用PCR技术对多发性骨髓瘤免疫球蛋白重链基因重排的研究

用ＰＣＲ技术检测了２１例多发性骨髓瘤（ＭＭ）病人外周血或骨髓涂片免疫球蛋白重链基因重排，发现１７例阳性，４例阴性，其中２例为轻链型。外周血免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排的检出率与骨髓涂片的结果基本一致，表明ＩｇＨ基因重排为诊断ＭＭ的最敏感方法之一，可弥补形态学、血清学诊断之不足。     

应用PCR检测石蜡包埋骨髓活检标本B淋巴细胞克隆性增生

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测慢性Ｂ细胞性白血病、多发性骨髓瘤及Ｂ细胞恶性淋巴瘤骨髓浸润的石蜡包埋骨髓活检标本克隆性免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排共１９例，其中１６例检测出ｌｇ基因单克隆性重排，总阳性率为８４％。非肿瘤大致正常骨髓标本和急性粒细胞白血病骨髓标本则出现多克隆性弥漫带或无扩增产物。以上结果表明：石蜡包埋骨髓活检标本来源的ＤＮＡ可用于ＰＣＲ检测单克隆性ＩｇＨ基因重排。     

降钙素基因逆转录巢式PCR及其临床应用价值的研究

目的：建立逆转录巢式（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ）ＰＣＲ方法扩增降钙素（ＣＴ）基因,探讨急性白血病诱导分化前后ＣＴ基因甲基化模式以及在微小残留病灶（ＭＲＤ）诊断中的临床价值。方法提取骨髓单个核细胞（ＢＭＭＣ）中的总ＲＮＡ,用逆转录酶合成ｃＤＮＡ,再以巢式ＰＣＲ扩增含有Ｍ位点的ＣＴ基因片段,并以Ｈｐａ Ⅱ酶切ＰＣＲ扩增终产物,分析ＣＴ基因的甲基化模式。     

提高半巢式PCR特异性探讨

提高半巢式ＰＣＲ特异性探讨金杨季晓辉李玉峰姚（南京医科大学微生物学教研室，南京２１００２９）关键词半巢式ＰＣＲ；Ｂ淋巴细胞白血病；特异性近年来，在巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）的基础上半巢式ＰＣＲ亦有所发展。普通ＰＣＲ需用一对（即两段）引物，巢式ＰＣ...     

多发性骨髓瘤骨髓和外周血IgH基因重排的研究

多发性骨髓瘤（ＭＭ）的恶性克隆缺乏特异免疫表型和基因标志，其克隆起源尚未明确。为了探讨ＭＭ恶性克隆及其前体细胞检测方法，我们采用ＰＣＲ技术分析了ＭＭ骨髓和外周血ＩｇＨ基因重排。１．研究对象：确诊ＭＭ患者４２例，其中ＩｇＧ型２０例，ＩｇＡ型８例，ＩｇＤ型４例，ＩｇＭ型１例，轻链病９例。ＤｕｒＩｅ临床分期：Ⅰ期９例，Ⅱ期１６例，Ⅲ期１７例。另选１０例反应性浆细胞增多症和１２例正常人做对照。２．ＰＣＲ检测：骨髓涂片和外周血基因组ＤＮＡ抽提按常规进行。引物扩增片段为ＩｇＨ第三互补决定区（ＣＤＲ３）序列，…     

一种检测异基因骨移植后供体植活的巢式PCR方法

目的 利用ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２Ｋ＾ｄ）和Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２Ｋ＾ｂ）小鼠Ｈ－２Ｋ等位基因不同,建立一种检测异基因骨髓移植后供体植活的方法。方法 分别以供鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）和受鼠（Ｃ５７ＢＬ／６）及ａｌｌｏ－ＢＭＴ后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ为模板进行巢式ＰＣＲ,并用琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ扩增产物。结果 以供鼠和移植后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ行巢式ＰＣＲ可扩增了约４２１ｂｐ的特异性片段,而未经移植的Ｃ     

系列PCR方法检测淋巴细胞白血病克隆性基因重排的选择应用

以１次、半巢式及多重ＰＣＲ方法扩增５８例淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ克隆性基因重排。结果显示：多重ＰＣＲ和１次ＰＣＲ的敏感度为１０￣（－４）～１０￣（－５）水平；半巢式ＰＣＲ敏感度可达１０￣（－５）～１０￣（－６）水平。ＩｇＨ和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ重排阳性率为６７．２％和６２．０％；半巢式ＰＣＲ检测ＩｇＨ重排阳性率为７０．７％。上述结果表明：多重ＰＣＲ可同时检测两对目的基因，适于初治病例检测，而对缓解病例的检测则需采用敏感度较高的半巢式ＰＣＲ方法。     

