多重PCR检测肠出血性大肠埃希菌O157：H7

目的 建立一种快速、特异的检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌株的多重PCR方法。 方法 针对O157:H7菌株的O157、H7抗原特异基因rfbE O157、fliC H7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因设计相应引物,在同一扩增体系中进行PCR反应,通过优化多重PCR 反应条件和循环参数,建立检测O157:H7菌株的多重PCR方法,并测定其特异性和灵敏度。 结果 6 对特异性引物各自扩增相应的基因片段,检测结果与常规PCR 获得的结果一致。细菌纯培养物的检测灵敏度为1.33×10⁴ CFU。 结论 该多重PCR方法能在一次检测中同时反映待测菌株是否为肠出血性大肠埃希菌O157:H7及其携带毒力基因的情况,可为O157:H7大肠埃希菌感染的诊断及流行病学调查提供一种简便、快速的检测手段。     

江苏省建湖地区大肠埃希菌O157:H7毒力基因分析

目的对检测出的17份肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株进行毒力基因分析。方法收集江苏省建湖地区2008年5月～9月监测出的17株肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株,利用单一和多重PCR法检测不同来源菌株0157抗原编码（rfbE）、H7鞭毛抗原编码（fliC）、志贺样毒素（stx1和stx2）、溶血素（hly）和黏附抹平因子（eaeA）。结果通过血清学方法确定的17株肠出血性大肠埃希菌0157：H7阳性菌株,再通过PCR法检测,其中15株大肠埃希菌rfbE和fliC基因检测为阳性,确认为EHEC O157：H7,其中9株菌株扩增出全部毒力基因,5株菌株扩增出除stxl外其它全部毒力基因,1株仅检出stx2,hly毒力基因;2株大肠埃希菌rfbE基因检测阳性、fliC基因检测为阴性,确认为O157：H7-大肠埃希菌,无毒力基因检出。结论该地区存在O157：H7大肠埃希菌强毒株污染,从流行病学角度看具潜在的流行性危险,当地疾控部门应加强O157：H7的综合监测。     

免疫PCR技术检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7

目的 通过检测肠出血型大肠埃希菌O157:H7菌株,确定免疫PCR技术的检测灵敏度和特异性,探讨该方法用于检测食品和临床标本的可行性。 方法 免疫PCR技术检测O157:H7标准菌株和自食品、临床标本分离的菌株。 结果 免疫PCR最少可检测101/ml O157:H7细菌,临床和食品分离的O157:H7菌株检测结果均为阳性,而非O157:H7菌株检测结果均为阴性。 结论 免疫PCR技术具有较高的检测灵敏度、特异性及操作简便等特点,可作为食品和临床标本检测O157:H7方法。     

大肠埃希菌O157:H7菌体抗原基因检测芯片的制备

为探讨大肠埃希菌O15 7:H7菌体抗原基因检测芯片的制备方法,为进一步研制O15 7:H7诊断芯片奠定基础。一、材料和方法1.菌株来源:O15 7:H7标准株882 36 4株(山东省卫生防疫站)和地方株(江苏省卫生防疫站) ,霍乱弧菌16 0 17和16 16 9、志贺菌5 12 5 2和5 130 2、沙门菌5 0 0 87、5 0 0 0 1(中国药品生物制品检定所) ,DH5α(本所分离)。2 .探针和引物设计:根据O15 7的rfbE(GenBankS8346 0 )基因[1] ,设计并合成了(日本TaKaRa公司)扩增O15 7抗原引物,同时采用Cy3标记P2。经BLAST基因检索比较基因同源性和特异性后设计了正链探针。3.芯…     

我国大肠埃希菌O157:H7分离株大质粒pO157变异性研究

目的 分析我国分离的大肠埃希菌O157:H7菌株中大质粒pO157的变异情况。 方法 采用限制性内切酶酶切法分析质粒酶切图谱,而后采用嵌套引物进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,并用Southern blot进行验证,最后测序。 结果 根据酶切图谱将60株大肠埃希菌O157:H7分为A~E 5个群,而进一步研究表明造成A群与C群HindⅢ 酶切图谱的不同是由C群中的一个小质粒造成的。PCR结果显示A群与C群中的引物对5和25,B群中的引物对25得到的PCR条带与pO157出发菌株不同,其他均相同。测序结果显示造成引物对25在A~C群中与致病性大质粒pO157不同的原因是IS1310序列的插入。 结论 我国大肠埃希菌O157:H7分离株致病性大质粒pO157相对保守,部分菌株中存在插入序列如IS1310,这也是造成我国大肠埃希菌O157:H7 pO157质粒变异的主要原因。     

