方参鹿颗粒含药血清对较低危骨髓增生异常综合征p38MAPK磷酸化的抑制作用

目的 观察复方参鹿颗粒（CSG）含药血清对较低危骨髓增生异常综合征（lower-risk MDS）骨髓单个核细胞（BMMNC）p38MAPK磷酸化、CD34+细胞凋亡和正常造血干/祖细胞集落（CFU-HSPC）形成的影响。方法 16只清洁级Wistar大鼠,随机分为空白血清组、CSG组,每组8只,制备空白血清和CSG含药血清。体外骨髓细胞培养分为空白血清组、CSG组、SB203580组和SB202474组。分离lower-risk MDS患者BMMNC,与10%各组血清或p38抑制剂共培养,Annexin V/PI双染流式细胞术检测CD34+细胞凋亡率, Western Blot检测p38、p-p38蛋白表达。MACS分离骨髓CD34+细胞,用半固体甲基纤维素与10%各组血清或p38抑制剂共培养,观察CFU-HSPC形成,FISH检测集落中异常克隆细胞群体的比例。结果 与空白血清和SB202474组比较,CSG、SB203580组的凋亡率、p-p38蛋白表达减少 （P<0.05）;CFU-HSPC形成数增加（P<0.01）;形成的集落中异常克隆细胞比例降低（P<0.05）。CSG和SB203580组的p-p38蛋白表达和异常克隆细胞比例呈正相关（P<0.01）。结论 CSG含药血清能改善lower-risk MDS骨髓无效造血,其机制可能与抑制p38蛋白磷酸化,减少骨髓CD34+细胞凋亡,并恢复骨髓正常造血细胞的优势生长有关。     

从p38MAPK通路探讨复方参鹿颗粒对较低危MDS骨髓患者CD34+细胞凋亡的影响

目的:从p38有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路研究复方参鹿颗粒(FSG)对较低危骨髓增生异常综合征(lower-risk MDS)骨髓CD34~+细胞凋亡的影响。方法:将60例lower-risk MDS患者随机分为FSG组和安特尔治疗组,每组30例。干预3个月。观察治疗前后两组患者血常规、骨髓CD34~+细胞凋亡率、骨髓单个核细胞(BMMNC)磷酸化p38(p-p38),p38,丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)3/6,磷酸化p53(p-p53),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2家族相关基因(Bcl-xl)蛋白以及p38 mRNA表达的变化。对照组7例为年龄匹配的非MDS引起的血细胞减少患者。结果:与治疗前比较,FSG组治疗后红细胞计数、血红蛋白量、血小板明显上升(P0.05,P0.01);安特尔组治疗后血红蛋白量有上升趋势,白细胞、红细胞、血小板计数差异无统计学意义。与对照组比较,治疗前FSG组lower-risk MDS骨髓CD34~+细胞凋亡率,p-p38,MKK3/6,p-p53蛋白表达增加,Bcl-xl蛋白表达降低(P0.05,P0.01),p38,Bcl-2蛋白和p38 mRNA表达无差异;FSG治疗后,CD34~+细胞凋亡率,p-p38,MKK3/6,p-p53蛋白表达均降低(P0.05),但p-p38蛋白表达仍高于对照组(P0.05),Bcl-xl蛋白表达增高(P0.05)。安特尔组治疗前后CD34~+细胞凋亡率,p-p38,MKK3/6,p-p53,Bcl-xl蛋白表达差异均无统计学意义。对照组,lowerrisk MDS患者治疗前骨髓p-p38蛋白表达和CD34~+细胞凋亡率呈正相关(P0.01)。FSG组治疗后骨髓CD34~+细胞凋亡率下降与p-p38蛋白表达水平下降呈正相关(P0.01)。结论:FSG通过调控p38MAPK通路抑制骨髓CD34~+细胞凋亡,改善骨髓无效造血。     

