日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导抗卵免疫的初步研究

采用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及成熟虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，发现ＳＩＥＡ诱导小鼠产生显著的抗生殖及抗卵胚发育的免疫力；与对照组比较，ＳＩＥＡ免疫鼠在攻击感染后４６天，肝、肠组织内总虫卵数明显下降，成熟虫卵数和粪卵数分别降低了５９．９８％，６６．８６％和６６．９７％；粪卵下降程度与肝、肠组织中成熟虫卵的减少相一致，ＳＥＡ免疫后未呈现上述效应。     

ISOLATION OF SOME ANTIGENS FROM SCHISTOSOMA JAPONICUM AND THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE

Six kinds of antigens from the eggs and adult worms of schistosoma japonicum were isolated. They included adult microsomal antigen (JAMA), aqueous soluble egg antigen (SEA), urea-soluble egg antigen (JEU) and its further fractionated products (JECt-D. They were analyzed by sodium polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), enzyme-linked immuno- electro-transfer blot (EITB) and kinetic-dependent enzyme-linked immunosorbent assay (K-ELISA). They were quantitatively assayed by K-ELISA for specific antigenic activities against sera of 39 patients with schistosomiasis japonica. The sera of patients with diseases other than schistosomiasis and 10 healthy adults were tested simultaneously as control. JEC:} was antigenically more active (A A460/min X 10-j than other antigens. Determinatin of the specific antibody (IgG) levels of S. japonicum by using JEC:i, etc as diagnostic antigens in 30 chronic patients re- vealed that the level of anti-JEC:: antibody was the highest (11.7_0.7A A460/min X 10-j. EITB test showed tbat only JEC:; exhibited no cross reactivity with sera from patients with parago nimiasis and clonorchiasis sinensis, and that all posi- tive bands of JEC; disappeared in patients cured of chronic schistosomiasis. These findings suggest that JEC:; might become a more satisfactory antigen in the serodiagnosis of schistosomiasis japonica.     

4种抗原用于斑点免疫金银染色试验诊断日本血吸虫病的比较

采用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)试验对4种日本血吸虫抗原的敏感性及特异性进行比较。结果显示粗提成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测40例日本血吸虫病人血清抗体的敏感性均达100.0％,40例正常人血清的可疑阳性反应分别为2.5％、0、2.5％和0,40例肝吸虫病人血清的可疑交叉率分别为2.5％、0、2.5％和0,表明在高敏感的IGSS检测系统中,粗提成虫抗原的敏感性和特异性与部分纯化者和虫卵抗原无显著性差异(P>0.05)。     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备抗ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。用ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

日本血吸虫云南品系SIEA对小鼠的免疫保护作用

目的观察日本血吸虫云南品系SIEA(未成熟卵可溶性抗原)免疫小鼠后产生的免疫保护效果.方法ICR小鼠经日本血吸虫云南品系SIEA免疫后攻击感染血吸虫尾蚴,感染后46 d剖杀,观察减虫率、粪卵减少率、雌虫子宫内虫卵数、肝表面虫卵结节数、肝脏各期虫卵数及各期虫卵构成比.结果经SIEA免疫后感染血吸虫尾蚴的小鼠粪卵及雌虫子宫内虫卵减少率分别为33.25%,34.75%(P<50.05);肝表面虫卵结节密度下降47.76%(P<0.05);肝组织内虫卵总数下降,每雌肝卵减少率为41.83%(P<0.05);每雌成熟虫卵减少率为54.37%(P<0.05);肝组织内成熟虫卵比例下降,未成熟卵比例增加(P<0.05).结论日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原(SIEA)的抗原性较强,诱导小鼠产生了抗卵胚发育及抗雌虫生殖免疫力,可望作为血吸虫抗病疫苗候选抗原.     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。且ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

