外周血胰岛素样生长因子Ⅱ-mRNA对肝癌的诊断价值

目的探讨外周血胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-II）-mRNA在肝癌诊断和判断预后中的价值。方法从癌组织和外周血中制备总RNA,经随机引物和逆转录酶作用合成IGF-ⅡcDNA,再分别以RT-PCR扩增IGF-ⅡcDNA片段,分析其在肝病诊断与鉴别中的临床价值。结果肝癌组织和外周血中扩增出的IGF-Ⅱ基因片段大小为170bp,并与原设计相一致。肝癌、癌灶周围和远癌组织中,IGF-Ⅱ基因检出率分别为100%、53.3%和0。肝癌患者外周血IGF-II基因片段阳性率34.2%,在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中分别为14.3%、19.4%和45.5%,在伴有肝外转移肝癌中全数阳性,在AFP〈50ng/ml的17例中阳性6例（35.3%）;肝硬化、慢性肝炎、急性肝炎和肝外肿瘤组中未见IGF-Ⅱ基因片段阳性。IGF-Ⅱ基因标志与肝癌大小间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论外周血IGF-Ⅱ基因分析有助于肝癌的诊断、转移判别及术后复发的监测。     

外周血有核细胞胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA检测对肝癌的诊断价值

目的分析肝癌患者外周血有核细胞中胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因片段,观察它在肝癌诊断和判断预后中的临床价值.方法从肝病患者外周血中制备有核细胞总RNA,经随机引物和逆转录酶合成IG F-Ⅱ-cDNA,分别以巢式聚合酶链反应扩增IGF-Ⅱ基因片段,分析肝病患者外周血中IGF-Ⅱ基因标志物检测的临床价值.结果(1)肝癌患者外周血中IGF-Ⅱ的检出率为34.2%,明显高于其它肝病、肝外肿瘤和正常对照组(P<0.05).在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中,IGF-Ⅱ基因片段阳性率分别为14.3%、19.4%和45.5%;(2)IGF-Ⅱ基因片段的检出率在肝内有无转移的肝癌组间存在明显差异(P<0.05),伴有肝外远处转移肝癌中,IGF-Ⅱ基因片段阳性率为100%.结论外周血中IGF-Ⅱ基因标志物有助于肝癌的诊断、肝癌远处转移的判断以及肝癌术后复发的监测.     

原发性肝癌外周血白蛋白基因片段扩增的临床意义

目的:探讨外周血白蛋白(Alb)基因在肝癌早期诊断和鉴别诊断中的临床价值。方法:以巢式聚合酶链反应(RT-PCR)扩增外周血中Alb的基因片段分析在原发性肝癌(HCC)、慢性肝病和非肝病患者外周血中血白蛋白基因表达。结果:67例肝癌患者外周血中Alb基因的检出率为59.7%,明显高于肝硬化、慢性肝炎和肝外肿瘤组患者(P<0.01),但与急性肝炎组无明显差别(P>0.05);在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中,Alb基因片段阳性率分别为33.3%、36.8%和76.9%;肝内有无转移的肝癌组间存在明显差异(P<0.05),尤其在伴有肝外远处转移的肝癌中,Alb基因全数阳性(100.0%)。结论:分析外周血中Alb基因有助于肝癌的诊断、肝癌远处转移判别的监测。     

IGF-Ⅱ和IGF-Ⅱ-mRNA异常表达对肝癌诊断的价值

目的:探讨胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅱ及IGF-Ⅱ-mRNA在肝癌组织中的表达特点及游离IGF-Ⅱ的临床价值。方法:以免疫组化法分析肝癌癌灶、癌周和远癌组织中IGF-Ⅱ的表达与胞内定位。从肝组织中制备总RNA,经随机引物和逆转录酶合成IGF-Ⅱ-cDNA,巢式聚合酶链反应扩增及DNA测序证实,分析IGF-Ⅱ-mR-NA的表达,并分析血清游离IGF-II水平。结果:肝癌组织IGF-Ⅱ表达呈强阳性,明显高于癌旁和远癌肝组织,分布呈胞浆包涵体样、全胞浆和核内三种形态。癌灶总RNA水平显著低于癌周与远癌组织;其IGF-Ⅱ灵敏度为2ng/L,扩增基因片段为170bp,癌灶和癌周组织中IGF-Ⅱ基因检出率,分别为100%和53.2%,远癌组织未见扩增片段。肝癌患者血游离IGF-II水平明显高于肝硬化和慢性肝炎患者。结论:IGF-Ⅱ及IGF-Ⅱ-mRNA的过度表达与肝癌形成有关,并有助于肝癌早期诊断。     

