颗粒化日本血吸虫M_r22600抗原对小鼠树突状细胞和CD4~+CD25~+调节性T细胞的作用

目的研究颗粒化日本血吸虫Mr22600抗原对小鼠树突状细胞(DCs)功能的影响及诱导CD4+CD25+调节性T细胞的作用。方法体外实验:分别用Sepharose 4B偶联rSj22.6/26GST抗原与可溶性rSj22.6/26GST抗原负载DCs,流式检测DCs表型变化,混合淋巴细胞增殖实验检测DCs功能。将不同抗原负载的DCs,与CD4+T细胞共培养,流式检测观察对CD4+CD25+Foxp3+T细胞数量的影响。体内试验:将42只BALB/c小鼠随机分6组(每组6～8只),A组免疫Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原,B组免疫福氏佐剂乳化rSj22.6/26GST抗原,C组免疫rSj22.6/26GST抗原,同时设Sepharose4B对照组(D组),福氏佐剂对照组(E组)和PBS对照组(F组),各组均为皮下多点免疫50μg抗原,隔2周加强免疫,共免疫2次。末次免疫后2周处死,无菌取腹股沟淋巴结,制备细胞悬液,流式检测DCs占淋巴结细胞的比例;同时取脾脏,制备成脾脏单个核细胞,流式检测各免疫组CD4+CD25+Foxp3+T细胞占脾细胞的比例。用免疫磁珠分选各免疫组CD4+CD25+T细胞,与CD4+CD25-T细胞共培养,氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测细胞增殖情况。结果体外实验结果显示,DCs经可溶性抗原刺激后表面分子CD40、CD80、CD86表达率分别为(43.5±6.2)%、(37.7±0.1)%和(71.4±1.4)%,经Sepharose4B偶联抗原刺激后表达率分别为(31.2±5.4)%、(32.0±1.6)%和(63.8±1.0)%,与可溶性抗原相比,Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原不能有效刺激DCs成熟。Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原负载DCs可诱导CD4+CD25+调节性T细胞扩增。体内实验结果显示,Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原免疫小鼠可诱导CD4+CD25+调节性T细胞数量增加,且与可溶性抗原组(cpm值为3558±147)相比,Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原组(cpm值为1420±335)来源的CD4+CD25+调节性T细胞的抑制能力更强。结论 Sepharose4B偶联rSj22.6/26GST抗原与可溶性抗原相比,更易诱导CD4+CD25+调节性T细胞,诱导的CD4+CD25+调节性T细胞具有更强的抑制功能,且这一作用可能与不同性状抗原干预DCs的功能状态有关。     

日本血吸虫虫卵抗原诱导CD4+CD25+T细胞及其细胞因子表达

目的 探讨日本血吸虫虫卵抗原诱导宿主免疫应答下调的机制.方法 6～8周龄雌性队LB/c小鼠分为2组,实验组小鼠口服血吸虫虫卵10 000个以及尾静脉注射可溶性虫卵抗原(SEA)200μg,每周免疫1次,共4次;对照组注射PBS.流式细胞仪检测SEA免疫小鼠CD4+CD25+T细胞数量;与CD4+CD25-T细胞共同培养,检测CD4+CD25+T细胞抑制功能;流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞表达IL-4、IL-10与IFN-γ水平;酶联免疫吸附试验检测静脉血IL-10和转化生长因子-β表达水平.结果 实验组小鼠CD4+CD25+T细胞数量为14.7%,对照组为7.4%;实验组IL-10为29.2 pg/ml,对照组为11.0 pg/ml.与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞主要合成IL-10及少量IFN-γ.CD4+CD25+T细胞显著抑制CD4+T细胞增殖. 结论 日本血吸虫虫卵抗原可能通过诱导CD4+CD25+T细胞和IL-10下调机体免疫应答.     

