抑癌基因p16与乙肝病毒相关性肝癌研究进展

p16蛋白是细胞周期素依赖性蛋白激酶CDK4特异性的抑制子，通过抑制CDK4的活性，使细胞分裂停滞于G1－S期而阻止细胞的异常增殖，因而p16基因为重要的抑癌基因。乙型肝炎病毒（HBV）感染后，其DNA可整合入宿主肝细胞基因组中，并引起抑癌基因的改变，HBV与p16的改变有相关性。p16基因的改变在HBV相关性肝癌的发病机制中占重要地位。     

加味逍遥散与化疗药结合抗裸鼠移植性肝癌的实验研究

目的 观察加味逍遥散与化疗药结合对探鼠移植性肝癌(HepG2)模型的抗肿瘤作用.并探讨该复方中药抗肿瘤的作用机制.方法 15只六周龄裸鼠建立裸鼠人肝癌模型(HepG2).并随机分为三组:生理盐水组,氟尿嘧啶+加味逍遥散组,氟尿嘧啶组和加味逍遥散组,观察其抗肿瘤作用(抑瘤率)检测肿瘤组织癌基因的表达.结论 加味逍遥散具有显著的抗肿瘤作用.其抗肿瘤作用机制为提高机体免疫功能和调节癌基因的表达.     

ESR1基因多态性与原发性肝癌发生的相关性研究

目的 探讨广西扶绥县原发性肝癌(PLC)患者肝癌相关基因ESR1遗传多态性与肝癌发生的关系.方法 以50例壮族、50例汉族PLC患者,37例壮族、37例汉族高危人群,30例壮族、30例汉族正常人群为研究对象.选取ESR1基因SNP rs 9340772位点作为遗传标志,用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法 (PCR-RFLP)检测ESR1基因多态性及其基因突变的分布频率.结果 肝癌组、高危人群及正常人群ESR1基因的SNP rs 9340772位点均未发生突变,3组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ESR1基因SNP rs 9340772位点多态性与原发性肝癌的发生无关.     

FHIT基因与肝癌的研究进展

肿瘤发生过程中,原癌基因激活、抑癌基因功能丧失、以及一些修饰基因功能改变等起了重要作用。对抑癌基因的研究已成为目前肿瘤研究领域内的一个热点。近年在染色体3p区域新发现的脆性组氨酸三体(FHIT)基因是将脆性位点与肿瘤基因的变异联系起来的抑癌基因。它在人类许多肿瘤组     

原发性肝癌组织癌基因ras和抑癌基因P~（53）点突变研究

应用多聚酶链延伸反应──限制性片段长度多态性分析法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对４３例福尔马林液固定、石蜡包埋肝癌组织癌基因ｒａｓ和抑癌基因Ｐ（５３）点突变进行分析。结果表明，ｒａｓ基因总突变率为４１．９％（１９／４３），其中Ｎ－ｒａｓ第１２位密码子突变率为３７．２％（１６／４３），Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２位密码子突变率为６．９％（３／４３），Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１３位、Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ第１２和６１位密码子未发现有突变者。Ｐ~（５３）基因第２４９密码子突变率为２０．９％（９／４３），第２４８密码子未发现有突变者。结果提示Ｎ－ｒａｓ第１２密码子和Ｐ（５３）第２４９密码子突变与肝癌的发生和发展有关。     

抑癌基因p16与乙肝病毒相关性肝癌研究进展

p16蛋白是细胞周期素依赖性蛋白激酶CDK4特异性的抑制子，通过抑制CDK4的活性，使细胞分裂停滞于G1-S期而阻止细胞的异常增殖，因而p16基因为重要的抑癌基因。乙型肝炎病毒(HBV)感染后，其DNA可整合入宿主肝细胞基因组中，并引起抑癌基因的改变，HBV与p16的改变有相关性。p16基因的改变在HBV相关性肝癌的发病机制中占重要地位。     

