功率密度对激光诱导之VSMC凋亡率的影响

目的 :通过激光照射诱导体外培养血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)凋亡 ,观察能量密度相同时功率密度与ＶＳＭＣ凋亡率的关系 ,为将激光诱导细胞凋亡的方法用于血管成形术后再狭窄的防治提供实验依据。材料与方法 :组织贴块法培养兔主动脉平滑肌细胞 ,透射电镜上观察ＶＳＭＣ胞浆内肌丝及密体 ,鉴定ＶＳＭＣ。实验采用第四代细胞。将能量密度确定为 10 0、2 0 0、30 0、40 0Ｊ/ｃｍ2 ,以功率密度分别为 10 0、2 0 0、30 0ｍＷ/ｃｍ2 予波长 5 10 6ｎｍ铜蒸气激光照射。照光后 2 4ｈ取材 ,制作细胞涂片 ,以ＤＮＡ末端标记法 (ＴＵＮＥＬ)标记ＴＵＮ…     

UV-C诱导体外平滑肌细胞凋亡的相关信号机理的研究

为观察经ＵＶＣ照射诱导的体外凋亡动脉中膜平滑肌细胞(ＳＭＣ)内Ｃａ2+浓度及ａｃｔｉｎ表达的变化,应用ＳＰ免疫组织化学技术和图像分析技术检测凋亡ＳＭＣ内ａｃｔｉｎ的表达;应用粘附细胞分析及筛选激光细胞仪观察凋亡ＳＭＣ内Ｃａ2+浓度的变化。结果:ＵＶＣ照射后,ＳＭＣ出现典型的凋亡形态学和生化指标上的改变。ＵＶＣ动态照射10ｍｉｎ引起胞浆内Ｃａ2+浓度的快速升高;并引起照射后不同时期ＳＭＣ中Ｃａ2+浓度的持续升高。凋亡ＳＭＣ内ａｃｔｉｎ表达较正常大大加强,并出现从胞内向核周、从胞内向核内的迁移和再分布。据此认为:Ｃａ2…     

放射线诱导RSV转化神经细胞凋亡的研究

本文首次尝试以凋亡为指标研究ＲＳＶ (Ｒｏｕｓｓａｒｃｏｍａｖｉｒｕｓ)转化的大鼠神经细胞Ｒ2的放射效应特点 ,现报告如下。一、材料和方法1 细胞培养方法 :Ｒ2细胞系为中国医学科学院基础所提供。使用ＤＭＥＭ培养基 ,其中含有 10 %的小牛血清 ,每毫升各 10 0单位的青、链霉素及 15ｍｇ %的谷氨酰胺。于 5 %ＣＯ2 (ｖ/ｖ)空气的培养箱中密闭培养 ,0 2 5 %胰酶消化传代。照射时选择处于指数增殖期的细胞 (换液后 2 4ｈ)。2 Ｘ射线照射 :使用Ｖａｒｉａｎ直线加速器产生的 6ＭｅＶＸ射线进行照射 ,剂量率为 2 5 0ｃＧｙ/ｍｉｎ ,源皮距…     

宁夏42台医用诊断X射线机质量控制检测结果

笔者以大肠癌细胞ＳＷ1116为对象 ,研究其放射敏感性 ,以便指导临床治疗 ;同时观察大肠癌细胞ＳＷ1116受照后的细胞周期变化 ,为综合治疗中有目的地选择细胞周期特异性的化疗药物提供理论依据。一、材料和方法1 细胞培养 :ＳＷ1116细胞由本所细胞室提供。采用含10 %小牛血清的ＰＲＭＩ16 40培养基 ,在 37℃ ,饱和湿度 ,5 %ＣＯ2 培养箱中培养。2 照射方法 :采用Ｓｉｅｍｅｎｓ直线加速器 ,6ＭＶＸ射线照射 ,照射野 10ｃｍ× 10ｃｍ ,源皮距 10 0ｃｍ ,吸收剂量率为 2 0 0ｃＧｙ ｍｉｎ ,皿上覆盖 1 5ｃｍ厚的补偿块。3 细胞存活率测定 :取…     

