创伤后应激障碍样行为异常大鼠海马钙/钙调素依赖性蛋白激酶IIá偄表达

目的　探讨创伤后应激障碍 (PTSD)样精神与行为异常的神经生物学机制。方法　在大鼠海马惊厥阈下电刺激PTSD动物模型基础上 ,采用流式细胞仪、荧光标记术及Westernblotting等方法 ,定量观测了PTSD样行为异常大鼠海马细胞内游离Ca2 + 含量与钙调素 (CaM )相对活性平均通道荧光 ,及海马组织总CaM、Ca2 + /CaM依赖性蛋白激酶II偄(CaMKII偄)表达的动态变化规律。结果　电刺激停止后 72h内阈下刺激组实验动物海马细胞内游离钙浓度明显增高 ,游离CaM平均通道荧光则同步降低 ;而海马组织总CaM表达于电刺激停止后 48h内明显增多 ,CaMKII偄表达则显著降低?崧邸『B硐赴鸆a2 + CaM CaMKII偄信号途径调控紊乱可能是实验动物长时程ＰＴＳＤ样行为异?闹匾±砩砘≈     

创伤后应激障碍样行为异常大鼠海马钙/钙调素依赖性蛋白激酶IIá表达

目的 探讨创伤后应激障碍(PTSD)样精神与行为异常的神经生物学机制.方法 在大鼠海马惊厥阈下电刺激PTSD动物模型基础上,采用流式细胞仪、荧光标记术及Western blotting等方法,定量观测了PTSD样行为异常大鼠海马细胞内游离Ca2+含量与钙调素(CaM)相对活性平均通道荧光,及海马组织总CaM、Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶IIá(CaMKIIá)表达的动态变化规律.结果 电刺激停止后72 h内阈下刺激组实验动物海马细胞内游离钙浓度明显增高,游离CaM平均通道荧光则同步降低;而海马组织总CaM表达于电刺激停止后48h内明显增多, CaMKIIá表达则显著降低.结论 海马细胞Ca2+-CaM-CaMKIIá信号途径调控紊乱可能是实验动物长时程PTSD样行为异常的重要病理生理基础之一.     

创伤后应激障碍行为异常大鼠海马钙／钙调素依赖性蛋白激酶11α表达

目的：探讨创伤后应激障碍（PTSD）样精神与行为异常的神经生物学机制。方法：在大鼠海马惊厥阈下电刺激PTSD动物模型基础上，采用流式细胞仪、荧光标记术及Western blotting等方法，定量观测了PTSD样行为异常大鼠海马细胞内游离Ca^2 含量与钙调素（CaM)相对活性平均通道荧光，及海马组织总CaM、Ca^2 ／CaM依赖性蛋白激酶IIα（CaMKIIα）表达的动态变化规律。结果：电刺激停止后72h内阈下刺激组实验动物海马细胞内游离钙浓度明显增高，游离CaM平均通道荧光则同步降低；而海马组织总CaM表达于电刺激停止后48h内明显增多，CaMKIIα表达则显著降低。结论：海马细胞Ca^2 -CaM-CaMKIIα信号途径调控紊乱可能是实现动物长时程PTSD样行为异常的重要病理生理基础之一。     

创伤后应激障碍大鼠海马神经元分子伴侣钙网蛋白表达的变化

目的检测分子伴侣钙网蛋白(CRT)在创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马神经元中表达的变化,探讨CRT对PTSD大鼠海马神经元内Ca2+信号的调节,为研究PTSD海马记忆异常的发病机制提供依据。方法采用单一延长应激(SPS)方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,成年健康雄性Wistar大鼠随机分为SPS1 d、4 d、7 d组和正常对照组。采用免疫组织化学、免疫印迹和逆转录聚合酶链反应检测大鼠海马神经元CRT的表达变化;用荧光探针标记法检测大鼠海马神经细胞内游离Ca2+浓度变化。结果 SPS刺激后大鼠海马神经元CRT的表达于刺激后7 d最多;细胞内游离Ca2+浓度于1 d增至顶峰,之后逐渐下降。结论PTSD致内质网应激、海马神经元钙超载、内质网分子伴侣CRT表达上调、激活未折叠蛋白反应,可导致细胞凋亡,这可能是PTSD大鼠海马记忆异常的病理生理基础。     