湖北首例大肠埃希菌O157:H7血清型感染株的检出

大肠埃希菌O157：H7血清型是引起人类出血性肠炎的主要菌型，自1982年在美国首次被确认为食物中毒致病菌以来，在世界范围内已发生多次暴发流行，特别是1996年在日本暴发的大规模流行，引起了极大的恐慌，世界各国广泛关注。各国卫生机构已将此作为常规检测项目进行日常检测。2005年9月我科微生物实验室检出一株O157：H7大肠埃希菌，经湖北省疾病预防控制中心确认，为湖北省首例大肠埃希菌O157：H7感染株，现将相关临床资料和实验室检测报道如下。     

江苏省徐州市出血性大肠埃希菌O157∶H7 感染性腹泻的监测研究

目的 系统监测肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(O157∶H7)感染并发肾衰(HUS)、腹泻患者、宿主动物、蝇类、食品携带O157∶H7的状况,为预警监测体系建立提供参考依据。 方法 采集徐州市疫情暴发点和监测点腹泻患者粪便、蝇类和食品标本分离菌株。应用PCR技术检测志贺毒素基因stx。 结果 1999-2011年徐州市累计报告O157∶H7引起的感染性腹泻并发HUS 132例。腹泻患者带菌率1.2%、蝇类带菌率0.5%、食品带菌率1.0%、宿主动物带菌率3.1%。菌株带毒由stx1和stx2共存发展为以不带毒为主。 结论 江苏省徐州市O157∶H7感染自1999年、2000年暴发流行后,该市疫情一直稳定。腹泻患者带菌率、宿主动物带菌率、蝇类带菌率、食品带菌率及菌株带毒情况发生了改变。     

鉴定大肠埃希菌O157:H7的表型特征探讨

目的探讨大肠埃希菌O157:H7特有的表型特征并应用于鉴定。方法用4-甲基伞型酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)和山梨醇试验鉴别3株大肠埃希菌O157:H7标准菌株以及大肠埃希菌ATCC 25922(ATCC 25922)、侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)和肠聚集性大肠埃希菌(EAEC),并用全自动微生物鉴定系统VITEK 2-compact等自动化仪器及血清学做进一步鉴定,对健康体检者粪便中检出的大肠埃希菌也进行了鉴定。结果 3株大肠埃希菌O157:H7的MUG和山梨醇均阴性,EPEC O111的MUG阳性、山梨醇阴性,其他大肠埃希菌的MUG和山梨醇均阳性。来自粪便的357株大肠埃希菌中,检出MUG阴性或山梨醇阴性及MUG和山梨醇均为阴性的大肠埃希菌95株。大肠埃希菌O157:H7被VITEK 2-Compact明确筛查出来。仅大肠埃希菌O157:H7与O157血清凝集,试验的其他大肠埃希菌及粪便中的95株大肠埃希菌全部不与O157血清凝集。ATB半自动微生物仪及基质辅助激光解吸-飞行时间质谱仪(VITEK MS)不能鉴定大肠埃希菌O157:H7。结论 MUG和山梨醇发酵试验联合应用,对大肠埃希菌O157:H7有较高的筛查准确率,效果优于其他方法,但必须经血清学鉴定。     

肠出血性大肠埃希菌O157 ∶ H7质粒 pO157 上毒力因子的研究进展

肠出血性大肠埃希菌O157 ∶ H7是一种重要的致病菌,可以引起不同程度人类疾病。目前已知的O157 ∶ H7的致病因子有3个,志贺毒素、粘附抹平效应毒力岛和特异性质粒pO157。其中pO157在致病过程中的作用并不十分清楚。本文结合近年来的研究进展,介绍了pO157上与细菌致病性有关的毒力因子。     

浙江省衢州市柯城区检出带毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7

目的　了解浙江省衢州市柯城区肠出血性大肠埃希菌O157∶H7人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况。方法　采集腹泻患者粪便、动物粪便以及各类食品、蝇类等标本，MEC肉汤增菌后，用特异性免疫磁珠集菌，以科玛嘉显色平板分离，纯化的菌株经生化鉴定、血清分型及毒力基因检测。结果　2007年采集动物粪便标本300份，共检出O157∶H7菌16株，总带菌率为5.33%，其中牛、羊、猪带菌率较高，分别为20.83%、12.70%和3.61%，腹泻患者、食品和媒介昆虫中均未检出。毒力基因检测所有分离株Istx/I2、hly、eaeA 3种毒力基因均呈阳性，而stx1均呈阴性。结论　衢州市柯城区部分动物中存在O157∶H7感染，且为产毒株，应加强O157∶H7的综合监测。     