基于P38MAPK通路的复方参鹿颗粒含药血清对TNF-α诱导的正常骨髓CD34~+细胞凋亡的影响

目的基于P38MAPK途径探讨复方参鹿颗粒含药血清对TNF-α诱导的正常骨髓CD34+细胞凋亡的影响。方法 Wistar大鼠随机分为空白组和复方参鹿颗粒低、中、高剂量组,分别制备空白血清和不同浓度的含药血清。收集并分离8例正常的骨髓单个核细胞(BMMC),分别加入空白血清和10%不同浓度含药血清,与20 ng/ml人重组TNF-α共同培养。流式细胞术检测CD34~+细胞凋亡率,Western blot检测骨髓单个核细胞P38、p-P38、P53、p-P53、Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达,荧光定量PCR检测P38、P53、Bcl-xl、Bcl-2mRNA表达。结果与空白组相比,复方参鹿颗粒中、高剂量组CD34~+细胞凋亡率以及p-P38、p-P53蛋白表达显著下降,Bcl-xl蛋白和mRNA表达显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论复方参鹿颗粒含药血清可有效抑制TNF-α诱导的正常骨髓CD34~+细胞凋亡,下调p-P38和p-P53蛋白表达,上调Bcl-xl表达。其机制可能与P38MAPK通路介导的凋亡途径有关。     

基于p38 MAPK信号通路探讨苍膝通痹胶囊对KOA大鼠关节软骨的保护作用

目的:观察苍膝通痹胶囊治疗膝骨关节炎(KOA)模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:将60只4周龄SPF级健康雄性SD大鼠,随机分为空白组,模型组,二甲基亚砜(DMSO)组,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组,每组10只。除正常组外,其余各组采用改良Hulth法建立KOA模型,造模成功后,苍膝通痹胶囊组每日给予0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊溶液灌胃,SB203580组每日给予0.015 g·kg~(-1)的SB203580溶液灌胃,苍膝通痹胶囊联合SB203580组组每日给予含0.015 g·kg~(-1)SB203580及0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊的混合溶液灌胃,DMSO组给予1%DMSO溶液灌胃,模型组和空白组给予生理盐水灌胃,用药干预4周后处死、取材。苏木素-伊红(HE)染色观察软骨组织形态学改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血上清液中白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-tine PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测软骨组织中p38 MAPK信号通路中相关因子p38,p-p38,基质金属蛋白酶-13(MMP-13),Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)mRNA及蛋白的表达水平,免疫组化法检测p-p38的定位表达。结果:与正常组比较,模型组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著上调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著下调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著上调(P0.01);与模型组比较,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著下调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著上调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著下调(P0.01)。结论:苍膝通痹胶囊可有效保护KOA大鼠软骨组织,其机制可能与靶向阻断p38 MAPK信号通路有关。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素的干预研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化中的作用及大黄素的干预效应。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)分为对照组、IL-1β诱导组、IL-1β+SB 203580组和IL-1β+大黄素组。培养48 h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白(CK)、p38MAPK及磷酸化-p38MAPK(p-p38MAPK)的表达情况。结果IL-1β可诱导部分NRK52E由卵圆形转变为梭形,同时CK表达减弱,α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达增强。SB 203580阻断p38MAPK通路后可显著抑制IL-1β诱导的细胞形态改变,同时上调CK表达,下调α-SMA及p-p38MAPK的表达。大黄素对IL-1β诱导的细胞形态改变及α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达也有明显抑制作用,其抑制作用与SB 203580的阻断作用相比无显著性差异。结论p38MAPK参与介导IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化过程,大黄素可通过干扰p38MAPK信号通路抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

大蒜素对PM2.5诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的探讨PM2.5对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及大蒜素(Allicin)的抑制作用及可能机制。方法采集大气PM2.5并分别以0(空白对照组)、20、100、200、400 mg/L(PM2.5 20、100、200、400 mg/L组)作用小鼠VSMCs 24 h,检测VSMCs增殖情况,一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量和VSMCs中磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;VSMCs分别加入Allicin 5、20、40 mg/L(Allicin 5、20、40 mg/L组)、p38 MAPK通路阻滞剂SB203580 20μmol/L(SB203580 20μmol/L组)和Allicin40 mg/L与SB203580 20μmol/L(Allicin+SB203580组),检测Allicin的干预作用及机制。结果与空白对照组比较,PM2.5 100、200、400 mg/L组均诱导VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量升高,NO分泌减少(P0.05,P0.01),细胞内p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达增加(P0.05),尤其200 mg/L组效果显著(P0.05,P0.01);与PM2.5 200 mg/L组比较,Allicin 20、40 mg/L组、SB203580 20μmol/L组、Allicin+SB203580组可抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P0.01),VSMCs中p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达降低(P0.05,P0.01);与Allicin 20 mg/L组比较,Allicin+SB203580组可进一步抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P0.01,P0.05),VSMCs中p-p38MAPK及PCNA蛋白表达降低(P0.01)。结论 Allicin可能通过抑制p38 MAPK信号通路,抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖。     

