AP-PCR和set1、set2两基因PCR用于志贺氏菌基因多态性研究

本文应用随机引物PCR(简称AP-PCR或PAPD)和set1,set2两基因PCR方法分析了71株F2a志贺氏菌的基因多态性。结果为：两种引物的AP-PCR中,引物12将71株F2a志贺氏菌分为2种不同的基因型,引物17和set1、set2两基因PCR将所有菌株分为4种不同的基因型,两种方法结合则可分为7种不同的基因型;其中65株F2a志贺氏菌基因型相同,其余6株各为独立的型别。本研究表明AP-PCR和set1、set2两基因PCR为志贺氏菌基因多态性分析的有效手段,两者结合则更为完善;研究结果还表明在我国南北不同地区不同时同分离到的无论是暴发株还是散发株均具有相同的优势克隆,说明其为引起国内菌痢散发和暴发的主要基因型,是流行病学研究和防治的重点。     

志贺氏菌痢暴发菌株的分子流行病学分析

目的：探讨四种基因分型方法在一起F2a志贺氏菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法：对43株分离自患者粪便和食物的菌株分别进行质粒图谱分析、质粒DNA酶切图谱分析、随机PCR分析、set1／set2毒力基因PCR分析。结果：随机PCR将43株Fla志贺氏菌分为两个不同的谱型，质粒图谱、set1／set2毒力基因PCR分为三个不同的谱型，而质粒DNA酶切图谱分为四个不同谱型。其中基因型完全相同的菌株35株，为引起本次菌痢暴发的流行株。7株基因型不同菌株是本次暴发期间同时存在的散发病例。从食物中分离的菌株基因型与流行株相同，证明此次暴发是通过污染的食物而引起传播的。食堂炊事员粪便中虽然分离出了F2a志贺氏菌，但基因型与流行株不同，不是本次暴发的传染源。结论：DNA水平上的分型方法能更为准确、深入地揭示菌痢暴发过程中各分离株之问的流行病学联系。     

兰州市志贺菌相关毒力基因

目的调查兰州市分离志贺菌株的毒力基因型。方法常规分离志贺菌,应用聚合酶链反应检测志贺菌肠毒素1基因（set1A和set1B）、志贺菌肠毒素2基因（sen）、侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）、侵袭相关位点基因（ial）和多重调控基因（virA）。结果兰州市志贺菌毒力基因virA、set1A阳性率为100％;ipaH阳性率为93．7％;ial、sen、set1B阳性率分别为56．2％、62．5％、25．0％,set1B仅在福氏志贺菌Ⅳ型中检出。结论兰州市志贺菌中携带的毒力基因存在差异,virA、set1A和ipaH较稳定,可作为靶基因用于兰州市志贺菌的检验,set1B可用于筛选福氏志贺菌Ⅳ型菌株。     

一起F2a志贺氏菌痢暴发的分子流行病学

F2a志贺氏菌仍是在我国引起菌痢暴发流行的主要病原体之一。目前对志贺氏菌痢暴发事件的研究，多局限于表型水平，或以单一分子生物学方法为主，具有较大的局限性和片面性。本文应用三种分子生物学方法对1997年内蒙古呼和浩特市某驾驶学校发生的一起F2a志贺氏菌暴发进行分子流行病学研究，其中set1、set2毒力基因PCR为首次应用，结果报告如下。     

志贺菌多位点酶电泳分析

目的研究志贺菌基因型和群体遗传学结构.方法采用多位点酶电泳(MEE)法对江西铜鼓县及郑州近5 a分离的59株志贺菌散发株进行多位点酶基因分类和群体遗传学研究.共测定4种代谢酶.结果59株菌共分为46个电泳型(ETs),聚类分析显示46个ETs归属于10个克隆系(CLa～CLj).两地菌株分属几个紧密相连的克隆系,不同年代的菌株有优势克隆系存在.群体遗传结构分析表明,被测4种代谢酶基因位点均具多态性,平均杂合度(h)5.5,平均遗传多态值(H)0.637.两地菌株h和H之间差异均无统计学意义(P>0.05).结论每个酶基因位点都有一个优势等位基因,提示在志贺菌进化演变过程中以自然选择为主,不同年代的宋内菌聚在一个亚克隆系内,推测它们染色体基因是同源的.     