中国启东地区肝癌细胞凋亡相关基因的克隆、表达及其与肝癌相关性研究

Objective To explore the molecular basis of hepatocarcinogenesis by cloning and expressing a novel liver cancer apoptosis-related gene. Methods With homologous screening and RT-PCR, we had cloned an apoptosis-related gene APG from liver cancer cells, compared its expression in hepatocellular carcinoma (HCC) tissue, and paracarcinoma tissue, and analyzed its sequence from these tissues. The association of APG gene expression with HCC was investigated. Results A new gene APG was cloned with a full-length cDNA of 563 bp. Sequencing analysis showed heterogeneity of APG gene from hepatocarcinoma tissue and from paracarcinoma tissue. Among 50 cases of liver cancer, APG gene, expressions were down-regulated in 42 cases (84%), while up-regulated in 8 cases (16%,P<0.01). Its expression was also found to be associated with tumor size (P<0.05), HbsAg level (P<0.01), degree of tumor differentiation (P<0.01), invasion of the tumor capsule (P<0.01), clinical stage (P<0.01), tumor embolism (P<0.01), paracarcinoma tumor satellites (P<0.01), Ki-67 protein expression (P<0.05), p53 protein expression (P<0.01) and apoptosis (P<0.05). There is no association between the gene expression, gender and AFP (P>0.05). Conclusion APC is an appoptosis-related gene and down-regulated in HCC. Its expression is associated with many clinical and pathologic features of HCC, suggesting that APC gene is probably involved in the tumorigenesis of HCC.     

FHIT基因与子宫颈癌的相关性研究

脆性组氨酸三联体（FHIT）基因是近年来发现的定位于人3号染色体短臂（3p14．2）上的候选抑癌基因。许多研究表明其表达改变与人类多种肿瘤关系密切。FHIT基因可能通过调控细胞周期，诱导细胞凋亡发挥抑制肿瘤的作用，其失活机制主要表现为启动子区域CPG岛甲基化、缺失及异常转录。本文重点综述FHIT基因的生物学特性及在宫颈癌发生发展中的作用。     

抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖的抑制及作用机制

目的探讨抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖和细胞周期的调控作用。方法构建野生型PTEN基因和突变型PTEN基因的真核表达载体pEGFP—WT—PTEN和pEGFP—PTEN;G129R。采用脂质体介导的基因转染法,分别将上述载体转染不表达PTEN蛋白的人肝细胞肝癌细胞系HHCC,经G418筛选,获得稳定表达PTEN蛋白的细胞克隆。以流式细胞仪测定细胞周期,以Western blot法分析稳定表达PTEN蛋白的肝癌细胞内源性的磷酸化AKT表达水平,同时与未进行基因转染和转染空载体pEGFP-C1的HHCC细胞进行对照。结果稳定表达野生型PTEN蛋白的肝癌细胞,细胞生长受到明显抑制,与转染空载体的HHCC细胞比较,G1期细胞比例显著增高,G2期和S期细胞比例显著降低,且差异有统计学意义（P〈0．05）;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,与转染空载体的HHCC细胞比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。与转染空载体的HHCC细胞比较,稳定表达野生型PTEN蛋白的HHCC细胞,其内源性磷酸化AKT水平明显减低;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,其AKT水平无明显变化。结论野生型PTEN基因对肝癌细胞周期具有调控作用,而突变型PTEN基因丧失对肝癌细胞周期的调控作用;野生型PTEN基因可能通过降低AKT的活化而实现对肝癌细胞周期的调控。     

表达新城疫病毒HN基因重组鸡痘病毒的构建及其抑瘤作用

目的〖HT5”SS〗： 构建表达新城疫病毒（newcastle disease virus, NDV）HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN,探讨vFVHN对体外培养人肝癌细胞 SMMC7721的抑制作用和对小鼠荷肝癌模型的体内抑瘤效果。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 以野生型鸡痘病毒（fowl poxvirus, FPV）282 E4株为载体,构建表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒vFVHN。采用5溴2脱氧尿苷（5bromo2deoxyribouridine,BrdU）加压法筛选重组体,并通过RTPCR和Western blot等方法对其进行鉴定。采用噻唑蓝（methylthiazoletetrazolium,MTT）染色法检测vFVHN对人肝癌细胞SMMC7721的杀伤率,并通过检测抑瘤率观察其在C57BL/6小鼠荷肝癌模型的抑瘤效果。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： 成功构建重组鸡痘病毒vFVHN,其对SMMC7721细胞的杀伤率为43.37%,对C57BL/6小鼠肝癌模型的抑瘤率为20.65%。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗： 重组鸡痘病毒vFVHN可有效杀伤体外培养的人肝癌细胞SMMC7721,并对C57BL/6小鼠荷肝癌模型体内的实体肿瘤有一定抑制作用。     