冬连三七组分调控AGEs/p38MAPK改善糖尿病动脉粥样硬化兔血管内皮损伤的机理研究

目的:研究冬连三七组分(Composition of Ophiopogon polysaccharide,Notoginseng total saponins and Rhizoma Coptidis alkaloids,CONR)调控AGEs/p38MAPK信号转导通路,改善糖尿病动脉粥样硬化(diabetic atherosclerosis,DA)兔血管内皮损伤的机制。方法:雄性新西兰大白兔分为空白组、模型组、CONR高剂量组、CONR低剂量组、SB203580组、辛伐他汀组;静脉推注四氧嘧啶并且配合腹主动脉内膜球囊损伤术诱导DA模型。CONR高、低剂量组每日分别给予CONR 450 mg/kg、CONR 150 mg/kg灌胃10周;辛伐他汀组给予3 mg/kg辛代他汀灌胃10周;SB203580组给予p38MAPK抑制剂2 mg/kg腹腔注射,12 h重复给药10周;空白组每日给予生理盐水20 ml灌胃。结果:各实验组对AGEs高表达均有降低作用,与模型组比较差异具有统计学意义。各实验组对p-p38MAPK蛋白高表达均有抑制作用,与模型组比较,差异具有统计学差异(P0.01)。CONR高、辛伐他汀组对p-p38MAPK蛋白的抑制作用优于SB203580组(P0.01)。CONR低高剂量组、SB203580组及辛伐他汀组显著降低DA大兔ET水平,实验各组NO活性较模型组显著增强(P0.01)。冬连三七组分明显抑制了DA兔胸主动脉血管内皮细胞的损伤。结论:冬连三七组分可能通过干预AGEs/p38MAPK信号转导通路改善DA兔的血管内皮损伤。     

黄芩苷对幽门螺杆菌诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞损伤的保护作用及机制

目的:探讨黄芩苷(baicalin)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞(human gastric epithelial GES-1 cells)损伤的保护作用及机制研究。方法:采用Hp感染GES-1细胞,加入baicalin(15,30,60 mg·L~(-1))和p38分裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580 20μmol·L~(-1)共培养。噻唑蓝(MTT)比色法测细胞增殖、流式细胞术测细胞凋亡、酶联免疫吸附法(ELISA)测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-8水平、比色法测细胞乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性、蛋白免疫印迹法(Western blot)测细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2,p-p38 MAPK及total-p38 MAPK(T-p38 MAPK)蛋白表达。结果:与空白组比较,Hp可抑制GES-1细胞增殖,促进GES-1细胞凋亡,诱导GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8并增加LDH活性,增加GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并降低Bcl-2蛋白表达(P0.01);与Hp感染组比较,中、高浓度baicalin组可促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.01);与高浓度baicalin组比较,SB203580可进一步促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:baicalin可通过抗炎、促增殖并抗凋亡减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK通路有关。     

银杏蜜环口服溶液作用p38 MAPK调节eNOS/NO信号途径保护人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤

目的:评估银杏蜜环口服溶液对缺氧复氧损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用;从p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)/一氧化氮(NO)信号途径探讨银杏蜜环口服溶液保护受损HUVECs的药效机制。方法:缺氧缺糖/复氧复糖法建立体外HUVECs缺血再灌注损伤模型。分为正常组、模型组、银杏蜜环口服溶液高质量浓度组(75 mg·L-1,简称银蜜高),低质量浓度组(36 mg·L-1,简称银蜜低),p38 MAPK抑制剂SB203580组,银蜜高+SB203580组,e NOS抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组,银蜜高+L-NAME组。细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)及微量酶标法检测细胞活力及细胞损伤;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)/p38 MAPK和磷酸化e NOS(p-e NOS)/e NOS蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),可溶性细胞间黏附分子-1(s ICAM-1),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)含量;硝酸盐还原酶法检测NO含量。结果:银蜜高、银蜜低组可显著提高缺氧复氧损伤HUVECs活力、降低细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量(P0.05,P0.01);抑制受损细胞p38的磷酸化(P0.05),降低细胞培养上清中TNF-α,s ICAM-1含量(P0.05,P0.01)。在给予银蜜高或(和)SB203580后,受抑制的e NOS磷酸化表达水平显著升高(P0.05);银蜜高可显著提高受损细胞NO含量,在加入e NOS抑制剂L-NAME后,银蜜高可拮抗L-NAME降低细胞NO生成和升高Caspase-3的作用(P0.05)。结论:银杏蜜环口服溶液可提高氧复氧损伤HUVEs活力,具有抗炎、调节内皮系统、抑制细胞凋亡的作用,机制与其作用于p38 MAPK进而调节e NOS-NO信号途径相关。     

白桦脂醇对A375细胞黑素合成及p38-MAPK信号通路调控机制的研究

目的:研究植物雌激素成分白桦脂醇对黑素合成中关键限速酶、MAPK信号通路调控作用。方法:使用NaOH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性,Western blot和PCR法测定MAPK通路中关键蛋白激酶和TYP、TRP-1、TRP-2、MITF、p38、p-p38蛋白含量及mRNA表达;加入p38信号通路阻断剂(SB203580)之后,测定上述蛋白和mRNA表达。结果:白桦脂醇对A375细胞黑素含量和酪氨酸酶活性有抑制作用(P0.05或P0.01),SB203580(10μmol/L)能阻断白桦脂醇对A375细胞黑素含量和酪氨酸酶活性抑制作用;白桦脂醇对A375细胞中上述蛋白及mRNA表达有抑制作用(P0.05或P0.01),加入SB203580后,阻断p38-MAPK信号通路,白桦脂醇以上作用受到显著抑制(P0.05或P0.01)。结论:表明白桦脂醇通过MAPK信号通路中的p38-MAPK信号通路抑制A375细胞黑素合成。     

益气活血方对内毒素诱导内皮细胞炎症反应的干预作用

目的研究益气活血方对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导内皮细胞炎症反应的干预作用。方法体外培养内皮细胞EA. hy926,设为空白对照组、LPS组、益气活血方低剂量组、益气活血方高剂量组、辛伐他汀组、SB203580(p38 MAPK抑制剂)组、SB203580+益气活血方组,药物预处理3 h后加LPS刺激12h,收集上清及细胞,ELISA检测上清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8水平,Western blot检测黏附因子VCAM-1、ICAM-1蛋白表达水平及p38 MAPK蛋白磷酸化水平。结果与空白对照组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-8分泌水平以及VCAM-1、ICAM-1蛋白表达水平升高(P 0. 01),p38 MAPK蛋白磷酸化水平亦明显升高(P 0. 01);与LPS组比较,益气活血方低、高剂量组、辛伐他汀组TNF-α、IL-6、IL-8、VCAM-1、ICAM-1表达水平以及p38 MAPK磷酸化水平明显降低(P 0. 05,P 0. 01);益气活血方组、SB203580组以及益气活血方+SB203580组TNF-α、IL-6、IL-8、VCAM-1、ICAM-1表达水平及p38 MAPK磷酸化水平较LPS组均有明显下降(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方+SB203580组与益气活血方组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论益气活血方通过抑制p38 MAPK活性发挥抗LPS诱导内皮细胞炎症反应之作用。     