树突状细胞抗日本血吸虫感染保护性免疫力的研究

目的 探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)致敏树突状细胞抗血吸虫感染的保护性免疫力。方法 利用SEA分别致敏树突状细胞和巨噬细胞，将致敏树突状细胞和巨噬细胞分别免疫BALB／C小鼠3次，攻击感染6周后计数成虫和肝脏虫卵。结果 SEA致敏树突状细胞免疫小鼠诱导27．3％的减虫率和41．5％的减卵率，明显高于SEA致敏巨噬细胞组(22．0％和30．7％)和未致敏树突状细胞及巨噬细胞组(16．3％，27．3％和11．7％，17．0％)，血清抗体水平于第6周达高峰。结论 SEA致敏树突状细胞具有抗日本血吸虫感染的保护性免疫作用。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要集中于３０８ＫＵ到４９６ＫＵ之间，其主要反应带为４９６ＫＵ、３９７ＫＵ和３３７ＫＵ。推测４９６ＫＵ和３３７ＫＵ这两抗原分子在诱导宿主产生抗卵成熟过程中可能起着重要作用。     

日本本血吸虫患者尿液中32kD循环抗原的免疫生物学特征

目的研究日本血吸虫感染者尿液中特异性的诊断抗原，以尿液为样本诊断日本血吸虫病。方法用IgG的亲和层析柱分离和纯化抗日本血吸虫循环抗原抗体并用生物素标记分离纯化的IgG抗体；Western blot检测日本血吸虫虫卵可溶性抗原和日本血吸虫感染者尿液中存在的日本血吸虫主要的循环抗原分子。结果日本血吸虫患者尿液中存在日本血吸虫的特异性循环抗原，Western blot显示其尿液中主要循环抗原分子与虫卵可溶性32kD抗原分子相同。结论日本血吸虫感染者尿液中的32kD循环抗原分子可能来自日本血吸虫虫卵可溶性抗原，可作为血吸虫感染的诊断。     

日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位

目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。     

日本血吸虫抗原的表位模拟肽筛选及免疫保护性

目的　筛选日本血吸虫雄虫抗原的表位模拟肽 ,并探讨其诱导小鼠抗日本血吸虫的免疫保护性。　方法　用日本血吸虫可溶性雄虫抗原的IgG对噬菌体随机 1 2肽库进行亲和筛选。 3轮筛选后 ,经Dot-ELISA检测获得阳性噬菌体克隆 ,并用混合特异性噬菌体克隆免疫小鼠及进行抗日本血吸虫免疫保护性分析。　结果　 1 8个特异性噬菌体克隆均显示有抗原性 ,其噬菌体混合克隆免疫诱导小鼠产生了特异性抗体 ,以及 31 72 %的减虫率和 51 54%的减卵率 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 0 1 )。　结论　筛选噬菌体肽库获得的日本血吸虫可溶性雄虫抗原的表位模拟肽分子能诱导小鼠产生抗日本血吸虫的保护性免疫。     

Establishment and characterization of a monoclonal antibody against egg antigens of Schistosoma japonicum

A monoclonal antibody (N29B3) against egg antigens of Schistosoma japonicum was obtained by hybridoma technique N29B3 was of IgG3 isotype. The molecular weight of its target antigen was 141 KD. IIFA with section of liver from infected rabbit showed that N29B3 was located on surface of miracidium and egg shell. IIFA and ELISA also showed that N29B3 was not reactive with antigens of differential developmental stages of S. japonicum and antigens of other trematodes. The data indicated that N29B3 has specificity for egg antigens. In western blotting, sera from chronic infected human and mice and from acute infected mice (30 and 45 days) all recognized 141 KD molecule. These results suggest that 141 KD molecule has potential capacity for early diagnosis of schistosomiasis.     

SjAWMMcAb对吡喹酮杀虫效果的影响

目的 :制备日本血吸虫成虫表膜单克隆抗体 (SjAWMMcAb) ,探讨其与吡喹酮在宿主体内的联合杀虫作用。方法 :用SP2 / 0骨髓瘤细胞与日本血吸虫成虫表膜抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合 ,经筛选和克隆化后建立分泌日本血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,通过单层细胞培养法和小鼠体内接种法收集单克隆抗体 ;采用Westernblotting和免疫荧光测定 (IFA)对其进行鉴定 ;小鼠实验观察单抗与吡喹酮的联合杀虫作用。结果 :建立了 3个分泌SjAWMMcAb的细胞株 ,Westernblotting显示 3个McAb可识别 5种不同分子量的蛋白 ,IFA表明 3个McAb均能与血吸虫成虫表膜发生特异性反应 ,3B6和 1C2两株McAbs与吡喹酮联用杀虫率分别可提高 4 1.78%和 2 4 .12 %。结论 :某些SjAWMMcAb与吡喹酮可发挥联合杀虫作用     

