二氯乙酸钠对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察二氯乙酸钠(sodium dichloroacetate,DCA-Na)对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:将对数生长期的MG63细胞随机分为对照组和低、中、高浓度DCA-Na组,对照组不加DCA-Na,低、中、高DCA-Na组加入DCA-Na(终浓度分别为50μg·m L-1、100μg·m L-1、200μg·m L-1),并设1个只加等量培养基不加细胞和DCA-Na的空白组。分别在干预24 h、48 h、72 h后,采用Cell Counting Kit-8细胞活性检测试剂盒分光光度法检测MG63细胞增殖情况,测定光密度(optical density,OD),计算低、中、高DCA-Na组细胞增殖抑制率,细胞增殖抑制率=[1-(DCA-Na组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)]×100%;分别采用Caspase-3活性检测试剂盒分光光度法和Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒流式细胞法检测MG63细胞Caspase-3酶活性情况和细胞凋亡情况;并在干预48 h后采用Transwell实验检测MG63细胞迁移情况。结果:1细胞增殖检测结果。干预后,低、中、高DCA-Na组MG63细胞增殖抑制明显,且随干预时间的延长,3组细胞增殖抑制率均呈上升趋势。各时间点间MG63细胞增殖抑制率差异有统计学意义(F=847.080,P=0.000),存在时间效应;干预24 h、48 h、72 h后,低、中、高DCA-Na组MG63细胞增殖抑制率的组间差异均有统计学意义,且低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组[(10.802±3.000)%,(18.792±2.261)%,(27.080±3.133)%,F=2.795,P=0.000;(13.098±1.299)%,(25.215±2.676)%,(44.382±2.397)%,F=4.362,P=0.000;(14.728±1.177)%,(35.297±4.757)%,(64.227±4.549)%,F=5.896,P=0.000];3组间MG63细胞增殖抑制率总体比较,差异有统计学意义,存在分组效应(F=296.412,P=0.000);时间因素与分组因素之间存在交互效应(F=75.678,P=0.000)。2Caspase-3酶活性检测结果。对照组MG63细胞Caspase-3酶活性无明显变化,干预后低、中、高DCA-Na组MG63细胞Caspase-3酶活性均呈上升趋势。各时间点间MG63细胞Caspase-3酶活性的差异有统计学意义(F=1 480.792,P=0.000),存在时间效应;干预24 h、48 h、72 h后,4组间MG63细胞Caspase-3酶活性的差异均有统计学意义,且对照组低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组(0.027±0.003,0.143±0.005,0.153±0.008,0.161±0.003,F=2.320,P=0.000;0.035±0.003,0.174±0.004,0.184±0.007,0.253±0.001,F=1.014,P=0.000;0.031±0.004,0.246±0.006,0.275±0.003,0.371±0.004,F=1.000,P=0.000);4组间MG63细胞Caspase-3酶活性总体比较,差异有统计学意义,存在分组效应(F=624.975,P=0.000);时间因素与分组因素之间存在交互效应(F=94.579,P=0.000)。3流式细胞法细胞凋亡检测结果。对照组MG63细胞凋亡率无明显变化,干预后低、中、高浓度DCA-Na组MG63细胞凋亡率均呈上升趋势。各时间点间MG63细胞凋亡率的差异有统计学意义(F=359.645,P=0.000),存在时间效应;干预24 h、48 h、72 h后,各组间MG63细胞凋亡率的差异均有统计学意义,且对照组低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组[(2.554±0.427)%,(10.708±2.012)%,(20.857±2.531)%,(27.312±2.140)%,F=6.733,P=0.000;(1.748±0.202)%,(18.604±2.721)%,(29.471±1.605)%,(36.873±2.734)%,F=9.292,P=0.000;(1.944±0.112)%,(24.071±3.921)%,(30.050±3.921)%,(38.211±1.721)%,F=8.237,P=0.000];4组间MG63细胞凋亡率总体比较,差异有统计学意义,存在分组效应(F=46.627,P=0.000);时间因素与分组因素之间存在交互效应(F=7.012,P=0.000)。4细胞迁移检测结果。干预48 h后,4组迁移细胞数[显微镜每个视野下(×200)]的组间差异有统计学意义[(84.45±10.45)个,(74.56±9.45)个,(65.41±5.21)个,(40.21±4.52)个,F=148.243,P=0.000)];低、中、高DCA-Na组迁移细胞数均少于对照组(P=0.017,P=0.001,P=0.000),且低DCA-Na组中DCA-Na组高DCA-Na组(P=0.012,P=0.001,P=0.000)。结论:DCA-Na可抑制人骨肉瘤MG63细胞的增殖,增强MG63细胞Caspase-3酶活性,诱导和促进MG63细胞凋亡,抑制MG63细胞的迁移;且浓度越高、干预时间越长,其影响越明显。     

桃红四物汤对兔自体皮片移植模型Delta-like4表达的影响

目的:观察桃红四物汤对兔自体皮片移植模型Delta-like 4表达的影响。方法:将75只新西兰大白兔(10~12月龄)随机分为假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组15只。模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组动物进行自体皮片移植手术,假手术组仅在对应区域作切口,不进行皮下组织分离。造模术后假手术组和模型组动物以蒸馏水灌胃,低剂量组、中剂量组和高剂量组均以制备好的桃红四物汤汤剂灌胃(每次给药量分别为2.5 g·kg~(-1)、5 g·kg~(-1)、10 g·kg~(-1)),每天2次。分别在药物干预开始后2、5、8 d从每组随机选取5只动物,心脏采血后处死,切取移植皮片吻合区皮片组织。采用酶联免疫吸附实验测定血清Delta-like 4蛋白含量;所取皮片组织分成2份,一份制成石蜡切片,HE染色后测定血管密度,另一份采用逆转录聚合酶链式反应法测定Delta-like 4 mRNA含量。结果:1血清Delta-like 4蛋白含量。药物干预开始后2 d,5组动物血清Delta-like 4蛋白含量比较,差异无统计学意义[(30.58±3.56)ng·m L~(-1),(32.31±2.66)ng·m L~(-1),(33.53±1.75)ng·m L~(-1),(36.00±1.49)ng·m L~(-1),(35.63±1.87)ng·m L~(-1),F=2.669,P=0.062]。药物干预开始后5、8 d,5组动物血清Delta-like 4蛋白含量比较,组间差异均有统计学意义[(30.56±1.35)ng·m L~(-1),(33.52±2.50)ng·m L~(-1),(37.96±1.83)ng·m L~(-1),(48.74±2.34)ng·m L~(-1),(49.05±2.86)ng·m L~(-1),F=46.239,P=0.000;(29.26±2.20)ng·m L~(-1),(32.98±1.43)ng·m L~(-1),(35.24±1.97)ng·m L~(-1),(38.02±1.72)ng·m L~(-1),(36.06±2.50)ng·m L~(-1),F=8.394,P=0.000];模型组分别与假手术组和低剂量组比较,差异均无统计学意义(5 d:P=0.112,P=0.269;8 d:P=0.340,P=0.182);中、高剂量组血清Delta-like 4蛋白含量均高于模型组(5 d:P=0.000,P=0.000;8 d:P=0.020,P=0.006);中、高剂量组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.862,P=0.245)。药物干预后5 d,中、高剂量组血清Delta-like 4蛋白含量均高于低剂量组(P=0.000,P=0.000)。药物干预开始后8 d,中、高剂量组Delta-like4蛋白含量与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.105,P=0.623)。2移植皮片组织中Delta-like 4 mRNA含量。药物干预开始后2、5、8 d,5组动物移植皮片中Delta-like 4 mRNA含量比较,组间差异均有统计学意义(0.26±0.03,0.29±0.04,0.34±0.06,0.42±0.03,0.39±0.04,F=7.072,P=0.001;0.25±0.03,0.34±0.04,0.39±0.03,0.48±0.06,0.45±0.06,F=12.028,P=0.001;0.25±0.06,0.30±0.04,0.35±0.03,0.44±0.03,0.43±0.04,F=10.813,P=0.000);模型组分别与假手术组和低剂量组比较,差异均无统计学意义(2 d:P=0.452,P=0.162;5 d:P=0.320,P=0.158;8 d:P=0.171,P=0.219);模型组Delta-like4 mRNA含量低于中、高剂量组(2 d:P=0.000,P=0.001;5 d:P=0.001,P=0.009;8 d:P=0.001,P=0.002);中、高剂量组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.426,P=0.330,P=0.725)。药物干预开始后2 d,中、高剂量组与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.111,P=0.167);药物干预开始后5、8 d,中、高剂量组Delta-like 4 mRNA含量均高于低剂量组(5 d:P=0.024,P=0.025;8 d:P=0.013,P=0.028)。3移植皮片组织中血管密度。药物干预开始后2、5 d,5组动物移植皮片中每个视野(×400)中血管数量比较,组间差异均有统计学意义[(5.37±0.36)个,(2.55±0.41)个,(2.83±0.24)个,(3.31±0.26)个,(3.53±0.67)个,F=4.084,P=0.014;(5.62±0.56)个,(4.25±0.68)个,(4.80±0.74)个,(5.88±0.42)个,(5.92±0.48)个,F=4.600,P=0.009];模型组均低于假手术组(P=0.001,P=0.011),模型组与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.527,P=0.268);中、高剂量组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.620,P=0.939)。药物干预开始后2 d,中、高剂量组与模型组比较,差异均无统计学意义(P=0.102,P=0.131);中、高剂量组与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.297,P=0.352)。药物干预开始后5 d,中、高剂量组高于模型组(P=0.003,P=0.003);中、高剂量组与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.038,P=0.033)。药物干预开始后8 d,5组动物移植皮片中每个视野中血管数量比较,差异无统计学意义[(6.18±0.33)个,(5.86±0.66)个,(6.03±0.40)个,(6.27±0.53)个,(6.27±0.59)个,F=0.334,P=0.852]。结论:桃红四物汤能上调兔自体皮片移植模型Delta-like 4的表达,促进血管新生。但本研究未能明确桃红四物汤的剂量及作用时间与其上调Delta-like 4表达作用的关系,需要在今后的研究中进一步探讨。     