电针经p38 MAPK信号通路对坐骨神经损伤大鼠脊髓中AQP1和AQP4表达的影响＊

目的 探讨电针（electroacupuncture，EA）治疗对坐骨神经损伤大鼠脊髓中水通道蛋白AQP1和AQP4表达的影响，并揭示其可能作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分成假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、电针组（EA组）、抑制剂组（SB203580组）和电针 + 抑制剂组（EA + SB203580组），每组12只。采用钳夹法复制坐骨神经损伤大鼠模型，并给予电针和p38抑制剂SB203580干预14天。分别于干预前及干预后第7天和14天检测坐骨神经功能指数（SFI）；HE染色观察损伤处远端坐骨神经组织病理学变化；BL-410电生理系统检测大鼠神经传导速度（NCV）；qRT-PCR检测脊髓AQP1和AQP4 mRNA表达水平；Western blot检测脊髓AQP1、AQP4、p-p38MAPK和p38MAPK蛋白表达水平。结果 与Sham组比较，Model组大鼠坐骨神经组织结构不完整，出现明显炎症浸润和病理损伤，EA组和SB203580组大鼠坐骨神经组织相较于Model组坐骨神经组织炎症浸润和病理损伤得到明显缓解，EA + SB203580组与SB203580组的差异不大。与Sham比较，Model组大鼠脊髓中AQP1和AQP4 mRNA和蛋白表达水平以及p-p38MAPK/p38MAPK蛋白比值均显著增加，而SFI值和NCV显著降低（P < 0.01）；与Model组比较，EA组和SB203580组大鼠脊髓中AQP1 和AQP4 mRNA和蛋白表达水平、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白比值均显著降低，而SFI值和NCV显著升高（P < 0.01）；与SB203580组比较，EA + SB203580组检测指标无显著性变化（P > 0.05）。结论 电针刺激可抑制脊髓中AQP1和AQP4表达，改善大鼠坐骨神经损伤，其可能与抑制p38MAPK信号通路活化有关。     

疏肝健脾方药含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞炎症损伤及TLR4/p38MAPK信号通路影响的研究

目的:研究疏肝健脾方药含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激下大鼠肝细胞炎症反应及TLR4(Toll样受体-4)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的影响。方法:体外培养并鉴定SD大鼠肝细胞,制备疏肝健脾方药含药血清,对肝细胞进行疏肝健脾方药、p38MAPK抑制剂等药物干预,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的表达,Western blot检测TLR4,p38MAPK,p-p38MAPK蛋白的表达。结果:可提取大鼠疏肝健脾方药含药或空白血清约2~3 m L,大鼠获得纯化后肝细胞1.5×108~2.0×108个,Typan blue染色测定细胞活力均在95%以上,免疫荧光法鉴定确定提取的为肝细胞。肝细胞培养上清的检测:LPS组较空白血清组IL-6,TNF-α水平均有显著升高(P<0.01)。与LPS组比较,药物干预组IL-6,TNF-α表达水平呈显著降低(P<0.01)。肝细胞的蛋白检测:与空白血清组比较,LPS组的p38MAPK,p-p38MAPK,TLR4蛋白表达均有显著升高(P<0.01);与LPS组比较,SB239063能显著下调p38MAPK的蛋白表达水平(P<0.01),疏肝健脾组亦有下调,但无显著差异;疏肝健脾组,SB239063组的p-p38MAPK的蛋白表达水平均下调显著(P<0.01);TLR4蛋白表达水平以疏肝健脾组下调具有显著性差异(P<0.01),SB239063组下调无显著统计学差异。结论:疏肝健脾方药可能通过TLR4/p38MAPK信号通路调控大鼠肝细胞炎症损伤,含药血清可能是其重要的作用途径之一。     

扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3

 目的从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38 MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(poly-peptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68mmol·L^-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69mmol·L^-1PCF组、UVA+2.84mmol·L^-1 PCF组、UVA+1.42mmol·L^-1 PCF组。以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK及磷酸化p38MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42～5.69mmol·L^-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化。结论PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK通路和caspase-3活性有关。     