60Co放射线照射对培养血管内皮细胞通透性的影响

为深入探讨放射线辐照对血管内皮细胞通透性影响及炎细胞浸润的分子机理 ,建立能定量评价内皮细胞通透性变化的细胞模型是必要的前提。本实验以培养的血管内皮细胞ＥＣＶ3 0 4为对象 ,用培养小室法 ,观测视黄酸诱导的单核样ＨＬ 6 0细胞在受照单层内皮细胞上的粘附及迁移变化。一、材料和方法1 细胞培养与辐照 :①ＨＬ 6 0细胞的诱导 :细胞于含10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 16 40培养液中 ,37℃ ,体积分数为0 5 %ＣＯ2 条件下培养至 1× 10 5个 ｍｌ,加入视黄酸 ,使终浓度达 5× 10 - 3 ｍｍｏｌ Ｌ ,继续培养 3ｄ ,用于实验。②ＥＣＶ3 0 4细胞…     

血啉甲醚PDT处理后血管平滑肌细胞增殖特性的研究

本研究通过固定平滑肌细胞ＰＤＴ作用后的存活率 ,测定了ＰＤＴ作用后第 2 4小时的平滑肌细胞的增殖细胞核抗原(ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＰＣＮＡ)表达情况 ,拟对血啉甲醚的ＰＤＴ作用于存活细胞的特点作一初步分析。方法 :平滑肌细胞培养经 0 2 5 %胰酶消化接种于 2 5ｍｌ培养瓶中 ,用ＤＭＥＭ培养基将血啉甲醚分别稀释成 15 μｇ/ｍｌ和 6 0 μｇ/ｍｌ,用其置换掉含 10 %新生牛血清ＤＭＥＭ培养液 ,置于ＣＯ2 培养箱 1ｈ。去掉含血啉甲醚的ＤＭＥＭ液 ,Ｈａｎｋ氏液冲洗两遍 ,加入新的培养液。…     

WR-1065对不同辐射敏感性人肿瘤细胞的保护作用

目的 :研究抗辐射药 WR- 10 6 5对两种不同辐射敏感性的人恶性胶质瘤细胞系的辐射防护作用。方法 :M0 5 9J和 M0 5 9K恶性胶质瘤细胞系来源于同一肿瘤标本的不同部位 ,M0 5 9J和啮齿类 xrs5突变体细胞为辐射敏感型及双链断裂 (DSB)修复缺陷型细胞 ,而 M0 5 9K和野生型 CHO- K1细胞为抗辐射型细胞。 M0 5 9J和 M0 5 9K细胞在 DMEM/ F12培养基中培养 ,当细胞达到 80 %～ 90 %汇合时分瓶 ,每瓶重新接种 3× 10 5 细胞。两种细胞在Mc Coy′s 5 A培养基中培养 ,当细胞达到 80 %～ 90 %汇合时 ,再分瓶 ,每瓶重新接种 2× 10 6 细胞。…     

TUNEL与PI双染流式细胞术在细胞周期与细胞凋亡检测上的应用

电离辐射对细胞凋亡和细胞周期的各自影响已见诸多报道。但采用一种方法对凋亡和周期同时进行定量检测的流式细胞术 ,目前在国内尚未见报道。笔者将ＴＵＮＥＬ与ＰＩ染色的方法加以结合 ,借以探讨这一新方法以及该方法所揭示出凋亡与周期阻滞的内在关系。一、材料和方法1 细胞株 :ＨｅＬａＳ3细胞株 ,由卫生部放射生物学重点实验室提供 ,培养基为ＲＰＭＩ 1 640 (含 1 0 %胎牛血清 ) ,在 5 %ＣＯ2 、37℃培养箱中培养至指数生长期 ,以 1× 1 0 6细胞 孔接种于 6孔培养板中 ,按照射后时间分组 ,每组 6个样本。2 照射条件 :国产深部Ｘ射线…     