骨髓间充质干细胞移植对胶原诱导性关节炎大鼠血清细胞因子的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠血清细胞因子的影响。方法:选取清洁级雌性Wistar大鼠60只。用颈椎脱臼断颈法处死1只大鼠,取股骨和胫骨骨髓,分离、培养BMSCs。其余59只大鼠采用随机数字表分为正常对照组(20只)、模型组(20只)、细胞移植组(19只)。模型组和细胞移植组每只大鼠在尾根部、背部及左后足跖部皮下注射含牛Ⅱ型胶原的乳化液共0.5 mL,正常对照组注射等量生理盐水。于第1次注射后第14天再注射1次。于第2次注射后的第15天,各组分别随机处死2只大鼠,观察左侧踝关节组织形态,判断造模是否成功。于第2次注射的当天,细胞移植组大鼠通过尾静脉注射BMSCs悬液,正常对照组和模型组注射等量生理盐水。干预30 d后,采用关节炎指数(arthritis index,AI)评价各组大鼠关节炎严重程度;采用ELISA法检测大鼠血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)水平。结果:①模型鉴定结果。造模完成后的第15天,正常对照组大鼠踝关节结构完整,组织切片未见明显炎性细胞增殖;模型组和细胞移植组大鼠踝关节滑膜增生,组织切片可见大量增殖的炎性细胞,提示造模成功。②关节炎严重程度评价结果。干预30 d后,正常对照组、模型组和细胞移植组AI值分别为(1.15±0.32)分、(8.25±3.18)分和(5.07±1.29)分,3组间的总体差异有统计学意义(F=2.823,P=0.005)。模型组和细胞移植组AI值均高于正常对照组(P=0.017,P=0.023),细胞移植组AI值低于模型组(P=0.042)。③血清细胞因子水平检测结果。干预30 d后,3组间血清VEGF、MMP-3、TNF-α和IL-17水平总体比较,差异均有统计学意义[(10.45±3.44)pg·mL~(-1),(22.43±6.49)pg·mL~(-1),(17.22±5.20)pg·mL~(-1),F=2.059,P=0.043;(5.39±1.27)pg·mL~(-1),(12.49±3.22)pg·mL~(-1),(7.30±2.11)pg·mL~(-1),F=2.823,P=0.005;(22.34±8.50)pg·mL~(-1),(44.39±12.29)pg·mL~(-1),(35.55±9.40)pg·mL~(-1),F=1.983,P=0.048;(5.23±1.28)pg·mL~(-1),(11.26±3.07)pg·mL~(-1),(8.34±4.30)pg·mL~(-1),F=2.557,P=0.015]。模型组和细胞移植组血清VEGF、MMP-3、TNF-α和IL-17水平均高于正常对照组(模型组和正常对照组比较:P=0.022,P=0.040,P=0.033,P=0.016;细胞移植组和正常对照组比较:P=0.019,P=0.031,P=0.022,P=0.047);细胞移植组血清VEGF、MMP-3、TNF-α和IL-17水平低于模型组(P=0.044,P=0.012,P=0.033,P=0.048)。结论:BMSCs移植可减轻CIA大鼠关节炎严重程度,降低CIA大鼠血清中VEGF、MMP-3、TNF-α和IL-17水平。     

傲骨胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松相关检测指标的影响

目的:观察傲骨胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松相关检测指标的影响.方法:将50只健康10周龄雌性SD大鼠分为5组,A组9只,B组10只,C组10只,D组11只,E组10只.A组大鼠切除卵巢周围部分脂肪,其余4组切除卵巢制成骨质疏松模型.从造模后第11天开始,C组、D组、E组大鼠分别按0.3375 g· kg-1、0.675 g·kg-1、2.025 g· kg-1以傲骨胶囊灌胃,A组和B组按10 mL·kg-1以去离子水灌胃,每天1次,共13周,第13周末处死大鼠.从药物干预开始至处死前,每周测定1次各组大鼠的体质量.取各组大鼠左侧股骨,测定其股骨中点、远端和近端骨密度.取各组大鼠右侧股骨,测定其骨钙含量和骨恒重.结果:①体质量.药物干预前5组大鼠体质量比较,差异有统计学意义(F =7.230,P=0.000).组间两两比较:A组大鼠体质量[(241.40±19.10)g]小于B组[(281.90±21.00)g]、C组[(280.70±22.60)g]、D组[(282.20±20.90)g]和E组[(281.70±23.40)g],差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000).药物干预13周后5组大鼠体质量均有增加(t=4.180,P=0.000;t=15.390,P=0.000;t 12.140,P=0.000;t 15.590,P=0.000;t=11.630,P=0.000),对增加值进行组间比较,差异有统计学意义(F=7.364,P=0.000).进一步组间两两比较:A组增加值[(100.20±39.25)g]小于B组[(178.10±36.78) g]和D组[(143.10±29.18)g],差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.008);B组增加值大于C组[(116.20±30.43)g]、D组和E组[(130.30±35.63)g],差异均有统计学意义(P =0.000,P=0.028,P=0.003).其余各组间两两比较,差异无统计学意义(P＞0.05).②骨密度.5组大鼠股骨远端、股骨中心点及股骨近端骨密度组间比较,差异均有统计学意义(F=15.549,P=0.000;F =4.688,P=0.005;F=4.343,P=0.005).B组股骨远端、股骨中心点及股骨近端骨密度[(0.21±0.02)g· cm-2,(0.13±0.02) g· cm-2,(0.18±0.03) g·cm-2]均低于A组[(0.27±0.02)g·cm-2,(0.16±0.01)g·cm-2,(0.22±0.02) g·cm-2]、D组[(0.26±0.02)g·cm-2,(0.16±0.03)g·cm-2,(0.20±0.02)g·cm-2]、E组[(0.26±0.03)g· cm-2,(0.18±0.01) g· cm-2,(0.21±0.01) g·cm-2],差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.001,P=0.000;P=0.000,P=0.001,P=0.039;P =0.000,P=0.000,P=0.003);C组股骨远端和股骨近端骨密度[(0.22±0.01)g·cm-2,(0.18±0.02)g· cm-2]低于D组,差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.039);C组股骨远端、股骨中心点[(0.15±0.02)g·cm-2]及股骨近端骨密度均低于E组(P =0.000,P=0.001,P =0.003);D组股骨中心点骨密度低于E组(P=0.027);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).③骨钙含量.5组大鼠骨钙含量比较,差异有统计学意义(F=5.929,P=0.001).A组骨钙含量[(254.12±19.11) mg·g-1]大于B组[(203.23±30.58) mg·g 1]和C组[(226.35±26.71) mg· g-1],差异均有统计学意义(P=0.000,P=0.027);B组骨钙含量小于D组[(245.80±16.43) mg·g-1]和E组[(239.40±37.30) mg·g-1],差异均有统计学意义(P=0.001,P=0.005);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).④骨恒重.5组大鼠骨恒重比较,差异有统计学意义(F=5.147,P=0.001).E组大鼠骨恒重[(664.51±44.75) mg]大于A组[(603.77±70.05) mg]、B组[(603.38±36.57) mg]和C组[(611.93±53.03) mg],差异均有统计学意义(P=0.013,P=0.012,P=0.030);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞ 0.05).结论:中、高剂量的傲骨胶囊能促进去卵巢大鼠对钙的吸收和利用,增加骨密度,具有明显的抗骨质疏松作用.同时傲骨胶囊还有抑制由雌激素水平降低所引起的体质量增加的作用.     

电针秩边穴与水道穴对大鼠急性脊髓损伤后运动和排尿功能的影响

目的:观察电针秩边穴与水道穴对大鼠急性脊髓损伤后运动和排尿功能的影响。方法:将48只SD大鼠随机分为电针组和对照组,每组24只。采用改良Allen’s重物打击法将所有大鼠制成急性脊髓损伤模型。造模后24 h,电针组大鼠在秩边穴和水道穴进行电针治疗,对照组大鼠在秩边穴和水道穴旁开0.5 cm处进行电针治疗。每天治疗1次,每次15 min。分别于实验干预1 d、3 d、7 d和14 d后采用BBB评分法评定2组大鼠的运动功能,同时于每次运动功能测试完成后,测定大鼠的膀胱容量和剩余尿量。结果:1运动功能。干预后不同时间BBB评分的差异有统计学意义,即存在时间效应[(0.50±0.53)分,(2.90±1.10)分,(7.50±1.27)分,(11.50±0.71)分;(0.60±0.52)分,(2.70±0.95)分,(4.60±0.70)分,(8.60±0.97)分;F=625.000,P=0.000]。2组大鼠BBB评分的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应(F=29.866,P=0.000);干预1 d、3 d后,2组大鼠的BBB评分比较,差异均无统计学意义(t=0.429,P=0.678;t=0.435,P=0.674);干预7 d、14 d后,电针组大鼠的BBB评分均大于对照组(t=6.328,P=0.000;t=9.222,P=0.000)。时间因素和分组因素之间存在交互效应(F=24.939,P=0.000)。2排尿功能。干预后不同时间膀胱容量的差异有统计学意义,即存在时间效应[(1.10±0.05)m L,(1.37±0.05)m L,(1.89±0.09)m L,(2.31±0.19)m L;(1.10±0.06)m L,(1.36±0.05)m L,(1.67±0.08)m L,(1.88±0.08)m L;F=193.885,P=0.000]。2组大鼠膀胱容量的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应(F=65.970,P=0.000);干预1 d、3 d后,2组大鼠的膀胱容量比较,差异均无统计学意义(t=0.177,P=0.868;t=0.366,P=0.733);干预7 d、14 d后,电针组大鼠的膀胱容量均大于对照组(t=4.186,P=0.014;t=4.647,P=0.009)。时间因素和分组因素之间存在交互效应(F=10.283,P=0.000)。干预后不同时间剩余尿量的差异有统计学意义,即存在时间效应[(2.00±0.20)m L,(1.88±0.15)m L,(1.49±0.07)m L,(0.98±0.11)m L;(1.99±0.19)m L,(1.89±0.17)m L,(1.73±0.12)m L,(1.29±0.07)m L;F=131.825,P=0.000]。2组大鼠剩余尿量的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应(F=3.787,P=0.038);干预1 d、3 d后,2组大鼠的剩余尿量比较,差异均无统计学意义(t=0.016,P=0.988;t=0.039,P=0.971);干预7 d、14 d后,电针组大鼠的剩余尿量均小于对照组(t=3.791,P=0.019;t=5.334,P=0.006)。时间因素和分组因素之间存在交互效应(F=5.646,P=0.028)。结论:电针秩边穴与水道穴能改善大鼠急性脊髓损伤后的运动和排尿功能。     

