MTT法探讨三氧化二砷及莪术对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用

目的探讨两种天然药物三氧化二砷(ATO)和莪术(RC)对晶状体上皮细胞(LEC)增殖的抑制作用,为寻求防治后发性白内障的确切有效药物提供实验依据。设计实验性研究。研究对象体外培养的牛LEC。方法倒置显微镜下观察细胞形态学变化。MTT比色法检测不同终浓度(2．5、5、10μmol/L)ATO和(5、10、20mg/ml)RC作用于增殖状态下LEC 72小时后对细胞增殖的抑制程度。主要指标细胞形态、吸光度(A)值。结果倒置显微镜下可见增殖对照组细胞大小均匀,生长密集,ATO和RC组细胞生长及形态有明显改变,增殖缓慢,生长差,贴壁能力减弱。MTT比色法结果显示:不同浓度(2．5、5、 10μmol／L)的ATO和(5、10、20mg／ml)RC可明显抑制LEC增殖,并具有剂量依赖关系(P均<0．01)。结论两种天然药物 ATO、RC能够明显抑制LEC增殖,有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

曲安奈德对体外人视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的 探讨曲安奈德（triamcinolone acetonide，TA）对人视网膜色素上皮细胞（human retinal pigment epithelium，ARPE-19）增生的影响。方法 采用MTT比色法测定终质量浓度为10、30、300mg／LTA分别作用于ARPE-19细胞24h和72h后的吸光度A值。结果 不同药物浓度TA对ARPE-19增殖的抑制作用差异有显著性（F0.05,3．16=3．24，P〈0．05）；此外，TA作用时间对ARPE-19增生的影响显著（F0.05 1,16=4．49，P〈0．05）；而且TA药物浓度和作用时间之间相互影响，对ARPE-19细胞增殖的抑制作用具有显著性意义（F0.04,1．16=4．49，P〈0．05）。结论 TA能够抑制视网膜色素上皮细胞的增殖，有望成为增殖性玻璃体视网膜病变的治疗药物。     

NS398对白介素1α诱导兔角膜基质细胞环氧化酶2表达的抑制

目的探讨氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺（NS398）对白介素1α（IL-1α）诱导的兔角膜基质细胞环氧化酶2（COX-2）表达的影响。方法体外培养兔角膜基质细胞,实验组分别以含0、25、50、100、200μmol／LNS398的培养液孵育2h后加入IL-1α诱导COX-2表达,24h后实时荧光定量聚合酶链反应（Real-Time PCR）检测兔角膜基质细胞中COX-2基因表达的差异,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度NS398对细胞生长的影响,并与对照组进行比较。结果Real—Time PCR结果显示IL—1α诱导后24h各组COX-2 mRNA表达量差异有统计学意义（F=988．45,P〈0．01）;对照组与各实验组以及各实验组之间COX-2 mRNA表达量进行多重比较可见,0μmol／LNS398浓度组与对照组之间差异无统计学意义（q=1．3322,P〉0．05）,其他NS398浓度组与对照组相比差异均有统计学意义（q=34．7896,48．3298,65．8010,70．8131,P〈0．01）,随培养液中NS398浓度的增加,IL-1α刺激后兔角膜基质细胞中COX-2 mRNA表达量不断下降（q=36．1218,49．6620,67．1332,72．1453,13．5402,31．0114,36．0235,17．4712,22．4833,5．0121,P〈0．01）;MTT法检测结果显示,100μmol／L、200μmol／L的NS398对兔角膜基质细胞生长均有明显的抑制作用（q=12．7693,20．9087,P〈0．01）。结论NS398能够有效抑制IL-1α诱导的兔角膜基质细胞COX-2的表达,但超过一定浓度会对细胞产生明显毒性作用。     