创伤后应激障碍大鼠海马分子伴侣葡萄糖调节蛋白94表达的变化

目的观察创伤后应激障碍(PTSD)模型大鼠海马神经元分子伴侣葡萄糖调节蛋白94(GRP94)的表达变化。方法建立单一延长应激(SPS)大鼠模型,随机分为SPS刺激后第7天组、第14天组及正常对照组,采用免疫组化、Western blot、RT-PCR方法检测各组海马神经元GRP94的表达。结果免疫组化及Western blot结果均显示:造模第7天海马神经元GRP94蛋白表达较正常对照组明显增加(P<0.05),而第14天明显降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示:造模第7天海马神经元GRP94 mRNA水平明显增加(P<0.05),第14天则明显降低。结论 PTSD大鼠海马GRP94蛋白水平发生了变化,为进一步研究内质网径路细胞凋亡提供了实验基础。     

尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca2+浓度及Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα表达的影响

目的 探讨尼莫地平( nimodipin,NIM)对戊四氮( pentylenetetrazol,PTZ) 点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离 Ca2+浓度([Ca2+]I)、ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium / calmodulin-dependent protein kinase Ⅱa,CaMKⅡα 蛋白表达的影响.方法 将动物分为正常对照组、PTZ 组和 NIM + PTZ组,采用 PTZ 慢性点燃癫痫模型,应用 Mor-ris 水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]I变化,Western blot方法测定 CaMKⅡα蛋白的表达.结果 PTZ 组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]I明显升高(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少(P<0.05);与 PTZ 组比较,NIM + PTZ 组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马细胞内[Ca2+]I;下降(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平升高(P<0.05).结论 PTZ 点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常,由此引起大鼠空间学习记忆能力受损;NIM 可以降低细胞内[Ca2+]I;,提高 CaMKⅡα的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力.     

戊四氮点燃癫痫大鼠海马Ca2+浓度及CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ的表达

目的 探讨戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+] i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIα ( calcium / calmodulin-dependent protein kinase IIα, CaMKIIα) mRNA的表达.方法 动物分为正常对照组和PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Morris水迷宫观察2组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]i浓度变化,反转录多聚酶链反应方法测定海马CaMKIIα mRNA的表达.结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]i浓度明显升高(P<0.05),CaMKIIα mRNA表达水平明显降低(P<0.05).结论 PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKIIα的表达异常,由此引起空间学习记忆受损.     

创伤后应激障碍大鼠海马神经元凋亡和Akt/mTOR信号通路的改变

目的 检测创伤后应激障碍（PTSD）模型大鼠海马神经元凋亡和蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉系靶蛋白(mTOR)信号通路的改变,探讨PTSD发病机制。方法 将成年健康雄性SD大鼠60只分为对照组（n=10）和模型组（n=50）。采用改良的单一连续应激方法制备PTSD大鼠模型,在造模后1 d、4 d、7 d、14 d和28 d处死大鼠（每个时间点处死5只）,流式细胞术检测海马神经元凋亡率,Western blot方法检测海马第10号染色体缺失性磷酸酶张力蛋白同源物基因编码产物（PTEN）、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）的表达水平。 结果 PTSD后1 d、4 d、7 d和14 d大鼠海马神经细胞凋亡率高于对照组（P<0.05）;PTSD后1 d大鼠海马PTEN蛋白表达高于对照组（P <0.05）,4 d达高峰,14 d仍高于对照组（P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平在PTSD后1 d即低于对照组（P<0.05）,以后逐渐增高,28 d仍低于对照组（P<0.05）;p-mTOR蛋白在PTSD后4 d低于对照组（P<0.05）,以后逐渐增高,但28 d仍低于对照组（P<0.05）。结论 PTSD模型大鼠海马神经元Akt/mTOR信号通路激活,参与海马神经元凋亡调控。     

