麻疹病毒抗原检测在儿童麻疹早期诊断中的应用价值

麻疹诊断一直以来依赖临床表现和麻疹病毒(MV)特异性IgM的检测.MV感染早期IgM抗体的临床实验室检出阳性率低,国内报道通常在50%左右[1],在儿童尤其是婴幼儿麻疹诊断中的应用有局限性.为此,我科于2003年3月～2004年12月间采用间接免疫荧光法(IFA)对238例麻疹患儿的鼻咽部分泌物或咽拭子进行MV抗原检测,并和ELISA法检测MV IgM抗体的结果进行比较,现报道如下.     

间接免疫荧光法检测呼吸道非典型病原体临床应用评价

呼吸道感染性疾病中,细菌性病原体感染多见,主要菌种为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、结核杆菌等。实验室通过细菌培养和药敏试验,帮助临床诊治疾病,这是运用广泛而且经典的方法。近年来,人们发现呼吸道疾病嗜肺军团菌（LP）、肺炎支原体（MP）、Q热立克次体（QFR）、肺炎衣原体（CP）、腺病毒（ADV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、甲型流感病毒（INFA）、乙型流感病毒（INFB）、副流感病毒（PIVs）等非典型病原体感染日渐增多,造成病情迁延加重,逐渐引起临床重视。     

免疫印迹法与间接免疫荧光法在副肿瘤性天疱疮自身抗体检测中的应用

目的 探讨免疫印迹法(immunoblot, IB)与间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence, IIF)在副肿瘤性天疱疮(paraneoplastic pemphigus, PNP)自身抗体检测中的应用。方法 收集2007年7月—2017年10月上海交通大学医学院附属瑞金医院收治的11例PNP患者的血清和4例健康体检者血清。分别应用以鼠膀胱和猴食道为底物的IIF对患者血清进行检测;同时环切包皮分离表皮后提取表皮抗原成分,进行IB分析。结果 以鼠膀胱为底物的IIF检测中,11例PNP患者血清中有6例呈阳性表达;以猴食道为底物的IIF检测中,11例结果均为阴性。IB检测中,7例检出IgG抗体,均与相对分子质量为190 000 Da的蛋白多肽结合,其中5例同时与相对分子质量为210 000 Da的蛋白多肽结合。两种方法合用共检出8例阳性。对照组未检出PNP相关的特异性抗体。结论 以鼠膀胱为底物的IIF检测可作为PNP的过筛试验,而利用环切包皮分离表皮行IB检测可作为前者的补充。     

伤寒杆菌抗原检测在伤寒早期诊断中的应用

伤寒是由伤寒杆菌引起的急性肠道传染病，目前仍是我国及世界上许多发展中国家较为常见的传染病之一，选择适肖的检测方法对其早期诊断有着非常重要的意义。我们用ELISA法检测伤寒杆菌抗原对我院2003年7月至2005年5月门诊、病房共216例持续高热、疑似伤寒患者做了检测，现总结如下。     

间接免疫荧光法检测抗核抗体的临床应用

抗核抗体(ANA)是自身免疫病检测的主要项目之一,主要存在于IgG中。临床上用免疫光法检测抗核抗体报道很多,文献提示它是一个很敏感的试验,尤其是系统性红斑狼疮(SLE)阳性率最高。为了观察该方法在热带地区一海南岛的敏感性及临床应用价值,现报道97例阳性患者的临床疾     

猴泡沫病毒间接免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的建立检测血清中猴泡沫病毒(SFV)抗体的间接免疫荧光方法,为检测实验用猴群中SFV的感染情况提供参考依据。方法用SFV-1病毒感染BHK-21细胞,待50%细胞出现病变时,用胰蛋白酶消化细胞后以2×107/mL浓度40μL的细胞滴到10孔镀膜的玻片上,丙酮固定。利用制备的抗原片通过间接免疫荧光法对34份猴血清标本进行检测。结果建立了检测SFV抗体的间接免疫荧光染色方法,SFV抗体阳性19例,15例血清检测为阴性。结论本方法具有良好的特异性,可作为SFV检测的可靠方法。     