超声乳化吸除联合连续环形后囊撕除术治疗先天性白内障临床观察

目的 探讨超声乳化吸除联合连续环形后囊撕除和一期人工晶体植入术治疗先天性白内障对后发障的预防作用。方法 对61例（68眼）先天性白内障患者施行超声乳化吸除术，其中55眼术中连续环形撕除后囊，52眼联合植入人工晶体。所有患者术后随访6个月以上。结果 61例（68眼）术后1周矫正视力≥0．5者41眼（70．7％）与术后1个月矫正视力〉10．5者42眼（72．4％）比较，差异无显著性（P〉0．05）；术后3个月和6个月，未行连续环形后囊撕除组的13眼中分别有5眼和8眼发生了后发障（分别为46．2％和61．5％），而连续环形后囊撕除组分别为1眼和4眼发生后发障（分别为1．82％和7．3％）。两组间差异具有非常显著性（P均〈0．01）；术中未能一期植入人工晶体组和一期人工晶体植入组分别有8眼和4眼发生后发障（分别为50．0％和7．7％），差异亦具有非常显著性（P〈0．01）。结论 白内障超声乳化联合连续环形后囊撕除和一期人工晶体植入术治疗先天性白内障，可有效减低术后后发障的发生率。     

葡萄籽原花青素提取物对牛晶状体上皮细胞增殖及细胞周期的影响

目的 观察葡萄籽原花青素提取物(grape seedproanthocyanidin extract,GSPE)对牛晶状体上皮细胞(bovinelens epithelial cells,BLECs)的增殖及细胞周期的影响,为后发性白内障的药物治疗提供新的研究方向.方法 首先进行BLECs的原代及传代培养,取第2-第3代的BLECs,分别采用MTT法、流式细胞术及免疫组化SP染色法进行实验,研究不同浓度及作用时间的GSPE对体外培养的BLECs的增殖及细胞周期的影响.结果 GSPE能明显抑制BLECs的增殖,并呈现剂量和时间依赖性.在作用24 h后,随着GSPE浓度的增高(20 μg/ml,60 μg/ml,100 μg/ml),A值逐渐变小(0.343±0.079,0.252±0.029,0.137±0.011),抑制作用逐渐增强(P＜0.01).100 μg/ml GSPE作用BLECs 24 h、48 h、72 h后,A值分别为0.137±0.011、0.096±0.025、0.055±0.008,差异有非常显著的统计学意义(P<0.01).流式细胞术结果显示:经过GSPE处理,BLECs的G0/G1期细胞数量增加,S期、G2/M期明显减少.100 μg/ml GSPE作用24 h后,G0/G1期细胞为83.67%±5.63%,阴性对照组为59.13%±5.71%,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化结果:GSPE剂量组中p21蛋白的表达增加,阳性细胞率从28.75%±1.25%增加到86.73%±5.11%,与阴性对照组7.73%±1.75%相比,差异有非常显著的统计学意义(P＜0.01).结论 GSPE通过上调p21蛋白的表达诱导细胞周期停滞于G0/G1期,能有效地抑制牛晶状体上皮细胞增殖,可能成为后发性白内障的药物治疗研究的新方向.     

Thapsigargin防治兔眼后发性白内障的研究

目的探讨thapsigargin（TG）对兔眼后发性白内障形成的影响。方法所有兔眼均行晶状体囊外摘出术。术后实验组（右眼）晶状体囊袋内分别注入0．1mL TG（A组：0．3μmol／L;B组：1μmol／L）;对侧眼（左眼）注入含相同溶剂的BSS液。术后第1、3、7、10、15、35d应用裂隙灯显微镜观察眼前节的炎症反应及晶状体后囊膜混浊情况。术后第35d,Odrich法评估中央区后囊膜混浊程度。摘除眼球行组织病理学检查。结果1μmol／LTG组兔眼后发性自内障的形成明显受到抑制,但存在明显的术后早期眼前节炎症反应（结膜充血、角膜水肿、前房混浊等）,于术后第15d左右消退。0．3μmol／LTG组眼炎症反应相对较轻,形成后发性白内障的时间较短,与对照组比较差异无统计学意义（P〈0．05）。组织病理学检查结果显示所有兔眼均未发现明显的炎性细胞浸润,1μmol／L TG组兔眼后囊膜区存在增生的晶状体上皮细胞（LECs）。结论高浓度TG能够延缓兔眼后发性白内障的发展,但早期炎症反应较重,毒性反应明显。     

