补体抑制活性物质鱼腥草总多糖中内毒素的去除

为建立补体抑制活性鱼腥草总多糖中内毒素的去除方法,将琼脂糖疏水色谱及聚丙烯酰胺凝胶过滤色谱分别与多粘菌素亲和吸附色谱联用纯化鱼腥草多糖。以显色基质比色法检测纯化前后内毒素的含量变化,细胞溶血法检测纯化前后体外抗补体活性变化。结果发现,疏水色谱与亲和吸附色谱的联用对内毒素的清除效果优于凝胶过滤色谱与亲和吸附色谱的联用,其清除率达42.85%。内毒素清除前后,抗补体活性没有明显变化。表明疏水色谱与亲和吸附色谱联用可用于清除鱼腥草总多糖中的内毒素且不影响其抗补体活性。     

新疆紫草抗HIV有效成分咖啡酸四聚体的理化性质和纯化工艺研究

目的：初步研究咖啡酸四聚体(CAT)的理化稳定性的基础上选择合适的大孔吸附树脂，去除杂质，提高紫草水溶性部分中有效成分咖啡酸四聚体的含量。方法：以咖啡酸四聚体为指标,HPLC检测纯化前后或其他条件改变的含量变化。结果：7种型号的树脂中LK001纯化效果最佳。确定工艺为吸附液质量浓度10 g·L^-1，pH 4.5，3 BV·h^-1的流速流过树脂柱，用去离子水快速洗脱至Molish反应为阴性, 再用20%乙醇洗脱至无色，然后以50 mL 45%的乙醇洗脱，洗脱液除去乙醇，50 ℃浓缩干燥得粉末。收率为3.6%，CAT单个有效成分的含量为58%，纯度提高了45倍。结论：采用LK001树脂可以去除杂质,提高粗提物中有效成分咖啡酸四聚体的含量。     

中药注射剂工艺中活性炭除热原效果评价

目的建立中药注射剂工艺中活性炭去除热原效果的评价方法。方法以动态浊度法,测定中药注射剂浓配药液中活性炭使用前后细菌内毒素的含量,评价其去除热原的效果。结果在双黄连粉针剂和注射用丹参(冻干)2种粉针剂浓配药液的活性炭使用效果的评价中,双黄连药液中的吸附率≥70%,丹参药液中的吸附率95%。结论中药粉针剂在制造过程中加入活性炭吸附大量热原是合理的。但对于大剂量的细菌内毒素,活性炭不能完全吸附去除。     

石榴花中多酚物质的纯化工艺研究

目的：探索石榴花中多酚物质纯化的最佳工艺。方法：以多酚含量为指标,采用静态吸附-解吸方法,考察17种大孔吸附树脂的吸附效果并系统研究大孔树脂动态吸附性能及洗脱参数。结果：D-101 树脂分离效果最好,其最佳工艺为药液质量浓度0.012 g·mL^-1(相当于原生药)的提取液,以3 BV·h^-1吸附速率吸附于径高比为1∶4的大孔吸附树脂柱上,上样量为12 BV(树脂床体积);再用3 BV70％乙醇,以2 BV·h^-1的流速进行洗脱效果最佳。结论：经D-101树脂处理后的石榴花总酚含量可达到75％。该法简单易行,周期短、成本低、所得多酚纯度高,对工业化大生产具有重大指导意义。     

活性炭吸附蛋白质溶液中的热原物质的研究

 目的:探索蛋白溶液中的热原物质去除问题?方法:以活性炭为吸附剂,3种常见蛋白为代表,采用定量鲎试验法,研究了活性炭吸附内毒素的有效程度和影响因素?结果:不同蛋白溶液中,活性炭吸附内毒素的有效程度相差显著,对溶菌酶溶液中的内毒素吸附最有效,去除倍数达216.5,而在牛血清白蛋白、牛血红蛋白溶液中的吸附倍数分别为33.1和51.1;酸性环境下,活性炭吸附内毒素更为有效;高离子强度促进活性炭对内毒素的疏水吸附作用;活性炭对蛋白质的吸附与蛋白质的相对疏水强度呈正相关?结论:活性炭吸附热原法适用于疏水性较低的、低分子量蛋白质或多肽,在微酸性环境中吸附去除热原物质?     