儿童福氏志贺菌超广谱β内酰胺酶CTX-M基因型的研究

目的 了解唐山地区产CTX-M型超广谱B内酰胺酶（EsBk）福氏志贺菌的流行基因型,为有效预防和控制该类感染提供理论依据。方法临床分离的无重复产ESBLs的福氏志贺菌43株,采用CLSI推荐的表型筛选和确证试验检测ESBLs,采用聚合酶链反应（PCR）检测CTX-M基因型。结果43株产ESBLs的福氏志贺菌中,产CTX-M基因型的有19株（44．2％）,经PCR扩增及测序,19株具有ESBLs表型的福氏志贺菌中有17株表达CTX-M-14,1株表达CTX-M-57,1株表达CTX-M-3。结论唐山地区存在着CTX-M基因的流行,应加强唐山地区产CTX-M型ESBLs菌株的检测。     

志贺菌6种毒力基因的多重PCR检测

目的:建立志贺菌6种毒力基因[志贺菌肠毒素I基因(setl)、志贺菌肠毒素2基因(sen)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、侵袭相关蛋白基因(ial)、志贺毒素1基因(stxl)及调控基因(virA)]的多重PCR鉴定方法,实现多基因的同时检测.方法:选掸志贺菌的6种毒力基因作为靶基因,以A群和C群4株标准及B群和D群4株临床分离株为模型,应用降落PCR方法在1个反应管中同时进行扩增,根据扩增片段大小定性判断结果.通过样本倍比稀释检验多重PCR的灵敏性,并在NCBI网站上用BLAST检索各引物的特异性.另选取河南省2001年至2007年115株志贺菌进行多重PCR检测,以验证多重PCR的可行性.结果:多重PCR能同时检测上述6种毒力基因,与单基因PCR分别检测6种毒力基因相比具有相近的灵敏度与特异性.应用多重PCR方法检测115株志贺菌,除stxl外,其余5种毒力基因的阳性率均在85%以上.结论:多重PCR鉴定志贺菌毒力基因具有简便、快速的特点,适用于毒力基因鉴定和流行病学调查研究.     

永州市福氏志贺菌临床分离株毒力基因的研究

目的对2012年湖南省永州市医院分离的144株福氏志贺菌进行毒力基因的检测,以了解其毒力基因的携带情况。方法针对毒力基因,设计特异性引物,采用PcR方法检测临床分离株中ial、ipaH和icsP毒力基因的分布情况。结果I44株福氏志贺菌中,其中F1a65株（451％）,F2a50株（208％）,F×24株（167％）,其他25株（173％）。ip＆H、icsP基因的阳性率为1oo％（144／144）,而iaI基因的阳性率为53．4％（77／I44）。结论永州市的福氏志贺菌的ipaH和FcsP携带率非常高,而iaI基因携带率相对较低。     

临床分离志贺菌中质粒介导磷霉素耐药基因的检测

目的在磷霉素耐药志贺菌中检测质粒介导的磷霉素耐药基因fosA、fosA3和fosC2,并分析其传播方式。方法
　　琼脂倍比稀释法测定志贺菌对抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。在磷霉素耐药菌株中利用聚合酶链式反应(PCR)检测其质粒介导的磷霉素耐药基因fosA、fosA3和fosC2。对阳性扩增产物进行测序分析并对阳性菌株进行接合试验,采用琼脂倍比稀释法测定接合子对12种抗菌药物的MIC值, PCR法检测接合子质粒介导磷霉素耐药基因,肠杆菌科基因间的重复序列PCR( ERIC-PCR)法对阳性菌株进行同源性分析。结果263株志贺菌中磷霉素耐药25株、中介7株,耐药率为9．5%。 PCR结果显示18株磷霉素耐药志贺菌fosA3阳性(基因登录号为KJ716852),阳性率为6.8%,未检出fo-sA和fosC2。18株fosA3阳性株中,13株结合成功,与受体菌相比,结合子对磷霉素的MIC值明显提高, ERIC-PCR法证实部分fosA3阳性志贺菌具有同源性。结论首次在临床分离的志贺菌中检测到质粒介导的磷霉素耐药基因fosA3,虽然目前检出率不高,但其传播可造成磷霉素耐药性的扩散,需要加强监测。     

一起菌痢暴发的分子流行病学分析

本文对1997年在内蒙呼和浩特市一起菌痢暴发期间分离的43株福氏2a志贺氏菌进行质粒图谱和质粒DNA酶切图谱分析。结果为：43株福氏2a中出现三种不同的质粒图谱和四种不同的酶切图谱,其中41株(95．35％)质粒图谱相同,39株(90．70％)酶切图谱相同,其余各株具有各自独立的图谱特征。提示质粒图谱和酶切图谱相同的菌株是引起本次菌痢暴发的流行株,而图谱特征不同的菌株可能为本次暴发偶合的部分散发病倒。质粒分析与表型分析相比较具有更特异敏感的特点．而质粒图谱与质粒DNA酶切图谱相比．后者的分辨率更高．但两种方法均存在着一定的局限性。     