染料木黄酮对翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的 观察染料木黄酮对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞（HPF）的抗增殖作用。方法取HPF的第3或4代进行实验；采用免疫组织化学技术检测HPF增殖细胞核抗原的表达；MTT法检测染料木黄酮对HPF增殖的抑制影响。结果当染料木黄酮的质量浓度≥3．125μg／ml时能有效地抑制细胞表达增殖细胞核抗原。MTT试验证实，作用24h，染料木黄酮质量浓度〈12．5μg／ml，抑制率与对照组比较差异无显著统计学意义（P〉0．05），作用48h之后所有用药组抑制率与对照组比较差异均有显著统计学意义（P〈0．05），且与对照组比较生长曲线显著下移。结论染料木黄酮在质量浓度≥6．25μg／ml时可显著抑制体外培养的人HPF的增殖，且与质量浓度呈一定的量效关系。     

雷公藤内酯醇对血管内皮细胞t-PA、PAI-1蛋白表达的影响

目的研究雷公藤内酯醇（triptolid，T10）对血管内皮细胞移行活性及组织型纤溶酶原激活物（tissue—type plasminogen activator，t-PA）和纤溶酶原激活物抑制物-1（plasminogen activator inhibitor-1，PAI—1）蛋白表达的影响，探讨T10对新生血管生成的抑制作用。方法体外培养传3代人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），加入不同浓度的T10（5μg·L^-1、10μg·L^-1、20μg·L^-1、30μg·L^-1）、地塞米松（300mg·L^-1），观察HUVECs移行活性；免疫组织化学染色检测HUVECs中t—PA和PAI-1蛋白表达量。结果T10能明显抑制HUVECs移行活性，使HUVECs移行数量、移行距离明显减少和缩短；T10能明显抑制HUVECs中t-PA和PAI-1蛋白表达，使t-PA和PAI-1蛋白表达棕黄色阳性染色减少，与对照组相比差异具有显著性（P〈0．01）。结论T10能明显抑制血管内皮细胞移行，抑制内皮细胞t-PA和PAI—1蛋白表达，从而有效抑制新生血管生成与生长。     

早期原发闭角型青光眼合并白内障的两种手术方式临床观察

目的 分析单纯超声乳化和超声乳化联合虹膜周边切除对早期原发闭角型青光眼合并白内障的临床治疗效果。方法 选择仅局部用药即可控制眼压在正常范围的早期闭角型青光眼合并白内障患者34例（38眼），随机分组，分别施以单纯超声乳化和超声乳化联合虹膜周边切除手术（各19眼）。结果 两种术式都显著改善了视力（经x^2检验，P〈0．01）；视力改善与采用何种术式无关（经x^2检验，P〉0．05）。术前术后眼压差异无显著性，但术前17眼需药物协助控制眼压，术后观察期内无一例眼压升高需使用降眼压药物者。两种术式都显著改善了房角粘连（经x^2检验，P〈0．01）。周边前房深度术前术后差异有非常显著性（经t检验，P〈0．01）；两种术式问差异无显著性（经t检验，P〉0．05）。中央前房深度术前术后差异有非常显著性（经t检验，P〈0．01），两种术式间差异无显著性（经t检验，P〉0．05）。结论 对于早期原发闭角型青光眼合并白内障患者采取单纯超声乳化和超声乳化联合虹膜周边切除手术治疗均可以控制眼压，改善视力，但单纯超声乳化术术后并发症少，而且手术操作简单。     