旋毛虫成虫可溶性抗原免疫小鼠攻击感染后的免疫应答

目的　探讨旋毛虫成虫可溶性抗原 (AWSAg)接种小鼠后诱发的免疫应答。　 方法　制备旋毛虫AWSAg免疫小鼠 ,分别于攻击感染后 7、14、2 1、2 8和 3 5d ,动态观察免疫小鼠特异性IgG抗体水平、IL 2水平和T淋巴细胞亚群的变化。　结果　与非免疫鼠相比 ,免疫鼠血清特异性IgG抗体OD值在攻击感染后 7d明显升高 ,在观察期内一直高于非免疫鼠。感染后 7dIL 2水平明显增高 ,达观察期内最高值 ,2 1d后才逐渐减少 ,在感染后 2 8～ 3 5d仍高于正常组。免疫鼠CD4+ T细胞在攻击感染 7d明显增加并保持不变 ,非免疫鼠CD4+ T细胞及CD4/CD8比值明显较正常鼠减低。　结论　旋毛虫AWSAg免疫小鼠攻击感染后 ,出现细胞、体液免疫应答。     

日本血吸虫可溶性成虫抗原及虫卵抗原对CD4+ T 细胞分化的影响

目的 目的 观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原 （SWA） 及虫卵抗原 （SEA） 在诱导CD4+ T细胞分化中的不同作用。 方法 方法 分别用SWA、 SEA免疫C57BL/6小鼠后分离脾细胞， 或用SWA、 SEA体外刺激正常小鼠来源的脾细胞后， 采用流式细胞术 （FCM） 检测脾细胞中产生IFN?γ及IL?4的细胞比例， 以及CD4+ T细胞中Th1、 Th2细胞亚群的比例。 结果 结果 SWA比SEA更能优势诱导CD4+ T细胞产生IFN?γ （P < 0.05），SEA比SWA更能优势诱导CD4+ T淋巴细胞产生IL?4 （P < 0.05）。结论 结论 SWA较SEA更能优势诱导Th1细胞分化， SEA较SWA更能优势诱导Th2细胞分化。     

环孢素A对感染旋毛虫小鼠的免疫调节作用

目的观察环孢素A(CsA)对感染旋毛虫小鼠免疫功能的影响。方法小鼠腹腔注射环孢素A感染旋毛虫后,分别采用ELISA和流式细胞仪检测小鼠不同时期外周血中IL-2含量、CD4+及CD8+T淋巴细胞的百分率。结果(1)单纯感染旋毛虫小鼠感染后1~5周IL-2的含量较正常组明显增加;注射CsA组小鼠感染后1周IL-2的含量较单纯感染组明显降低,感染后2~4周IL-2的含量与单纯感染组相比无明显差异,但仍高于正常组。(2)单纯感染旋毛虫小鼠感染后1~4周,CD4+T淋巴细胞较正常组明显减少,CD8+T淋巴细胞明显增多,CD4+/CD8+比值明显下降;注射CsA组小鼠CD4+T淋巴细胞细胞较单纯感染组明显减少,而CD8+T淋巴细胞无明显变化。结论CsA对感染旋毛虫小鼠具有一定的免疫调节作用。     

日本血吸虫虫卵抗原诱导CD4+CD5+T细胞及其细胞因子表达

目的 探讨日本血吸虫虫卵抗原诱导宿主免疫应答下调的机制.方法 6～8周龄雌性队LB/c小鼠分为2组,实验组小鼠口服血吸虫虫卵10 000个以及尾静脉注射可溶性虫卵抗原(SEA)200μg,每周免疫1次,共4次;对照组注射PBS.流式细胞仪检测SEA免疫小鼠CD4+CD25+T细胞数量;与CD4+CD25-T细胞共同培养,检测CD4+CD25+T细胞抑制功能;流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞表达IL-4、IL-10与IFN-γ水平;酶联免疫吸附试验检测静脉血IL-10和转化生长因子-β表达水平.结果 实验组小鼠CD4+CD25+T细胞数量为14.7%,对照组为7.4%;实验组IL-10为29.2 pg/ml,对照组为11.0 pg/ml.与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞主要合成IL-10及少量IFN-γ.CD4+CD25+T细胞显著抑制CD4+T细胞增殖. 结论 日本血吸虫虫卵抗原可能通过诱导CD4+CD25+T细胞和IL-10下调机体免疫应答.     