二至丸抑制绝经后骨质疏松大鼠骨代谢紊乱的作用机制研究

目的:探讨二至丸抑制绝经后骨质疏松大鼠骨代谢紊乱的作用机制。方法:2月龄雌性清洁级SD大鼠60只,采用随机数字表随机分为假手术组15只与手术组45只。假手术组在双侧卵巢周围切除少许脂肪组织,手术组摘除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症大鼠模型。造模后2周,再将手术组大鼠随机分为模型组、二至丸组与雌二醇组,每组15只。二至丸组和雌二醇组大鼠,分别用二至丸混悬液和戊酸雌二醇片混悬液灌胃;假手术组和模型组大鼠,用生理盐水灌胃;每日1次,连续灌胃12周。药物干预结束后,采用ELISA法检测大鼠血清中骨代谢标记物骨特异性碱性磷酸酶(bone alkaline phosphotase,BALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(tartrate-resistant acid phosphatase-5b,TRACP-5b)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、组织蛋白酶K(cathepsin K,Cath-K)含量;并每组随机取3只大鼠的L_5椎体,以4%多聚甲醛固定,行骨密度(bone mineral density,BMD)及组织学检测;每组其余12只大鼠L_5腰椎以液氮保存,行骨代谢标记物mRNA表达的检测。并对各组检测结果进行比较。结果:(1)BMD检测结果。药物干预12周后,4组间腰椎BMD检测结果比较,差异有统计学意义[(0.16±0.02)g·cm~(-2),(0.10±0.03)g·cm~(-2),(0.13±0.02)g·cm~(-2),(0.14±0.02)g·cm~(-2);F=5.800,P=0.005];假手术组、二至丸组与雌二醇组高于模型组(P=0.001,P=0.024,P=0.010);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.123,P=0.236);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.701)。(2)组织学检测结果。药物干预12周后,假手术组腰椎骨小梁致密,分布均匀,排列规则,表面光滑,交织成网状,骨小梁间隙均匀。模型组腰椎骨小梁变细、分布稀疏、散乱、不连续,表面粗糙,完整性差,出现碎片、断裂等。二至丸组与雌二醇组腰椎骨小梁变细,数量减少,分布稀疏,排列较规则。4组间骨小梁面积百分比比较,差异有统计学意义[(23.25±5.32)%,(11.82±3.87)%,(17.10±3.83)%,(18.08±2.59)%;F=8.144,P=0.001];模型组、二至丸组与雌二醇组低于假手术组(P=0.000,P=0.015,P=0.038);二至丸组与雌二醇组高于模型组(P=0.034,P=0.014);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.677)。(3)骨代谢标记物血清含量检测结果。药物干预12周后,4组间血清BALP含量比较,差异有统计学意义[(58.14±9.04)单位·L~(-1),(40.91±6.47)单位·L~(-1),(51.13±7.88)单位·L~(-1),(52.23±7.41)单位·L~(-1);F=5.239,P=0.008];假手术组、二至丸组与雌二醇组高于模型组(P=0.001,P=0.034,P=0.012);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.133,P=0.286);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.645)。4组间血清TRACP-5b含量比较,差异有统计学意义[(0.71±0.13)pg·mL~(-1),(0.98±0.22)pg·mL~(-1),(0.79±0.09)pg·mL~(-1),(0.77±0.07)pg·mL~(-1);F=3.874,P=0.025];假手术组、二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.004,P=0.038,P=0.022);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.320,P=0.459);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.795)。4组间血清MMP-9含量比较,差异有统计学意义[(1.63±0.23)pg·mL~(-1),(2.01±0.35)pg·mL~(-1),(1.64±0.25)pg·mL~(-1),(1.58±0.18)pg·mL~(-1);F=3.507,P=0.034];假手术组、二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.021,P=0.023,P=0.009);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.972,P=0.699);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.673)。4组间血清Cath-K含量比较,差异有统计学意义[(2.55±0.40)pg·mL~(-1),(4.06±0.87)pg·mL~(-1),(3.07±0.77)pg·mL~(-1),(2.73±0.69)pg·mL~(-1);F=5.539,P=0.006];假手术组、二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.001,P=0.024,P=0.004);假手术组与二至丸组、雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.217,P=0.671);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.408)。(4)骨代谢标记物mRNA表达检测结果。药物干预12周后,4组间BALPmRNA表达比较,差异有统计学意义[(1.01±0.04),(0.62±0.10),(0.78±0.13),(0.83±0.13);F=14.482,P=0.000];模型组、二至丸组与雌二醇组低于假手术组(P=0.000,P=0.001,P=0.007);二至丸组与雌二醇组高于模型组(P=0.015,P=0.002),二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.385)。4组间TRACP-5bmRNA表达比较,差异有统计学意义[(0.98±0.04),(2.05±0.41),(1.67±0.26),(1.50±0.21);F=16.574,P=0.000];模型组、二至丸组与雌二醇组高于假手术组(P=0.000,P=0.000,P=0.003);二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.024,P=0.002);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.282)。4组间MMP-9mRNA表达比较,差异有统计学意义[(1.00±0.06),(1.86±0.17),(1.51±0.32),(1.45±0.35);F=11.684,P=0.000];模型组、二至丸组与雌二醇组高于假手术组(P=0.000,P=0.002,P=0.007);二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.028,P=0.010);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.643)。4组间Cath-KmRNA表达比较,差异有统计学意义[(0.99±0.03),(2.52±0.57),(1.85±0.27),(1.74±0.54);F=13.543,P=0.000];模型组、二至丸组与雌二醇组高于假手术组(P=0.000,P=0.002,P=0.005);二至丸组与雌二醇组低于模型组(P=0.011,P=0.004);二至丸组与雌二醇组比较,差异无统计学意义(P=0.663)。结论:对于绝经后骨质疏松模型大鼠,二至丸和戊酸雌二醇片均可增加其骨密度和骨小梁数量;作用机制可能是通过促进BALP表达、抑制TRACP-5b、MMP-9与Cath-K表达,从而抑制骨代谢紊乱;两种药物的作用相当。     

氨甲环酸对全膝关节置换术中应用止血带造成的缺血再灌注损伤的影响

目的:探讨氨甲环酸对全膝关节置换(total knee arthroplasty,TKA)术中应用止血带造成的缺血再灌注损伤的影响。方法:膝骨关节炎患者60例,男19例、女41例;年龄61～79岁,中位数68岁;病程3～20年,中位数8年。随机分为氨甲环酸组和生理盐水组,每组30例。均行初次单侧全膝关节置换术,手术全程上充气止血带,放置负压引流管。分别于术中安装假体后和术后3 h,氨甲环酸组给予氨甲环酸1 g加入100 mL生理盐水中静脉滴注,生理盐水组给予生理盐水100 mL静脉滴注。术中缝合关节囊后,氨甲环酸组给予氨甲环酸1 g加入100 mL生理盐水中关节腔局部灌注,生理盐水组给予生理盐水100 mL关节腔局部灌注。术后负压引流管夹闭3 h后间断开放,术后24 h拔除引流管。记录2组患者手术时间、术中出血量及术后24 h负压引流量。分别于术前、术后24 h、术后72 h时肘静脉采血5 mL,术后24 h拔除引流管时取引流液10 mL。采用酶联免疫法检测外周血血清中和关节腔引流液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。结果:①一般结果。2组患者均顺利完成手术,手术时间、术中出血量的组间差异均无统计学意义[(73.4±6.5)min,(70.2±8.2)min,t=1.636,P=0.326;(65±11)mL,(62±15)mL,t=0.824,P=0.428],氨甲环酸组术后24 h引流量少于生理盐水组[(217±35)mL,(467±52)mL,t=21.710,P=0.000]。②2组患者手术前后外周血血清中IL-6含量检测结果。时间因素和分组因素存在交互效应(F=12.312,P=0.000);2组患者外周血血清中IL-6含量的组间总体比较,差异有统计学意义,即存在分组效应(F=3.214,P=0.001);不同时间点间外周血血清中IL-6含量总体比较,差异有统计学意义,即存在时间效应(F=16.531,P=0.000);2组患者手术前后外周血血清中IL-6含量均呈先增高后降低的趋势,但2组的趋势不完全一致[氨甲环酸组:(6.23±1.65)pg·mL~(-1),(28.13±4.21)pg·mL~(-1),(22.09±2.75)pg·mL~(-1);生理盐水组:(6.41±2.02)pg·mL~(-1),(37.54±5.31)pg·mL~(-1),(32.52±3.01)pg·mL~(-1)];术前2组患者外周血血清中IL-6含量的组间差异无统计学意义(t=1.567,P=0.268);术后24 h和术后72 h时,氨甲环酸组患者外周血血清中IL-6含量均低于生理盐水组(t=3.553,P=0.001;t=4.537,P=0.000)。③2组患者手术前后外周血血清中TNF-α含量检测结果。时间因素和分组因素存在交互效应(F=17.312,P=0.000);2组患者外周血血清中TNF-α含量的组间总体比较,差异有统计学意义,即存在分组效应(F=4.318,P=0.000);不同时间点间外周血血清中TNF-α含量总体比较,差异有统计学意义,即存在时间效应(F=15.231,P=0.000);2组患者手术前后外周血血清中TNF-α含量均呈先增高后降低的趋势,但2组的趋势不完全一致[氨甲环酸组:(20.51±3.61)pg·mL~(-1),(35.33±4.35)pg·mL~(-1),(31.32±2.98)pg·mL~(-1);生理盐水组:(19.82±2.96)pg·mL~(-1),(42.85±3.87)pg·mL~(-1),(37.76±3.62)pg·mL~(-1)];术前2组患者外周血血清中TNF-α含量的组间差异无统计学意义(t=1.312,P=0.316);术后24 h和术后72 h时,氨甲环酸组患者外周血血清中TNF-α含量均低于生理盐水组(t=5.124,P=0.000;t=3.317,P=0.001)。④2组患者术后关节腔引流液中IL-6、TNF-α含量检测结果。氨甲环酸组术后关节腔引流液中IL-6、TNF-α含量均低于生理盐水组[(30.23±3.42)pg·mL~(-1),(38.78±4.15)pg·mL~(-1),t=2.637,P=0.018;(31.65±4.27)pg·mL~(-1),(41.24±4.83)pg·mL~(-1),t=3.281,P=0.001]。结论:在TKA术中静脉滴注结合关节腔灌注氨甲环酸,有利于减轻应用止血带造成的缺血再灌注损伤。     

口服蠲痹汤和盐酸氨基葡萄糖胶囊治疗膝骨关节炎的疗效观察及作用机制研究

目的:观察口服蠲痹汤和盐酸氨基葡萄糖胶囊治疗膝骨关节炎的临床疗效并探讨其作用机制。方法:将80例膝骨关节炎患者随机分为2组,每组40例,分别采用口服蠲痹汤和盐酸氨基葡萄糖胶囊、单纯口服盐酸氨基葡萄糖胶囊治疗。蠲痹汤口服每日1剂,水煎400 m L,早晚各200 m L,连续服用8周;盐酸氨基葡萄糖胶囊口服每次2粒,每日3次,连续服用8周。分别于治疗前、治疗开始后8周测量并比较2组患者膝关节疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分、日本骨科协会(Japanese orthopaedic association,JOA)膝关节功能评分以及Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的血清含量。结果:1膝关节疼痛VAS评分和JOA膝关节功能评分。治疗前2组患者膝关节疼痛VAS评分及JOA膝关节功能评分比较,组间差异均无统计学意义[(8.01±1.16)分,(8.05±1.12)分,t=0.157,P=0.876;(70.02±9.86)分,(68.32±10.28)分,t=0.755,P=0.453]。治疗开始后8周,口服蠲痹汤和盐酸氨基葡萄糖胶囊组膝关节疼痛VAS评分低于单纯口服盐酸氨基葡萄糖胶囊组[(2.33±0.68)分,(5.86±0.97)分,t=18.850,P=0.000],JOA膝关节功能评分高于单纯口服盐酸氨基葡萄糖胶囊组[(86.24±5.32)分,(79.46±7.54)分,t=4.647,P=0.000];2组患者膝关节疼痛VAS评分均低于治疗前(t=26.720,P=0.000;t=9.348,P=0.000),JOA膝关节功能评分均高于治疗前(t=9.156,P=0.000;t=5.526,P=0.000)。2TLR4、TNF-α血清含量。治疗前2组患者TLR4、TNF-α血清含量比较,组间差异均无统计学意义[(17.90±6.80)ng·mL~(-1),(18.40±6.50)ng·mL~(-1),t=0.336,P=0.738;(188.70±38.90)pg·mL~(-1),(192.40±46.50)pg·mL~(-1),t=0.386,P=0.701]。治疗开始后8周,口服蠲痹汤和盐酸氨基葡萄糖胶囊组TLR4、TNF-α血清含量均低于单纯口服盐酸氨基葡萄糖胶囊组[(11.40±3.60)ng·mL~(-1),(15.10±4.30)ng·mL~(-1),t=4.173,P=0.000;(122.40±39.20)pg·mL~(-1),(158.20±37.37)pg·mL~(-1),t=4.181,P=0.000],2组患者TLR4、TNF-α血清含量均低于治疗前(t=5.343,P=0.000;t=2.678,P=0.000;t=7.593,P=0.000;t=3.636,P=0.000)。结论:口服蠲痹汤和盐酸氨基葡萄糖胶囊治疗膝骨关节炎,能够缓解或消除膝关节疼痛,改善膝关节功能,其疗效优于单纯口服盐酸氨基葡萄糖胶囊;其作用机制可能是通过抑制TLR4的表达,使TNF-α的表达受到抑制,从而减轻了炎症反应。     