三氧化二砷对体外培养的人视网膜色素上皮细胞作用的实验研究

目的 观察三氧化二砷（As2O3）对体外培养的人视网膜色素上皮（RPE）细胞的增生抑制及凋亡诱导作用。方法 不同浓度的As2O3理细胞，倒置显微镜下观察细胞形态，四唑盐（MTT）比色法检测人RPE细胞对As2O3的药物敏感性，流式细胞仪检测细胞周期变化和凋亡率。结果 药物处理后细胞出现凋亡形态改变。MTT比色法结果显示，As2O3作用血清组人RPE细胞后各实验组与对照组之间吸光度比较有统计学意义，药物剂量分别为：作用24h为6．25μmol／L（P=0．018）、48h为6．25μmol／L（P〈0．01）、72h为1．56μmol／L（P〈0．01）；作用无血清组细胞48h后为12．5μmol／L（P〈0．01）。流式细胞仪分析结果显示As2O3作用人RPE细胞周期改变表现为S期阻滞及G2／M期延长。As2O3处理人RPE细胞后出现凋亡峰。结论 As2O3可抑制体外培养的人RPE细胞的生长并诱导其凋亡，有望为临床防治增生性玻璃体视网膜病变（PVR）提供新的药物干预。     

维拉帕米对人晶状体上皮细胞整合素表达的抑制作用

目的研究钙通道阻滞剂维拉帕米对人晶状体上皮细胞（LECs）株SRA01/04整合素表达的影响。方法对人LECs株SRA01/04进行培养并传代,分别以0.02、0.04、0.08mmol/L的维拉帕米作用于SRA01/0424h,经流式细胞仪检测SRA01/04各整合素的阳性表达率。结果整合素α2、α3、α5、β1、β2在人LECs株SRA01/04中呈阳性表达,维拉帕米对其表达具有抑制作用,并随药物浓度的增加而逐渐增强（P〈0.05）。结论钙通道阻滞剂维拉帕米对LECs整合素的表达具有抑制作用,可能阻碍整合素介导的LECs黏附、移行和增生,有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

MG132对人晶状体上皮细胞增生、移行和上皮-间充质转化的抑制作用

背景 晶状体后囊膜混浊（PCO）发生的主要病理机制是白内障术后后囊膜残留的晶状体上皮细胞（LECs）的增生、移行和分化,研究发现蛋白酶体抑制剂MG132可抑制牛LECs的增生,但对人LECs的生物学影响尚不明确. 目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132对体外培养的人LECs增生、移行和上皮-间充质转化（EMT）的抑制作用.方法 收集白内障超声乳化摘出术中连续环形撕囊的囊膜片用组织块培养法进行原代培养并传代,取第2代或第3代LECs进行常规消化,调整细胞密度至5×105个/ml,以200 μl/孔接种至96孔板常规培养24 h,分别加入成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）、MG132或MG132＋FGF-2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,培养24 h后用MTT法测定吸光度（A490）值,计算LECs的增生率.在移行能力测定中,应用传代的人LECs分别加入FGF-2、MG132或MG132＋FGF-2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,用无菌棉棒在细胞层中划出细胞裸露区,继续培养24 h,计数移行至裸露区的细胞,评估细胞移行率.在传代的人LECs培养液中分别加入转化生长因子-β2（TGF-β2）、MG132或MG132＋TGF-β2,以基础培养液培养的细胞作为对照组,培养24 h后用免疫组织化学法检测细胞质中纤维连接蛋白（FN）的表达. 结果 对照组、FGF-2组、MG132组和MG132＋FGF-2组的LECs增生值（A490）分别为0.582±0.020、0.723 ±0.010、0.434±0.011和0.465±0.008,总体差异有统计学意义（F=110.482,P＜0.01）,FGF-2组LECs增生值明显高于对照组,MG132组和MG132＋FGF-2组的LECs增生值明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.对照组、FGF-2组、MG132组和MG132＋FGF-2组LECs移行数目分别为8.67±1.08、11.58±1.59、2.67±0.09和2.75±0.09,差异有统计学意义（F=34.301,P＜0.01）,其中FGF-2组LECs的移行数明显多于对照组,而MG132组和MG132＋FGF-2组LECs移行数明显少于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.与对照组比较,MG132组LECs的增生率和移行率分别降低25.4％和75.0％,FGF-2组LECs增生率和移行率分别增加24.2％和33.6％,MG132＋FGF-2组LECs的增生率和移行率分别下降20.1％和68.3％.对照组、TGF-β2组、MG132组和MG132＋TGF-β2组LECs中FN表达量（A值）分别为1.242±0.023、2.329±0.113、1.043±0.021和1.163±0.018,差异有统计学意义（F=113.752,P＜0.01）,TGF-β2组LECs中FN表达量明显高于对照组,而MG132组和MG132＋TGF-β2组明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.TGF-β2可以诱导人LECs转分化,FN表达增强;MG132与TGF-β2同时存在时可以减弱人LECs转分化,FN表达下降. 结论 MG132抑制体外培养的人LECs的增生与移行,并可阻止TGF-β2诱导的人LECs的EMT.     

PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞中S期激酶相关蛋白2表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对体外培养的人晶状体上皮细胞（LECs）增生和细胞周期S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达的影响。方法 MTT比色法检测25μmol/L的LY294002处理人LECs细胞株SRA01/04后12h和24h细胞的增生情况;流式细胞仪检测LY294002作用24h后细胞周期的分布情况;Westernblot和real-timePCR法分别测定LY294002处理24h后细胞中Skp2及其mRNA的表达情况。结果 25μmol/L的LY294002作用于SRA01/04细胞0～24h,SRA01/04细胞的增生受抑制,且作用24h时对SRA01/04细胞的抑制作用最明显。LY294002组中处于G1期和S期的细胞占总细胞数的百分率分别为（66.15±2.63）%和（27.34±6.58）%,对照组为（56.73±1.35）%和（37.32±5.54）%,LY294002组细胞Skp2及其mRNA的表达量明显减少。结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增生,使部分细胞停滞于细胞周期的G1期,LY294002抑制人LECs的增生可能与Skp2的表达下调有关。     

1,25-二羟维生素D_3对体外人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的：研究1,25二羟维生素D3[1,25-（OH）2D3,简称D3]对体外培养的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,hLEC）增殖的影响。方法：人晶状体上皮细胞系SRA01/04常规培养,取对数期细胞接种于96孔培养板,将含有细胞和培养液不含D3的空白对照组,只含有培养液不含有细胞及D3的调零组,含有无水乙醇（10-4mol/L）、细胞和培养液的阴性对照组,含有不同浓度（10-10,10-9,10-8,10-7mol/L）的D3组,分别处理24,48,72h后,采用MTT法检测各组细胞在490nm波峰处吸光度A值,计算细胞生长抑制率;FCM检测10-7mol/LD3处理细胞48h后细胞周期的改变。结果：24和48h10-8和10-7mol/LD3组A值均较对照组下降（P〈0.01）,72h各处理组和对照组差异无统计学意义。10-7mol/LD348h后,G1和S期细胞数占总细胞数百分比分别为（65.3±2.4）%和（30.0±1.4）%,与对照组[（57.4±1.5）%和（39.0＋1.4）%]相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：1,25-（OH）2D3在10-7和10-8mol/L对细胞增殖具有抑制作用,使hLEC部分阻滞于细胞周期的G1期。     