弗氏枸橼酸杆菌TaqMan实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法的建立

目的 建立针对弗氏枸橼酸杆菌的TaqMan实时荧光定量-聚合酶链反应(real time-PCR)检测方法。 方法 针对弗氏枸橼酸杆菌的特有序列设计引物和TaqMan探针,扩增目的基因建立标准曲线,确定检测方法的灵敏度;对20种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌进行检测,评价该检测方法的特异性;使用牛奶模拟标本评价方法在实际检测工作中应用性。 结果 TaqMan real time-PCR检测方法对弗氏枸橼酸杆菌重组质粒的检测灵敏度为1.0101拷贝／反应体系;该检测方法在检测30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现特异性扩增。该检测方法对牛奶模拟样本中弗氏枸橼酸杆菌检测下限为1.0102cfu/ml的菌量;通过对1.0107、1.0105和1.0103三个浓度质粒标准品的重复检测,确定本方法的组内变异系数为1.90%~3.91%;组间变异系数为1.52%~1.69%。 结论 本研究建立的TaqMan real time-PCR检测方法可作为检测弗氏枸橼酸杆菌灵敏、特异、快速的方法。     

潜在致病性的弗氏枸橼酸杆菌的筛查

目的 筛查具有潜在致病性的弗氏枸橼酸杆菌。方法 对从河南省睢县分离到的36株弗氏枸橼酸杆菌进行黏附HEp-2细胞的检测,以及与HEp-2细胞(MOI: 100)作用10 h后的乳酸脱氢酶(LDH)释放情况分析。同时比较弗氏枸橼酸杆菌CF74(Citrobacter freundii 74)、CF72(Citrobacter freundii 72)、肠聚集性大肠埃希菌(Enteroaggregative E. coli,EAEC)、肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic E. coli,EPEC)2348/69和HB101的黏附和细胞毒性差异。结果 16株弗氏枸橼酸杆菌几乎没有黏附性,黏附指数1;18株弗氏枸橼酸杆菌具有中等强度的黏附性,黏附指数100;2株弗氏枸橼酸杆菌CF74和CF65(Citrobacter freundii 65)具有强的黏附性。与HEp-2细胞作用10 h后,除了CF74(24.4%),其余的35株弗氏枸橼酸杆菌具有低的LDH释放量,LDH释放量与阴性对照HB101(5.02%)相似。说明除了CF74,其余的弗氏枸橼酸杆菌不具有细胞毒性。CF74具有和EAEC042一样的聚集性黏附类型,并且 CF74引起的LDH释放率明显高于CF72、2348/69和HB101(P0.01)而低于EAEC17-2。结论 作为潜在的致病菌,CF74具有强的黏附性和细胞毒性。     

胶体金标记免疫层析法检测大肠杆菌O157

目的 应用抗大肠杆菌O157(E.coli O157)单克隆抗体,制备一种简便快速的胶体金标记免疫层析(GICA)条用于检测标本中E.coli O157.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗E.coli O157单克隆抗体,以硝酸纤维膜作为抗E.coli O157单克隆抗体的包被载体,制成GICA检测条.标本中E.coli O157与检测条上金标记抗体(Au-Ab)结合后,利用硝酸纤维膜的层析作用移动,与膜上的固相抗体结合形成可见的红色条带.结果 GICA检测条灵敏度可达105 cfu/ml.用GICA检测了1750份不同食品和人畜粪便标本中E.coli O157,GICA检测条阳性份数43份,后经分离培养检出29株大肠杆菌O157;另14份标本经鉴定,其中12份标本可疑为弗劳地枸橼酸杆菌.结论 GICA条检测标本的E.coli O157,特异性较高,不需任何仪器设备,较简便快速,易于判断结果,故可对标本进行快速筛查,适合各级疾控中心和临床检验部门使用.     