胰岛素样生长因子Ⅱ及其受体在肝组织中的表达意义

目的：研究胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF－Ⅱ）及其受体（IGFR）在不同肝组织中的表达及与肝癌病理学分级及乙肝病毒感染的关系。方法：采用免疫组织化学方法，检测10正常肝标本，28例肝血管瘤标本、13例肝硬化标本和42例原发性肝癌中的IGF－Ⅱ及IGFR的表达水平，分析其阳性率及与乙型肝炎病毒（HBV）感染和Edmondson分级的关系。结论：正常肝、肝硬化、肝血管瘤和肝癌中IGF－Ⅱ阳性率分别为10％，76．9％，46．4％，76．2％，IGFR阳性率分别为20％，92．3％，64．2％，61．9％，与正常肝组织相比，各阳性率有显著性差异（P＜0．05），对于肝癌而言，IGF－Ⅱ及IGFR的表达在HBV阳性与阴性之间有显著差异（P＜0．05）；在Edmondson分级Ⅰ-Ⅱ与Ⅲ-Ⅳ之间有显著差异（P＜0．05）。结论：IGF－Ⅱ和IGFR的表达可能参与了肝硬化及肝脏肿瘤的发生。在肝癌中，其表达与HBV感染及肝癌Edmondson分级亦有一定关系。     

肝外胆管癌组织中HSP70的表达意义

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）在肝外胆管癌组织中的表达及其临床意义。方法：以兔抗人HSP70多克隆抗体为试剂，应用免疫组织化学方法（SP法），检测30例肝外胆管癌组织中HSP70的表达水平，并与癌旁非癌组织作对照。结果：在肝外胆管癌30例中，HSP70表达阳性率为77％，而癌旁非癌组织阳性率则为13％，二有显性差异（P＜0．05）。癌组织中HSP70阳性表达率与病理分级有关，组织学分级I，Ⅱ级与Ⅲ，Ⅳ级阳性经分别为56％和100％，二有显性差异（P＜0．05）。原发癌灶直径≥2cm及＜2cmHSP70阳性表达率分别为95％及50％，二有显性差异（P＜0．05）；肿瘤伴转移与无转移HSP70阳性表达率分别为100％及59％，二有显性差异（P＜0．05）。结论：肝外胆管癌组织HSP70表达明显增,且与组织学类型、癌灶大小及癌转移有关。     

Ras和p16基因在肝癌组织中的表达与临床意义

目的：观察基因ras和p16在肝癌组织中的表达，探讨其在肝癌术后复发及预后中的作用。方法：应用免疫组化S－P法，检测53例手术切除肝癌组织和12例正常肝组织的ras和p16表达及与肝癌临床病理指标、术后复发及预后的关系。结果：（1）ras在肝癌和正常肝组织中的阳性表达率分别为66．0％和34．0％，ras表达与肿瘤大小、有无肝内转移密切相关（P均＜0．05）。ras阳性、阴性表达病例3年复发率分别为68．8％、38．9％，3年生存率分别为37．1％、66．7％（P＜0．05）。（2）p16在肝癌和正常肝组织中的阳性表达率各为47．2％、100．0％，p16表达与有无肝内转移、组织分化密切相关（P均＜0．05）。p16阳性、阴性表达病例3年复发率分别为48．0％、67．9％，其3年生存率分别为64．0％、32．1％（P均＜0．05）。（3）ras和p16在肝癌中的表达密切相关（P＜0．01），p16阳性ras阴性与p16阴性ras阳性表达病 列3年复发率分别为35．7％、79．2％，3年生存率分别为71．4％、29．2％，差异有极显著性（P＜0．01）。结论：联合检测p16和ras的表达可作为判断肝癌术后复发及预后的有效指标，多基因分析比单基因分析更有价值。     

IGF—II基因启动子低甲基化状态与肝细胞癌变关系的研究

目的：动态观察肝细胞癌变过程中胰岛素样生长因子-II（IGF—II）表达及其DNA启动子2（P2）甲基化状态。方法：以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲雄性SD大鼠诱发肝细胞癌,分别观察肝细胞形态学（HE染色）改变、肝及血IGF—II动态变化;应用亚硫酸氢钠修饰基因组DNA,以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）扩增分析启动子的甲基化状态。结果：肝细胞在诱癌后从颗粒样变性、不典型增生到高分化肝细胞癌形成过程中,肝和血中IGF—II表达呈梯度增加,差异有统计学意义（F=13．2,P〈0．011。正常鼠、肝细胞变性鼠、癌前病变鼠和肝细胞癌变鼠肝IGF—II基因P2低甲基化率分别为0％、27．8％、88．9％和100％,肝细胞癌变过程中肝IGF—II基因P2逐步去甲基化,各组问差异有统计学意义（χ^2=28．414,P〈0．001）,且与肝或外周血IGF—II的异常表达呈明显正相关。结论：IGF—II基因启动子逐步低甲基化改变与肝细胞的恶性转化关系密切。     

