γ—干扰素诱导角质形成细胞凋亡及其Fas抗原表达研究

目的：探讨γ－干扰素在银屑病发病中的作用。方法：流式细胞仪测定亚二倍体含量、片段化DNA分析、Annexin V凋亡检测法、免疫组织化学、间接免疫荧光流式细胞仪测定Fas抗原表达。结果：γ－干扰素上调角质形成细胞Fas抗原表达（P＜0．01）,诱导角质形成细胞凋亡（P＜0．01）,结论：γ－干扰素可能通过上调角质形成细胞Fas抗原表达,进而诱导角质形成细胞凋亡而参与银屑病发病。     

皮肤科学基础

20 0 12 834　 ︽-干扰素诱导角质形成细胞凋亡及其 Fas抗原表达研究 /张峻岭 (天津市长征医院皮肤科 )…∥中国皮肤性病学杂志 .- 2 0 0 1,15 (3) .- 16 3～ 16 4应用流式细胞仪测定角质形成细胞中亚二倍体细胞含量 ,片段化 DNA分析及 Annexin V法检测经 γ-干扰素诱导的角质形成细胞凋亡 ,并采用组化法、流式细胞仪测定经 γ-干扰素作用后角质形成细胞中 Fas抗原表达情况。结果表明 ,γ-干扰素可诱导角质形成细胞凋亡 ,并上调角质形成细胞中 Fas抗原的表达。提示 γ-干扰素可能通过上调角质形成细胞中 Fas抗原的表达 ,从而诱导角质形…     

药物实验湿疹离体模型的初步应用

目的利用干扰素-γ(IFN-γ)与抗Fas单克隆抗体(AntiFasmab)诱导角质形成细胞凋亡,模拟湿疹样皮炎的部分发病机制作为离体实验模型,研究中药单体人参皂甙化合物Ⅰ、Ⅱ的可能治疗作用.方法将IFN-γ、AntiFasmab作用于体外培养角质形成细胞colo-16,用流式细胞仪、倒置显微镜、荧光显微镜观察colo-16细胞凋亡情况及单体人参皂甙化合物Ⅰ、Ⅱ对colo-16凋亡的抑制作用.结果①流式细胞仪检测IFN-γ对colo-16细胞Fas抗原的表达有明显的上调作用.②colo-16表面Fas抗原的表达与其凋亡呈正相关.③IFN-γ、AntiFasmab二者联合作用于colo-16可诱导细胞凋亡,镜下可见典型的细胞凋亡形态学特征.④单体人参皂甙化合物Ⅰ、Ⅱ对colo-16的凋亡有部分阻断作用.结论①IFN-γ对角质形成细胞Fas抗原的表达有上调作用.②IFN-γ、AntiFasmab共同作用可诱导角质形成细胞凋亡.③单体人参皂甙化合物Ⅰ、Ⅱ可抑制角质形成细胞凋亡.     

β-溶血型链球菌诱发银屑病发病机理探讨

探讨β-溶血性链球菌诱发银屑病的机制。采用3H-TdR掺入法测定细胞增殖反应,AnnexinV法测定细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞表面抗原表达。结果显示β-溶血性链球菌(SP)刺激淋巴细胞活化增殖,经SP活化的淋巴细胞培养上清液作用于角质形成细胞48h,可促进角质形成细胞增殖,诱导角质形成细胞表达HLA-DR和Fas抗原;再次加入上清液继续作用48h,则诱导角质形成细胞凋亡。SP作为超抗原首先活化T细胞,使之释放细胞因子,后者使角质形成细胞活化增殖,表达和抗原,继而诱导细胞凋亡,此过程可能是银屑病的主要发病机制之一。     

金黄色葡萄球菌性超抗原诱发银屑病发病机理探讨

目的探讨金黄色葡萄球菌性超抗原诱发银屑病的机制。方法3H-TdR掺入法测定细胞增殖反应,亚二倍体细胞含量测定,片段化DNA分析,膜联蛋白V(AnnexinV)法测定细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞表面抗原表达。结果金黄色葡萄球菌肠毒素B活化的淋巴细胞培养上清液作用于角质形成细胞48h,可促进角质形成细胞增殖,诱导角质形成细胞表达HLA-DR和Fas抗原;再次加入上清液继续作用48h,则诱导角质形成细胞凋亡（P<0.01）。结论金黄色葡萄球菌肠毒素B作为超抗原活化T细胞,使之释放细胞因子,后者使角质形成细胞首先活化增殖,继而凋亡。     