紫杉醇对人Tenon囊成纤维细胞增生的抑制作用及机制

背景人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的异常增生是导致抗青光眼滤过手术失败的主要原因。寻找抑制HTFs增生的药物对抑制青光眼术后功能性滤过泡的瘢痕化有重要意义。目的观察紫杉醇对体外培养的HTFs增生、凋亡、细胞周期以及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）表达的影响。方法收集抗青光眼滤过术中切除的人眼Tenon囊组织,用组织块培养法培养HTFs并进行传代,取3～6代细胞用于实验。采用小鼠抗人角蛋白抗体、小鼠抗人波形蛋白抗体、小鼠抗人结蛋白抗体、小鼠抗人S-100抗体行免疫组织化学染色鉴定培养的HTFs。在培养基中分别加入0、1×10^-8、1×10^-8、1×10^-6mol／L紫杉醇,采用实时细胞电子分析系统（RT—CES）观察不同浓度紫杉醇作用后HTFs的细胞指数变化;采用DAPI染色法观察各组细胞的凋亡情况;用流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用后HTFs各细胞周期比例;采用实时定量PCR（real—timePCR）和ELISA法检测各组HTFs中MMP-1mRNA和蛋白的表达量,分别以MMP-1mRNA／GAPDHmRNA和MMP-1蛋白质量浓度（μg／L）表示。结果组织块原代培养7d内可见细胞游出,呈长梭形和不规则三角形,培养的细胞抗波形蛋白抗体染色阳性,而抗角蛋白抗体、抗结蛋白抗体和抗S-100抗体染色阴性。培养基中加入紫杉醇作用24h后,1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇组平均细胞指数值分别为1．09±0．191、0．665±0．093和0．473±0．117,均明显低于0mol／L紫杉醇组的1．514±0．283,差异均有统计学意义（均P=0．000）;紫杉醇作用后,HTFs的细胞核内可见呈DAPI蓝色荧光的颗粒状物质,荧光强度随着紫杉醇浓度的增加而增强。l×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇分别作用12h后,G,／M期HTFs的比例分别为（9．20±0．80）％、（12．37±0．45）％和（13．80±0．35）％,明显高于0mol／L紫杉醇组的（7．17±0．50）％,差异均有统计学意义（P=0．005、0．000、0．000）。与0mol／L紫杉醇组比较,1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇作用30min后HTFs中MMP-1mRNA的相对表达量均明显下降,差异均有统计学意义（均P=0．000）;1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L紫杉醇作用24h后,HTFs中MMP-1蛋白的表达量均明显低于0mol／L紫杉醇组,差异均有统计学意义（P=0．010、0．002、0．001）。结论1×10^-8～1×10^-6mol／L紫杉醇可抑制体外培养HTFs的增生,诱导细胞凋亡,阻断细胞的有丝分裂,其作用机制可能与下调细胞中MMP-1的表达有关。     

白内障术后黄斑区光学相干断层扫描动态观察

目的：观察白内障术后黄斑厚度的改变。方法：将126例白内障患者分为两组,分别行常规白内障超声乳化联合人工晶状体植入术64例和小切口非超声乳化联合人工晶状体植入术62例。两组术前、术中无并发症,术前及术后1,3mo黄斑区行OCT检查,观察两组术后黄斑厚度及视力变化。本研究采用SPSS 17.0统计学软件处理,每组术前、后采用配对t检验对数据进行统计学处理; 两组间术前、后分别采用独立样本t检验对数据进行统计学处理,取α=0.05检验水准。结果：两组术后黄斑厚度变化：超声乳化组：术前、术后1,3mo黄斑厚度分别为241.3±10.9, 279.7±16.5,245.6± 12.6μm。术后1mo与术前比较差异有显著差异（P〈0.01）; 术后3mo与术前比较,差异无统计学差异（P〉0.05）; 术后1mo与3mo比较有统计学差异（P〈0.05）。有3例术后1mo出现黄斑囊样水肿,2例术后3mo完全消退。小切口非超声乳化组：术前、术后1,3mo黄斑厚度分别为240.5±11.9,280.9±16.8,246.6±13.2μm。黄斑厚度术后1mo与术前比较有显著统计学差异（P〈0.01）; 术后3mo与术前比较,无统计学差异（P〉0.05）; 术后1mo与3mo比较有统计学差异（P〈0.05）。有2例术后1mo出现黄斑囊样水肿,2例术后3mo完全消退。超声乳化组与小切口非超声乳化组,两组间术前、术后1,3mo分别比较均无统计学差异（P均〉0.05）。结论：无论选择白内障超声乳化还是小切口非超声乳化白内障联合人工晶状体植入,术后1mo黄斑厚度明显增加,证明术后造成黄斑水肿; 术后3mo厚度基本恢复术前。黄斑增厚与术式选择无明显关系。     