信号传导及转录激活因子1诱导骨细胞凋亡在激素性股骨头坏死过程中的作用

目的:探讨信号传导及转录激活因子1诱导细胞凋亡在激素性股骨头坏死过程中的作用。方法:选择30例激素性股骨头坏死组织标本,FicatⅠ期和Ⅱ期患者10例(A组)、FicatⅢ期患者10例(B组)、FicatⅣ期和Ⅴ期患者10例(C组),同时选择10例接受股骨颈骨折内固定手术的正常股骨头组织标本(D组)。对所有标本在光镜下观察测定空骨陷窝率,采用TUNEL凋亡检测法测定细胞凋亡率,分别采用免疫组化法和ELISA法对磷酸化信号传导及转录激活因子1的表达进行定性和定量检测,同时分别对细胞凋亡率与空骨陷窝率和磷酸化信号传导及转录激活因子1表达量进行相关性分析。结果:4组患者股骨头空骨陷窝率比较,差异有统计学意义[(29.10±6.14)%,(54.10±7.33)%,(75.25±7.80)%,(7.20±1.32)%,F=227.614,P=0.000];A组空骨陷窝率高于D组(P=0.000),B组高于A组(P=0.000),C组高于B组(P=0.000)。4组患者股骨头细胞凋亡率比较,差异有统计学意义[(5.70±3.27)%,(36.90±9.53)%,(70.30±13.63)%,(2.80±2.57)%,F=136.004,P=0.000]。A组和D组比较,差异无统计学意义(P=0.209);B组高于A组(P=0.000),C组高于B组(P=0.000)。4组患者股骨头磷酸化信号传导及转录激活因子1定性检测结果比较,差异有统计学意义[(3.15±0.82),(5.97±1.01),(8.56±0.94),(1.00±0.56),F=150.005,P=0.000]。A组高于D组(P=0.000),B组高于A组(P=0.000),C组高于B组(P=0.000)。4组患者股骨头磷酸化信号传导及转录激活因子1定量检测结果比较,差异有统计学意义[(1.86±0.43),(5.04±2.24),(11.14±2.49),(1.00±0.28),F=73.466,P=0.000]。A组高于D组(P=0.000),B组高于A组(P=0.000),C组高于B组(P=0.000)。空骨陷窝率和细胞凋亡率呈正相关(rs=0.882,P=0.000),细胞凋亡率和磷酸化信号传导及转录激活因子1表达量呈正相关(rs=0.860,P=0.000)。结论:骨细胞凋亡是激素性股骨头坏死的重要过程,并且信号传导及转录激活因子1可能在其中发挥了重要作用。     

不放置引流管对中重度膝骨关节炎初次全膝关节置换术后快速康复的影响

目的:观察不放置引流管对中重度膝骨关节炎初次全膝关节置换术后快速康复的影响。方法:采用随机数字表将符合要求的70例中重度膝骨关节炎患者随机分为引流管组和非引流管组,每组35例。2组患者均行全膝关节置换术且在安装骨水泥假体时使用止血带,引流管组在切口闭合前放置负压引流管并持续留置48 h,非引流管组正常闭合切口而不放置负压引流管。记录并比较2组患者的手术时间、住院时间、理论失血总量、输血情况、膝关节主动屈曲90°所需时间、血红蛋白下降值、膝关节疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分、膝关节周径增加率、膝关节屈曲度、美国膝关节协会评分(knee society score,KSS)及并发症发生情况。结果:①一般指标。2组患者手术时间、住院时间及理论失血总量比较,组间差异均无统计学意义[(87.11±7.16)min,(85.42±5.49)min,t=1.105,P=0.273;(7.74±2.20)d,(7.17±1.84)d,t=1.179,P=0.243;(1 268.00±299.86)mL,(1 170.00±182.62)mL,t=1.639,P=0.106];引流管组11例输血、非引流管组8例输血,2组患者输血率比较,差异无统计学意义(χ~2=0.650,P=0.420);引流管组膝关节主动屈曲90°所需时间长于非引流管组[(5.63±1.06)d,(4.91±1.15)d,t=2.206,P=0.009]。②血红蛋白下降值。时间因素与分组因素不存在交互效应(F=1.005,P=0.342);2组患者血红蛋白下降值总体比较,组间差异无统计学意义,即不存在分组效应(F=1.598,P=0.211);手术前后不同时间点之间血红蛋白下降值的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=16 255.255,P=0.000);2组患者血红蛋白下降值均呈先上升后平稳再下降趋势,且2组的变化趋势完全一致[(31.26±2.84)g·L~(-1),(44.80±3.61)g·L~(-1),(44.09±3.97)g·L~(-1),(9.77±2.07)g·L~(-1),F=10 065.255,P=0.000;(30.00±3.09)g·L~(-1),(43.86±3.93)g·L~(-1),(43.14±3.85)g·L~(-1),(9.14±1.94)g·L~(-1),F=6 776.683,P=0.000]。③膝关节疼痛VAS评分。时间因素与分组因素不存在交互效应(F=0.046,P=0.984);2组患者膝关节疼痛VAS评分总体比较,组间差异无统计学意义,即不存在分组效应(F=0.596,P=0.443);手术前后不同时间点之间膝关节疼痛VAS评分的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=97.350,P=0.000);2组患者膝关节疼痛VAS评分均呈降低趋势,且2组的降低趋势完全一致[(3.71±0.80)分,(3.44±0.87)分,(2.53±0.85)分,(1.74±0.76)分,F=65.184,P=0.000;(3.58±0.74)分,(3.29±0.99)分,(2.45±1.10)分,(1.67±0.79)分,F=38.258,P=0.000]。④膝关节周径增加率。时间因素与分组因素不存在交互效应(F=1.321,P=0.269);2组患者膝关节周径增加率总体比较,组间差异有统计学意义,即存在分组效应(F=19.211,P=0.000);手术前后不同时间点之间膝关节周径增加率的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=85.058,P=0.000);2组患者膝关节周径增加率随时间均呈先上升后降低趋势,但2组的变化趋势不完全一致[(4.97±0.86)%,(5.84±0.83)%,(5.11±0.77)%,(3.96±0.77)%,F=34.279,P=0.000;(5.72±0.93)%,(6.51±0.98)%,(5.67±0.89)%,(4.22±0.84)%,F=52.107,P=0.000];术后1 d、3 d和6 d,引流管组膝关节周径增加率均小于非引流管组(t=-3.522,P=0.001;t=-3.053,P=0.003;t=-2.808,P=0.007);术后1个月,2组患者膝关节周径增加率比较,差异无统计学意义(t=-1.370,P=0.175)。⑤膝关节屈曲度。时间因素与分组因素存在交互效应(F=3.402,P=0.011);2组患者膝关节屈曲度总体比较,组间差异有统计学意义,即存在分组效应(F=6.676,P=0.012);手术前后不同时间点之间膝关节屈曲度的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=1 196.369,P=0.000);2组患者膝关节屈曲度随时间均呈先下降后上升趋势,且2组的变化趋势不完全一致(87.80°±4.92°,44.09°±5.52°,67.09°±4.18°,81.51°±6.24°,103.34°±6.18°,F=636.930,P=0.000;86.34°±5.32°,49.02°±5.56°,69.29°±5.07°,83.03°±5.37°,104.46°±5.17°,F=561.441,P=0.000);术后1 d、6 d、1个月和1年,2组患者膝关节屈曲度比较,差异均无统计学意义(t=1.190,P=0.238;t=-1.981,P=0.052;t=-1.089,P=0.280;t=-0.818,P=0.416);术后3 d,引流管组膝关节屈曲度小于非引流管组(t=-3.734,P=0.000)。⑥KSS评分。术前和术后1年,2组患者KSS评分比较,差异均无统计学意义[(67.00±4.32)分,(66.23±4.77)分,t=0.710,P=0.480;(159.85±5.93)分,(160.57±6.81)分,t=-0.468,P=0.641];术后1年,2组患者KSS评分均较术前增加(t=-85.886,P=0.000;t=-81.456,P=0.000)。⑦安全性。引流管组2例发生无症状性肌间静脉血栓,1例发生切口相关并发症;非引流管组3例发生无症状性肌间静脉血栓,3例发生切口相关并发症。切口相关并发症经对症处理后,切口均完全愈合;无症状性肌间静脉血栓给予常规抗凝处理后,血栓消失。2组患者均无手术相关感染、肺栓塞等并发症发生。2组患者并发症发生率比较,差异无统计学意义(χ~2=0. 510,P=0. 475)。结论:在中重度膝骨关节炎初次全膝关节置换术后不放置引流管,能早期改善膝关节活动度,并发症少,虽然对早期预防血肿形成不利,但对膝关节疼痛缓解和膝关节功能恢复无明显影响,有利于术后快速康复的实施。     