间接免疫荧光法对多种呼吸道病毒快速检测方法

目的：建立一种新的快速诊断呼吸道病原微生物感染检测方法。方法：采用德国欧蒙公司间接免疫荧光技术对578例患者进行流感病毒A（FluA）、流感病毒B（FluB）、副流感病毒1（PIV1）、副流感病毒2（PIV2）、副流感病毒3（PIV3）、腺病毒3（ADV3）以及合胞病毒（RSV）、肺炎支原体（MP）、肺炎衣原体（CP）、克雷白（KLB）、军团菌（LPS）、嗜血流感（HI）等12种病原微生物进行检测。结果：下呼吸道感染在儿童组阳性率为46．1％（140／304）,以合胞病毒感染最为多见;在成人组感染阳性率为42．0％（115／274）,以腺病毒感染最为常见。结论：间接免疫荧光方法检测呼吸道病毒具有高灵敏度和特异性,而且操作简捷,适合临床实验室病毒检测的要求。     

巨细胞病毒感染的快速诊断——低速离心和单克隆抗体间接免疫荧光方法检测早期抗原

应用低速离心和巨细胞病毒早期核抗原单克隆抗体间接免疫荧光方法(简称DEACF),检测临床标本中巨细胞病毒(CMV),并与传统病毒分离方法进行比较。结果:139份临床标本病毒分离方法阳性16份(11.5%),细胞病变(CPE)出现时间平均9.2日,其中2份DEACF检测阳性;DEACF检测阳性18份(13.0%),培养16h61.1%出现阳性,培养88h可检出全部阳性标本,其中4份病毒分离阴性标本中,3份有证据不是DEACF的假阳性反应。DEACF的敏感性为89.5%,特异性为99.2%。DEACF检测的139份标本中,用低速离心可使培养88h的阳性检出率从未离心的44.4%提高到100%。     

快速鉴定法与间接免疫荧光法检测肺炎支原体比较分析

目的对两种肺炎支原体检测方法进行比较分析,以探讨两种方法在临床中的应用价值。方法选取住院部呼吸道感染患儿100例,取患儿咽拭子标本用快速鉴定培养基法培养肺炎支原体,同时对同一患儿血清用间接免疫荧光法进行肺炎支原体Ig M抗体的检测。结果快速鉴定培养基法的阳性检出率为26%,灵敏度为33.3%,特异性为85%,阳性预测值和阴性预测值分别是76.9%和45.9%;间接免疫荧光法的阳性检出率为64%,灵敏度为98.3%,特异性为87.5%,阳性预测值和阴性预测值分别是92.2%和97.2%。结论相比快速鉴定法而言,间接免疫荧光法是检测肺炎支原体更好的方法。     

间接免疫荧光检测技术检测沙门菌的实验研究

目的为加强食品安全管理,快速检测食源性致病菌,对间接免疫荧光检测法检测沙门菌的敏感性进行探讨。方法制备沙门菌抗原片和食品样品抗原片,用沙门菌A-F多价诊断血清作为一抗,异硫氰酸荧光素(FITC)标记羊抗兔IgG作为二抗。结果与国标法比较,沙门菌间接免疫荧光法具有快速、简便等优点,且两种检验方法的阳性检出率未出现统计学差异(P=0.250)。结论沙门菌间接免疫荧光检测法可以用于食品安全快速检测。     

单克隆抗体间接免疫荧光试验检测生殖器单纯疱疹病毒感染

目的:评价间接免疫荧光试验 (IFA)在生殖器疱疹(GH)诊断中的应用价值.方法:采用以单纯疱疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体为夹心的IFA方法,检测了120例临床诊断为GH患者皮疹中的HSV,并与病毒培养法进行比较.结果:IFA检测HSV的总阳性率为85.8%,高于病毒培养法的阳性率(70.8%,χ2=12.04,P<0.01).两种方法检测GH患者皮肤水疱内的HSV阳性率分别为93.3%和90.0%,无明显差异(χ2=1.96,P>0.05);而检测糜烂和结痂性皮疹内的HSV时,IFA 的阳性率分别为92.6%和69.4%,均分别高于病毒培养法(75.9%,χ2=5.82,P<0.05;47.2%,χ2=14.17,P<0.01).结论:IFA 法具有简单、快速、敏感性高的优点,适用于检测GH患者皮疹内HSV,有临床实用价值.     

间接免疫荧光法(IFL)测抗伤寒、副伤寒沙门菌IgM抗体

目的 从敏感性、特异性、早期和快速检测的角度探讨新的伤寒和副伤寒的实验诊断方法，以提高伤寒及副伤寒的实验室诊断水平。方法 用间接免疫荧光法和肥达试验检测85例经血培养确诊的伤寒或副伤寒患者、20例献血员及65例非伤寒副伤寒发热病人血清伤寒及副伤寒IgM抗体，对检测结果进行统计学分析和处理。结果 IFL检测85例伤寒或副伤寒患者血清IgM抗体，79例阳性，阳性率92.9%，病程6d以内，阳性率为90%；肥达试验检测同样病例，47例阳性，阳性率55.3%，病程6d以内阳性率46.7%，两种方法的检测结果具有显著性差异（P〈0.01）。对献血员和其他发热病人检测，两种方法的阳性率均在2%以下，二者没有差异。结论 检测抗伤寒和副伤寒沙门菌IgM抗体，免疫荧光法比肥达试验的灵敏度更高，免疫荧光法比肥达试验更具早期和快速检出的特点。     