胰岛素样生长因子-1及其受体在晶状体上皮细胞迁移中的作用

背景 白内障囊外摘出术后发生的后囊膜混浊（PCO）与残留晶状体上皮细胞（LECs）的增生和迁徙有关,曾有研究认为,糖尿病患者后发性白内障的发生率高于正常人,而胰岛素样生长因子-1（IGF-1）是否可促进LECs的迁徙尚不清楚. 目的 探讨IGF-1/IGF-1受体（IGF-1R）系统对LECs迁移能力的影响,为临床上防治PCO提供理论依据. 方法 将人永生化LECs系（HLEC-B3）细胞在DMEM中进行常规传代培养,第2代细胞采用荧光免疫组织化学法（兔抗人α-晶状体蛋白抗体）鉴定细胞.分别在培养基中加入质量浓度为0、30、90 μg/L的IGF-1培养48 h.将0、30、90 μg/L IGF-1中培养的细胞分别进行Transwell迁移小室实验,计数任意5个视野中结晶紫染色细胞,评估各组细胞的迁移能力.将细胞分别在0、1.5、30、60、90 μg/LIGF-1中培养,采用Western bolt法检测IGF-1R,包括IGF-1Rα和IGF-1Rβ亚基在各组细胞中的表达变化.结果 HLEC-B3细胞贴壁后48 h达对数生长期,培养的第2代HLEC-B3细胞对α-晶状体蛋白呈阳性反应,细胞膜呈红色荧光.各组细胞在Transwell迁移小室培养12h后,0 μg/L IGF-1组仅可见0（0,1）个染色的迁移细胞,30 μg/L IGF-1组和90 μg/L IGF-1组分别可见10（10,11）个和29（27,31）个染色的迁移细胞,30 μg/LIGF-1组和90 μg/L IGF-1组的迁移细胞数明显多于0μg/L IGF-1组,差异均有统计学意义（均P=0.008）,90 μg/L IGF-1组明显多于30 μg/L IGF-1组,差异均有统计学意义（P=0.009）.Western blot法检测发现,5个培养组细胞中IGF-1 Rα和IGF-1Rβ的表达量（IGF-1R/β-actin）差异均有统计学意义（F=63.700、130.530,均P=0.000）,当IGF-1质量浓度＞30 μg/L时,随着IGF-1质量浓度的增加,IGF-1Rα和IGF-1Rβ的表达量均逐渐升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 IGF-1能够上调HLEC-B3细胞膜上IGF-1R蛋白的表达,这种作用呈剂量依赖性;IGF-1能够增强体外培养的HLEC-B3细胞的迁移能力,提示PCO的发生可能与IGF-1/IGF-1R系统的激活有关.     