石榴花中多酚物质的纯化工艺研究

目的：探索石榴花中多酚物质纯化的最佳工艺。方法：以多酚含量为指标,采用静态吸附-解吸方法,考察17种大孔吸附树脂的吸附效果并系统研究大孔树脂动态吸附性能及洗脱参数。结果：D-101 树脂分离效果最好,其最佳工艺为药液质量浓度0.012 g·mL^-1(相当于原生药)的提取液,以3 BV·h^-1吸附速率吸附于径高比为1∶4的大孔吸附树脂柱上,上样量为12 BV(树脂床体积);再用3 BV质量分数为70％乙醇,以2 BV·h^-1的流速进行洗脱效果最佳。结论：经D-101树脂处理后的石榴花总酚含量可达到75％。该法简单易行,周期短、成本低、所得多酚纯度高,对工业化大生产具有重大指导意义。     

热毒宁注射液生产过程中关键工序对细菌内毒素去除效果研究

目的:研究热毒宁注射液生产过程中关键工序对细菌内毒素去除效果的影响.方法:采用动态浊度法测定0.8%活性炭吸附前后、10×103截留相对分子质量超滤前后细菌内毒素含量变化,考察其去除情况.结果:活性炭对细菌内毒素吸附率为78.7%,10×103截留超滤对细菌内毒素去除率为99.6%.结论:关键工序能有效保证热毒宁注射液的安全性.     

大孔吸附树脂分离纯化菝葜总黄酮

目的：研究大孔吸附树脂富集、纯化菝葜总黄酮的工艺条件及参数。方法：以总黄酮收率为指标,对工艺条件进行了筛选。结果：6种大孔吸附树脂和1种聚酰胺中,D140型树脂具有最佳的吸附及洗脱参数,其静态吸附容量以干树脂计为14.87 mg·g^-1。最佳吸附条件：药液质量浓度为0.5 g·mL^-1(以生药量计),吸附流速为2 BV·h^-1,吸附量为18 BV；洗脱最佳条件：以10 BV蒸馏水、5 BV的20%乙醇依次洗脱,弃去洗脱液；再用5～10 BV,60%乙醇以流速1 BV·h^-1进行洗脱,总黄酮的收率为84.72%。结论：D140型树脂综合性能较好,适于菝葜总黄酮的分离纯化。     

蟾酥中3种蟾毒配基组合物的表观溶解度和表观油水分配系数的测定

目的：测定蟾酥中3种蟾毒配基组合物的表观溶解度和表观油水分配系数。方法：采用高效液相色谱法测定了蟾酥中3种蟾毒配基组合物中RBG，CBG，BL的表观溶解度，采用摇瓶法测定了RBG，CBG，BL的表观油水分配系数。结果：37 ℃，pH 7.0时，蟾酥中3种蟾毒配基组合物中RBG，CBG，BL的表观溶解度均为最大值，分别是76.29，51.85，32.76 μg·mL^-1，总溶解度为160.9 μg·mL^-1。在偏酸和偏碱性条件下，三者均有不同程度的降解。RBG，CBG，BL在不同pH条件下各自log P值差别不大，pH对RBG，CBG，BL的油水分配系数影响不显著，三者的油水分配系数均较大，为典型的疏水性产物，三者的疏水性大小顺序为RBG>BL>CBG。结论：蟾酥中3种蟾毒配基组合物中RBG，CBG，BL的水溶性差，疏水性极强，应考虑加入表面活性剂增溶，以利于注射制剂的成型。     