人原发性肝癌胰岛素样生长因子2基因的印迹状态

目的研究人原发性肝癌中胰岛素样生长因子2(insulin like growth factor Ⅱ,IGF2)基因印迹状态,为进一步研究肝癌发生机理提供线索。方法用限制性片段长度多态性检测IGF2基因杂合状态,用逆转录-酶联聚合反应半定量检测IGF2基因在肝癌及癌旁组织中的表达,分析IGF2印迹状态、表达量与人原发性肝癌的关系。结果55．6％(10／18)的肝癌组织存在IGF2基因印迹的重新获得,与之相对的远癌组织有60％(6／10)也发生了IGF2基因印迹的重新获得。50％(9／18)的癌组织IGF2基因过度表达,但表达量与基因印迹的改变没有显著相关性。结论IGF2基因印迹的重新获得可能参与了肝癌的发生。     

p21、IGF-Ⅱ在肝细胞癌和肝硬化组织中的表达水平及其与肝细胞不典型增生的关系

目的：探讨p21、胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF—Ⅱ)在肝硬化、肝细胞癌组织中表达的意义及其与肝细胞不典型增生(LCD)的关系。方法：用免疫组化S—P法检测单纯肝硬化、癌旁肝硬化及肝细胞癌(HCC)p21、IGF—Ⅱ表达情况：结果：癌旁肝硬化、单纯肝硬化、癌组织p21的阳性表达率分别为92．86％、68％、54．55％；癌旁肝硬化、单纯肝硬化、癌组织IGF—Ⅱ的阳性表达率分别为75％、74％、36．36％。肝硬化与HCC之间差异有统计学意义(P＜0．05)；IGF-Ⅱ与p21阳性表达呈正相关关系；HBsAg的阳性或伴LCD改变的肝硬化，p21、IGF—Ⅱ阳性率均高于HBsAg阴性或不伴有LCD改变的肝硬化(P＜0．05)。结论：①在肝细胞癌变演化过程中p21、IGF—Ⅱ可能发挥协同作用；②LCD是一群具有肿瘤增殖潜能的癌前细胞群，尤其有p21、IG7—Ⅱ共同过度表达者，有发生HCC的高度危险。     

肝癌组织IGF-Ⅱ启动子甲基化状态及病理学特征分析

目的:分析人肝细胞癌(HCC)组织中胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因启动子甲基化状态及其临床病理学特征。方法:以甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)分析人HCC癌灶、癌旁及正常肝脏组织IGF-Ⅱ基因P3甲基化状态及其病理学特征。结果:人癌灶、癌旁以及正常肝组织P3甲基化率分别为0%、47.5%和100%,各组之间的甲基化状态差异均有统计学意义。癌旁组织P3甲基化率在低分化组显著低于高中分化组(P=0.000);HBsAg阳性组显著低于HBsAg阴性组(P=0.040),但与性别、年龄、肿瘤大小及AFP之间差异未见显著统计学意义。结论:IGF-Ⅱ基因启动子甲基化程度降低在HCC形成过程中起重要作用。     

MKK4在原发性肝癌中的表达及其临床意义

研究丝裂原活化蛋白激酶激酶4(mitogen-activated protein kinase kinase 4,MKK4)在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测45例原发性肝细胞癌及其癌旁组织和20例正常肝脏组织中的MKK4蛋白的表达,并分析其与肝细胞癌临床病理参数之间的关系。结果肝细胞癌组织中MKK4蛋白阳性表达率(75.6%)较癌旁(100.0%)及正常肝脏组织(100.0%)中低,二者差异有统计学意义(P<0.05)。MKK4蛋白表达与肿瘤有无转移、肿瘤分化程度及临床分期有关(P<0.05),与患者的年龄、性别、肿瘤大小、乙肝表面抗原情况无关(P>0.05)。结论 MKK4可能与原发性肝细胞癌侵袭转移的过程有关,并可能成为一个判断肝细胞癌转移潜能大小的潜在观测指标。     

p28GANK蛋白在肝细胞性肝癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨p28GANK蛋白在肝细胞性肝癌（HCC）组织中的表达及其临床意义。方法收集HCC组织及其相应癌旁组织60例（其中32例伴有肝硬化组织）、正常肝组织30例,采用免疫组化法检测HCC、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织组织中p28GANK蛋白的表达,分析p28GANK蛋白表达水平与HCC患者临床病理特征关系。结果 p28GANK蛋白在HCC、癌旁肝组织、肝硬化组织性、正常肝组织阳性表达率分别为71．7％、10．0％、12．5％、6．7％,HCC中p28GANK蛋白的阳性表达率高于其他组织（P＜0．05）。 HCC患者中,低分化（Ⅲ～Ⅳ级）、淋巴结和（或）远处转移及TNM分期Ⅲ＋Ⅳ者p28GANK蛋白表达阳性率分别高于高分化（Ⅰ～Ⅱ级）、无淋巴结和（或）远处转移、TNM分期Ⅰ＋Ⅱ者（P＜0．05）。结论 p28GANK蛋白表达可能与HCC的发生发展有关,p28GANK可作为HCC诊断的分子标志物。     