三氧化二砷对表皮生长因子诱导的视网膜色素上皮细胞增生和迁移的影响

背景 细胞因子失衡所导致的视网膜色素上皮(RPE)细胞的异常增生和迁移是增生性玻璃体视网膜病变( PVR)的主要病理变化之一.三氧化二砷(As2O3)是中国传统中药中的有效成分,可有效抑制肿瘤细胞的增生和迁移.但As2O3对细胞生长因子引起的RPE细胞增生和迁移的影响尚未明确. 目的 探讨As2O3对表皮生长因子(EGF)诱导的ARPE-19细胞增生和迁移的影响.方法 用无血清培养基对RPE细胞系ARPE-19细胞进行培养,将终浓度为0、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0和20.0 μmol/L的As2O3分别加入到无血清培养基和含10 mg/L EGF的ARPE-19细胞培养液中作用24 h和48 h,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测各培养组ARPE-19细胞活性的吸光度(A)值,以探讨As2O3对细胞的药物毒性作用,并筛选安全、有效的As2O3作用浓度.用10 mg/L EGF加入培养基诱导ARPE-19细胞迁移,分别在培养板中加入0、0.5、1.0、2.0μmol/L As2O3 作用24 h和48 h,并通过划痕试验和Transwell试验检测As2O3对EGF诱导的ARPE-19细胞迁移的影响.结果 MTT法检测发现不同浓度As2O3组作用24 h和48 h后,无血清培养组细胞A值随As2O3浓度的升高而逐渐下降,总体差异有统计学意义(F浓度=38.269,P=0.000;F时间=0.874,P=0.358).与空白对照组(0μmol/LAs2O3组)比较,0.5～ 5.0 μmol/L As2O3组ARPE-19细胞A值的差异均无统计学意义(P＞0.05).对含10 mg/LEGF组的ARPE-19细胞,药物对细胞A值的影响呈现浓度和时间依赖性(F浓度=152.155,P=0.000;F时间=51.649,P=0.000).与对照组比较,0.5～2.0μmol/L As2O3加入24 h和48 h后,A值的变化差异均无统计学意义(P＞0.05),而0.5、1.0、2.0μmol/L As2O3加入10 mg/L EGF诱导的ARPE-19细胞中作用24h和48 h后,A值的变化差异均无统计学意义(F浓度=2.215,P=0.126;F时间 =2.230,P=0.155).5.0 ～20.0 μmol/L As2O3作用于EGF诱导的ARPE-19细胞中作用后,细胞A值明显下降,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),5.0～20.0 μmol/L As2O3作用24 h后,对EGF诱导的ARPE-19细胞增生抑制率分别为12％、32％、37％;作用48 h后细胞抑制率分别为39％、44％和53％.划痕试验结果显示,0.5～2.0 μmol/L As2O3对EGF诱导的ARPE-19细胞的横向迁移具有抑制作用.Transwell试验结果表明,0.5～2.0 μmol/L As2O3对10 mg/L EGF诱导的ARPE-19细胞纵向迁移有明显的抑制作用,0.5、1.0、2.0μmol/L As2O3作用12h对ARPE-19细胞的抑制率分别为22％、33％和46％. 结论 As2O3在一定浓度范围内对ARPE-19细胞无毒性作用,2.0 μmol/L以下浓度的As2O3对EGF诱导的ARPE-19细胞增生无明显影响,但可影响细胞的迁移能力,5.0 μmol/L以上浓度的As2O3可明显抑制ARPE-19细胞的增生.     

重组胸腺素β4调节NF-KB表达促进兔角膜碱烧伤后修复

目的：探讨重组胸腺素β4（Thymosin β4, Tβ4）对角膜碱烧伤后角膜核转录因子κB（nuclear factor κB,NF-κB）表达的影响和促进角膜愈合的观察。 方法：用1mol/L NaOH浸透的6mm直径圆滤纸片贴于兔角膜中央30s,建立兔角膜碱烧伤模型。动物随机分为实验组和对照组,实验组给予低中高剂量（0.1,1,10μg/50μL）Tβ4,对照组给予PBS（阴性对照组）和rh-EGF（阳性对照组）皆2次/d滴眼。烧伤后1, 3, 7, 14d肉眼观察角膜烧伤面积的变化,照相、统计愈合率;免疫组化染色检测NF-κB和IL-1β表达;取烧伤区角膜组织匀浆液提取细胞核蛋白,用ELISA检测NF-κB的p65亚基表达水平。 结果：角膜碱烧伤后Tβ4用药组角膜愈合率最高达到338%,相应阴性对照组为22.8%,Tβ4用药组显著高于对照组（P〈0.01）,其中中剂量Tβ4组愈合率高于其他剂量组;Tβ4用药组NF-κB免疫组化染色积分吸光度明显低于对照组（P〈0.05）,ELISA检测NF-κB的p65亚基,在Tβ4用药组中表达最少（P〈0.01）,IL-1β免疫组化染色阳性,但实验组和对照组差异无统计学意义。 结论：重组Tβ4促进角膜碱烧伤修复,其机制可能与下调NF-κB在细胞核内的表达相关。