大鼠创伤后应激障碍模型的建立及其海马糖皮质激素受体的变化

目的 建立较理想的创伤后应激障碍（PTSD）动物模型，并初步探讨脑组织糖皮质激素受体（GR）变化规律。方法 采用频率25Hz、波宽1ms、串长10s、串隔7min、强度100μA的恒流、单脉冲电流，反复刺激大鼠海马建立PTSD模型，观察实验情感行为改变；并利用Western blot法检测脑组织GR.要通过反复惊厥阈下电刺激海马，成功诱发了实验动物较长时程 明显活动习性改变、警觉水平增高、惊恐行为、环境适应能力下降、射藏逃避反应等多种PTSD样情感行为障碍；电刺激停止后1周内海马GR表达明显增高。结论 海马惊厥下电刺激可基本满足PTSD主要临床表现，而海马结构GR持续高表达可能直接参与了PTSD持续性精神行为障碍和发生发展过程。     

碳酸锂对慢性应激抑郁模型大鼠海马蛋白激酶A和蛋白激酶C表达的影响

  目的 研究碳酸锂对慢性应激抑郁模型大鼠海马蛋白激酶A（PKA）和蛋白激酶C（PKC）表达的影响。方法 将大鼠随机分为抑郁模型组、碳酸锂组和对照组。模型组和碳酸锂组给予21 d的应激刺激,此期间对照组正常饲养,刺激期间碳酸锂组每天灌胃给予碳酸锂（60 mg/kg）,模型组和对照组每天灌胃给予等体积的生理盐水。应用open-field法和液体消耗实验进行行为学检测。采用Western blot检测各组大鼠海马PKA和PKC的表达情况。结果 应激后,模型组大鼠水平穿越格数、竖立次数、修饰次数和糖水消耗百分比均显著低于对照组,碳酸锂组水平穿越格数和糖水消耗百分比低于对照组（P0.05）。Western blot结果显示,模型组大鼠海马PKA和PKC的表达水平显著低于对照组（P0.05）。结论 碳酸锂可以逆转慢性应激抑郁模型大鼠海马中PKA和PKC表达的降低,碳酸锂对PKC表达的影响大于对PKA的影响。     

睫状神经营养因子对应激大鼠行为和海马神经元的影响

目的探讨睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对应激大鼠行为和海马神经元的影响。方法采用海马ＣＡ１区微注法，旷场试验法，Ｎｉｓｓｌ染色法和细胞计数观察应激大鼠的行为和海马神经元数量的变化及１００Ｕ、５００Ｕ、１０００Ｕ的ＣＮＴＦ对它们的作用。数据以ｘ±ｓ表示，经ｔ检验。结果５００Ｕ和１０００Ｕ的ＣＮＴＦ可显著增加慢性应激大鼠的水平活动和垂直活动（Ｐ＜０．０５～０．０１），明显减少应激大鼠海马神经元细胞的丢失（Ｐ＜０．０５）。结论ＣＮＴＦ对慢性应激大鼠海马神经元损伤具有保护作用，并可能通过海马神经元介导增加慢性应激大鼠的行为活动     

神经肽Y经Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶途径诱导心肌细胞肥大

目的 观察神经肽Y(NPY)诱导心肌细胞肥大效应,及Ca2+/CaM依赖的钙调神经磷酸酶(CaN)途径在其中起的作用.方法 用NPY(10、100nmol)刺激心肌细胞,用环胞索A(CsA)特异性抑制CaN活性.测定心肌细胞蛋白合成速率(3H-Leu掺入量)、CaN-蛋白表达、c-jun mRNA表达、CaN酶活性、细胞内游离钙含量.结果 (1)在100nmol NPY作用下,心肌细胞3H-Leu掺入量及c-jun mRNA表达量均较对照组显著增高(P<0.05,P<0.001).NPY+CsA组和对照组相比无显著差别.(2)在100 nmol NPY作用下,NPY组心肌细胞内CaN酶比活力、CaN-α表达、胞浆及核内钙含量较对照组显著增高(P<0.05,P<0.05,P<0.001,P<0.001).结论 NPY可刺激心肌细胞肥大,CaN信号途径在其中起重要作用.     