间接免疫荧光法和原位杂交法检测急性白血病中Bcl-2和Bcl-2/Bax表达的对比研究

目的:比较两种不同方法检测急性白血病(AL)患者Bcl-2和Bcl-2/Bax表达情况。方法:采用链亲和索-胶体金原位杂交法(ISH-SAG)和间接免疫荧光法对57例AL患者的Bcl-2和Bcl-2/Bax进行检测。结果:(1)ISH-SAG法中,完全缓解(CR)组Bcl-2细胞表达率高于间接免疫荧光法,且差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Bel-2及Bcl-2/Bax检测均显示ISH-SAG法的特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比优于间接免疫荧光法;Bcl-2/Bax检测也显示ISH-SAG法较间接免疫荧光法高。(3)ISH-SAG法中Bcl-2细胞表达率和积分值的阳性检出率无差别。结论:(1)ISH-SAG法测定Bcl-2及Bel-2/Bax优于间接免疫荧光法。(2)ISH-SAG法中Bcl-2积分值临床应用价值不大。     

不同固定方法对冰冻切片间接免疫荧光结果的影响

目的：寻找一种冰冻切片间接免疫荧光染色以及HE染色过程中最佳的组织固定方法。方法：取健康成年小鼠双侧睾丸冰冻切片,分别采用3种方法进行固定：①丙酮4℃固定15分钟,-20℃保存24h;②95％酒精4℃固定15分钟,-20℃保存24h;③切片-20℃保存24h后,再用4℃丙酮固定15分钟。然后做间接免疫荧光和HE染色,观察组织结构及染色情况。结果：4℃丙酮固定的组织切片HE染色以及间接免疫荧光效果良好。-20℃保存24h后,4℃丙酮固定15分钟的冰冻切片HE染色和间接免疫荧光结果最差。结论：酒精和丙酮都可以固定组织,但是4℃丙酮固定效果最好。     

间接免疫荧光法与ELISA检测抗核抗体、抗双链DNA抗体的比对分析

目的 探讨间接免疫荧光法(IIFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗核抗体(ANA)和抗双链DNA(ds-DNA)抗体的异同.方法 抽取确诊或疑为自身免疫性疾病患者血清125例,同时采用IIFA法和ELISA法检测 ANA 82例,抗ds-DNA抗体检测57例,其中14例同时检测ANA和抗ds-DNA抗体.对两种方法 检测结果 不符者采用免疫印迹法复查抗可溶性核抗原(ENA).结果 82例 ANA阳性率IIFA法与ELISA法分别为87.8%和73.17%,差别有统计学意义(P<0.01);57例血清中抗ds-DNA抗体检测阳性率IIFA法与ELISA法分别为77.19%和71.93%,差别无统计学意义(P>0.05).采用不同cutoff值时两种方法 符合率比较,ANA、抗ds-DNA抗体检测结果 差别均有统计学意义(P<0.01).两法对一些稀有核型ANA检测符合率较低,而抗ds-DNA抗体的符合率在不同核型上没有差异.ANA检测以1:100为cutoff滴度,抗ds-DNA抗体以弱阳性为cutoff值时,两种方法 可获得较高的符合率,但在检测滴度1:100 ANA、弱阳性抗ds-DNA抗体时两种方法 存在明显的不一致.结论 IIFA法检测总ANA、抗ds-DNA抗体的敏感性均高于ELISA法, IIFA法作为ANA的筛查方法 ,阳性标本再进行ELISA法检测,可在获得荧光核型信息同时观察抗体滴度的变化情况,并且更快捷经济.两种或多种不同方法 学原理的实验互相佐证,有助于减少实验误差.     