亲和色谱技术在天然药物研究中的应用

亲和色谱是利用生物分子与亲和色谱固定相表面配位体之间特效性亲和吸附作用来进行选择性分离生物分子的分离方法,具有高选择性、高活性回收率和高纯度等特点,广泛的用于分离、检测或研究复杂样品中的目标分子,已逐渐成为天然药物研究中的重要手段。本文概述了免疫亲和色谱、凝集素亲和色谱、细胞膜色谱法、固定化金属亲和色谱、分子烙印色谱、染料配基亲和色谱、核酸适配体亲和色谱、亲和膜色谱、前沿亲和色谱等几种常用亲和色谱技术的配基的种类和选择方法,重点介绍了它们在天然药物研究中的应用进展,并对其应用前景进行了展望。     

不同材质超滤膜对细菌内毒素与有效成分的影响

目的:考察不同材质超滤膜对注射用芪红脉通的适用性.方法:以细菌内毒素与有效成分透过率为指标,采用截留相对分子质量100kDa的聚砜、聚醚砜、聚丙烯、混纺4种不同材质的中空纤维超滤膜进行超滤,以动态浊度法检测超滤前后细菌内毒素的去除情况,并结合有效成分的透过率,综合评价超滤膜材质对注射用芪红脉通的适用性.结果:聚丙烯材质超滤膜去除细菌内毒素的效果好,且有效成分的透过率较高,适于本品的精制.结论:超滤法去除细菌内毒素效果理想,且不同材质超滤膜去除细菌内毒素的效果存在差异.     

不同填料的固相小柱对人参皂苷Re血浆样品萃取回收率的研究

目的:以人参皂苷Re为研究对象,考察固相萃取小柱的洗脱条件和不同填料固相小柱的萃取效率,从而确定固相萃取人参皂苷Re血浆样品的实验方法。方法:以水,乙腈及不同含量的甲醇对固相小柱进行洗脱,将洗脱液在Zorbax SB-C₁₈(4.6 mm×75 mm,5μm)柱上以乙腈-水进行梯度洗脱,进行高效液相色谱分析。确定人参皂苷Re在固相萃取小柱上的洗脱条件。通过比较不同固相填料的萃取回收率,选择最佳的固相萃取小柱。结果:最大可用甲醇清洗含量为40%甲醇,甲醇洗脱最小含量为80%的甲醇;在所考察的3种固相填料中,以Waters OasisHLB柱为固相填料时样品的萃取回收率最好。结论:经试验,Waters Oasis HLB柱的萃取回收率在103%~113%,适用于血浆中人参皂苷Re的分析。     

不同孔径超滤膜对栀子苷热原去除工艺的影响

目的:考察不同孔径超滤膜对去除栀子苷热原工艺的影响.方法:考察不同孔径超滤膜去除栀子苷中热原的效果,以鲎试剂动态浊度法定量测定超滤前后栀子苷原料中内毒素含量,筛选去除栀子苷中热原的最佳工艺.结果:100 kDa孔径的超滤膜可较好地去除栀子苷药液中热原,对栀子苷成分的影响较小.结论:采用超滤法去除栀子苷中热原的工艺可行,可为其他中药注射剂及原料生产工艺中热原去除提供参考.     

人血清白蛋白的仿生亲和配基研究

 目的研究人白蛋白特异的仿生亲和配体和仿生亲和分离技术。方法合成固定化亲和配体库，以人血浆为原料筛选，进行人白蛋白分离实验。结果筛选出两个可以特异结合人血清白蛋白的亲和配体。其中3-氨甲基吡啶配位体对白蛋白的一步纯化倍数为18倍，回收率87.5%。结论固定化3-氨甲基吡啶可以特异结合人血清白蛋白。     

