左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类和单胺类神经递质含量变化的影响

目的 观察左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类神经递质Asp、Glu、Gly、GABA和单胺类神经递质5-HT、NE含量变化的影响，探讨老年机体神经元的神经递质的变化，以及左归丸、右归丸延缓老年大鼠神经内分泌调控退化的作用机制。方法 以自然衰老大鼠为动物模型，分设4组：青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用HPLC-荧光法，检测各组大鼠海马、杏仁核Asp、Glu、gly、GABA含量变化；采用ELISA法，检测5-HT、NE含量变化。结果 与青年对照组相比，老年对照组大鼠海马、杏仁核Asp、Glu、Gly、GABA含量有不同程度升高，而与老年对照组相比，两用药组含量有不同程度降低。同时，老年对照组大鼠海马NE含量减少，左归丸组能提高老年大鼠海马NE含量。而各组大鼠5-HT含量无明显差异。结论 左归丸、右归丸通过不同程度地纠正老年大鼠海马和杏仁核脑区氨基酸类和单胺类神经递质的紊乱状态，使兴奋性和抑制性神经递质趋向平衡，从而有助于改善大脑边缘系统，延缓机体衰老。     

左归丸与右归丸对EAE大鼠APP及GAP-43表达的影响

目的 观察左归丸和右归丸对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠淀粉样前体蛋白(APP)及生长相关蛋白[GAP-43)表达的影响,探讨滋阴与温阳补肾法治疗EAE的可能机制.方法 应用髓鞘碱性蛋白(MBP)68-86免疫诱导Lewis大鼠建立EAE模型.免疫后第7天、第14天、第28天取大鼠脑白质与脊髓,采用Western-blot和实时荧光定量RT-PCR技术检测APP及GAP-43蛋白及mRNA的表达.结果 免疫后第7天,激素和左归丸均能升高EAE大鼠脊髓中APP和脑白质中APP mRNA的过低表达(P<0.05或P<0.01),且在脊髓中二者对APP的调节优于右归丸(P<0.05);第14天,左归丸显著调节脑白质中APP mRNA的过高表达、脊髓中APP mRNA的过低表达(P<0.05或P<0.01),作用优于右归丸(P<0.05).免疫后第7天,激素与左归丸显著上调EAE大鼠脑白质和脊髓中GAP-43水平(P<0.05或P<0.01),在脊髓中二者作用优于右归丸(P<0.01),右归丸显著下调脑白质中GAP-43 mRNA的表达(P<0.05);第14天,激素与左归丸显著抑制脑白质中GAP-43的过高表达(P<0.05);第28天,激素组与左归丸组脑白质中GAP-43水平低于模型组与右归丸组(P<0.01).结论 左右归丸对EAE大鼠脑白质和脊髓中APP和GAP-43蛋白与基因的表达均具有一定调节作用,且左归丸的作用明显优于右归丸.     

左归丸与右归丸对EAE大鼠血浆Th1/Th2平衡的影响

目的探讨左归丸、右归丸对实验性自身免疫性脑考髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）大鼠病程及其血浆Th1／Th2（IFN-γ／IL-4）的影响。方法用MBP免疫Lewis大鼠诱导EAE模型，随机分为模型组、激素组、左归丸组、右归丸组及正常对照组，研究各组间发病率、死亡率、神经功能评分的差异，并分别在急性期（免疫后第15天）和缓解期（免疫后第27天）采集血样，检测血浆细胞因子水平。结果右归丸组发病率低于其他各处理组（P％0．05）；急性期神经功能评分左归丸组和右归丸组均低于模型组和激素组（P〈0．05）；急性期左归丸组血浆Th1／Th2水平低于模型组（P〈0．05）；缓解期模型组、激素组Th1／Th2水平均低于对照组（P〈0．05），左归丸组、右归丸组Th1／Th2水平均高于模型组和激素组（P〈0．05），右归丸组Th1／Th2水平高于对照组（P〈0．05）；模型组Th1/Th2水平在缓解期下降（P〈0．01），左归丸组和右归丸组Th1／Th2水平均在缓解期升高（P〈0．01）。结论右归丸可降低EAE发病率；左归丸和右归丸均能减轻EAE疾病严重程度，治疗效果优于醋酸泼尼松；左归丸可下调EAE急性期血浆Th1／Th2水平；左归丸和右归丸均能上调EAE缓解期血浆Th1／Th2水平。     