PCR扩增IgH和TCRβ基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残…

利用ＩｇＨ和ＴＣＲβ克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于     

白血病中P16基因突变的检测

用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ直接测序和多重ＰＣＲ法，检测了１８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ），１例Ｋ５６２细胞株，９例急性粒细胞性白血病（ＡＭＬ），６例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ），２例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血／培养细胞ＤＮＡ中Ｐ１６基因的点突变和基因缺失。用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ共筛查出５例ＣＭＬ中Ｐ１６基因的异常，突变率为２７．８％（５／１８），对其中１例外显子２异常者经测序证实为第１５１密码子ＣＣＣ→ＣＧＣ的转换，导致Ｐｒｏ→Ａｒｇ的错义突变；并检出１例ＭＭ中Ｐ１６基因外显子３的异常；受检的ＡＬＬ，ＡＭＬ，Ｋ５６２细胞株中，未检出突变。各病例中均未检出Ｐ１６基因的缺失。本文探讨了白血病中Ｐ１６基因突变的意义。     

PCR扩增IgH和TCR_β基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残留病中的应用

利用ＩｇＨ和ＴＣＲ＿β克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ．ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于移植后２个月时ＰＣＲ检测又重新出现阳性，但临床无复发现象。４例对照者ＰＣＲ均为阴性。结果表明ＰＣＲ技术具有简便、快速、敏感、特异性强等优点，在检测微小残留（ＭＲＤ）中具有广阔前景。     

TT病毒感染者外周血单个核细胞中TT病毒的研究

目的 了解ＴＴＶ阳性肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＴＴＶ ＤＮＡ存在及复制情况。方法 采用巢式ＰＣＲ（ｎＰＣＲ）技术和绿豆芽核酸酶消化单链ＤＮＡ方法研究在ＰＢＭＣ中的ＴＴＶ ＤＮＡ存在及复制情况，并克隆测序分析证实。１６例血标本（血清和ＰＢＭＣ）和粪便标本来自北京地坛医院１９９７年１０月～１９９８年１０月住院患者。结果 １６ＴＴＶ阳性肝炎患者ＰＢＭＣ中有１４例ＴＴＶ ＤＮＡ阳性，粪便中有５例     

以LacZ基因标记的大鼠微量残留白血病细胞的分布研究(摘要)

目的　了解微量残留白血病 (ＭＲＬ)在体内的分布状态。方法　利用携带外源性标志基因ＬａｃＺ的白血病细胞株ＬＴ1 2ｎｌ建立了ＢＮ大鼠ＭＲＬ模型。应用逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)及巢式ＰＣＲ方法 ,结合Ｘ ｇａｌ染色法、细胞形态学及病理形态学方法检测ＢＮ大鼠ＭＲＬ阶段白血病细胞中的特异性标志基因ＬａｃＺ。结果　化疗后第 4天肱骨标本中出现阳性条带 ;第6天股骨出现阳性条带 ;第 9天脾脏出现阳性条带 ,肱骨条带的信号明显较前增强。同期Ｘ ｇａｌ检测脾脏阴性。外周血、肝脏持续阴性。结论　ＰＣＲ方法可作为实验性ＭＲ…     

PCR对SSCP检测p53基因杂合性缺失的影响

对比观察了常规ＰＣＲ及半巢式ＰＣＲ对ＳＳＣＰ检测乳腺用ｐ５３基因杂合性缺失的影响。结果显示，半巢式ＰＣＲ能将石蜡包埋组织ｐ５３基因第４外显子ＤＮＡ片段ＰＣＲ扩增成功率由８２．５％提高到１００％，但应用半巢式ＰＣＲ产物对１３例杂合子病人ＳＳＣＰ分析显示，乳腺癌组织ｐ５３基因杂合性缺失由常规ＰＣＲ─ＳＳＣＰ检出阳性６例降低至１例。本研究结果表明，半巢式ＰＣＲ虽能提高ＰＣＲ的敏感性，但由于乳腺癌组织往往混杂有一些正常组织成分，二次ＰＣＲ扩增增加了正常组织ＤＮＡ对肿瘤组织ＤＮＡ的影响，因而不适用于乳腺癌ｐ５３基因杂合性缺失的研究。     

HBV感染者外周血单个核细胞中HBV DNA的检测

目的；研究乙型肝炎毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中ＨＢＶ ＤＮＡ的存在及其与血清ＨＢＶ ＤＮＡ的关系。方法：用ＰＣＲ法及斑点杂交法对５０例ＨＢｓＡｇ（＋）的感染者ＰＢＭＣｓ ＨＢＶ ＤＮＡ进行检测。同时用ＰＣＲ法检测感染者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果：ＰＣＲ法和斑点杂交法分别从３５份和３２份ＰＣＭＣｓ检出率均为６０．０％左右。ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为３６．０％。结论：Ｈ     