荷电微孔滤膜的制备及其性能的初步研究

 本文报道一种由相转化法制备的荷电微孔滤膜及其制备和性能评价。采用的膜材料为聚酰胺和天然多糖。实验表明，该膜带正电荷，可以除去溶液中带负电荷的微量杂质，如细菌内在素和色素等。它属于一种新的过滤介质，在医药、纯水制备以及生物医学工程等方面有着广泛的应用前景。     

基于超滤技术的消癌平注射液工艺改进

目的：采用超滤技术优化消癌平注射液的生产工艺。方法：采用HPLC、比色法、动态浊度法和光阻法分别检测消癌平注射液超滤前后绿原酸、总酚酸、细菌内毒素的含量变化及澄明度的合格率;比较原生产工艺和超滤膜联用技术对消癌平注射液中指标成分的影响、细菌内毒素的去除效果及澄明度的改善程度。结果：原生产工艺、30 kDa和5 kDa超滤膜联用、30 kDa和10 kDa超滤膜联用成品中绿原酸回收率分别为51.6%,52.6%,55.3%,总酚酸回收率分别为75.3%,58.2%,64.6%,细菌内毒素去除率分别为84.2%,98.4%,98.2%,成品澄明度合格率分别为80.0%,95.6%,93.3%。结论：与原工艺相比,采用截留相对分子质量30 kDa和5 kDa的超滤膜进行二级超滤时,指标性成分无明显损失,但可最大程度提高成品澄明度合格率,并能有效去除药液中细菌内毒素,保证注射剂的安全性及生产效率,适用于消癌平注射液的生产。     

聚砜超滤膜对热毒宁注射液脱炭液的纯化工艺研究

目的 考察不同截留相对分子质量聚砜材质中空纤维超滤膜及板式超滤膜对热毒宁注射液脱炭液的超滤效果.方法 以超滤前后绿原酸转移率、栀子苷转移率、指纹图谱相似度、细菌内毒素、蛋白质、草酸盐、树脂的去除情况为考察指标,优化热毒宁注射液脱炭液的纯化工艺.结果 聚砜材质截留相对分子质量10 000的中空纤维膜对热毒宁注射液脱炭液中草酸盐及树脂有明显去除效果,聚砜材质截留相对分子质量5 000的板式膜能够100％去除药液中的细菌内毒素.结论 采用2级超滤膜联用技术能够保障热毒宁注射液的制剂稳定性及临床使用安全性.     

应用m2-Gi1α融合蛋白鉴别M2受体的特异性药物

 目的表达m2-Gilα融合蛋白,通过检测GDP与m2-Gilα融合蛋白的亲和力大小来鉴别m2受体的特异性激动剂、拮抗剂和反向激动剂。方法用两步PCR反应重组m2-Gilα融合蛋白cDNAs,并插入到pBacPAK9病毒载体中,利用Sf9细胞表达M2受体蛋白和m2-Gilα融合蛋白,通过[³H]QNB结合饱和实验及[³⁵S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测受体表达水平及GDP 与m2-Gilα融合蛋白的亲和力。结果m2-Gilα融合蛋白表达水平是(18.14±0.17)pmol·mg(膜蛋白)^-1。M2-Gilα融合蛋白与[³H]QNB的结合量随着[³H]QNB浓度的升高而增加,10μmol·L^-1GTDγS使m2-Gilα融合蛋白与[³H]QNB的饱和结合曲线明显下移。Ach使m2-Gilα融合蛋白与[³⁵S]GTPγS竞争性替代结合曲线明显右移,Pilo稍次之,alcuronium,AF—DX116,Iso及atropine 则使曲线左移,GDP的IC₅₀值分别是168.4,152.3,6.84,6.12,5.59,4.52μmol·L^-1,无配体存在时为14.7μmol·L^-1。结论表达的m2-Gilα融合蛋白具备M2配体结合的特性及G蛋白耦联受体的信号转导功能,对于有基础活性的m2-Gilα融合蛋白,Ach, Pilo是完全激动剂;atropine,alcuronium,Iso和AF-DX116为拮抗剂。