左归丸对大鼠转化生长因子-α、β及其受体表达的影响

为探讨左归丸通过调节神经-内分泌-免疫网络而影响肝再生的作用机制，采用免疫组织化学法、地高辛标记探针原位杂交法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)加Dot Blot定量法对实验大鼠下丘脑弓状核(ARN)、再生肝的转化生长因子(TGF)-α、TGF-β及其受体的表达进行了研究。     

左归丸和右归丸对皮质酮所致大鼠海马神经细胞病理模型学习记忆相关信号转导分子mRNA表达的影响

目的 观察左归丸和右归丸含药鼠血清对皮质酮所致大鼠海马神经细胞病理模型学习记忆相关信号转导分子mRNA表达的影响.方法 以新生24h乳鼠海马组织为材料,体外原代培养细胞,用高浓度皮质酮(10~(-4)mol/L)处理细胞制作大鼠海马病理细胞模型.采用倒置显微镜观察细胞形态变化,FDA/PI荧光双染法观察细胞存活情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,实时定量PCR法观察与学习记忆相关的信号转导分子BDNF、CaMKⅡ、ERK、CREB mRNA的表达变化,及补肾方药左归丸和右归丸的改善作用.结果 与空白对照组相比,皮质酮模型组神经细胞树突和轴突变细、细胞活力下降,死亡细胞明显增多,及BDNF、CaMKⅡ、ERK、CREB等信号转导分子的 mRNA表达下调;而左归丸和右归丸含药鼠血清可明显改善模型组细胞上述各项指标的异常变化.结论 左归丸和右归丸鼠血清能够保护大鼠海马神经细胞免遭高浓度皮质酮的损伤作用,改善模型细胞学习记忆相关信号转导分子mRNA的表达.     

缺碘子代大鼠海马c-fos表达的研究

目的复制碘缺乏病大鼠模型,研究胚胎期及新生期缺碘、甲状腺激素不足对海马神经细胞原癌基因c鄄fos表达的影响,并探讨其在缺碘性学习记忆低下中可能的机制。方法以碘缺乏病病区粮食加去离子水复制碘缺乏病动物模型,以免疫组化方法研究第一代第二、三胎大鼠海马神经细胞原癌基因c鄄fos表达。结果缺碘组子代大鼠尿碘及血清T3、T4均较同龄正常对照组大鼠明显降低,海马神经细胞原癌基因c鄄fos阳性表达百分率较对照组大鼠海马明显增多(33.74±7.51)/(18.56±4.97),P<0.05。结论胚胎期与新生期缺碘、甲状腺激素不足导致海马神经细胞原癌基因c鄄fos表达明显增加,这种增加的原癌基因c鄄fos表达可能参与了缺碘、甲状腺激素不足,导致海马神经元损伤及其功能、代谢的变化乃至学习记忆低下。     

左归丸对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2,Bax表达的影响

目的 观察左归丸干预皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响.方法 1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞.实验分为正常对照组,模型组,左归组.Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡情况;Real time PCR和Western印迹法检测Bcl-2、Bax的表达变化.结果 胸腺细胞经皮质酮处理后,胸腺细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bcl-2 mRNA表达显著降低;Bax表达显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.01).与模型组比较,左归组胸腺细胞凋亡率降低(P<0.01);Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05).结论 左归丸鼠血清能通过调节bcl-2/bax比率的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡.     

右归丸对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化损伤的防护作用

目的：观察右归丸对二甲基亚硝胺（ DMN）诱导的肝纤维化大鼠的防护作用。方法： Wistar雄性大鼠随机分为正常组,模型组,治疗组3组,除正常组外,其余两组大鼠以DMN复制肝损伤模型,于造模第2周开始,用右归丸给予治疗组大鼠灌胃治疗。动态记录各组大鼠体重,死亡情况,计算腹水率;肝组织做天狼星红胶原染色,羟脯氨酸（ Hyp）含量测定及血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）检测。结果：与DMN模型组比较,治疗组大鼠体重下降有所恢复,死亡率明显降低,腹水率减小,肝组织胶原面积减小（ P＜0.05）;血清ALT显著降低（ P＜0.05）。结论：右归丸对于DMN诱导的大鼠肝纤维化有显著的防护作用。     