细胞增殖状态及细胞周期分布对激光诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :探讨细胞的增殖状态及细胞周期分布对体外培养的血管平滑肌细胞凋亡的激光诱导率的影响。方法 :组织贴块法培养兔胸主动脉平滑肌细胞 ,实验取第四代细胞。饥饿法同步化后 ,随机分为三组 :(1) 10 %新生牛血清 (ＮＣＳ)组 ,(2 )ＰＤＧＦ组 ,(3) 4 0 %胎牛血清 (ＦＢＳ)组。各组加入相应的生长因子作用 16ｈ之后 ,ＭＴＴ比色法检测增殖代谢状况 ,流式细胞仪 (ＦＣＭ)检测细胞的周期分布情况 ,5 10 6ｎｍ的铜蒸汽激光照射后 ,ＴＵＮＥＬ法计数细胞凋亡率。结果 :ＭＴＴ法检测 40 %ＦＢＳ组 5 70ｎｍ处的吸光值最高 ,ＰＤＧＦ组次之 ,10 %…     

CO_2激光照射治疗女阴瘙痒症

ＣＯ2 激光扩束照射治疗女阴瘙痒症 10 9例 ,ＣＯ2 激光输出功率 30Ｗ ,光斑直径 10 0ｃｍ ,照射距离 5 0ｃｍ ,照射时间 10～ 15ｍｉｎ ,每日或隔日 1次 ,一般照射 3次即有效。随着照射次数增加症状逐渐改善 ,有效率 97 9%。操作方法简便 ,治疗时患者局部感觉舒适 ,无副作用 ,易为病人接受。CO_2激光照射治疗女阴瘙痒症@程洪葆$浙江嘉兴市妇幼保健院!314000     

波长510.6 nm铜蒸气激光诱导兔血管平滑肌细胞凋亡的照射剂量筛选

目的　筛选对离体培养的兔血管平滑肌细胞 (VSMC)能诱导出较高凋亡率的激光照射剂量参数。方法　取离体培养的第 4代兔VSMC ,予波长 5 10 6nm铜蒸气激光照射 ,照射剂量为功率密度 10 0、2 0 0、30 0mW cm2 ,能量密度10 0、15 0、180、2 0 0、2 10、30 0J cm2 。脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL)标记检测各照射剂量组细胞凋亡率。结果　与对照组比较 ,各照射组VSMC凋亡率明显增高 ,达对照组凋亡率的 2 9～ 14 7倍 (P <0 0 5 )。以功率密度 30 0mW cm2照射 6 6 7s照射组之VSMC凋亡率最高 ,达 30 %。结论　以波长 5 10 6nm、功率密度 30 0mW cm2 铜蒸气激光照射兔VSMC 6 6 7s可诱导发生较高的细胞凋亡率     

Caspase-3基因在凋亡HL-60细胞及肿瘤细胞中的表达

目的　明确ｃａｓｐａｓｅ３ 基因在凋亡前后ＨＬ６０ 细胞及不同肿瘤细胞系中的表达特性。方法　用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交技术检测γ射线诱发的凋亡前后ＨＬ６０ 细胞和６ 种肿瘤细胞中ｃａｓｐａｓｅ３ 的ｍＲＮＡ。结果　ｃａｓｐａｓｅ３ 基因在白血病细胞株ＨＬ６０ 、ＣＥＭ 和Ｋ５６２ 细胞及视母细胞瘤细胞ＳＨＳＹ５Ｙ 中表达高于宫颈癌细胞ＨｅＬａ 及乳腺癌细胞ＭＣＦ７ ;在凋亡ＨＬ６０ 细胞表达高于未照射对照ＨＬ６０ 细胞。结论　ｃａｓｐａｓｅ３ 表达水平与细胞寿命、对辐射敏感性及细胞凋亡的发生有关。     

鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性的异质性及其机理探讨

目的　进一步证实人鼻咽癌细胞系CNE 2Z确实存在着放射敏感性的异质性 ,并探讨其有关机理。方法　观察人鼻咽癌细胞系CNE 2Z亚克隆株H5和S1的裸鼠移植瘤放射敏感性的不同 ;用流式细胞仪、荧光显微镜、Western blot检测H5和S1凋亡能力的不同及凋亡相关蛋白表达的差异 ;用3H掺入法说明DNA合成抑制率与放射敏感性的不同 ;用RT PCR观察相关癌基因 (fas、p5 3)的表达与放射敏感性的关系。结果　鼻咽癌细胞系CNE 2Z中确实存在放射敏感性的异质性 ,H5、S1两种细胞的凋亡率都随着照射后时间的延长而增加 ,但H5比S1高且差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。两种细胞的DNA合成率于放射前无差别 ;照射后都较放射前受到抑制 (P <0 0 5 ) ,H5受抑制程度大 (P <0 0 5 )。H5与S1细胞fas、p5 3基因的表达差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论　本实验再次证实了鼻咽癌细胞系CNE 2Z确实存在放射敏感性异质性 ,并证实了其异质性的机理与细胞受射线照射后引起凋亡的能力不同有关、与DNA合成的抑制率成正相关、与癌基因fas、p5 3的表达无关。     

DNA损伤在电离辐射诱导凋亡中的重要性:重度联合免疫缺陷突变和DNA倍体对小鼠淋巴细胞系辐射敏感性的影响

目的 :通过研究重度联合免疫缺陷 ( scid)突变和 DNA倍体对电离辐射诱导小鼠淋巴细胞系凋亡敏感性的影响 ,判定 DNA损伤是否是凋亡的关键始动因子。方法 :采用γ射线 ( 1 3 7　 Cs,剂量率约为 0 .9Gy/ min)或DNA相关的 1 2 5 　 I衰变 (细胞在培养基内培育约 2 4小时 ,其中含 5 0～ 10 0 Bq/ m l的 1 2 5 　 I-碘代脱氧尿苷 )比较野生型及 scid纯合或杂合突变小鼠前 B和前 T细胞系在照射后致死的敏感性和凋亡产生速率。用小鼠前 T细胞系假 2倍体和倍体克隆研究 DNA倍体的不同对细胞的辐射敏感性和凋亡的影响。应用荧光显微镜观察凋…     

低剂量辐射诱导小鼠红细胞免疫及2,3-DPG、SOD适应性反应

笔者在本实验中用不同剂量⁶⁰Coγ射线照射人食管癌细胞系Eca-109,研究照射前后癌细胞的凋亡率的变化和检测凋亡相关基因p53、bcl-2和bax的表达,探讨放射诱导食管癌细胞凋亡的分子机理。     

MAPK信号转导途径参与bFGF抑制辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的作用

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对辐射诱导的血管内皮细胞凋亡的作用及其信号转导途径。方法　以6 0 Coγ射线照射建立原代分离培养的人脐带静脉内皮细胞凋亡模型 ,以流式细胞术 (Annexin V FITC +PI标记 )评价细胞凋亡率。观察不同浓度的bFGF和MEK的抑制剂U0 12 6对细胞凋亡的影响。结果　bFGF对辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡有明显的抑制作用 ,细胞凋亡率可从 (35 2 2± 5 5 ) %降至 (11 6 7± 3 8) % ,而U0 12 6可部分阻断bFGF的抗凋亡作用 ,细胞凋亡率由 (10 5 9± 1 6 ) %升至 (17 96± 1 4 ) %。结论　bFGF可能通过MAPK信号转导途径抑制辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡。     

60Coγ射线对淋巴瘤患者淋巴细胞增殖的影响及机理

淋巴瘤 (ｌｙｍｐｈｏｍａ)是临床上常见的一种恶性肿瘤 ,严重危害人们身体健康 ,笔者用6 0 Ｃｏγ射线照射淋巴瘤患者淋巴细胞 ,观察其作用的机理。一、材料和方法1 材料 :16 4 0培养基 (ｓｉｇｍａ)、小牛血清 (Ｇｉｂｃｏ)、胰蛋白酶 (ｓｉｇｍａ)、流式细胞仪 (美国Ｂ .Ｄ公司 )、6 0 Ｃｏγ射线 (本院提供 )、ｐ2 7抗体 (ｓｉｇｍａ)。2 方法 :取 10例初诊淋巴瘤患者静脉血 2ｍｌ,加入Ｆｉ ｃｏｌｌＨｙｐａｑｕｅ分取液于试管内 ,室温离心 ,吸出淋巴细胞在5 %ＣＯ2 、37℃温箱培养 ,细胞培养后分别接受 2、4、8ｃＧｙ6 0 Ｃｏγ射线…     