小鼠诺如病毒间接免疫荧光检测方法的建立

目的建立小鼠诺如病毒(MNV)的间接免疫荧光试验(IFA)的检测方法。方法将MNV-1接种RAW264.7细胞,培养36 h收集病毒培养物及未感染细胞培养物,点制抗原玻片;以107TCID50的MNV-1灌胃接种BALB/c小鼠,收集感染血清做阳性对照血清。收集人工感染后不同时间点的血清样品,以1:10的稀释度使用IFA法测定感染血清MNV抗体滴度。选取80份送检小鼠血清样品,以IFA和ELISA方法测定,差异样品使用Western blot方法进行验证。结果 MNV-1感染RAW264.7细胞(36~48)h,细胞感染率为60%,以36 h感染细胞状态为佳;IFA法测定感染小鼠血清,小鼠感染1周后抗体水平逐渐提高,在4周时抗体滴度达到最高值,之后维持稳定,采集感染4周的动物血清做IFA方法的阳性质控品;80份血清中,IFA法测定阳性27份,阴性53份,ELISA法测定阳性32份,阴性48份;Western blot方法对差异样品验证,其中阳性3份,阴性2份,IFA法和ELISA法检测符合率分别为96.0%和97.5%。结论 IFA方法检测小鼠诺如病毒基本可以反应小鼠的感染情况,偶有假阴性的出现,可以选择IFA方法和ELISA方法作为初筛,差异样品用Western blot方法验证。     

2005年麻疹111例临床特点

目的了解2005年麻疹病人的临床特点。方法对111例住院治疗的麻疹病例的年龄、性别、主要临床症状、并发症和预防接种史进行分析。结果111例中有预防接种史者12例,占10．8％;年龄大者具有koplik斑的少;全部病例康复出院。结论坚持预防接种可有效控制麻疹的发病率;隔离治疗和良好的护理可减少并发症,提高治愈率。     

免疫荧光法检测子宫内膜IgG抗体诊断子宫内膜异位症的价值

目的　探讨免疫荧光法测定子宫内膜IgG抗体 ,并用以诊断子宫内膜异位症的临床价值。 方法　将血清 (n =91)和子宫内膜标本 (n =77)分 3组 ,用直接免疫荧光法 (DIF)测定各组内膜组织中沉积的IgG ,用间接免疫荧光法检测各组血清中的子宫内膜IgG抗体。 结果　①检测内膜中沉积的IgG敏感性 82 % ,特异性 36 .8% ;②检测血清中子宫内膜IgG抗体诊断子宫内膜异位症敏感性 87.2 % ,特异性 98.1%。结论　①检测子宫内膜沉积的IgG抗体诊断子宫内膜异位症的临床意义不大 ;②测定血清中的子宫内膜IgG抗体诊断子宫内膜异位症敏感性强 ,特异性高 ,临床应用有一定意义     

用Hela细胞检测Bip抗体间接免疫荧光法的建立

目的 建立抗免疫球蛋白结合蛋白(Bip)抗体检测的间接免疫荧光法(IIF),为探讨其在类风湿关节炎(RA)中的意义做出方法 学准备.方法 以Hela细胞为抗原基质固定于载片上,加入待测稀释血清温育,待抗原抗体特异结合后加入荧光素标记的抗人IgG与待测Bip抗体结合,最后置荧光显微镜下观察Hela细胞胞浆有无特异荧光出现.结果 RA患者血清检测中可见到Hela细胞胞浆中出现特异性荧光,而健康献血员血清检测中未发现Hela细胞胞浆中的特异性荧光,实验所见荧光模式与文献报道相符.结论 以Hela细胞为抗原基质的间接免疫荧光法能够对血清中Bip抗体进行检测.     

Evaluation by indirect immunofluorescent assay and enzyme linked immunosorbent assay of the dynamic changes of serum antibody responses against severe acute respiratory syndrome coronavirus

Background Severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) is a newly emerging virus that gives rise to SARS patients with high rates of infectivity and fatality. To study the humoral immune responses to SARSCoV, the authors evaluated lgG and IgM specific antibodies in patients‘ sera.Methods Two methods, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect immunofluorescent assay (IFA) , were used to detect specific serum IgG and IgM against SARS-CoV in 98 SARS patients and 250 controls consisting of patients with pneumonia, heahh-care professionals and healthy subjects. The serum antibody profiles were investigated at different times over one and a half years in 18 of the SARS patients.Results The sensitivity and specificity of ELISA for detecting IgG against SARS-CoV were 100.0% and 97.2% and for IgM 89. 8% and 97.6% respectively; the figures using IFA for IgG were 100.0% and 100.0% and for IgM 81.8% and 100.0% respectively. During the first seven days of the antibodies trace test, no IgG and IgM were detected, but on day 15, IgG response increased dramatically, reaching a peak on day 60,remaining high up to day 180 and decreasing gradually until day 540. On day 15,IgM was detected, rapidly reached a peak, then declined gradually until day 180 when IgM was undetectable.Conclusion The detection of antibodies against SARS virus is helpful in the clinical diagnosis of SARS.