牛磺酸通过p38通路对缺氧内皮细胞ICAM-1,VCAM-1表达的影响

探讨牛磺酸(taurine,Tau)通过p-p38通路对牛肺主动脉内皮细胞(PAECs)中ICAM-1,VCAM-1的影响及其作用机制。原代培养PAECs取4~12代细胞用于实验。分为5组:对照(control)组、缺氧(hyp)组、抑制剂(SB203580)组、给药(Tau)组、抑制剂+给药(SB+Tau)组,Tau的给药浓度为100 mmol·L~(-1),p38抑制剂SB203580浓度为20μmol·L~(-1),给药时间为12h。MTT检测不同浓度Tau对PAECs的抑制。使用Western blot及Real-time PCR方法检测p38通路蛋白及炎症因子ICAM-1,VCAM-1的表达情况。使用免疫荧光检测p38核位移情况。MTT结果显示随着Tau浓度增加,对PAECs增殖抑制增强。Western blot和Real-time PCR结果显示在蛋白水平及基因水平Tau都抑制ICAM-1,VCAM-1的表达。Western blot的结果和免疫荧光的结果均显示Tau可以抑制p38蛋白的活化。Tau可能通过p38 MAPK通路抑制由缺氧引起的牛肺主动脉内皮细胞中ICAM-1,VCAM-1的表达。     

茜草总蒽醌对环磷酰胺诱导小鼠白细胞降低的保护作用及其作用机制

目的:探讨茜草总蒽醌对环磷酰胺诱导小鼠白细胞降低的保护作用及其可能机制。方法:采用腹腔注射环磷酰胺的方法复制小鼠白细胞减少模型,分别用茜草总蒽醌高、低剂量组治疗,每组10只,给药15天后,测定各组小鼠外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞计数(BMC)、骨髓CD34+细胞、脾脏指数、胸腺指数、脾集落形成单位(CFU-S)及血清粒细胞集落刺激因子(G-CSF)等指标。结果:茜草总蒽醌治疗组对小鼠外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞计数(BMC)、骨髓CD34+细胞、脾脏指数、胸腺指数、脾集落形成单位(CFU-S)、血清粒细胞集落刺激因子(G-CSF)等指标均有明显的回升作用,与模型组比较有显著性差异(P 0. 05)。结论:茜草总蒽醌对CTX诱导的外周血白细胞数下降具有明显的对抗作用;促进骨髓细胞及骨髓CD34+细胞增殖,有显著的抗化疗骨髓抑制作用,且在升白细胞上存在一定的量效关系;对免疫器官有较好的保护作用,其作用可能与升高血清CD34+、CFU-S、G-CSF活性有关。     

宣肺平喘胶囊基于p38磷酸化途径对COPD自噬影响研究

目的 探讨宣肺平喘胶囊是否通过抑制p38磷酸化而影响香烟烟雾提取物诱导的支气管上皮细胞自噬。方法 将支气管上皮细胞分为空白组、香烟烟雾提取物组、宣肺平喘低剂量组、宣肺平喘中剂量组、宣肺平喘高剂量组。以香烟烟雾提取物诱导支气管上皮细胞建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)细胞模型,空白组以空白血清培养,宣肺平喘各组加入宣肺平喘含药血清培养。CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光显微镜观察自噬情况,Western blot法检测细胞中p38、p-p38、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin 1蛋白表达情况,RT-PCR法检测细胞中LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin 1 mRNA表达情况。结果 与空白组比较,香烟烟雾提取物组细胞活力均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、自噬水平和p-p38、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin 1蛋白表达量及LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin 1 mRNA表达量均显著增高(P均<0.05);与香烟烟雾提取物组比较,宣肺平喘各组细胞活力均显著增加(P均<0.05),细胞凋亡率、自噬水平和p-p38、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ...     