鼠肝细胞癌变发生过程中热休克蛋白gp96及其基因的动态表达

目的:探讨肝细胞癌变过程中热休克蛋白(HSP)gp96及基因的动态表达与变化。方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA,0.05%)喂饲SD大鼠诱发肝癌,观察肝病理组织学(HE染色)和总RNA的改变,以巢式逆转录酶链反应扩增gp96基因片段;以免疫组化分析肝细胞癌变过程中gp96的动态表达。结果:SD鼠在喂饲2-FAA后,在诱癌早期肝细胞发生颗粒样变性,中期出现不典型增生,后期见大量癌巢结节。癌变过程中肝组织gp96-mRNA表达明显增加,且显著高于对照组肝组织(P<0.01);正常肝gp96蛋白表达较少,肝细胞癌变过程中gp96表达呈显著的梯度增加。结论:gp96参与肝细胞的癌变过程,癌变初期的过度表达有助于肝癌的早期诊断。     

人胰岛素样生长因子Ⅱ型受体反义基因对肝癌细胞恶性表型的影响

目的 研究人胰岛素样生长因子Ⅱ型受体（IGF-ⅡR）反义基因对SMMC-7721人肝癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 构建IGF-ⅡR正、反义基因真核表达质粒,用磷酸钙-DNA共沉淀的方法,导入SMMC-7721人肝癌细胞株,经G418培养基筛选稳定的抗性细胞。采用Northern杂交检测对转染细胞内源性IGF-ⅡR基因转录的抑制,观察转染细胞克隆形成率,细胞生长曲线,软琼脂生长及裸鼠致瘤能力的变化。结果 IGF-ⅡR反义基因转染肝癌细胞的内源性IGF-ⅡR基因转录受到有效抑制,转染细胞克隆形成率明显降低,并失去在软琼脂上生长的能力,裸鼠致瘤性明显降低,但细胞生长曲线无明显变化。结论 IGF-ⅡR反义基因可以有效阻断IGF-Ⅱ至IGF-ⅡR的自泌/旁泌生长刺激信号环路,一定程度地抑制肝癌细胞的恶性表型。     

肝癌组织PTEN基因及其相关因子HIF-1α表达的研究

目的:研究肝癌中PTEN基因及其相关因子HIF-1α的表达与肝癌发生发展之间的关系。方法:应用RT-PCR法检测37例肝癌癌灶及非癌组织中PTEN基因mRNA表达,并通过凝胶图像系统分析其相对表达量。同时采用免疫组化方法分析肝癌组织中PTEN及HIF-1α蛋白的定位和表达。结果:RT-PCR检测PTENmRNA表达率癌灶为48.65%(18/37),非癌组织表达为100%(37/37)。PTEN基因在癌灶组织中表达显著低于非癌(P<0.001)。免疫组化检测肝癌癌灶组织中PTEN蛋白表达率为37.84%(14/37),显著低于非癌组织(P<0.001),且多为弱表达;HIF-1α蛋白表达率为97.30%(36/37),且多为强表达,两者呈负相关(r=-0.8755)。结论:PTEN基因下调或缺失可能诱导HIF-1α的过度表达,与肝癌的发生发展密切相关。     

肝癌组织GP73过表达及血GP73异常对肝癌的诊断价值

目的：分析肝癌（HCC）组织及外周血高尔基体糖蛋白-73（GP73）表达对肝癌的诊断价值。方法：以Western Blot法检测肝癌组织GP73表达;收集肝病患者外周血标本,以酶联免疫吸附法检测GP73水平。结果：肝癌、癌旁组织GP73均有表达,但癌组织GP73蛋白条带灰度均值为480.7,明显高于癌旁（209.0,t=6.453,P〈0.001）。外周血GP73水平,正常对照组（28.83±21.00）ng/mL,慢性肝炎组（49.86±40.46）ng/mL,肝硬化组（62.30±56.30）ng/mL和肝癌组（87.25±78.41）ng/mL,肝癌组明显高于对照组和良性肝病各组（P〈0.05）;肝癌患者血GP73表达与HBV感染、伴肝外转移密切相关（P〈0.05）,与血AFP呈显著正相关（r=0.961,P〈0.05）;经临床综合评价,受试者工作特征曲线下面积AFP为0.877,GP73为0.931,且两者对肝癌具有互补诊断价值。结论：GP73过表达与肝癌发展密切相关,它的定量检测有助于肝癌的诊断与鉴别。