EB病毒感染所致肝脏损伤患者病毒特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞功能分析

目的分析EB病毒(EBV)感染者中发生肝脏损伤和未发生肝脏损伤患者病毒特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞功能的差异。方法入组45例EBV感染者, 28例发生肝脏损伤,17例未发生肝脏损伤。分离外周血单个核细胞, 纯化CD4+T细胞和CD8+T细胞, 使用重组EBV核心抗原2(EBNA2)刺激培养96 h。细胞技术试剂盒法检测细胞增殖, 流式细胞术检测CD4+T细胞和CD8+T细胞比例。酶联免疫吸附试验检测CD4+T细胞分泌细胞因子和CD8+T细胞分泌毒性分子水平, 实时定量PCR法检测CD4+T细胞亚群转录因子mRNA水平和CD8+T细胞中毒性分子mRNA水平, 流式细胞术检测CD8+T细胞中免疫检查点分子水平。组间比较采用t检验或Mann-Whitney检验。结果重组EBNA2刺激后外周血单个核细胞增殖、CD4+T细胞和CD8+T细胞比例在EBV感染无肝脏损伤组和EBV感染致肝脏损伤组之间的差异无统计学意义(P > 0.05)。重组EBNA2刺激后CD4+T细胞分泌相关细胞因子比例和转录因子mRNA水平在EBV感染无肝脏损伤组和EBV感染致肝脏损伤组之间的差异无统计学意义(P...     

日本血吸虫感染ICR小鼠后Tc1和Tc2细胞的动态观察及其功能分析

目的 目的 观察日本血吸虫感染ICR小鼠后不同时期T淋巴细胞中杀伤性T细胞 （Tc） 亚型Tc1和Tc2比例的动态变化, 并分析两者分别与Th1和Th2细胞比例变化的相关性。 方法 方法 分别取日本血吸虫感染0、 3、 5、 8、 13周的小鼠脾脏淋巴细胞, 采用流式细胞术检测各个时期Tc1、 Tc2和Th1、 Th2细胞亚群分别占T淋巴细胞的比例。 结果 结果 与0周对照比较, 感染3、 5、 8、 13周小鼠T淋巴细胞中Tc1细胞比例显著增高 （P均< 0.01）, 感染5、 8、 13周小鼠T淋巴细胞中Tc2细胞比例显著增高 （P均< 0.01）。比较Tc1和Tc2细胞比例在相同时间点的增速发现, 感染3周时Tc1细胞比例增高最显著, 而感染5周时Tc2细胞比例的增高最显著。感染各个时间点CD3+ T细胞中的Th1细胞比例与Tc1细胞比例平行增长, 且两者呈正相关（r = 0.978, P = 0.004）; CD3+ T细胞中的Th2细胞比例与Tc2细胞比例平行增长, 且两者呈正相关 （r = 0.974, P = 0.005）。体外可溶性成虫抗原 （SWA） 刺激脾细胞可优势增加T淋巴细胞中的Tc1细胞比例 （P < 0.01）, 而可溶性虫卵抗原 （SEA） 刺激脾细胞可优势增加T淋巴细胞中的Tc2细胞比例 （P < 0.01）。 结论 结论 日本血吸虫感染不同阶段, 小鼠T淋巴细胞中的Tc1 和Tc2细胞比例均显著升高, 并分别与Th1和Th2细胞比例呈正相关。在感染3周时主要以Tc1细胞比例升高为主, 而感染 5周时主要以Tc2细胞比例升高为主。SWA可优势诱导Tc1细胞, 而SEA可优势诱导Tc2细胞。     

流式细胞术测定感染旋毛虫小鼠免疫功能的研究

目的观察感染旋毛虫小鼠免疫功能的动态变化.方法采用流式细胞术分别检测感染旋毛虫后7、14、21、28、35d小鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分率.结果实验组较正常组CD4+T细胞减少,CD8+T细胞增多,CD4+/CD8+细胞比值下降(P＜0.05),以感染后第14d最明显,直到感染后35d仍未见恢复.结论感染旋毛虫的小鼠出现免疫抑制现象,感染急性期的免疫抑制程度最高.     