低强度激光照射诱导大鼠胸主动脉金属硫蛋白的生成

目的 :观察低强度激光照射对大鼠胸主动脉金属硫蛋白(ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ ,ＭＴ)生成的影响 ,以探讨激光照射的细胞保护机理。方法 :选用 3、6、1 2Ｊ ｃｍ2 3个剂量低强度激光对体外孵育的大鼠胸主动脉进行照射。采用竞争性ＲＴ ＰＣＲ法测定胸主动脉内ＭＴ的ｍＲＮＡ水平 ,以1 0 9Ｃｄ牛血红蛋白饱和法测定ＭＴ的含量。结果 :经 3、6、1 2Ｊ ｃｍ2 的激光照射后 ,血管的ＭＴ1ｍＲＮＡ水平分别比对照组增加 1 75 % (Ｐ >0 0 5)、41 8 6 % (Ｐ <0 0 5)和 668 2 % (Ｐ <0 0 1 ) ;ＭＴ2ｍＲＮＡ水平分别比对照组增加1 63 9(Ｐ …     

3例60Co源辐射事故病人循环内皮细胞的动态变化

本文作者就河南“4 2 6”辐射事故中 3例病人外周血中循环内皮细胞 (ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ,ＣＥＣ)数的动态变化作如下报道。一、材料和方法1 受照者和受照剂量 :“梅”女性 ,38岁 ;“天”男性 ,37岁 ,“旺”男性 ,8岁 ,为同一家庭成员 ,生物剂量分别为 5 6 1Ｇｙ、2 6 8Ｇｙ和 2 48Ｇｙ。2 检查指标和方法 :参照Ｈｌａｄｏｖｅｃ[1 ] 法检测ＣＥＣ。静脉抗凝新鲜血 3ｍｌ,395Ｇ离心 2 0ｍｉｎ ,取上层液加入ＡＤＰ ,充分混匀 ,再以 395Ｇ离心 2 0ｍｉｎ ,取上层液 2 10 0Ｇ离心 2 0ｍｉｎ ,弃上层 ,取…     

β射线对血管内皮细胞的影响

目的　探讨血管再狭窄防治中 β射线对血管内皮细胞的影响。 方法　培养人脐静脉内皮细胞接受 β射线照射 2 5 ,5 0 ,10和 2 0Gy后 ,以MTT比色法分析细胞增殖反应 ,采用透射电镜进行超微结构观察和使用流式细胞仪进行DNA倍体分析以及凋亡率分析。结果　经 2 5 ,5 0 ,10和2 0Gy照射后 ,血管内皮细胞的生长呈剂量依赖性抑制 ,与对照组比较抑制率分别为 5 % (P <0 0 1)、5 % (P <0 0 1)、7% (P <0 0 1)、11% (P <0 0 1) ;透射电镜未发现典型的凋亡征象 ;流式细胞仪检查未发现DNA降解的凋亡峰 ,各实验组和对照组的凋亡率均 <4 4 % ,差异无显著性 ;DNA倍体分析发现对照组G2 /M期细胞数百分率为 13% ,各照射组依次为 17% (P <0 0 1)、2 4 % (P <0 0 1)、2 9%(P <0 0 1)、32 % (P <0 0 1) ,差异有非常显著性。G0 /G1 期对照组为 76 % ,各照射组依次为 74 %(P <0 0 5 )、70 % (P <0 0 1)、6 4 % (P <0 0 1)、6 2 % (P <0 0 1)。S期对照组为 11% ,各剂量组依次为9% (P >0 0 5 )、6 % (P <0 0 1)、7% (P <0 0 1)、5 % (P <0 0 1)。结论　 2 5 ,5 0 ,10和 2 0Gyβ射线照射后 ,内皮细胞的生长呈剂量依赖性抑制 ,细胞周期阻滞明显 ,但对内皮细胞凋亡无显著影响。