电针夹脊穴和督脉穴对急性脊髓损伤家兔后肢神经功能的影响及其作用机制

目的:观察电针夹脊穴和督脉穴对急性脊髓损伤家兔后肢神经功能的影响,并探讨其作用机制。方法:采用随机数字表将60只新西兰家兔随机分为假手术组、模型组、电针组,每组20只。假手术组咬除T_(13)~L_1棘突及全部椎板,暴露0.5 cm宽硬膜,不损伤脊髓;模型组和电针组采用改良Allens法建立急性脊髓损伤家兔模型,并行脊髓MRI扫描鉴定模型。模型组和假手术组不给予治疗,电针组给予电针刺激受损脊髓节段上下两对夹脊穴及上下督脉穴(筋缩、命门)治疗,每次30 min,每日1次,共7次。电针干预开始后1 d、3 d、7 d采用改良Tarlov评分法评价家兔后肢神经功能。干预结束后每组取10只家兔,以4%多聚甲醛行心脏灌注后剖取损伤脊髓约1 cm,制成切片后经HE染色于显微镜下观察脊髓组织形态,并采用免疫组织化学法观察脊髓细胞增殖情况和巢蛋白(Nestin)表达水平。将每组剩余的10只家兔麻醉,分离坐骨神经并注入5μL的30%辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),24 h后取脊髓横断面背侧靠近损伤处脊髓,采用HRP逆行示踪法标记红核神经元细胞数。结果:①模型鉴定结果。MRI片上假手术组脊髓横断面信号正常,可见清晰的脑脊液通过。模型组和电针组脊髓横断面信号增强,脑脊液受压;受伤节段的脊髓在矢状位MRI片T2WI上呈明显的高信号,T1WI上呈低信号;提示脊髓断端周围充血、水肿,证明造模成功。②后肢神经功能评分。电针干预后不同时间点Tarlov评分比较,差异有统计学意义,即存在时间效应(F=6.920,P=0.001);除假手术组外,干预后模型组和电针组Tarlov评分均逐渐升高。3组Tarlov评分总体上比较,组间差异有统计学意义,即存在分组效应(F=426.78,P=0.000)。干预开始后1 d,电针组Tarlov评分高于模型组[(0.30±0.47)分,(0.20±0.41)分,q=7.010,P=0.486],低于假手术组[(0.30±0.47)分,(4.70±0.47)分,q=30.843,P=0.000)];模型组低于假手术组(q=31.544,P=0.000)。干预开始后3 d,电针组Tarlov评分高于模型组[(1.55±0.60)分,(1.05±0.53)分,q=2.877,P=0.006],低于假手术组[(1.55±0.60)分,(4.80±0.41)分,q=20.775,P=0.000];模型组低于假手术组(q=23.651,P=0.000)。干预开始后7 d,电针组Tarlov评分高于模型组[(2.65±0.59)分,(1.40±0.50)分,q=8.004,P=0.000],低于假手术组[(2.65±0.59)分,(4.85±0.41)分,q=14.081,P=0.000];模型组低于假手术组(q=22.093,P=0.000)。时间因素和分组因素之间存在交互效应(F=70.786,P=0.000)。③脊髓组织形态。假手术组脊髓形态结构完整,神经元结构正常、分布均匀,细胞膜、细胞核及组织间隙均正常,尼氏体显示清晰;模型组脊髓组织正常结构丧失,可见组织充血、水肿,神经元细胞数量减少,部分尼氏体消失,灰质中部分区域甚至有较大的空腔;电针组与模型组相比,脊髓形态结构基本完整,神经元细胞结构基本正常,空泡变性减少,组织充血、水肿消失。④脊髓细胞增殖情况。电针干预开始后7 d,200倍显微镜下观察,每个视野下3组家兔脊髓增殖细胞数比较,组间差异有统计学意义[(43.67±8.19)个,(18.77±3.55)个,(6.30±2.32)个,F=382.413,P=0.000];电针组脊髓增殖细胞多于模型组(q=20.889,P=0.000)和假手术组(q=31.348,P=0.000),模型组多于假手术组(q=10.459,P=0.000)。⑤脊髓细胞Nestin表达水平。干预开始后7 d,200倍显微镜下观察,每个视野下3组家兔脊髓细胞Nestin阳性表达细胞数比较,组间差异有统计学意义[(23.37±5.10)个,(10.77±3.26)个,(4.43±1.33)个,F=218.084,P=0.000];电针组Nestin阳性表达细胞数多于模型组(q=15.770,P=0.000)和假手术组(q=23.696,P=0.000),模型组多于假手术组(q=7.926,P=0.000)。⑥红核神经元细胞数。干预开始后7 d,200倍显微镜下观察,每个视野下3组红核神经元细胞数比较,组间差异有统计学意义(513.40±46.79,417.90±43.03,578.40±43.91,F=32.760,P=0.000);电针组红核神经元细胞数多于模型组(q=6.771,P=0.000)、少于假手术组(q=4.608,P=0.000),模型组少于假手术组(q=11.379,P=0.000)。结论:电针刺激夹脊穴和督脉穴能明显改善急性脊髓损伤家兔的后肢神经功能,其作用机制可能是通过促进神经干细胞增殖分化和抑制红核神经元细胞凋亡,从而使损伤节段神经组织修复及神经通路再通。     

桃红四物汤对大鼠血管吻合模型吻合区Delta-like4表达及血管新生的影响

目的:观察桃红四物汤对大鼠血管吻合模型吻合区Delta-like4表达及血管新生的影响。方法:将40只3月龄SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、生理盐水组、桃红四物汤组,每组10只。桃红四物汤组、生理盐水组行尾部动脉血管离断后吻合术;假手术组仅在相应区域作切口,不进行血管离断吻合;空白对照组不做任何处理。造模术后桃红四物汤组以20 mL·kg~(-1)剂量的桃红四物汤灌胃,生理盐水组给予等量生理盐水灌胃,每日灌胃2次;假手术组和空白对照组不给予任何药物干预。分别在药物干预开始后2 d、5 d从各组随机抽取5只大鼠,采用颈椎脱臼法处死后,桃红四物汤组和生理盐水组切取尾部的吻合处血管,假手术组和空白对照组切取尾部相应部位动脉血管。将所取血管组织制成石蜡切片,分成2份,1份采用免疫组化法检测血管吻合区Delta-like4的蛋白表达(光镜下灰度值与Delta-like4的蛋白表达量呈反比);1份经HE染色后测量吻合区血管内膜面积。结果:(1)血管吻合区Delta-like4的蛋白表达。药物干预开始后2 d,4组大鼠血管吻合区Delta-like4蛋白表达的灰度值比较,差异无统计学意义(126.27±20.56,111.73±7.99,119.30±16.71,124.53±7.35,F=0.624,P=0.062)。药物干预开始后5 d,4组大鼠血管吻合区Delta-like4蛋白表达的灰度值比较,差异有统计学意义(85.60±5.58,99.07±3.84,103.13±11.61,111.60±4.49,F=7.041,P=0.012);进一步两两比较,桃红四物汤组血管吻合区Delta-like4蛋白表达的灰度值低于生理盐水组(LSD-t=-2.334,P=0.048)、假手术组(LSD-t=-3.035,P=0.016)、空白对照组(LSD-t=-4.450,P=0.002);生理盐水组血管吻合区Delta-like4蛋白表达的灰度值与假手术组、空白对照组比较,差异均无统计学意义(LSD-t=-0.703,P=0.502;LSD-t=-2.166,P=0.062);假手术组血管吻合区Delta-like4蛋白表达的灰度值与空白对照组比较,差异无统计学意义(LSD-t=-1.464,P=0.181)。(2)吻合区血管内膜面积。药物干预开始后2 d,4组大鼠吻合区血管内膜面积比较,差异无统计学意义[(0.20±0.01)mm~2,(0.18±0.02)mm~2,(0.16±0.01)mm~2,(0.17±0.02)mm~2,F=2.625,P=0.122)。药物干预开始后5 d,4组大鼠吻合区血管内膜面积比较,差异有统计学意义[(0.30±0.02)mm2,(0.20±0.01)mm~2,(0.21±0.01)mm~2,(0.21±0.01)mm~2,F=17.063,P=0.000];进一步两两比较,桃红四物汤组吻合区血管内膜面积大于生理盐水组(LSD-t=-46.275,P=0.020)、假手术组(LSD-t=-68.142,P=0.000)、空白对照组(LSD-t=-66.154,P=0.000);生理盐水组吻合区血管内膜面积与假手术组、空白对照组比较,差异均无统计学意义(LSD-t=-2.187,P=0.060;LSD-t=-1.988,P=0.082);假手术组吻合区血管内膜面积与空白对照组比较,差异无统计学意义(LSD-t=0.199,P=0.847)。结论:桃红四物汤能上调血管吻合大鼠模型吻合区Delta-like4的表达,促进血管新生。     

人工关节假体磨损颗粒对巨噬细胞游走抑制因子表达的影响

目的:观察人工关节假体磨损颗粒对巨噬细胞游走抑制因子表达的影响.方法:配制钛颗粒悬液,并培养小鼠巨噬细胞.将培养的第3代小鼠巨噬细胞分别进行以下实验:①将细胞分为4组,A组不作任何处理,B组加入浓度为0.01％的钛颗粒;C组加入浓度为0.05％的钛颗粒,D组加入浓度为0.1％的钛颗粒培养24 h后分别用酶联免疫吸附剂测定法和聚合酶链式反应法检测各组的巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA的含量.②将细胞分2组,对照组不作任何处理,观察组加入浓度为0.1％的钛颗粒.分别在实验开始后0h、6h、12h、24 h和36 h对2组的不同培养孔的细胞用酶联免疫吸附剂测定法和聚合酶链式反应法检测各组的巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA的含量.③将细胞分为4组,Ⅰ组不作任何处理,Ⅱ组加入浓度为0.1％的钛颗粒,Ⅲ组加入浓度为1 00 μmol· mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐,Ⅳ组先加入浓度为100 μmol·mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐,1h后再加入浓度为0.1％的钛颗粒.培养24 h后用酶联免疫吸附剂测定法检测各组的巨噬细胞游走抑制因子蛋白含量.④将细胞分为2组,a组不作任何处理,b组加入浓度为0.1％的钛颗粒.分别在实验开始后0h、0.5h、1h、3h和6h对2组的不同培养孔的细胞用酶联免疫吸附剂测定法测定磷酸化p65的含量.结果:①钛颗粒浓度对巨噬细胞游走抑制因子表达的影响:各组小鼠巨噬细胞巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA含量的组间比较,差异均有统计学意义(F=207.158,P=0.000;F=64.955,P=0.000).A组巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA的含量[(3.93±0.11)ng· mL-1,(0.03±0.01)]与B组[(4.21±0.27)ng· mL-1,(0.10±0.01)]比较,差异无统计学意义(P=0.167;P =0.223);A组小于C组[(6.56 ±0.27)ng·mL-1,(0.25±0.09)],差异有统计学意义(P=0.000;P=0.004);A组小于D组[(7.82 ±0.21)ng·mL-1,(0.70 ±0.09)],差异有统计学意义(P =0.000;P=0.000);B组小于C组(P =0.000;P=0.025)和D组(P=0.000;P=0.000);C组小于D组(P=0.000;P =0.000).②钛颗粒刺激时间对巨噬细胞游走抑制因子的影响:对照组巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA含量各时点间比较,差异无统计学意义(F=0.310,P=0.865;F=0.065,P=0.991).观察组巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA含量各时点间比较,差异有统计学意义(F=32.857,P=0.000;F=15.621,P=0.000),各时点间两两比较:6h时的巨噬细胞游走抑制因子蛋白和巨噬细胞游走抑制因子mRNA表达量[(4.14±0.24)ng· mL-1,(0.08±0.04)]与0 h[(3.60±0.40)ng,mL-1,(0.03±0.01)]比较,差异无统计学意义(P =0.133;P =0.621);12 h的表达量[(5.61±0.47)ng· mL-1,(0.36±0.21)]大于0h,差异有统计学意义(P =0.000;P=0.004);24 h的表达量[(7.15 ±0.10)ng· mL-1,(0.71±0.12)]大于12 h,差异有统计学意义(P=0.000;P =0.003);36 h的表达量[(5.22±0.85)ng·mL-1,(0.31 ±0.18)]小于24 h,差异有统计学意义(P =0.000;P =0.004),但高于0h的表达量(P =0.000;P=0.003).③钛颗粒和吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白的影响:实验结束后4组小鼠巨噬细胞的巨噬细胞游走抑制因子蛋白量分别为,Ⅰ组(3.77 ±0.42)ng·mL-1,Ⅱ组(7.59±0.28)ng· mL-1,Ⅲ组(4.23 ±0.42)ng·mL-1,Ⅳ组(6.48±0.5)ng· mL-1 析因方差分析结果提示,单独使用0.1％钛颗粒能促进巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白(F=153.363,P=0.000);单独使用100 μmol·mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白无影响(F=1.762,P=0.221);100 μmol·mL-1的吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对0.1％钛颗粒促进巨噬细胞表达巨噬细胞游走抑制因子蛋白具有抑制效应(F=10.325,P=0.012).④钛颗粒浓度对巨噬细胞NF-κB信号通路的影响:a组各时点磷酸化p65含量比较,差异无统计学意义(F=0.248,P=0.904).b组各时点磷酸化p65含量比较,差异有统计学意义(F=30.217,P=0.000),各时点间两两比较:0.5 h磷酸化p65含量[(17.68±0.55)pg·mg-1]高于0 h[(10.38±3.18)pg·mg-1],差异有统计学意义(P =0.005);1 h磷酸化p65含量[(23.31 ±2.05)pg· mg-1]高于0.5h,差异有统计学意义(P =0.020);3 h磷酸化p65含量[(31.80±1.84)pg·mg-1]高于1 h,差异有统计学意义(P =0.002);6 h磷酸化p65含量[(18.42±3.61)pg·mg-1]低于3 h(P =0.000),但高于0 h(P=0.003) 结论:人工关节假体磨损颗粒可通过NF-κB信号通路上调巨噬细胞游走抑制因子的表达,促进假体周围炎症反应,导致假体周围骨吸收、溶解,导致假体无菌性松动.     