不同应激方式与时程对大鼠海马CA3区HSP70表达及血清皮质醇含量的影响

目的：探讨不同应激方式与时程对大鼠海马CA3区热休克蛋白70（HSP70）表达及血清皮质醇含量的影响.方法：采用慢性限制活动应激（CRS）作为可预知性应激动物模型,每天随机给予不同轻度应激刺激建立慢性不可预知性应激（CMS）动物模型,观察两组动物海马CA3区HSP70的表达及血清皮质醇含量.结果：CMS大鼠海马神经细胞开始出现损伤的时间较CRS晚,损伤程度较CRS轻.CRS较CMS大鼠海马CA3区HSP70表达逐渐增强,且与对照组比较有统计学差异（P＜0.01）.应激组大鼠血清皮质醇较对照组高,动态观察显示应激早期达到高峰.结论：CRS大鼠海马的损伤及HSP70的表达均较CMS明显.不同的应激方式下大鼠HSP70细胞保护效应较损伤效应有所延迟,提示应激前诱导HSP70表达可能会起到预防细胞死亡的作用.     

鞘内注射钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂对坐骨神经损伤大鼠的镇痛作用

目的 探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在神经病理性疼痛中的作用.方法 大鼠48只随机分为6组:坐骨神经分支选择性损伤组(SNI组)、假手术组(Sham组)、术前鞘内注射AlP(autocamtide-2-related inhibitory peptide AIP)或生理盐水组(BA组、BN组)、术后鞘内注射AIP或生理盐水组(AA组、AN组).测定SNI大鼠注射AIP前后机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)的改变.结果 SNI大鼠从术后第2天至第14天出现明显的机械痛敏,鞘内注射AIP能够缓解SNI大鼠的机械痛敏,术前给药组术后1 d、2d、3d的MWT分别为(9.0±1.1)g、(9.1±1.5)g、(7.5±1.5)g,显著高于SNI组[分别为(5.9±0.9)g、(5.6±1.0)g、(5.7±1.0)g,均P<0.01];术后给药能缓解SNI大鼠的机械痛敏约4h,较之术前给药为短.结论 CaMKⅡ参人了神经病理性痛大鼠疼痛的调节.     

下调蛋白磷酸酯酶2A活性对抑郁症大鼠症状改善效果及其作用机制

目的 探讨下调蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)活性对抑郁模型大鼠症状改善效果及其作用机制.方法 以慢性温和不可预知应激诱导抑郁症大鼠模型30只,分为对照A组、对照B组、低浓度冈田酸(OA)组、中浓度OA组、高浓度OA组及最优浓度OA组各5只;检测对照A组、对照B组、低浓度OA组、中浓度OA组、高浓度OA组PP2A的活性,筛选最优浓度OA;对照A组及对照B组分别从侧脑室微量注射无菌生理盐水5μl,低浓度OA组、中浓度OA组、高浓度OA组、最优浓度OA组分别从侧脑室注射浓度为5 nmol/L、10 nmmol/L、20 nmol/L及最优浓度OA溶液各5μ1.对对照B组及最优浓度OA组进行蔗糖水消耗试验、旷场试验、体重及水迷宫等行为学测试,检测去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、皮质醇(CORT)水平,检测脑组织中酪氨酸羟化酶(TH)、细胞外信号激酶(ERK)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)及糖原合酶激酶3β(GSK-3β)的蛋白水平及磷酸化水平检测.结果 OA组的浓度越高PP2A的活性越低(P＜0.01),将20 nmol/L OA组设为最优浓度OA组;最优浓度OA组旷野实验的水平及垂直得分均高于对照B组(P＜0.05);随观察时间延长,最优浓度OA组的糖水饮用量、体重增加,水迷宫逃避潜伏期缩短(P＜0.05),且在给药后第8、15、22天,与对照B组比较,其糖水饮用量、体重均较高,水迷宫逃避潜伏期较短(P＜0.05);最优浓度OA组NE、5-HT水平,TH、ERK、AKT蛋白水平以及TH、ERK、AKT、GSK-3β的磷酸化水平均高于对照B组(P＜0.05);最优浓度OA组CORT水平以及GSK-3β蛋白水平均低于对照B组(P＜0.05).结论 PP2A的活性随OA浓度升高而降低,下调PP2A活性可能通过调节TH、ERK以及AKT/GSK-3β信号途径,从而改善大鼠的抑郁症状.     