皮肤科学基础

20131668 PML基因诱导角质形成细胞凋亡及其Fas,Fasl和Bcl-2表达/王琼玉(西安交大医学院二附院皮肤科),马慧群,王世捷…//中国皮肤性病学杂志.-2013,27(6).-550~596通过流式细胞仪及AnnexinV法检测经PML基因转染的角质形成细胞凋亡;采用免疫组织化学、基因探针杂交测定经PML基因作用后的角质形成细胞Fas,Fasl和Bcl-2表达。结果:PML基因上调角质形成细胞Fas及Fasl表达(P<0.01),抑制Bcl-2基因表达,诱导     

葡萄球菌性超抗原对银屑病患者外周血淋巴细胞产生白介素-2、γ-干扰素的影响

银屑病患者外周血淋巴细胞对葡萄球菌性超抗原（葡萄球菌肠毒素B，SEB)和链球菌超抗原刺激反应增强，且经SEB刺激的银屑病患者外周血淋巴细胞(PBLC)培养上清液可促进角质形成细胞增殖，表达HLA-DR和Fas抗原，继而诱导细胞凋亡。为了进一步探讨培养上清液对角质形成细胞的作用机制，笔者检测了SEB刺激前后的银屑病患者淋巴细胞培养上清液中白介素(IL）-2、γ-干扰素（IFN-γ)的水平变化，现将结果报告如下。     

Fas、Bcl-2在银屑病皮损中的表达

为观察Fas、Bcl-2在银屑病患者表皮中的表达，探讨其与寻常型银屑病的相关性。采用免疫组织化学技术（IHC）对40例寻常型银屑病患者与20例正常人表皮中Fas、Bcl-2的表达进行了检测。结果：免疫组织化学染色显示寻常副银屑病组Fas、Bcl-2阳性细胞数密度较正常对照组明显增多，有显著统计学意义（P〈0．01）。进行期银屑病皮肤组织中Fas、Bcl-2的表达高于静止期银屑病组（P〈0．01）。由此可知：（1）Fas的高表达引起银屑病角质形成细胞的异常凋亡，且对维持银屑病的良性增生有一定的作用；（2）高表达的Bcl-2可通过抑制凋亡而促进银屑病患者角质形成细胞的增生。     

银屑病患者外周血CD4+T细胞内干扰素γ、白介素4表达与发病的关系

目的：探讨干扰素γ（IFN－γ）、白介素4（IL－4）表达在银屑病发病中的作用。方法：银屑病患者和正常人外周血经碘诺霉素和佛波酯刺激（同时加莫能呈抑制细胞因子向细胞外转移）后用三色荧光抗体染色；用流式细胞仪检测CD4^ T细胞内细胞因子IFN－γ、IL－4的表达情况。结果：未加刺激物时，银屑病患者与正常人外周血CD4^ ／IF－γ^ 细胞数量分别占0．79％、0．88％，CD4^ ／IL－4^ 细胞数量分别占1．92％、1．88％，两组间IFN－γ、IL－4的表达差异无显著性（P＞0．05）；经碘诺霉素和佛波酯刺激后银屑病患者CD4^ ／IFN－γ^ 细胞数量占21．69％，明显高于正常人对照组10．26％（P＜0．001），CD4^ ／IL－4^ 细胞数量分别占4．24％、4．40％，两组间差异无显著性（P＞0．05）。结论：未活化的CD4^ T细胞分泌的细胞因子极少。经抗原刺激后银屑病患者外周血Th1、Th2细胞分化失衡，导致IFN－γ异常表达，其在银屑病发病机制中起重要作用。     

皮肤科学基础

２００１０６６３β－溶血型链球菌与角质形成细胞增殖和凋亡研究／张峻岭（天津长征医院皮肤科）…／／中国皮肤性病学杂志．－２０００，１４（５）．－３０２～３０４ 为探讨β－溶血型链球菌诱发银屑病的机制，应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定角质形成细胞增殖反应，以流式细胞仪测定亚二倍体含量．行ＤＮＡ片段化分析，再应用 Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ法测定磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）“膜外化”细胞含量，观察细胞凋亡的早期表现。结果链球菌抗原悬液（ＳＰ）活化的Ｔ淋巴细胞上清液作用于角质形成细胞的Ｃｏｌｏ－１６细胞４８ｈ后，细胞的刺激指数…     