淫羊藿苷干预大鼠椎间盘源性腰痛的实验研究

目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)干预大鼠椎间盘源性腰痛的效果及可能的作用机制。方法:将45只8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为5组,假手术组、生理盐水组、ICA 50 mg·kg^-1组、ICA 100 mg·kg^-1组各10只,塞来昔布组5只。生理盐水组、ICA 50 mg·kg^-1组、ICA 100 mg·kg^-1及塞来昔布组大鼠通过L_4~5和L_5~6椎间盘穿刺建立大鼠腰痛模型;假手术组仅显露椎间盘,不进行穿刺。自造模后第7天开始进行药物干预,至造模后第21天结束。ICA 50 mg·kg^-1组和ICA 100 mg·kg^-1组以ICA溶液进行灌胃(ICA溶于去离子水中),每天剂量分别为50 mg·kg^-1和100 mg·kg^-1;塞来昔布组以塞来昔布胶囊进行灌胃(塞来昔布胶囊粉剂溶于去离子水中),每天100 mg·kg^-1;生理盐水组以生理盐水灌胃,每天100 mg·kg^-1;假手术组常规饲养,不进行干预。从各组随机选取5只大鼠,分别于造模前、造模后第7天、第14天、第21天、第28天、第35天进行足底机械性疼痛阈值检测。造模后第35天,足底疼痛阈值测定结束后处死假手术组、生理盐水组、ICA 50 mg·kg^-1组和ICA 100 mg·kg^-1组的5只大鼠,以qRT-PCR法测定椎间盘组织中P物质(substance P,SP)mRNA和降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)mRNA的含量。造模后第21天时,处死假手术组、生理盐水组、ICA 50 mg·kg^-1组和ICA 100 mg·kg^-1组其余的5只大鼠,以ELISA法测定大鼠椎间盘组织中细胞因子诱导的中性粒细胞趋化剂-1(cytokine-induced neutrophil chemoattractant-1,CINC-1)含量。结果:①足底机械性疼痛阈值。时间因素和分组因素存在交互效应(F=17.971,P=0.001)。5组大鼠的足底机械性疼痛阈值总体比较,差异有统计学意义,即存在分组效应(F=146.660,P=0.000)。造模前后不同时点间足底机械性疼痛阈值的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=118.057,P=0.000)。假手术组足底机械性疼痛阈值随时间未见明显变化,一直处于较高水平[(14.60±0.89)g,(14.79±0.47)g,(15.00±0.00)g,(15.00±0.00)g,(15.00±0.00)g,(15.00±0.00)g,F=0.836,P=0.537]。生理盐水组足底机械性疼痛阈值造模后明显降低,后期一直维持在较低水平[(14.67±0.74)g,(3.44±2.22)g,(3.19±1.37)g,(2.84±0.96)g,(3.92±1.36)g,(3.02±0.98)g,F=58.882,P=0.000]。ICA 50 mg·kg^-1组、ICA 100 mg·kg^-1组和塞来昔布组造模前后的足底机械性疼痛阈值变化趋势基本一致,造模后均先降低,药物干预开始后逐渐回升,药物干预结束后又逐渐降低[(15.00±0.00)g,(2.78±0.81)g,(4.64±1.67)g,(5.59±1.25)g,(8.52±1.63)g,(6.11±1.49)g,F=56.088,P=0.000;(14.66±0.76)g,(2.53±1.37)g,(10.65±2.69)g,(9.67±2.41)g,(10.67±2.04)g,(8.59±2.95)g,F=16.684,P=0.000;(15.00±0.00)g,(2.28±1.03)g,(12.09±1.28)g,(12.37±1.34)g,(6.71±2.89)g,(5.18±1.88)g,F=44.668,P=0.000]。造模后第7天时,ICA 50 mg·kg^-1组、ICA 100 mg·kg^-1组和塞来昔布组的足底机械性疼痛阈值两两比较,组间差异均无统计学意义。造模后第14天时,ICA 100 mg·kg^-1组和塞来昔布组的足底机械性疼痛阈值均高于ICA 50 mg·kg^-1组(P=0.001;P=0.000);ICA 100 mg·kg^-1组和塞来昔布组的足底机械性疼痛阈值比较,差异无统计学意义。造模后第21天时,ICA 100 mg·kg^-1组和塞来昔布组的足底机械性疼痛阈值均高于ICA 50 mg·kg^-1组(P=0.009;P=0.000);ICA 100 mg·kg^-1组和塞来昔布组的足底机械性疼痛阈值比较,差异无统计学意义。造模后第28天时,ICA 100 mg·kg^-1组的足底机械性疼痛阈值高于塞来昔布组(P=0.049);ICA 50 mg·kg^-1组与ICA 100 mg·kg^-1组、塞来昔布组比较,组间差异均无统计学意义。造模后第35天时,ICA 50 mg·kg^-1组、ICA 100 mg·kg^-1组和塞来昔布组的足底机械性疼痛阈值两两比较,组间差异均无统计学意义。②椎间盘组织CINC-1含量。造模后第21天,假手术组、生理盐水组、ICA 50 mg·kg^-1组及ICA 100 mg·kg^-1组大鼠椎间盘组织中CINC-1含量比较,差异有统计学意义[(534.2±142.6)pg·mL^-1,(28 376.0±976.7)pg·mL^-1,(21 866.0±1 536.0)pg·mL^-1,(9 956.0±1 010.0)pg·mL^-1,F=423.000,P=0.000]。生理盐水组的CINC-1含量高于假手术组、ICA 50 mg·kg^-1组和ICA 100 mg·kg^-1组(P=0.000;P=0.003;P=0.000);ICA 50 mg·kg^-1组的CINC-1含量高于ICA 100 mg·kg^-1组(P=0.000)。③椎间盘组织SP mRNA和CGRP mRNA含量。造模后第35天,假手术组、生理盐水组、ICA 50 mg·kg^-1组及ICA 100 mg·kg^-1组大鼠椎间盘组织中SP mRNA和CGRP mRNA含量比较,组间差异均有统计学意义(1.04±0.49,183.50±118.60,55.50±10.26,19.53±8.05,F=9.499,P=0.000;0.74±0.21,6.29±2.06,1.55±0.69,1.19±0.37,F=27.180,P=0.000)。生理盐水组的SP mRNA含量高于假手术组、ICA 50 mg·kg^-1组和ICA 100 mg·kg^-1组(P=0.008;P=0.042;P=0.015);ICA 50 mg·kg^-1组的SP m RNA含量高于ICA 100 mg·kg^-1组(P=0.000)。生理盐水组的CGRP m RNA含量高于假手术组、ICA 50 mg·kg^-1组和ICA 100 mg·kg^-1组(P=0. 000;P=0. 001;P=0. 000);ICA 50mg·kg^-1组和ICA 100 mg·kg^-1组的CGRP m RNA含量比较,差异无统计学意义。结论:ICA可有效缓解大鼠椎间盘源性腰痛,其镇痛效果与剂量有关,与同剂量的塞来昔布相比其镇痛效果持续时间更长,降低大鼠椎间盘组织中CINC-1的水平可能是其镇痛的作用机制之一。     

新伤湿敷液外敷在胫骨平台骨折术前治疗中的应用

目的:观察新伤湿敷液外敷在胫骨平台骨折术前治疗中的应用价值。方法:将60例接受手术治疗的胫骨平台骨折患者随机分为2组,每组30例。常规治疗组术前给予甘露醇脱水消肿、低分子肝素钙抗凝治疗,并指导患者行股四头肌等长收缩、足踝关节功能锻炼;外敷组在常规治疗基础上采用新伤湿敷液外敷患处治疗,每日2次,待肢体肿胀消除后停用。记录并比较2组患者患肢肿胀率、患肢疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分及手术等待时间。结果:外敷组退出1例,常规治疗组退出2例。①患肢肿胀率。时间因素和分组因素存在交互效应(F=35.234,P=0.000);2组患者患肢肿胀率总体比较,组间差异有统计学意义,即存在分组效应(F=-1.986,P=0.012);治疗前后不同时间点患肢肿胀率的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=619.710,P=0.000);2组患者患肢肿胀率随时间呈先升高后降低趋势,但变化趋势不完全一致[(7.83±1.52)%,(9.73±1.90)%,(10.84±2.00)%,(5.63±1.23)%,F=387.336,P=0.000;(7.67±1.65)%,(9.49±1.70)%,(10.79±1.66)%,(6.68±1.63)%,F=459.514,P=0.000];治疗前及治疗1 d、3 d后,2组患者患肢肿胀率的组间差异均无统计学意义(t=0.381,P=0.705;t=0.497,P=0.621;t=0.097,P=0.923);治疗7 d后外敷组患肢肿胀率低于常规治疗组(t=-2.775,P=0.008)。②患肢疼痛VAS评分。时间因素和分组因素存在交互效应(F=12.362,P=0.000);2组患者患肢疼痛VAS评分比较,组间差异有统计学意义,即存在分组效应(F=-6.974,P=0.000);治疗前后不同时间点患肢疼痛VAS评分的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=251.136,P=0.000);2组患者患肢疼痛VAS评分随时间呈降低趋势,但变化趋势不完全一致[(7.50±0.36)分,(7.15±0.31)分,(6.89±0.19)分,(4.92±0.46)分,F=322.490,P=0.000;(7.55±0.36)分,(7.36±0.28)分,(7.34±0.32)分,(6.13±0.41)分,F=94.309,P=0.000];治疗前,2组患者患肢疼痛VAS评分的差异无统计学意义(t=-0.937,P=0.353);治疗1 d、3 d、7 d后外敷组患肢疼痛VAS评分均低于常规治疗组(t=-2.720,P=0.009;t=-6.414,P=0.000;t=-10.520,P=0.000)。③手术等待时间。外敷组手术等待时间短于常规治疗组手术等待时间[(8.31±3.15)d,(10.21±3.51)d,t=-4.219,P=0.000]。结论:对于接受手术治疗的胫骨平台骨折患者,术前在常规治疗的基础上采用新伤湿敷液外敷,可以消除肿胀、缓解疼痛、缩短手术等待时间。     