磁共振椎管水成像126例分析

探讨磁共振椎管水成像（ＭＲＭ）对示椎管内病变部位及原因的价值与限度。方法采用三维快速自旋回波加脂肪抑制技术作冠状面重Ｔ２加权椎管水成像１２６例,包括忱延池６例、颈段１８例、胸段１９例、腰段８３例。所有图像均经３Ｄ最大信号强度投影（ＭＩＰ）后处理。结果９０．５％（１１４／１２６例）图像质量优良,ＭＲＭ阳性１０１例（８０．２％,１０２人次）。硬膜外病变５１人次,硬膜下３０个次,髓内２３人次。６６例手术     

术后并发严重感染患者肿瘤坏死因子基因微卫星多态性及其与预 …

探讨肿瘤坏死因子基因微卫生多态性与术后严重全身感染易感性及其预后的相关性。方法应用聚合链反应（ＰＣＲ）,经聚丙烯酰胺凝电泳及银染色方法,测定１２２例术后并发严重全身感染的患者和１３８名健康献血员（对照组）的ＴＮＦｃ微卫星多态性。结论ＴＮＦｃ微卫星多态性与术后严重全身感易感性及     

细菌脂多糖对NIH3T3细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响

目的 :探讨细菌脂多糖 (lipopolysaccharide,L PS)对 NIH 3T3细胞增生、胞内游离钙及 c AMP浓度的影响。　方法 :以中性红比色法检测细胞生长 ,酚试剂法检测细胞蛋白质合成 ,并动态检测 L PS对胞内游离钙和 c AMP浓度的影响。　结果 :1微量 L PS可促进细胞生长及蛋白质合成 ;2 L PS作用后 3～ 5 min可使胞内游离钙浓度升高 ,作用 1 m in后使 c AMP浓度升高 ,并保持较高水平。　结论 :胞内游离钙 ([Ca2 ]i)及 c AMP是 L PS对 NIH3T3细胞作用过程中重要的信使分子     

882例小儿肾活检的护理

目的 :为减少肾活检小儿及其家长的顾虑和恐惧心理 ,总结我科 18年来对 882例肾活检患儿的护理经验。　方法 :肾活检采用与 B超引导下“一秒种快速抽吸法”。　结果 :882例患儿成功率达 97.5 % ,有 6 9例患儿( 8.0 % )术后出现了并发症 ,其中肉眼血尿 5 2例 ( 5 .9% )、疼痛 30例 ( 3.4% )、肾包膜下血肿 2 7例 ( 3.1% )、血凝块栓塞 10例 ( 1.1% )、肾动静脉瘘 1例 ( 0 .1% )。　结论 :肾活检术是一项安全而有效的检查手段 ,通过心理护理及术前、术中、术后的护理 ,可减轻肾活检患儿及其家长的顾虑 ,并积极配合穿刺 ,可减少和及时发现并发症     

门静脉高压症患者脾内血管病变及其发病机制的研究

探讨门静脉高压症患者脾内血管病变及其机理。方法对２８例门静脉高压脾脏和１０例正常脾破裂脾脏切除标本,行ＨＥ染色和ＭＡＳＳＯＮ染色,观察血管形态学改变;免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、血管内皮生长因子受体１（Ｆｌｔ－１）的蛋白质表达;原位杂交法检测血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的ｍＲＮＡ表达。     

凡士林纱布压力蒸气灭菌效果的观察与分析

目的 :探讨预真空压力蒸气灭菌器对凡士林纱布的灭菌效果。　方法 :采用美国 AMSCO预真空压力蒸气灭菌器 ,对厚度分别为 2 0层、3 0层、40层、5 0层的凡士林纱布进行灭菌 ,凡士林与纱布重量比例为 3 :1,同时在各种厚度的凡士林纱布的上、中、下中央放入 1cm× 3 cm检样纱条 1条 ,3 M化学指示卡 1条、留点温度计 1支 ,分别记录 3 M化学指示卡和留点温度计测试结果。　结果 :灭菌后检样纱条进行细菌培养 ,2 0层、3 0层中检样纱条灭菌 2次细菌培养均为阴性 ,而 40层、5 0层的检样纱条阴性率分别为 91.7%与 83 .3 % ,各厚度上、中、下化学指示卡变色有差异 ,上层为标准黑 ,中层浅黑色 ,下层为棕色。各层留点温度计检测为 13 2～ 13 5℃ ,其中以上层最高。　结论 :凡士林纱布灭菌可选用预真空压力蒸气灭菌器。对热难于穿透的凡士林纱布 ,经过 2次灭菌程序 ,可保证 3 0层以下凡士林纱布的灭菌效果     