日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原对CD4~+ T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响

目的观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)、可溶性虫卵抗原(SEA)对小鼠CD4+T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响。方法以免疫磁珠分选正常小鼠脾细胞中的CD4+T淋巴细胞后,与羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记的抗原递呈细胞共培养,并分别以PBS、SWA、SEA刺激。36h后以流式细胞术(FCM)结合caspase-3荧光抗体标记技术检测CD4+T淋巴细胞的凋亡水平;96h后以碘化丙锭染色结合FCM分析CD4+T淋巴细胞周期分布情况。结果凋亡分析结果显示,经SEA和SWA刺激后,外周CD4+T细胞的凋亡百分比分别为(1.24±0.29)%和(1.52±0.38)%,两者差异无统计学意义(P0.05)。细胞周期分析表明,SWA组处于G1期、S期和G2/M期的细胞百分比分别为(78.91±2.98)%、(7.39±0.85%)和(10.69±1.05)%;与之相比,SEA组G1期细胞百分比[(59.42±1.32)%]显著降低,S期[(21.07±0.88)%]和G2/M期[(18.88±1.21)%]显著增加,差异均有统计学意义(P均0.01)。结论SWA、SEA均可诱导CD4+T淋巴细胞凋亡,SEA促进CD4+T淋巴细胞进入分裂周期的作用更明显。     

旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的　比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法　收集人工感染大鼠小肠内的成虫, 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠, 间隔１ 周共免疫３ 次, 末次免疫后１ 周, 每只小鼠攻击感染１００ 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后１ 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力, 感染后５ 周检查肌肉幼虫负荷。结果　成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为７９５５ ％ 、６２２５ ％ 和６５０ ％ 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是９７２７ ％ 、８６６０ ％ 和９００ ％ 。结论　实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力, 但后者的免疫原性更强。     

感染旋毛虫小鼠的细胞因子和T淋巴细胞亚群的动态变化

目的：探讨感染旋毛虫小鼠的细胞免疫调节作用。方法：将小鼠分为重感染组、轻感染组及对照组，于感染后不同时间随机取脾细胞制备悬液，分别以旋毛虫抗原及ＣｏｎＡ刺激后，检测白细胞介素ＩＬ－２及ＩＬ－６的活性、ＩｇＧ抗体水平以及ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ细胞含量。结果：感染早期脾细胞以ＩＬ－２的分泌为主，而感染晚期以ＩＬ－６为主，重感染组比轻感染组的ＩＬ－２与ＩＬ－６分泌多。感染后７ｄ血清中出现ＩｇＧ抗体，２８－３５ｄ达高峰；感染后１４－２１ｄ，ＣＤ４＋含量逐渐减少，２１ｄ后又逐渐上升，而ＣＤ８＋的含量却持续增多。结论：感染４ｗｋ后，ＩＬ－６的诱生水平持续增高，可能对旋毛虫病的获得性免疫起重要作用。ＩＬ－２活性与ＣＤ８＋Ｔ细胞百分率的增高，可能提示Ｔｈ１产生的细胞因子促进ＩＬ－２活性与ＣＤ８＋Ｔ细胞活化。     

感染旋毛虫大鼠免疫功能的动态观察

目的　观察感染旋毛虫大鼠免疫功能的动态变化。　方法　采用免疫组化的方法分别检测感染旋毛虫后 7、14、21、28、35、60 d大鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞的百分率,并同时用酶联免疫吸附试验测定IgE水平。　结果　实验组较对照组CD4+T细胞减少, CD8+T细胞增多,CD4+/CD8+比值下降(P<0.01),以感染后第14 d最明显,直到感染后60 d仍未见恢复;大鼠外周血中IgE水平在感染旋毛虫后7 d增加,21 d达到高峰。　结论　感染旋毛虫的大鼠出现免疫抑制现象,感染急性期的免疫抑制程度最高,感染大鼠的免疫抑制主要发生在成虫产新生蚴及新生蚴移行期。IgE是大鼠旋毛虫感染急性期重要的抗体。     

旋毛虫DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的研究

目的　观察旋毛虫DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法　将旋毛虫肌幼虫编码 31kDa抗原结构基因真核表达质粒pcDNA3-TspE1分别用肌肉注射和基因枪免疫BALB/c小鼠 ,免疫血清用旋毛虫肌幼虫冰冻切片及石蜡切片抗原进行IFAT检测 ,并用旋毛虫肌幼虫可溶性抗原进行Westernblot分析。结果　IFAT表明 pcDNA3-TspE1接种BALB/c小鼠后产生的免疫血清与旋毛虫肌幼虫可产生阳性反应 ,在肌幼虫冰冻及石蜡切片上均显示黄绿色荧光。Westernblot检测结果显示 ,pcDNA3-TspE1接种小鼠后产生的免疫血清只能识别旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中的 31kDa抗原组分 ,而 pcDNA3质粒接种小鼠后的血清不能与旋毛虫肌幼虫可溶性抗原发生免疫反应。结论　旋毛虫DNA疫苗 pcDNA3-TspE1能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。     

