红霉素(DNR)潴留以反映蛋白质p170和p190功能。 结果 ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度增加细胞对ADM(47.8倍)和DNR(21.6倍)的敏感性。ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,与单独任一种ASODN转染相比,对p170或p190表达的抑制并不增加(q值分别为3.23、3.24,P>0.05)。 结论 针对MDR1 MRP的ASODN联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度逆转肝癌细胞的耐药性。     

MDR1、CyclinD1和Bax与肺癌的预后

影响肺癌预后的因素较多,包括临床因素、癌基 因与抑癌基因,生长因子和细胞因子、基质蛋白酶 端粒酶、细胞增生和凋亡凋控因子、黏连分子等。本 文就MDR1、CyclinD1和Bax三个方面与肺癌的预 后关系进行讨论。 1　MDR1 多药耐药基因(MDR),在人类存在两种亚型 MDR1和MDR2,多药耐药主要与MDR1有关,而与 MDR2无关;MDR1编码的P 糖蛋白(P gp)是多药 耐药的基本功能单位。 1.1　MDR1基因和P gp的结构功能关系　人类的 MDR1基因位于第7号染色体,含有28个外显子 全长4.5kb,仅有一个开放阅读框,5′和3′非编码区 有调节基因,5′非编…     

环孢素A逆转肿瘤多药耐药的临床观察

多药耐药（MDR）是恶性肿瘤化疗失败的原因之一,临床许多病人在经历了最初有效的化疗之后,最终仍难免于复发,此时再使用曾有效的药物或从未用过的药物,均不见疗效.其主要原因是肿瘤细胞对化疗产生了耐药性,多药耐药基因（MDR1）呈高表达.因此,逆转肿瘤细胞的耐受性是提高肿瘤化疗疗效的关键.国内外许多基础研究表明,很多药物可用来逆转肿瘤细胞的MDR.我们自2002年起用RT-PCR法检测MDR1表达,用免疫调节剂环孢素A口服逆转肿瘤MDR取得良好效果.     

原发性肝癌多药耐药性的研究及预测

目的:探讨5种多药耐药(MDR)基因在肝癌组织中的表达,建立MDR的基因诊断标准。方法:用逆转录-聚合酶链(RT-PCR)方法、流式细胞术检测肝癌组织中5种MDR基因mRNA和蛋白质的表达,用四氮唑蓝快速比色(MTT)法检测抗癌药物对肝癌原代细胞的IC_(50)值。结果:肝癌耐药涉及mdr_1、MRP、LRP、GST_(p1)和TopoⅡα基因。mdr_1 mRNA≥0.5、MRP mRNA≥0.6、LRP mRNA≥0.8、GST_(p1) mRNA≥0.7和TopoⅡαmRNA≤0.4为耐药联合诊断标准,符合率为98.00％。结论:多重MDR是肝癌耐药的主要形式。用RT-PCR方法联合检测5种MDR基因mRNA表达在肝癌化疗敏感性预测中具有必要性和可行性。     

体外香菇多糖对顺铂抑制胃癌细胞增殖的促进作用

目的:研究体外香菇多糖(Lentinan)对多药耐药基因表达的影响和促进顺铂抑制胃癌细胞增殖的作用.方法:分别用顺铂(Cisplatin)、香菇多糖和顺铂联合香菇多糖处理SGC-7901胃癌细胞,将其分为4组:对照组(Con组),香菇多糖组(Len组),顺铂组(Cis组)和顺铂联合香菇多糖组(L+C)组.应用RT-PCR检测多药耐药基因MDR1、MRP1和LRP基因mRNA表达;应用CCK-8试剂盒检测Con组和药物处理组前后的胃癌细胞增殖状态.结果:正常SGC-7901胃癌细胞中多药耐药基因MDR1、MRP1和LRP均表达mRNA,香菇多糖能显著降低多药耐药基因表达而对细胞增殖无明显影响;顺铂明显增加多药耐药基因表达,同时抑制细胞增殖(P<0.05);香菇多糖联合顺铂作用后,MDR1和MRP1基因表达完全受到抑制,LRP表达显著降低,细胞增殖速度明显低于Con组、Len组和Cis组,差异具有统计学意义(10d:0.54vs1.90,1.88,0.92,均P<0.05).结论:香菇多糖联合顺铂后因抑制多药耐药基因表达而显著增强顺铂的抑制细胞增殖作用.