反义核酸对人肺腺癌细胞多药耐药逆转的实验研究

目的　探讨反义核酸对人肺腺癌细胞多药耐药的逆转效果。方法　以mdr1cDNA -9— 6为靶位点 ,合成反义核酸 (ATCCATCCCGACCTC)并用正义链作为对照 (GAGGTCGGGATGGAT) ,通过脂质体将其导入肺腺癌细胞A5 49/R ,分别采用逆转录聚合酶链反应、流式细胞仪、罗丹明试验及药敏试验观察两组细胞的mdr1mRNA、P糖蛋白 (Pgp)表达、罗丹明的聚集和对阿霉素的敏感性。结果　反义核酸处理的细胞mdr1mRNA下降 5 1 2 % ,正义组细胞和对照组细胞无明显变化、反义组细胞Pgp含量明显降低 ,细胞内罗丹明聚集 ,反义组 ,正义组和对照组的阿霉素IC50 分别为 0 0 0 9μg/ml、0 17μg/ml和 0 18μg/ml。 结论　反义核酸具有逆转人肺腺癌多药耐药的作用 ,其作用水平在mRNA或DNA水平 ,使Pgp的表达受到明显抑制 ,对阿霉素的敏感性明显提高。     

人可溶性TRAIL蛋白诱导多种肿瘤细胞的凋亡

探讨原核表达的凋亡激活因子－人可溶性ＴＲＡＩＬ蛋白放导多种肿瘤,尤其实体瘤细胞凋亡的人作用及与Ｐ５３突变的关系。方法ＰＣＲ扩增人ＴＲＡＩＬ密码子１１４－２８１,ＪＦ１１２５大肠杆菌表达,复发并纯化该可溶性片段。免疫组织化学分析各细胞株Ｐ５３的突变。     

儿童肾病合并水痘病毒感染的治疗(附10例报告)

目的 :探讨儿童肾病合并水痘病毒感染的治疗。　方法 :通过 10例肾病患儿合并水痘病毒感染 ,其中微小病变型 3例 ,系膜增殖性肾小球肾炎 6例 ,系膜增殖性伴新月体形成 1例 ,有中、轻度水痘病毒感染 9例 ,重度感染1例 ;用干扰素、阿昔洛韦、丙种球蛋白或血浆、鲜血、血小板悬液治疗 7例。　结果 :9例治愈 ,死亡 1例。 10例患儿实验室检查 lg G、C3、C4均低下。　结论 :肾病患儿免疫功能低下 ,糖皮质激素等免疫抑制剂和细胞毒类药物应用 ,极易感染水痘病毒或使体内静止的水痘病毒重新激活、增殖和扩散 ,从而加重肾的病变 ,严重者可引起死亡 ,故必须采取综合性治疗和预防 ,方能避免肾病患儿感染水痘病毒     

200例糖尿病患者足溃疡预测结果分析

目的 :动态观察、评估糖尿病患者发生足溃疡的危险性 ,为适时采取护理干预措施提供依据。　方法 :采用Gavin“糖尿病患者足溃疡危险因素加权积分表”,对 2 0 0例住院糖尿病患者分 A、B、C、D四组进行预测评分 ,隔天一次 ,直至出院 ,并随访 1 2～ 1 5个月 ,动态评估有糖尿病并发症者、糖尿病足者、糖尿病足溃疡者和无问题足者发生足溃疡的危险性及其发生率 ,同时观察采取干预措施前后的效果。　结果 :2 0 0例中筛查出发生足溃疡低危者 5 1例 ,中危者 1 1 9例 ,高危者 1 8例 ,无危者 1 2例。采取干预措施前已有 1 1例发生足溃疡 ,发生率为 5 .85 %。采取措施后 9例痊愈 ,随访一年中有 1例复发 ,2例发生新溃疡 ,发生率为 1 .5 8% ,明显低于采取措施前的发生率 (P<0 .0 0 5 )。　结论 :对已有并发症的糖尿病患者采取干预措施是延缓足溃疡发生、发展的有效手段。干预措施越早越好 ,从低危者即要开始采取预防教育和预防措施 ,对中危以上者要加大健康教育力度 ,严密观察并教会患者自评自查的方法