Differential activation of mitogen-activated protein kinases by γ-irradi-ation in IEC-6 cells: Role of intracellular Ca~(2 )

Objective: To explore the effects of γ-irradiation on mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and role of intracellular calcium in this event in intestinal epithelial cell line 6 (IEC-6 cells). Methods: After cultured rat IIEC-6 cells with or without the pretreatment of intracellular Ca2 chelator were exposed to Y-ir-radiation of 6 Gy, the total and phosphorylated MAPKs in the cells were determined with Western blotting and apoptosis was examined with flow cytometry. Activities of Extracellular signal-regulated protein kinase (ERK) and p38 MAPK were determined by using immuoprecipitation followed by Western blotting. Results: In response to γ-irradiation, phosphorylation of ERK was not significantly observed, while the levels of phosphorylated c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) and p38 MAPK were increased in 30 min and reached the peak 2 h after exposure to 6 Gy γ-irradiation, though the cell viability was significantly lowered 12 h. On the other hand, no obvious changes were seen in the total protei     

条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区丝裂原活化蛋白激酶p38表达变化

目的 探讨大鼠恐惧记忆形成过程中海马CA1/CA3区丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)表达及活性变化.方法 电击组及对照组大鼠各9只,分别给予或不给足底电击,1h和24h 后检测大鼠的僵住反应,然后处死动物,分别提取海马CA1和CA3区蛋白,western blot检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK表达情况.结果 电击组的大鼠在lh和24h的僵住反应的时间分别为(49.1±18.6)s,(75.7±19.6)s,明显高于对照组[分别为(14.0±4.5)s,(32.1±22.7)s],差异有统计学意义(n=9,P ＜0.05);在24h电击组大鼠海马CA1区p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK (Thr180/Tyr182)表达平均灰度值比值分别为9.4±2.6和7.8±2.1,与对照组(1.0±0.1和1.0±0.2)比较表达显著增加(n=9,P＜0.05);24h电击组大鼠海马CA3区p38 MAPK及磷酸化p38 NAPK(Thr180/Tyr182)表达平均灰度值比值分别为6.2±3.3和2.6±0.6,与对照组(2.1±0.5和1.4±0.5)比较表达显著增加(n=9,P＜0.05).结论 条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区p38 MAPK蛋白表达升高,活性增强.p38 MAPK可能参与了条件恐惧长时记忆的形成.     

重复经颅磁刺激对慢性不可预见性应激大鼠抑郁样行为及海马脂质的影响

目的:探讨重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)对慢性不可预见应激(chronic unpredictable stress,CUS)大鼠抑郁样行为及海马脂质的影响。方法:将24只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组(sham组)、模型组(CU...     

高低攻击行为大鼠不同脑区γ-氨基丁酸B2受体表达的差异

目的 通过检测和比较高、低攻击行为大鼠多个脑区内γ-氨基丁酸B2受体(γ-aminobutyric acid receptor B2,GABABR2)的表达情况,为探索GABA及其受体在大鼠攻击行为中的作用机制提供线索.方法应用社会隔离加居住入侵法制备高、低攻击行为大鼠模型,分别取正常、高攻击行为、低攻击行为大鼠(n=10/组)的顶区皮质、前额区皮质、下丘脑和海马,运用RT-PCR和Western blot分别检测3组大鼠各脑区GABABR2 mRNA和蛋白表达情况.结果 高攻击行为组大鼠顶区、前额区、下丘脑和海马GABABR2RT-PCR/Westem blot电泳条带相对积分光密度值[分别为(0.507±0.049/0.626±0.038)、(0.609±0.049/0.652±0.010)、(0.359±0.030/0.731±0.044)、(0.296±0.054/0.452±0.079)]低于正常组,差异有统计学意义(P＜0.05);低攻击行为组大鼠顶区和海马内GABABR2 RT-PCR/Western blot电泳条带相对积分光密度值均高于正常组,均差异有统计学意义(均P＜0.05),而前额区和下丘脑却低于正常组,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 大鼠顶区、前额区、下丘脑和海马内GABABR2差异表达与高、低攻击行为密切相关,可能是GABA参与调节攻击行为的机制之一.