蠲痹历节清方对急性痛风性关节炎大鼠的影响及其作用机制

目的:探讨蠲痹历节清方对急性痛风性关节炎大鼠的影响及其作用机制。方法:将96只2月龄雄性清洁级健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、蠲痹历节清方组、依托考昔组,每组24只。模型组、蠲痹历节清方组、依托考昔组大鼠以氧嗪酸钾溶液连续腹腔注射后,于大鼠右侧踝关节腔内注射尿酸钠溶液;正常对照组大鼠腹腔及右侧踝关节腔分别注入等剂量生理盐水。关节腔内注射后即刻给予药物干预,正常对照组和模型组以10 m L·kg~(-1)生理盐水灌胃,蠲痹历节清方组以22 g·kg~(-1)剂量的蠲痹历节清方悬混液灌胃,依托考昔组以5.5 mg·kg~(-1)剂量的依托考昔悬混液灌胃;每日2次,连续灌胃2 d。分别于药物干预开始后4 h、12 h、24 h、48 h采用免疫组化法检测各组大鼠踝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6蛋白含量;于药物干预开始后48 h采用全自动生化分析仪检测血尿酸含量,并观察各组大鼠踝关节滑膜组织形态。结果:(1)踝关节滑膜组织中TNF-α蛋白含量。药物干预开始后4 h、12 h、24 h、48 h,4组大鼠踝关节滑膜组织中TNF-α蛋白含量比较,差异均有统计学意义[(14.72±0.98)pg·m L~(-1),(40.05±1.31)pg·m L~(-1),(19.59±2.63)pg·m L~(-1),(19.00±1.32)pg·m L~(-1),F=72.528,P=0.012;(16.14±0.86)pg·m L~(-1),(40.95±2.56)pg·m L~(-1),(24.10±2.50)pg·m L~(-1),(21.02±2.68)pg·m L~(-1),F=59.314,P=0.000;(14.95±0.39)pg·m L~(-1),(38.65±0.75)pg·m L~(-1),(19.49±0.59)pg·m L~(-1),(18.64±0.62)pg·m L~(-1),F=35.681,P=0.001;(14.83±1.26)pg·m L~(-1),(37.91±1.30)pg·m L~(-1),(18.16±0.84)pg·m L~(-1),(17.32±0.83)pg·m L~(-1),F=37.553,P=0.000];正常对照组大鼠踝关节滑膜组织中TNF-α蛋白含量均低于模型组、蠲痹历节清方组和依托考昔组(P=0.000,P=0.000,P=0.003,P=0.001;P=0.000,P=0.000,P=0.001,P=0.008;P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.001);模型组踝关节滑膜组织中TNF-α蛋白含量均高于蠲痹历节清方组和依托考昔组(P=0.000,P=0.001,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);蠲痹历节清方组踝关节滑膜组织中TNF-α蛋白含量与依托考昔组比较,差异均无统计学意义(P=0.212,P=0.079,P=0.091,P=0.088)。(2)踝关节滑膜组织中IL-1β蛋白含量。药物干预开始后4 h、12 h、24 h、48 h,4组大鼠踝关节滑膜组织中IL-1β蛋白含量比较,差异均有统计学意义[(3.43±0.68)pg·m L~(-1),(7.40±0.51)pg·m L~(-1),(4.84±0.21)pg·m L~(-1),(4.67±0.18)pg·m L~(-1),F=64.473,P=0.028;(3.61±0.34)pg·m L~(-1),(7.95±0.63)pg·m L~(-1),(5.28±0.34)pg·m L~(-1),(4.91±0.42)pg·m L~(-1),F=50.119,P=0.006;(3.51±0.50)pg·m L~(-1),(6.98±0.60)pg·m L~(-1),(4.73±0.25)pg·m L~(-1),(4.47±0.23)pg·m L~(-1),F=41.346,P=0.002;(3.47±0.29)pg·m L~(-1),(6.90±0.68)pg·m L~(-1),(4.58±0.27)pg·m L~(-1),(4.12±0.11)pg·m L~(-1),F=68.784,P=0.000];正常对照组大鼠踝关节滑膜组织中IL-1β蛋白含量均低于模型组、蠲痹历节清方组和依托考昔组(P=0.003,P=0.000,P=0.001,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.002,P=0.004;P=0.000,P=0.000,P=0.001,P=0.000);模型组踝关节滑膜组织中IL-1β蛋白含量均高于蠲痹历节清方组和依托考昔组(P=0.000,P=0.001,P=0.003,P=0.000;P=0.000,P=0.008,P=0.000,P=0.000);蠲痹历节清方组踝关节滑膜组织中IL-1β蛋白含量与依托考昔组比较,差异均无统计学意义(P=0.198,P=0.081,P=0.101,P=0.097)。(3)踝关节滑膜组织中IL-6蛋白含量。药物干预开始后4 h、12 h、24 h、48 h,4组大鼠踝关节滑膜组织中IL-6蛋白含量比较,差异均有统计学意义[(3.72±0.31)pg·m L~(-1),(7.83±0.33)pg·m L~(-1),(4.87±0.12)pg·m L~(-1),(4.75±0.23)pg·m L~(-1),F=32.582,P=0.018;(4.07±0.38)pg·m L~(-1),(8.04±0.13)pg·m L~(-1),(5.62±0.38)pg·m L~(-1),(5.12±0.20)pg·m L~(-1),F=86.127,P=0.007;(3.77±0.14)pg·m L~(-1),(7.86±0.27)pg·m L~(-1),(4.79±0.53)pg·m L~(-1),(4.68±0.11)pg·m L~(-1),F=49.038,P=0.001;(3.55±0.14)pg·m L~(-1),(7.85±0.24)pg·m L~(-1),(4.67±0.38)pg·m L~(-1),(4.57±0.13)pg·m L~(-1),F=33.115,P=0.000];正常对照组大鼠踝关节滑膜组织中IL-6蛋白含量均低于模型组、蠲痹历节清方组和依托考昔组(P=0.001,P=0.000,P=0.001,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.001,P=0.006;P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.003);模型组踝关节滑膜组织中IL-6蛋白含量均高于蠲痹历节清方组和依托考昔组(P=0.000,P=0.000,P=0.002,P=0.000;P=0.000,P=0.001,P=0.000,P=0.000);蠲痹历节清方组踝关节滑膜组织中IL-6蛋白含量与依托考昔组比较,差异均无统计学意义(P=0.256,P=0.075,P=0.933,P=0.108)。(4)血尿酸含量。药物干预开始后48 h,4组大鼠血尿酸含量比较,差异有统计学意义[(132.52±3.32)μmol·L~(-1),(352.30±14.42)μmol·L~(-1),(165.08±3.57)μmol·L~(-1),(321.08±16.44)μmol·L~(-1),F=46.176,P=0.000];正常对照组大鼠血尿酸含量低于模型组、蠲痹历节清方组和依托考昔组(P=0.000,P=0.028,P=0.000),模型组血尿酸含量高于蠲痹历节清方组和依托考昔组(P=0.000,P=0.032),蠲痹历节清方组血尿酸含量低于依托考昔组(P=0.001)。(5)踝关节滑膜组织形态。药物干预开始后48 h,正常对照组踝关节滑膜上皮排列完整,无炎性细胞浸润;模型组踝关节滑膜上皮脱落,大量白细胞浸润;蠲痹历节清方组和依托考昔组踝关节滑膜上皮较完整,炎性细胞浸润较少。结论:蠲痹历节清方能有效降低急性痛风性关节炎大鼠的血尿酸水平,抑制其关节滑膜组织炎症反应,其作用机制可能与其能下调TNF-α、IL-1β、IL-6的蛋白表达有关。     

强骨膏方对绝经后骨质疏松性椎体骨折患者经皮椎体后凸成形术后骨代谢及生活质量的影响

目的:观察强骨膏方对绝经后骨质疏松性椎体骨折患者经皮椎体后凸成形术(percutaneous kyphoplasty,PKP)后骨代谢及生活质量的影响。方法:选择2018年9—12月因骨质疏松性椎体骨折接受了PKP治疗的患者为研究对象。采用随机数字表将符合要求的患者随机分为2组。常规治疗组自术后第2天开始口服碳酸钙D3片(每天1次,每次600 mg)和阿法骨化醇软胶囊(每天1次,每次1μg),强骨膏方组在常规治疗组治疗方案的基础上自术后第2天开始口服强骨膏方(每次15 mL,每天早晚各1次)。所有药物每服用3个月,停药1个月,共治疗1年。分别于入组时和治疗结束时,测定患者的血清总Ⅰ型原胶原氨基端前肽(total procollagen typeⅠN-terminal propeptide,T-PⅠNP)含量、Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-C-terminal telopeptide of typeⅠcollagen,β-CTX)含量、腰椎和髋部骨密度及简明健康状况调查表(short form 36 health survey questionnaire,SF-36)评分。结果:①分组结果。共纳入109例患者,强骨膏方组57例、常规治疗组52例。至试验结束时,强骨膏方组3例因出现药物性胃肠道不良反应退出、2例主动要求退出、1例因再次发生骨折退出;常规治疗组2例因出现药物性胃肠道不良反应退出、1例主动要求退出、2例因再次发生骨折退出。出现药物性胃肠道不良反应患者改用抗骨质疏松针剂治疗,再次出现骨折患者均再次行PKP和抗骨质疏松治疗,预后良好。②骨转换标志物及骨密度测定结果。入组时2组患者的血清T-PⅠNP含量、血清β-CTX含量、腰椎骨密度及髋部骨密度比较,组间差异均无统计学意义(t=-1.335,P=0.185;t=0.471,P=0.693;t=-1.734,P=0.086;t=-1.190,P=0.237)。治疗结束时2组患者的血清T-PⅠNP和β-CTX含量均较入组时降低[T-PⅠNP:(60.83±4.57)ng·mL~(-1),(39.26±4.06)ng·mL~(-1),t=26.460,P=0.000;(62.14±5.11)ng·mL~(-1),(31.32±2.49)ng·mL~(-1),t=38.692,P=0.000;β-CTX:(0.77±0.08)ng·mL~(-1),(0.44±0.05)ng·mL~(-1),t=25.880,P=0.000;(0.76±0.10)ng·mL~(-1),(0.52±0.06)ng·mL~(-1),t=14.961,P=0.000],腰椎和髋部骨密度均较入组时升高[腰椎骨密度:(0.758±0.011)g·cm~(-2),(0.786±0.024)g·cm~(-2),t=-10.238,P=0.000;(0.761±0.006)g·cm~(-2),(0.779±0.028)g·cm~(-2),t=-4.239,P=0.000;髋部骨密度:(0.528±0.008)g·cm~(-2),(0.567±0.036)g·cm~(-2),t=-7.550,P=0.000;(0.530±0.010)g·cm~(-2),(0.556±0.024)g·cm~(-2),t=-8.039,P=0.000];治疗结束时强骨膏方组的血清T-PⅠNP含量高于常规治疗组(t=11.754,P=0.000),血清β-CTX含量低于常规治疗组(t=-6.901,P=0.000),腰椎和髋部骨密度的组间差异均无统计学意义(t=1.355,P=0.179;t=1.770,P=0.080)。③SF-36评分。入组时2组患者的SF-36评分比较,差异无统计学意义(t=-1.212,P=0.229)。治疗结束时,2组患者的SF-36评分均较入组时升高[(102.22 1.69)分,(124.55±2.56)分,t=-98.085,P=0.000;(102.68±2.03)分,(115.34±2.29)分,t=-80.066,P=0.000],强骨膏方组的SF-36评分高于常规治疗组(t=18.702,P=0.000)。结论:绝经后骨质疏松性椎体骨折患者PKP术后应用强骨膏方,可以改善骨代谢、改善生活质量。     