左归丸对去卵巢大鼠股骨中Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察左归丸对去卵巢骨质疏松(OP)模型大鼠股骨中Ⅰ型胶原mRNA表达的影响,探讨左归丸对OP的防治作用机制。方法SPF级4.5月龄SD雌性大鼠,分为三组:正常组39只;假手术组39只;200只采取双侧背部卵巢切除术进行绝经后OP造模。造模21 d后,将去卵巢大鼠随机分为5组:模型组、尼尔雌醇组、左归丸高剂量组、左归丸中剂量组、左归丸低剂量组,每组40只。然后开始灌胃给药,左归丸高、中、低剂量组分别给予ig6.4,3.2,1.6 g/kg剂量的左归丸混悬液灌胃;尼尔雌醇组灌服尼尔雌醇混悬液灌胃;正常组、假手术组和模型组均灌服蒸馏水。于连续给药60、120、180 d后分3批取材,取大鼠左后肢股骨近端1/3部分,采用RT-PCR方法检测骨组织中Ⅰ型胶原mRNA的表达水平。结果去卵巢后,与正常组比较,模型组大鼠股骨中Ⅰ型胶原mRNA水平明显降低(P<0.01);和模型组比较,给药60d、120、180 d的左归丸各剂量组,股骨中Ⅰ型胶原mRNA水平显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论骨组织中Ⅰ型胶原的mRNA表达水平的下调可能是绝经后骨质疏松(PMOP)发生的重要机制之一,左归丸能够上调骨组织中Ⅰ型胶原的mRNA表达,从而有效防治OP。     

高碘对大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的观察长期高碘对大鼠海马神经细胞形态结构及细胞凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法SD大鼠随机分为3组：对照组、高碘Ⅰ组、高碘Ⅱ组，分别以含碘量为5、5000、10000μg／L的自来水及普通饲料喂养。6个月时检测血清总甲状腺激素（TT3、TT4）水平；光、电镜下观察神经细胞尼氏小体及超微结构改变；流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化；分光光度法检测一氧化氮（NO）水平及一氧化氮合酶（NOS）活性；RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2、baxmRNA表达。结果对照组、高碘Ⅰ组、高碘Ⅱ组血清TT3、TT4水平呈逐渐下降趋势，组间比较差异无统计学意义。高碘Ⅰ、Ⅱ组光镜下神经元尼氏小体模糊减少，胞质淡染，电镜下细胞核内染色质浓缩成块．聚集在核膜边缘，形成花瓣状、马蹄状等不规则形态，核膜内陷、包裹聚集的染色质形成凋亡小体。海马神经细胞凋亡率高碘Ⅰ、Ⅱ组均较对照组明显升高（P〈0．01），但高碘Ⅰ组、高碘Ⅱ组间比较未见明显差异（P〉0．05）。与对照组相比，高碘I、Ⅱ组S期细胞减少（P〈0．01），G2／M期增加（P〈0．05），G．期无明显变化（P〉0．05）。高碘Ⅰ、Ⅱ组大鼠海马组织NOS活性及NO水平均明显低于对照组（P〈0．01），bcl-2mRNA表达降低（P〈0．01）、baxmRNA表达升高（P〈0、01），但高碘I组、高碘Ⅱ组间未见明显改变（P〉0．05）。结论长期高碘可诱导大鼠海马神经细胞凋亡，细胞周期改变；其机制可能与NOS活性、NO水平降低以及bax过度表达、bcl-2表达下调有关。     

大鼠全脑缺血再灌注额叶、海马、丘脑IGF-1的表达

目的 探讨全脑缺血再灌注大鼠额叶、海马、丘脑胰岛素生长因子( IGF-1)的含量变化,揭示IGF-1对额叶、海马、丘脑缺血再灌注损伤的动态保护作用.方法选用Wistar老龄大鼠,雌雄随机分组,对照组5只,实验组分为全脑缺血15 min组,缺血15 min再灌注1h、6h、2d、4d、9d组,每组5只.用免疫组化ABC法检测缺血再灌注不同时相额叶、海马、丘脑IGF-1含量.结果正常老龄大鼠额叶、海马、丘脑均有少量IGF-1表达;缺血再灌注1h～2d,丘脑IGF-1表达明显增加,以后快速减少;缺血再灌注6h-2d,海马IGF-1表达明显增加,以后也快速减少;额叶仅于缺血再灌注2d出现一过性表达增加.结论对于缺血缺氧,丘脑和海马具有反应快捷的IGF-1神经保护机制,而额叶具有迟发性短暂的IGF-1神经保护机制.     