β-溶血型链球菌与角质形成细胞增殖和凋亡研究

目的 探讨β－溶血型链球菌诱发银屑病的机制。方法 ＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法、流式细胞仪测定亚二倍体含量、片段化ＮＤＡ分析、ＡｎｎｅｘｉｎＶ凋亡检测法。结果 链球菌悬液活化的外周血细胞培养上清液作用于角质形成细胞４８ｈ，可促进角质形成细胞增殖，再次加入上清液继续作用４８ｈ，则诱则细胞凋亡（Ｐ〈０．０１）；而链球菌本身对角质形成细胞增殖或凋亡无明显影响。结论 链球菌作为超抗原活化Ｔ细胞，使之释放细胞因子而     

红斑、丘疹及鳞屑性皮肤病

20 0 0 3147　银屑病患者皮损中细胞凋亡情况的评价 /茅晓红 (浙江大学医学院附二院皮肤科 )…∥中华皮肤科杂志 .- 2 0 0 0 ,33( 2 ) .- 77～ 79为探讨细胞凋亡与银屑病表皮过度增殖及免疫——炎症失调之间的关系 ,对银屑病患者皮肤中 Bax、Fas及其配体 ( Fas- L )的表达和细胞凋亡情况进行了检测。采用免疫组化 SP法 ,并用 TUNEL技术。结果银屑病皮损中各层的 Fas的表达均明显上调 ,且多数部位 Fas- L明显增高 ,Bax轻度增高。角质形成细胞凋亡增多。认为银屑病中当大量 Fas阳性淋巴样细胞与Fas- L阳性淋巴样细胞甚至角质形成细胞…     

干扰素诱导蛋白16在银屑病患者皮损中的表达及其调控

目的研究干扰素诱导蛋白16(interferon inducible protein 16,IFI16)在银屑病中的表达及分布,探讨其在银屑病发病中的作用。方法采用RT-PCR、免疫组化的方法分别检测10例银屑病患者皮损和10例健康人皮肤组织真皮与表皮中IFI16的表达情况;采用RT-PCR、Western印记方法检测IFN-γ,TNF-α,IL-17刺激前后Ha Ca T细胞中IFI16的表达情况。结果银屑病患者皮损处IFI16的表达明显高于健康人皮肤,并且以表皮表达为主,免疫组化结果显示IFI16主要定位于银屑病患者的角质形成细胞中。银屑病相关细胞因子IFN-γ,TNF-α和IL-17可以上调角质形成细胞中IFI16的表达水平。结论IFI16在银屑病患者皮损处表达明显高于正常人皮肤,并且IFN-γ,TNF-α和IL-17可以诱导其表达上调,可能是银屑病角质形成细胞的活化机制之一。     

系统性红斑狼疮患者bcl-2及Fas、Fas配体表达与淋巴细胞凋亡的关系

目的：对SLE患者外周血淋巴细胞凋亡率以及凋亡凋控基因表达蛋白bcl-2、Fas抗原和Fas配体进行分析,以进一步探讨其在SLE发病中的作用及相互关系。方法：应用流式细胞仪检测。结果：SLE患者外周血淋巴细胞凋亡率明显视于正常人（P＜0.01）和其他疾病患者（P＜0.05）;bcl-2抗原表达显著低于正常人和其他疾病患者（P＜0.01）,而Fas抗原、Fas配体表达三组间无明显差异。结论：SLE患者体内淋巴细胞凋亡的明显增加可能与其发病有关,而bcl-2对淋巴细胞凋亡抑制作用的减弱可能较Fas／Fas配体诱导促进淋巴细胞的凋亡更为重要。     

氧化苦参碱诱导角质形成细胞凋亡研究

目的 探讨苦参治疗银屑病的机制。方法 采用流式细胞仪测定亚二倍体细胞含量、ＤＮＡ片段化分析和ＡｎｎｅｘＶ（膜联蛋白Ｖ）凋亡检测法，观察氧化苦参碱９ＯＭＴ）对角质形成细胞凋亡的影响。结果 ＯＭＴ使角质形成细胞的亚二倍体细胞、ＤＮＡ片段化率及磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）膜外化细胞含量明显升高（Ｐ〈０．０１），首次发现一定浓度的ＯＭＴ可诱导角质形成细胞凋亡。结论 ＯＭＴ诱发角质形成细胞凋亡，这可能是苦参治疗银屑病的主要机制之一。     