日本血吸虫未成熟卵对小鼠肝肉芽肿形成的免疫学影响

目的探讨日本血吸虫未成熟卵诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚免疫的效果及其对小鼠肝肉芽肿形成的影响。方法采用未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及其不同组分抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，检测小鼠产生的抗病免疫能力。结果经ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫后，均可明显地降低攻击感染后免疫鼠的肝肉芽肿数目和大小。与对照组比较，上述两者免疫后的小鼠，其肝肉芽肿平均直径分别下降了２９．２６％和４９．６４％，尤以ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原的免疫效果为佳，且感染鼠脾重明显下降（Ｐ＜０．０１）。但是成熟虫卵可溶性抗原以及ＳＩＥＡ－１分部抗原免疫对降低肝卵肉芽肿数量和大小以及脾肿大程度均无明显作用，甚至刺激肉芽肿反应增强。结论ＳＩＥＡ和ＳＩＥＡ２６～２８０００分子抗原免疫可诱导宿主产生抗雌虫生殖和抗卵胚发育的作用，并明显抑制虫卵肉芽肿的形成。     

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性.方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原.分别以SDS-PAGE和Western blot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较.结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原.SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr 37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带.AWA-f见15条蛋白带,其中Mr 26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带.AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带.SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带.结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠.该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白.     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原致敏对树突状细胞功能的影响

目的探讨日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)致敏对树突状细胞(DC)功能的影响.方法利用SEA致敏DC,流武细胞术(FACS)检测SEA致敏的DC摄取抗原的能力,混合淋巴细胞反应检测SEA致敏的DC对同种异体T淋巴细胞的刺激作用.结果与未致敏的DC相比,SEA致敏后,DC摄取抗原的能力无明显变化,SEA致敏的DC抑制混合淋巴细胞反应.结论体外SEA致敏DC后,不是促进DC的活化,而是抑制DC的生物学活性.     

日本和曼氏血吸虫抗原在间接血凝试验中与不同血吸虫病人血清的交叉反应

用间接血凝试验(IHA)比较不同抗原SjSEA、SmAWA和SmBW与日本、曼氏和埃及血吸虫病人血清的交叉反应。结果显示:3种抗原致敏的绵羊红细胞(SRBC)与其相应的血吸虫病人血清反应率分别为100％(SjSEA),96％(SmAWA)和98％(SmBW);与不同种血吸虫病人血清的交叉反应率在79％～95％,其中以SjSEA最高。结果提示:SjSEA除可用于诊断日本血吸虫病外,也可作为诊断曼氏和埃及血吸虫病的候选抗原。此外,本试验还发现IHA抗体滴度与病人排出的虫卵数量无相关关系。     

日本血吸虫尾蚴抗原模拟表位的筛选及其免疫保护性

目的 筛选日本血吸虫尾蚴抗原的模拟表位，探讨其对日本血吸虫的免疫保护性。方法 用粗提日本血吸虫尾蚴抗原的抗体IgC作配体筛选噬菌体12肽库，按“吸附－洗脱－扩增”的过程进行三轮筛选；随机挑取单个噬菌体克隆进行Dot-ELISA检测；用混和噬菌体克隆免疫小鼠3次，攻击感染45d后剖杀冲虫，计算虫数及肝卵数。结果 经三轮筛选，特异性噬菌体得到富集，挑取11个噬菌体克隆经Dot-ELISA鉴定，均与日本血吸虫尾蚴抗原免疫血清呈特异性反应。与对照组相比，混和噬体克隆免疫小鼠的减虫率为18.79%，减卵率为38.00%。结论 利用噬菌体随机肽库技术获得了日本血吸虫尾蚴抗原的模拟表位，这些表位能诱导对日本血吸虫的保护性免疫。     

曼氏血吸虫与日本血吸虫交叉免疫原性的血清学实验研究

以曼氏血吸虫的虫卵和成虫免疫家兔后所产生的特异性抗体,可用以日本血吸虫虫卵、尾蚴和成虫为抗原分别进行的COP,CHR和ELACIEP测出,表明两种人体血吸虫存有显著的交叉抗原成分。应用此种血清交叉反应性,以检测抗异种人体血吸虫的抗体,似有效而可取的,可用以辅助诊断援外回国人员是否感染国外人体血吸虫病。