左、右归丸通过TGF-β1/Smad4信号途径对大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导的影响

目的研究左、右归丸含药血清经转化生长因子(TGF)-β1/Smad4信号途径对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨诱导的影响。方法以左归丸、右归丸水煎液和阳性对照药补佳乐、蒸馏水给SD大鼠灌胃后取血制备含药血清(含有10%含药血清的诱导剂),与诱导剂组共5种处理因素对BMSCs进行干预,选用Western印迹法检测碱性磷酸酶(ALP)蛋白的表达,用免疫组化SP法检测TGF-β1和Smad4蛋白的表达。结果左、右归丸与空白组和诱导剂组比可显著促进ALP蛋白的表达,增强TGF-β1和Smad4蛋白的表达(P<0.01),左归丸组与右归丸组比较可上调ALP、Smad4蛋白的表达(P<0.01)。结论左归丸与右归丸可能通过增强ALP、TGF-β1、Smad4蛋白的表达,影响TGF-β1/Smad4信号途径,从而协同诱导剂促进BMSCs的成骨诱导,并且左归丸较右归丸促进作用更明显。     

胰岛素对糖尿病大鼠海马病变的预防研究

选择与学习记忆密切相关的神经结构———大脑海马部位为研究对象 ,从普通光镜、透射电镜以及一氧化氮合酶(ＮＯＳ)阳性细胞、乙酰胆碱酯酶 (ＡｃｈＥ)阳性纤维表达等方面观察胰岛素治疗对较长病程糖尿病大鼠脑病变的防治作用。一、材料和方法1.动物模型制备 :6周龄ＳＤ大鼠 ,体重 (2 5 0± 30 )ｇ ,腹腔注射 2 %链脲佐菌素 (ＳＴＺ) 5 5ｍｇ/ｋｇ ,一周后尾静脉血糖大于 16 .7ｍｍｏｌ/Ｌ者作为糖尿病模型鼠〔1〕。正常对照组 (Ｎ组 10只 ) ;成模大鼠分 2组 :糖尿病组 (Ｄ组 10只 ) ;糖尿病治疗组 (Ｔ组 10只 ,皮下注射鱼精蛋白锌胰岛素 2…     

右归丸及其拆方干预对老年肾阳虚证患者基因差异表达的影响

目的观察右归丸及其拆方对老年肾阳虚证患者基因差异表达的影响。方法选取年龄在60岁以上的肾阳虚证患者8例进入研究,按随机数字法将其分为两组(右归丸组及温肾阳组各4例),另将4例60岁以下健康人设为正常对照组。分别观察治疗前及疗程结束后两组临床症状总积分,比较外周血白细胞的6条基因(SYPL1、PHF14、ARHGAP18、RECQL、OSTF1和SEC23B)的差异表达,并以GAPDH作为内参对照。结果右归丸组及温肾阳组连续用药2个疗程后,症状总积分在治疗前后均有统计学差异(t右归丸=20.657,P0.01,t温肾阳=51.000,P0.01);治疗后两组间总积分比较有统计学差异(F=74.432,P0.01)。RT-PCR结果显示,SYPL1基因,在右归丸组和温肾阳组的表达水平均存在统计学差异(t左归丸=-35.631,t温肾阳=-13.000,P0.01),且治疗后右归丸组和温肾阳组的表达均较治疗前上升。治疗后各组的SYPL1基因表达存在差异(F=487.049,P0.01),温肾阳组表达上升程度不及右归丸组。其他5种基因的表达情况与SYPL1基因状况类似。结论 (1)右归丸及温肾阳中药复方对老年肾阳虚患者的基因差异表达均有改善作用,右归丸优于单纯温肾阳复方治疗效果,验证了阴中求阳法的优越性。(2)老年肾阳虚患者的基因表达在短期内不能单独依靠药物恢复至完全正常,需要一个长期和综合的治疗过程。     