银屑病患者淋巴细胞与角质形成细胞体外培养NF-κB的表达

目的：探讨银屑病发病中淋巴细胞和角质形成细胞的相互作用及核因子调控机制。方法：从银屑病患者外周血分离单一核细胞（PBMC）．正常人皮肤体外培养获角质形成细胞（KC），两者混合培养，利用流式细胞仪分析培养体系及PBMC、KC各自的转录因子NF-κB表达，ELISA法测上清液中IL-8、ICAM—I含量。结果：银屑病患者培养体系及PBMC、KC中NF—κB和细胞因子的表达水平均高于健康对照组（P〈0．01）。结论：银屑病患者中NF—κB的活化增强是其发病的重要因素，同时提示抑制NF—κB活性的药物可能有助于银屑病的治疗。     

砷化物抑制银屑病角质形成细胞增殖的研究

银屑病主要表现为角质形成细胞过度增殖及凋亡异常,其中角质形成细胞过度增殖是由于细胞凋亡功能障碍或失调所致,凋亡缺陷在银屑病的发病机制巾发挥着重要作用。研究表明,砷化物可以通过对Fas/Fas配体、端粒和端粒酶的影响以及联合阻断JNK等多种途径诱导角质形成细胞凋亡,从而抑制其过度增殖。因此,砷化物有望成为一种局部治疗银屑病的新型药物。     

银屑病患者外周血单个核细胞Thl／Th2细胞因子表达研究

目的 探讨Thl／Th2细胞因子在银屑病发病机理中的作用。方法 应用逆转录-聚合酶链反应法(RT—PCR)半定量分析19例正常对照和22例银屑病患者外周血单个核细胞中TNFα、IFN-γ和IL-4、IL-l0 mRNA的表达。结果 银屑病患者TNFα和IFN-γ表达显著上调(P＜0．01)，而IL-4显著降低(P＜0．01)，IL—10较正常降低但无显著差异(P＞0．05)。结论 Thl型细胞因子在银屑病患者中过度表达，可能提示银屑病免疫病理机理中的T淋巴细胞活化模式。     

角质形成细胞生长因子及其受体反义寡核苷酸对HaCaT细胞的影响

目的研究角质形成细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)反义寡核苷酸对KGF介导的细胞周期和凋亡变化的抑制作用。方法利用永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞进行体外培养,流式细胞仪检测KGF引起的HaCaT细胞细胞周期和凋亡变化以及KGFR mRNA反义寡核苷酸对KGF的抑制作用。结果 10ng/mL KGF刺激24 h后可使S期比率较自然生长组增加15%(P＜0．05),并伴凋亡增加2．9%(P＜0．01)。针对KGFR mRNA不同位点的2个序列反义寡核苷酸作用后,S期比率和凋亡率降低,且抑制作用呈浓度依赖性(P均＜0．05)。反义寡核苷酸作用后G_0G_1期相应增加,也呈浓度依赖性(P＜0．01)。各实验组G_2M期比率差异无统计学意义(P均＞0．05)。结论 KGF可能是造成银屑病KC增殖和凋亡的诱因。KGFR mRNA反义寡核苷酸对KGF介导的HaCaT细胞增殖、凋亡增加具有抑制作用。     

干扰素γ/Fas介导的HaCaT细胞凋亡及8种人参皂甙的作用

目的体外诱导角质形成细胞凋亡并研究人参皂甙对细胞凋亡的影响。方法将IFN-γ,Anti Fas Ab作用于体外培养角质形成细胞HaCaT诱导细胞凋亡,并检测人参皂甙对细胞凋亡的影响。结果50 ng/mL IFN-γ和25 ng/mL Anti Fas Ab共同作用可以诱导21.5%角质形成细胞HaCaT凋亡。8种人参皂甙中,Mx,CK和Re可逆转Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡,逆转率分别为18.4%,14.5%和9.6%。结论IFN-γ和Anti Fas Ab共同作用可诱导HaCaT细胞凋亡。人参皂甙Mx,CK和Re对Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡有一定的抑制作用。