应用PCR检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的：检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法：以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果：（１）３４份ＭＬ患者骨髓标本ＩＢＭ检出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ＜０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳性率５７．９％（１１／１９），其中８例Ｂ－ＮＨＬ（８／１４）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排；５例同时还检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，２例Ｔ－ＮＨＬ（２／３）检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，无克隆性ＩｇＨ基因重排；２例免疫分型不明确ＮＨＬ患老中１例（１／２）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，无克隆性ＴＣＲ，基因重排。２例霍奇金病（ＨＤ）和１０例非淋巴系肿瘤骨髓ＩＢＭ均阴性。（３）Ⅲ，Ⅳ期ＮＨＬ患者ＩＢＭ检出率显著高于ＩＩ期（ｐ＜０．０１），初诊未治及复发患者也显著高于部分或完全缓解患者（Ｐ＜０．０１）。（４）ＩＢＭ阳性组ＮＨＬ２年死亡率５４．５％（６／１１），明显高于ＩＢＭ阴性（ｐ＜０．０５）。结论：ＰＣＲ方法检测ＩＢＭ有助于估     

多药耐药基因在淋巴—浆细胞系统恶性肿瘤中的表达及临床意义

本文应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）技术检测急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）２０例，慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）８例，多发性骨髓瘤（ＭＭ）１７例等肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）基因的表达，其中初治２８例，难治复发６例，完全缓解（ＣＲ）１１例。发现ＭＤＲ１基因在ＡＬＬ、ＣＬＬ及ＭＭ中表达阳性率分别为３５．７％，８３．３％及９％。难治复发组明显高于初治及ＣＲ组，三者比较差异显著（Ｐ＜０．０１）。初治ＭＤＲ１基因阴性表达组ＣＲ率（９４．４％）显著低于ＭＤＲ１基因阳性表达组（３０％）（Ｐ＜０．０１）。其结果表明：①淋巴—浆细胞系统恶性肿瘤细胞中ＭＤＲ１发生有原发性和继发性两种形式，其中ＭＭ发生率较低。②淋巴—浆细胞系统恶性肿瘤患者ＭＤＲ１基因表达与肿瘤细胞多药耐药性密切相关，可为临床合理制定化疗方案提供有用的依据。     

FMS癌基因突变的检测及对继发性白血病早期发现的提示

为探讨化疗与ＦＭＳ癌基因突变及这种突变与继发性血病的关系。方法收集５０例妇科肿瘤病人外周血，其中３５例为化疗前的外周血，１５例为化疗后的外周血。应用半巢式ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测其外周血白细胞ＦＭＳ癌基因突变情况。     

非霍奇金淋巴瘤中EB病毒BNLF_1片段及其表达产物的检测及意义

为研究ＥＢ病毒与非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）的关系，采用ＰＣＲ、原位杂交、ＬＳＡＢ（ｌａｂｅｌｉｎｇｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｖｉｎｂｉｏｔｉｎ）免疫组化技术，检测３２例ＮＨＬ和３３例反应性增生淋巴结中的ＥＢＶＢＮＬＦ１基因片段及其表达产物潜伏膜蛋白（ＬＭＰ１）。ＮＨＬ中ＥＢＶＢＮＬＦ１ＰＣＲ扩增阳性率为５３％，明显高于反应性增生淋巴结组２７％（Ｐ＜０．０５），其中５例Ｔ细胞淋巴瘤全部阳性。１７例ＰＣＲ阳性的ＮＨＬ中５例原位杂交阳性。ＬＭＰ１检测仅２例阳性。结果表明本组病例半数以上ＮＨＬ中有ＥＢＶ感染，可能与肿瘤的发生发展有一定关系。     

应用PCR技术检测慢性乙肝病毒性肝病血清及外周血单个核细胞中HBV－DNA

本文应用多聚酶连反应（ＰＣＲ）技术检测了１０４例慢性乙肝病毒性肝病患者血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶ－ＰＮＡ，并与放免法进行了比较。结果显示，ＰＣＲ检测结果更能客观地反应ＨＢＶ在体内存在的状态，在外周血单个核细胞中有ＨＢＶ感染；１０４例慢性肝病患者外周血单个核细胞中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为２８．８％，而血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性的２０例患者有７例ＰＢＭＣ中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ，占３５％。因此，在检测血清ＨＢＶ标志物及ＨＢＶ－ＤＮＡ的同时检测ＰＢＭＣ中的ＨＢＶ－ＤＮＡ可进一步防止ＨＢＶ传播与输血后肝炎的发生。     

半定量RT—PCR方法在基因表达研究中的应用

目的：定量检测Ｂ型内皮素受体（ＥＴＢ－Ｒ）基因在大鼠心、肝、肺、肾等器官及培养的肾小球系膜细胞（ＭＣ）的表达。方法：半定量逆转录－多聚酶链反应技术（ＳｑＲＴ－ＰＣＲ），并以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ＥＰ印迹法作对照。结果：ＥＴＢ－Ｒ基因在上述器官及ＭＣ均有表达，而表达水平依次为肺、心、肾和肝。结论：ＥＴＢ－Ｒ在不同器官有不同水平的基因表达，说明内皮素对不同器官的效应不同；ＭＣ是内皮素在肾内发挥作用的靶细胞