弓形虫感染对大鼠海马BDNF和NMDA表达的影响

目的观察弓形虫慢性感染对大鼠海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)和N-甲基天冬氨酸受体(NMDA)亚单位NR2A、NR2B表达的影响。方法将4w雄性Wistar大鼠随机分成3组:A组腹腔感染2 mL弓形虫速殖子2×107/mL;B组腹腔感染2 mL弓形虫速殖子2×105/mL和C组正常对照腹腔感染2 mL灭菌生理盐水。4w大鼠感染弓形虫速殖子9w后,应用免疫组化染色、原位杂交技术和图像处理方法分析海马BDNF,CA1、CA3和齿回状NR2A和NR2B的表达。结果BDNF的表达:弓形虫感染A组和B组大鼠免疫组化海马BDNF阳性染色颗粒均高于对照组,分别为(54.27±23.18)、(50.39±19.34)和(44.68±22.74)mm2(P<0.05);原位杂交显示弓形虫感染A组和B组大鼠脑组织中BDNF mR-NA表达均增加,海马阳性杂交信号高于对照组,为(0.13±0.02)、(0.12±0.02)和(0.09±0.01)(P<0.05);NR2A蛋白的表达:弓形虫感染A组和B组大鼠在CA3区表达的免疫反应灰度值较正常组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),而在CA1区和齿状回表达的免疫反应灰度值与对照组相比较差异均无显著性(P>0.05)。NR2B蛋白的表达:弓形虫感染A组和B组大鼠在CA1和CA3区表达的免疫反应灰度值分别与对照组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);而在齿状回表达的免疫反应灰度值差异无显著性(P>0.05)。结论弓形虫慢性感染大鼠海马组织BDNF和BDNF mRNA表达增强,弓形虫感染可影响其海马NMDA受体的表达。     

丁苯酞对血管性痴呆大鼠海马区血红素氧合酶-1表达的影响

目的探讨丁苯酞(Dlbutylphthalide,NBP)对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆功能的影响。方法采用双侧颈总动脉永久结扎法建立大鼠VD模型60只,随机分为假手术组、模型组和丁苯酞组(腹腔注射给予丁苯酞,1次/d,连续4 w),每组20只,用Y迷宫试验观察行为学改变,在RT-PCR水平观察各组海马区HO-1 mRNA的表达变化,HE染色法检测细胞形态变化。结果丁苯酞组学习和记忆成绩显著优于VD组;模型组海马区HO-1 mRNA表达跟假手术组相比明显的增多,丁苯酞组跟模型组比较HO-1 mRNA的表达明显增多,其差异有统计学意义。结论丁苯酞对VD的保护作用可能通过上调脑组织中的HO-1 mRNA的表达而实现。     

氯离子通道阻断剂对大鼠离体海马神经元凋亡的影响

目的 通过观察氯离子(Cl-)通道阻断剂对一氧化氮(NO)供体3-吗啉斯德酮胺(SIN-1)诱导的大鼠离体海马神经元凋亡的效应,探讨Cl-通道在缺血性脑损伤中的作用.方法 离体培养12 d的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、SIN-1处理组、SIN-1处理后和Cl-通道阻断剂组,对各组神经元分别在相应的时间点进行Hoechst荧光染色观察凋亡细胞数和MTT实验定量检测神经元的存活率.结果 SIN-1能明显诱导神经元凋亡(P<0.05),SITS和DIDS呈剂量依赖性地抑制NO诱导的神经元损伤,提高神经元的存活率,与SIN-1组相比差异显著(P<0.05).结论 Cl-通道阻断剂对NO诱导的大鼠海马神经元凋亡有一定的保护作用.     

甲状腺激素缺乏对大鼠海马区乙酰胆碱相关酶发育影响的观察

甲状腺激素对中枢神经系统的发育成熟及正常功能的维持具有重要作用。在脑发育关键期内甲状腺激素缺乏导致大脑皮层、海马及前脑基底部胆碱能神经元相关酶的活性明显降低〔１〕。为进一步探讨脑发育关键期内甲状腺激素缺乏对成年后中枢神经系统的影响，本研究对大鼠海马脑...     

大鼠发育中海马CA3区神经元形态、核及核仁的定量分析

目的：观察发育过程中大鼠海马神经元形态特点及其与脑老化的关系。方法：HE染色光镜观察，彩色显微镜图像分析仪分析。结果：随着年龄的增长锥体细胞层的厚度变薄，细胞密度及核仁数量，减少，幼年鼠面积最大，成年鼠核仁／核比值最大。结论：随着年龄的增大，大鼠海马CA3区锥区细胞的数量及形态均发生变化，以及适应功能的需要，这些形态也与脑老化过程有一定关系。