空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157多重PCR分子检测研究

目的建立同时检测空肠弯曲菌、单核细胞增生性李斯特菌（简称单增李斯特菌）和大肠杆菌O157的多重聚合酶链反应（PCR）检测技术。方法根椐空肠弯曲菌mapA基因序列、单增李斯特菌的编码溶血素（hly）基因序列和大肠杆菌的O157抗原（rfbE）基因序列,分别设计了3对特异引物,PCR扩增的目的基因片段为589 bp、360 bp和194bp;并对反应条件进行了优化。结果对3种致病菌检测,多重PCR检测DNA的敏感度分别为空肠弯曲菌2.264 ng、单增李斯特菌37.92 ng、大肠杆菌2.100 ng,样品检测时间6-8 h。结论该方法操作简便,检测周期短,特异性和敏感度高,为同时检测污染样品中空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157奠定了基础。     

空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157多重PCR分子检测研究

目的建立同时检测空肠弯曲菌、单核细胞增生性李斯特菌(简称单增李斯特菌)和大肠杆菌O157的多重聚合酶链反应(PCR)检测技术。方法根椐空肠弯曲菌mapA基因序列、单增李斯特菌的编码溶血素(hly)基因序列和大肠杆菌的O157抗原(rfbE)基因序列,分别设计了3对特异引物,PCR扩增的目的基因片段为589 bp、360 bp和194bp;并对反应条件进行了优化。结果对3种致病菌检测,多重PCR检测DNA的敏感度分别为空肠弯曲菌2.264 ng、单增李斯特菌37.92 ng、大肠杆菌2.100 ng,样品检测时间6~8 h。结论该方法操作简便,检测周期短,特异性和敏感度高,为同时检测污染样品中空肠弯曲菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157奠定了基础。     

上海地区家畜、家禽及肉制品大肠杆菌O157∶H7监测

目的　了解掌握本市家禽、家畜及肉制品大肠杆菌O157∶H7污染状况。方法2000年、2001年分别在流行季节在设置的监测点与超市采集家禽、家畜粪便、肉类制品 ,应用常规培养法与免疫磁珠法进行监测。结果两年间本市家禽、家畜及肉类制品O157∶H7阳性检出率 3.90% ,阳性率最高为肉类制品 4.87% ,2001年阳性率较 2000年明显提高 (P <0.01) ,16种抗生素耐药性监测 ,不同来源菌株对 13种抗生素存在不同耐药率。结论本市家禽、家畜及肉制品存在大肠杆菌O157∶H7污染状况 ,其中肉类制品高于家禽、家畜;免疫磁珠法阳性检出率高于常规培养法。     

河南省出血性大肠杆菌O157:H7监测研究

目的　为了解河南省E .coliO15 7∶H7感染性腹泻的分布特征、临床特点以及在家畜、家禽中的带菌状况和食物污染程度。方法　采用O15 7特异性筛查方法进行病原体分离培养 ,应用分子生物学、微生物学、生物化学技术进行病人、家畜、家禽的病原菌分离、培养、毒素因子测定。结果　 2 0 0 0 - 2 0 0 2年从 384 0份标本中检出E coliO15 7∶H72 2 0株 ,其中 77株具有毒素基因 ;显示有 5个毒素因子组合型。结论　病例有明显的时间、职业分布 ,发病以 6 0岁以上年龄组为主。最佳采样时间应在感染后 5天内。E coliO15 7∶H7感染性腹泻的发病与家畜家禽的带菌呈正相关。     

浙江省检出带毒力基因的人源性肠出血性大肠杆菌O157:H7

目的了解肠出血性大肠杆菌O157:H7在浙江省人群中的感染情况和菌型分布特征,制定相应的防治对策。方法5～10月份肠道传染病高发季节,在浙江省各地(市)肠道门诊采集腹泻病人粪便,对O157:H7菌株进行分离培养,并用PCR方法检测其毒力基因。结果1998年开始至今的人群监测中,共检出2株无毒力的肠出血性大肠杆菌O157:H7。PCR毒力基因检测,SLT2和Hly阳性,SLT1阴性。结论与以往不同,此次分离到带有毒力基因的人源性肠出血性大肠杆菌O157:H7,说明浙江省O157:H7在菌型特征方面发生了变化,对人群健康构成了更大的威胁。     

Rupture of a dissecting thoracoabdominal aortic aneurysm due to Citrobacter freundii infection

We describe a case of an elderly man with Citrobacter freundii‐associated infectious rupture of a dissecting thoracoabdominal aortic aneurysm. We performed an emergency thoracoabdominal aortic replacement using a rifampicin‐soaked prosthetic graft and omental flap wrapping. The patient was discharged on postoperative day 255, although he experienced pseudomembranous enteritis and paraplegia.