Differential Proteomics in Malignant and Normal Liver Cell Lines

Objective： To detect differential protein expression in malignant and normal liver cell lines in vitro using the SELDI ProteinChip platform, for investigating the pathogenesis of liver cancer. Methods： Two cell lines, human normal liver cell line L02 and hepatoma cell line SMMC-7721 were cultured routinely, harvested in good condition and lysed. After quantification, the supernatant of the lysate was tested by IMAC3 （Immobilized Mental Affinity Capture） and WCX2 （Weak Cation Exchange） chips on the SELDI-TOF-MS ProteinChip reader. Results： Protein expression differed between the malignant and normal liver cell lines. A total of 20 differentially expressed proteins were found, among which, 7 were captured by the IMAC3 chip and 14 by the WCX2 chip. Peaks at 5,419, 7,979 and 11,265 Da were higher and at 8,103, 8,492, 10,160 and 11,304 Da lower in SMMC-7721 cells by the IMAC3 chip; peaks at 7,517, 7,945 and 7,979 Da were higher and at 5,061, 5,551, 5,818, 7,439, 9,401,10,100, 10,312, 11,621, 11,662, 11,830 and 12,772 Da lower in SMMC-7721 cells by the WCX2 chip. Interestingly, both chips captured the 7,979 Da peak. In addition, the 11,081 Da peak corresponded precisely with the molecular mass of the calcium binding protein S100A10, which may participate in the formation of liver cancer in association with p36. Conclusion： Detecting differential protein expression in malignant and normal liver cell lines using the SELDI ProteinChip platform was simple, sensitive and repeatable. The results we obtained can serve as a basis for investigating the pathogenesis of liver cancer and aid the discovery of new therapeutic targets.     

辛伐他汀联合吡喃阿霉素对肝癌SMMC-7721细胞的协同抑制作用

目的:研究辛伐他汀联合吡喃阿霉素对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用。方法:辛伐他汀、吡喃阿霉素分别及联合处理细胞48小时,MTT法测量细胞的增殖抑制,按公式计算相互作用指数。结果:按照文献报道计算相互作用指数,相互作用指数小于1。结论:辛伐他汀和吡喃阿霉素对于SMMC-7721有协同抗瘤作用。     

云南地区晚期非小细胞肺癌患者的基因突变及其临床意义

目的:探讨云南地区晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血中肺癌相关驱动基因突变及其与临床病理特征的关系.方法:收集2019年1月至2019年12月云南省肿瘤医院分子诊断中心检测的304例Ⅳ期NSCLC患者外周血,用二代测序(next generation sequ...     

黄芩苷对肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤生长抑制作用及其机制

目的：以裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤动物模型为研究对象,观察黄芩苷对移植瘤生长能力的影响,初步探讨黄芩苷对CyclinD1和Caspase-3表达的影响。方法：BALB／c裸鼠右前腋部皮下接种人肝癌SMMC-7721细胞5×10^6个,建立人肝癌实体瘤模型。将20只成瘤裸小鼠随机分为空白对照组与黄芩苷组,每组10只。对照组腹腔注射生理盐水10ml／kg,黄芩苷组腹腔注射黄芩苷注射液100mg/kg,每2d给药1次,间断给药8次后称体重、处死,瘤块离体称重,计算抑瘤率;用免疫组织化学方法检测实验组和对照组移植瘤中CyclinD1和Caspase-3的表达水平。结果：黄芩苷组100ml/kg对裸鼠肝癌SMMC-7721实体瘤的抑制率为308％,两组间肝脏与肾脏指数比较,P均大于0.05。黄芩苷处理组凋亡指数为（13.6±11）％,高于对照组的（2.2±19）％,（P〈0.01）。黄芩苷能够抑制CyclinD1表达及上调Caspase-3表达,（均P〈0.05）。结论：黄芩苷对人肝癌SMMC-7721的裸鼠皮下移植瘤具有生长抑制作用,其抑瘤作用可能通过下调cy—clinD1表达和上调Caspase-3表达来达到抑制瘤体增殖并有促进其凋亡的作用。在保护免疫器官功能方面,黄芩苷无明显优势。黄芩苷可能成为治疗原发性肝癌的有效手段之一,但是其在保护免疫器官方面还需要进一步研究。     