中医综合疗法防治绝经后骨量减少的多中心临床研究

目的:观察口服强骨饮颗粒联合新编五禽戏锻炼及佩戴药穴腰带的中医综合疗法防治绝经后骨量减少的临床疗效及安全性。方法:从6家医院共纳入800例绝经后骨量减少患者,其中400例患者进行日光浴和饮食干预(常规治疗组),其余400例患者在此基础上采用口服强骨饮颗粒联合新编五禽戏锻炼及佩戴药穴腰带的中医综合治疗(中医综合治疗组),共治疗12个月。观察骨密度(bone mineral density,BMD)、血清Ⅰ型前胶原氨基端前肽(N~(-1)terminal propeptide of typeⅠprecollagen,PⅠNP)和Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(βcross~(-1)linked C~(-1)telopeptides of typeⅠcollagen,β~(-1)CTX)含量、疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分及不良事件发生率。结果:(1)BMD测定结果。治疗前后不同时间点腰椎BMD的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=1 974.342,P=0.000);治疗后中医综合治疗组腰椎BMD逐渐升高(F=1 482.684,P=0.000),常规治疗组腰椎BMD先升高然后降低(F=1 161.076,P=0.000)。2组患者腰椎BMD总体比较,组间差异无统计学意义,即不存在分组效应(F=2.939,P=0.087)。治疗前,2组患者腰椎BMD的差异无统计学意义[(0.775±0.046)g·cm~(~(-1)2),(0.777±0.049)g·cm~(~(-1)2),t=0.416,P=0.677];治疗6个月后和12个月后,中医综合治疗组的腰椎BMD均大于常规治疗组[(0.788±0.047)g·cm~(~(-1)2),(0.780±0.049)g·cm~(~(-1)2),t=~(~(-1)2).487,P=0.013;(0.789±0.048)g·cm~(~(-1)2),(0.778±0.049)g·cm~(~(-1)2),t=~(-1)3.039,P=0.002]。时间因素和分组因素存在交互效应(F=958.556,P=0.000)。治疗前后不同时间点股骨近端BMD的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=2 639.694,P=0.000);治疗后中医综合治疗组股骨近端BMD逐渐升高[(0.704±0.056)g·cm~(~(-1)2),(0.709±0.057)g·cm~(~(-1)2),(0.713±0.057)g·cm~(~(-1)2),F=5 515.964,P=0.000],常规治疗组股骨近端BMD逐渐降低[(0.707±0.054)g·cm~(~(-1)2),(0.706±0.054)g·cm~(~(-1)2),(0.706±0.054)g·cm~(~(-1)2),F=470.256,P=0.000]。2组患者股骨近端BMD总体比较,组间差异无统计学意义,即不存在分组效应(F=0.301,P=0.583)。时间因素和分组因素存在交互效应(F=5 456.814,P=0.000)。(2)血清PⅠNP和β~(-1)CTX含量测定结果。治疗前后不同时间点血清PⅠNP含量的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=276.541,P=0.000);治疗后中医综合治疗组血清PⅠNP含量先降低后升高,常规治疗组血清PⅠNP含量逐渐降低。2组患者血清PⅠNP含量总体比较,组间差异有统计学意义,即存在分组效应(F=11.094,P=0.001);治疗前,2组患者血清PⅠNP含量的差异无统计学意义[(45.76±21.66)ng·m L~(-1)1,(45.34±19.95)ng·m L~(-1)1,t=~(-1)0.284,P=0.777];治疗6个月后和12个月后,中医综合治疗组的血清PⅠNP含量均高于常规治疗组[(43.58±20.67)ng·m L~(-1)1,(40.58±17.81)ng·m L~(-1)1,t=~(~(-1)2).052,P=0.040;(49.89±24.16)ng·m L~(-1)1,(38.83±17.09)ng·m L~(-1)1,t=~(-1)7.472,P=0.000)]。时间因素和分组因素存在交互效应(F=651.242,P=0.000)。治疗前后不同时间点血清β~(-1)CTX含量的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=316.946,P=0.000);治疗后中医综合治疗组血清β~(-1)CTX含量先降低后升高[(0.296±0.173)ng·m L~(-1)1,(0.227±0.137)ng·m L~(-1)1,(0.259±0.155)ng·m L~(-1)1,F=275.302,P=0.000],常规治疗组血清β~(-1)CTX含量逐渐降低[(0.287±0.158)ng·m L~(-1)1,(0.281±0.156)ng·m L~(-1)1,(0.273±0.151)ng·m L~(-1)1,F=992.78,P=0.000]。2组患者血清β~(-1)CTX含量总体比较,组间差异无统计学意义,即不存在分组效应(F=3.124,P=0.078)。治疗前和治疗12个月后,2组患者血清β~(-1)CTX含量的差异均无统计学意义(t=~(-1)0.880,P=0.379;t=1.257,P=0.209);治疗6个月后,中医综合治疗组血清β~(-1)CTX含量低于常规治疗组(t=5.233,P=0.000)。时间因素和分组因素存在交互效应(F=247.222,P=0.000)。(3)疼痛VAS评分测定结果。治疗前和治疗12个月后,2组患者疼痛VAS评分比较,差异均无统计学意义[(2.40±0.69)分,(2.39±0.70)分,t=0.335,P=0.723;(2.38±0.68)分,(2.46±0.67)分,t=~(-1)1.696,P=0.090];2组患者治疗前的疼痛VAS评分与治疗12个月后相比,差异均无统计学意义(t=0.508,P=0.612;t=~(-1)1.540,P=0.124)。(4)不良事件观察结果。至试验结束时中医综合治疗组失访19例、未按照试验方案治疗28例,常规治疗组失访13例、未按照试验方案治疗9例,脱落和剔除均发生在治疗6个月后数据采集完成之后。2组均无患者死亡、发生严重疾病等严重不良事件。结论:口服强骨饮颗粒联合新编五禽戏锻炼及佩戴药穴腰带的中医综合疗法,能提高绝经后骨量减少患者血清中PⅠNP含量、降低β~(-1)CTX含量,从而增加患者的骨密度,而且安全性较高。     

铍针松解和针刀松解治疗早中期膝骨关节炎的短期临床疗效观察

目的:观察铍针松解和针刀松解治疗早中期膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的短期临床疗效。方法:将113例早中期KOA患者随机分为3组,铍针组38例、针刀组38例、扶他林组37例,分别给予铍针松解、针刀松解和扶他林乳胶剂涂抹膝关节疼痛部位,2周为1个疗程,共治疗1个疗程。比较治疗前后3组患者的膝关节软组织位移值、香蕉面积比值、压痛值、疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分及日本骨科学会(Japanese orthopaedic association,JOA)KOA疗效评分。结果:5例患者失访,其中铍针组2例、针刀组2例、扶他林组1例。108例患者完成治疗并获得随访,随访时间28~35 d,中位数30 d,均未出现不良反应。治疗前3组患者的膝关节软组织位移值、香蕉面积比值、压痛值、VAS评分及JOA评分比较,组间差异均无统计学意义[(5.61±0.50)mm,(5.80±0.65)mm,(5.67±0.68)mm,F=0.877,P=0.419;(72.01±3.23)%,(70.92±3.72)%,(71.48±5.87)%,F=0.546,P=0.581;(27.44±5.19)N,(27.24±7.64)N,(29.50±5.49)N,F=1.532,P=0.221;(4.65±0.71)分,(4.28±0.77)分,(4.36±0.85)分,F=2.283,P=0.107;(72.36±5.00)分,(71.67±3.96)分,(71.81±4.50)分,F=0.239,P=0.788]。治疗结束后1个月,3组患者的膝关节软组织位移值、香蕉面积比值、压痛值及VAS评分比较,组间差异均有统计学意义[(7.49±0.52)mm,(6.69±0.68)mm,(6.52±0.74)mm,F=32.280,P=0.000;(58.95±4.50)%,(61.66±4.02)%,(64.24±6.52)%,F=14.095,P=0.001;(46.06±6.76)N,(36.55±8.13)N,(36.46±6.17)N,F=31.015,P=0.000;(0.76±0.62)分,(2.06±0.76)分,(2.64±0.71)分,F=58.117,P=0.000];JOA评分比较,组间差异无统计学意义[(89.72±8.10)分,(87.50±6.27)分,(85.69±7.67)分,F=3.965,P=0.138]。治疗结束后1个月,3组患者的软组织位移值均较治疗前升高(t=-18.395,P=0.000;t=-16.693,P=0.000;t=-11.684,P=0.000),铍针组的软组织位移值高于针刀组和扶他林组(P=0.000;P=0.000),针刀组与扶他林组比较差异无统计学意义(P=0.153);3组患者的香蕉面积比值均较治疗前降低(t=23.148,P=0.000;t=21.909,P=0.000;t=-13.081,P=0.000),铍针组的香蕉面积比值低于扶他林组(P=0.001),铍针组与针刀组比较差异无统计学意义(P=0.075),针刀组与扶他林组比较差异无统计学意义(P=0.412);3组患者的压痛值均较治疗前升高(t=-21.091,P=0.000;t=-11.338,P=0.000;t=-10.917,P=0.000),铍针组的压痛值高于针刀组和扶他林组(P=0.000;P=0.001),针刀组与扶他林组比较差异无统计学意义(P=0.848);3组患者的VAS评分均较治疗前降低(t=30.138,P=0.000;t=21.622,P=0.000;t=12.552,P=0.000),铍针组的VAS评分低于针刀组和扶他林组(P=0.000;P=0.000),针刀组的VAS评分低于扶他林组(P=0.012)。结论:铍针松解、针刀松解及扶他林乳胶剂外用治疗早中期KOA的短期临床综合疗效相当,但铍针松解能更好地缓解膝关节疼痛,值得临床推广应用。     

强骨饮对假体周围骨溶解模型大鼠骨密度的影响及其作用机制研究

目的:探讨强骨饮对假体周围骨溶解模型大鼠骨密度的影响及其作用机制。方法:选取30只成年雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组和强骨饮组,每组10只。空白组不进行造模;模型组和强骨饮组大鼠右侧股骨植入高密度聚乙烯颗粒和钛棒,制备聚乙烯颗粒诱导的假体周围骨溶解模型。造模手术3 d后,强骨饮组大鼠以制备好的强骨饮药液灌胃,每周3次,连续给药11周。空白组和模型组均不进行药物干预。造模后12周,取大鼠静脉血用ELISA法测定血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartrate resistant acid phosphatase 5b,TRACP5b)水平,取右侧股骨进行骨密度检测,并以ELISA法测定股骨组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平。结果:实验过程中各组大鼠日常行为无差别,精神状况良好,反应灵敏,体质量逐渐增加。模型组和强骨饮组大鼠术后1周切口愈合。实验全过程中各组均无大鼠死亡。3组大鼠血清TRACP5b水平比较,差异有统计学意义[(1.83±0.42)U·L~(-1),(2.40±0.43)U·L~(-1),(1.90±0.28)U·L~(-1),F=9.323,P=0.002]。模型组血清TRACP5b水平高于空白组和强骨饮组(P=0.001;P=0.002)。3组大鼠股骨骨密度比较,差异有统计学意义[(0.162±0.009)g·cm~(-2),(0.119±0.010)g·cm~(-2),(0.140±0.007)g·cm~(-2),F=74.323,P=0.000]。模型组股骨骨密度低于空白组和强骨饮组(P=0.000;P=0.000)。3组大鼠股骨组织中TNF-α水平比较,差异有统计学意义[(70.21±8.83)pg·mL~(-1),(175.32±14.95)pg·mL~(-1),(129.73±12.86)pg·mL~(-1),F=160.242,P=0.000]。模型组股骨组织TNF-α水平高于空白组和强骨饮组(P=0.000;P=0.000)。结论:强骨饮可以增加假体周围骨溶解模型大鼠的骨密度,其机制可能是通过减轻炎症反应,抑制破骨细胞活性,从而减少假体周围骨吸收。