Trichinella spiralis antigens prime mixed Th1/Th2 response but do not induce de novo generation of Foxp3+ T cells in vitro

Many parasitic helminth infections induce Th2-type immune responses and engage the regulatory network. In this study, we specifically investigated the influence of antigens derived from different life stages of the helminth Trichinella spiralis on the polarization of naive CD4(+) T cells by dendritic cells. Results obtained from C57BL/6 mice showed that T. spiralis derived antigens have the capacity to induce bone marrow-derived dendritic cells to acquire an incompletely mature phenotype that promotes a significant proliferation of naive CD4(+) T cells and a mixed Th1/Th2 cytokine profile with the predominance of Th2 cytokines. Increased production of IL-4, IL-9, IL-10 and IL-13 accompanied increased IFN-γ. Furthermore, dendritic cells pulsed with T. spiralis antigens did not induce an increase in the population of Foxp3(+) T regulatory cells. Although other helminth antigens have demonstrated the capacity to induce de novo generation of Foxp3(+) T regulatory cells, here our in vitro studies provide no evidence that T. spiralis antigens have this capacity.     

Activated CD8+ T cells contribute to clearance of gastric Cryptosporidium muris infections

The role of CD4+ and CD8+ T lymphocytes in the development of a protective immune response against Cryptosporidium muris infection was studied by the reconstitution of severe combined immunodeficient (SCID) mice with well-defined populations of either naive or immune CD8+ or CD4+ T lymphocytes. Adoptive transfer of both naive and immune CD4+ T lymphocyte subpopulations protects SCID mice against cryptosporidiosis. Moreover, a significant biological impact of activated CD8+ T cells against gastric cryptosporidiosis was observed. The significant difference in the course and intensity of the infection in reconstituted SCID mice was found to be dependent on the protective function of both the CD4+ and CD8+ T-cell populations transferred. While SCID mice reconstituted with either immune or naive CD4+ or immune CD8+ T-cell subpopulations resolved the infection within 29, 37 and 51 days post-infection, respectively, those reconstituted with naive CD8+ T cells suffered from chronic infection similar to control SCID mice. Reconstitution with CD4+ T cells resulted in suppression of oocyst excretion and shortening of patent period in comparison with SCID mice reconstituted with CD8+ T cells. Thus, although CD4+ T cells are considered important in protective immunity, our results are the first to demonstrate the involvement of activated CD8+ T lymphocytes in the protection of mice against gastric cryptosporidiosis.     

Immune control of food intake: enteroendocrine cells are regulated by CD4+ T lymphocytes during small intestinal inflammation

BACKGROUND AND AIMS: Gastrointestinal inflammation reduces food intake but the biological mechanisms explaining suppressed feeding during inflammation are unknown. We have used a model of upper gut infection (Trichinella spiralis in the mouse) to study the effect of inflammation on food intake, and explored the role of a key enteroendocrine cell (EEC) in the regulation of feeding by the immune response. METHODS: Food intake of NIH mice infected with the intestinal nematode Trichinella spiralis was measured. Duodenal cholecystokinin (CCK) cells were counted. Plasma CCK was measured. Infected mice were treated with a specific CCK1 receptor antagonist, and food intake reassessed. The influence of the immune response on food intake and CCK was mechanistically examined by treating mice with CD4 or mast cell neutralising antibodies. The role of the T helper 2 response was further explored in mice genetically deficient for interleukin (IL)-4, IL-13, or IL-4Ralpha (receptor alpha subunit). RESULTS: Food intake of infected mice was significantly reduced at the temporal peak of intestinal inflammation. CCK expressing EEC were upregulated in infected mice, and plasma CCK levels were increased. A CCK1 receptor antagonist restored the food intake of infected mice to a significant degree. Furthermore, suppression of food intake was completely abolished in the absence of CD4+ T lymphocytes or IL-4Ralpha. CONCLUSIONS: The data show for the first time that intestinal inflammation results in reduced food intake due to upregulation of CCK. Moreover, following infection, food intake and CCK expressing cells are under the specific control of CD4+ T-cells, via release of IL-4 and IL-13.