益髓理血饮对二甲基苯蒽诱导骨髓增生异常综合征模型大鼠骨髓病态造血的影响及机制

目的:探讨中药复方益髓理血饮对二甲基苯蒽(DMBA)诱导的骨髓增生异常综合征(MDS)模型大鼠骨髓病态造血的改善作用及其机制。方法:将清洁级雄性SD大鼠分为正常对照组、模型组、复方皂矾丸阳性组及益髓理血饮低、高剂量组,每组12只。用DMBA诱导建立大鼠MDS模型,于造模第14天开始分组给药,连续30 d。给药后第31天处死各组大鼠,检测各组大鼠骨髓增生程度、病态造血,血清IL-3、TNF-α含量,股骨CD34表达及原始细胞所占比。结果:与正常对照组比较,模型组骨髓增生程度和骨髓病态造血明显,各给药组骨髓增生和病态造血明显改善;模型组血清IL-3含量显著降低(P0.01),TNF-α含量显著升高(P0.01),治疗后各给药组IL-3含量显著升高(P0.05),TNF-α含量降低(P0.05);模型组股骨CD34及髓CD45阳性表达(P0.01),治疗后股骨CD34表达和原始细胞比例均显著降低(P0.05)。以上改善均以高剂量组最为明显。结论:益髓理血饮治疗骨髓增生异常综合征能改善骨髓增生程度和病态造血,升高血清IL-3含量,降低血清TNF-α含量,减少股骨CD34阳性表达,降低股骨原始细胞比例。     

当归多糖诱导人白血病干细胞衰老与调控端粒系统机制的研究

目的探讨当归多糖(ASP)调控人CD34+CD38-骨髓白血病干细胞(LSC)衰老的端粒与端粒酶机制。方法免疫磁性分选人骨髓CD34+CD38-LSC;CCK-8检测ASP对CD34+CD38-LSC增殖抑制能力;衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老情况;混合集落培养(CFU-Mix)检测细胞增殖能力;荧光定量RT-PCR检测端粒酶基因TERT变化;TRAP-PCR检测细胞端粒酶活性;Southern blotting检测细胞端粒长度变化。结果免疫磁性分选后人骨髓CD34+CD38-LSC纯度达(91.15±2.41)%,相差显微镜观察显示细胞形态饱满,透明度高,折光性强。ASP体外诱导CD34+CD38-LSC 48 h,能有效抑制其增殖且呈浓度依赖性(P<0.05),集落形成能力下降(P<0.01)。40μg/mL ASP作用CD34+CD38-LSC 48 h,SA-β-Gal染色阳性细胞率明显升高(P<0.01);CD34+CD38-LSC端粒酶基因TERT表达水平下降(P<0.05);端粒酶活性下降(P<0.05);端粒长度缩短(P<0.05)。结论 ASP在体外可能通过调控细胞端粒系统诱导人骨髓CD34+CD38-LSC衰老。     

阿魏酸钠对氧糖剥夺所致星形胶质细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:观察阿魏酸钠对氧糖剥夺所致的体外培养星形胶质细胞损伤的保护作用,并探讨其机制。方法:原代培养星形胶质细胞分为对照组、氧糖剥夺组、氧糖剥夺+阿魏酸钠组(50,100,200 mol/L)、P38MAPK通路抑制剂SB203580组、氧糖剥夺+SB203580组。阿魏酸钠组细胞在氧糖剥夺前加入不同浓度的阿魏酸钠作用24 h,p38MAPK特异性阻断剂SB 203580(20μmol/L)在氧糖剥夺前1 h加入。将各氧糖剥夺组星形胶质细胞在无糖DMEM培养基、1%O2的培养条件下进行6 h时长的氧糖剥夺,进行如下实验:(1)倒置相差显微镜下观察星形胶质细胞形态学改变。(2)用乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、MTT法检测星形胶质细胞的损伤情况及细胞活力。(3)Hoechst 33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变。(4)Western blot方法观察磷酸化P38和活化的caspase-3蛋白表达的改变。结果:离体培养的星形胶质细胞经过氧糖剥夺处理6 h,细胞发生肿胀,突触回缩,呈空泡样改变,细胞活力明显下降,LDH漏出率增加,凋亡细胞百分比较正常对照组明显增加,SB203580可逆转以上改变。Western blot结果显示,磷酸化P38MAPK和活化的caspase-3蛋白表达也明显增加。氧糖剥夺前24 h加入阿魏酸钠(50,100,200μmol/L)可不同程度逆转以上改变。结论:阿魏酸钠能明显抑制氧糖剥夺所致的体外培养星形胶质细胞的损伤,这种作用与其抑制p38 MAPK信号转导通路有关。