CDC20在子宫内膜癌中的表达及其对RL95-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：评估细胞分裂周期蛋白20（CDC20）在子宫内膜癌（EC）中的表达,探讨其对EC细胞RL95-2周期和凋亡的影响及可能的机制。方法：从癌症基因组图谱（TCGA）数据库获取EC 的mRNA 表达矩阵以及患者的临床信息,通过R 语言分析CDC20 mRNA的差异表达情况及其与肿瘤分期的相关性,qPCR及WB法检测CDC20在RL95-2细胞中的表达;向RL95-2细胞转染sh-CDC20以敲减CDC20的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测敲减CDC20对RL95-2细胞增殖活力、细胞周期分布和凋亡的影响,WB法分析对Mcl-1/p-Chk1信号活性的影响;建立RL95-2细胞裸鼠移植瘤模型,评估敲减CDC20 对肿瘤生长的抑制作用及对移植瘤组织中Mcl-1/p-Chk1信号轴和细胞凋亡的影响。结果：CDC20在EC组织及RL95-2细胞中呈高表达（均P<0.01）,且CDC20的高表达与EC 的分期有关联。敲减CDC20可显著降低RL95-2 细胞增殖活力（P<0.01）,阻滞细胞周期于G1期（P<0.01）,促进细胞凋亡（P<0.01）,抑制细胞中Mcl-1和p-Chk1的表达（P<0.05 或P<0.01）。敲减CDC20 可显著抑制RL95-2细胞裸鼠移植瘤的生长（P<0.01）,降低移植瘤组织内Mcl-1 和p-Chk1 的表达（P<0.01）,促进移植瘤细胞凋亡（P<0.01）。结论：CDC20在EC组织中呈高表达且与肿瘤分期有关联,敲减CDC20 能够抑制RL95-2细胞及其裸鼠移植瘤的生长而促进凋亡,这可能与Mcl-1/p-Chk1信号轴有关。     

结直肠癌组织中FGF20表达与微血管的相关性

目的:探讨结直肠癌组织中FGF20的表达及其与微血管密度之间的相关性。方法:免疫组织化学染色和Western Blot方法检测结直肠癌组织及正常肠黏膜组织中FGF20的表达或CD34的表达,分析FGF20在癌组织及正常肠黏膜组织中的表达差异以及与临床病理之间的相关性,探讨FGF20的表达与结直肠癌组织中微血管密度的相关性。结果:免疫组织化学和Western Blot结果均提示结直肠癌组织中FGF20表达显著高于正常肠黏膜组织（P＜0.01）;癌组织中FGF20的表达与肿瘤浸润（P＜0.05）及淋巴结转移（P＜0.05）密切相关,与分化程度及肝转移无明显相关（P＞0.05）;癌组织中FGF20的表达与癌组织中微血管密度呈显著正相关（P＜0.05）。结论:FGF20在结直肠癌微血管形成中发挥重要作用,进而促进结直肠癌的发生、发展及远处转移,为明确FGF20在结直肠癌微血管形成中的作用以及深入探讨FGF20促进微血管形成的分子机制提供实验依据。     

SMMC-7721细胞线粒体DNA D—loop区点突变的研究

目的：分析人肝癌细胞株SMMC-7721细胞线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）D—loop区点突变的情况。方法：应用改良-步法提取mtDNA，PCR扩增D—loop区，产物经筛选后测序。结果：在SMMC-7721细胞mtDNAD—loop区发现三处新的点突变位点，分别是16166nt（A→G）、16278nt（C→T）和16362nt（T→C）。结论：SMMC-7721细胞mtDNAD—loop区新发现的点突变可能与肿瘤的发生发展有关。     

肝癌核心家系调查分析及标本数据库的建立

目的对肝癌核心家系进行调查并对其进行分析。建立肝癌核心家系标本数据库,为肝癌遗传易感性的研究提供实验标本和研究资料。方法对经县级及以上医院确诊的肝癌先证者及其血缘父母进行调查和填写调查表,并采集外周静脉血液8ml,其中抗凝血5ml分离、冻存,3ml非抗凝血进行乙肝两对半、AFP及肝功能检测。结果共收集肝癌核心家系251例,具备完整的血样标本及相关资料。调查发现30例家系有肝癌家族史,通过追踪随访新发现肝癌1例。结论建立规范的肝癌核心家系数据库是进行肝癌遗传学研究的基本手段,完善的血样标本及相关资料为后续研究提供了保证,肝癌核心家系标本数据库建立过程中面临的伦理、社会等问题值得探讨。     

单细胞克隆肝癌干细胞向间充质样细胞的分化潜能

探讨单细胞克隆肝癌干细胞（liver cancer stem cell,LCSCs）向间充质样细胞分化的潜能。方法：通过有限稀释法获得单个细胞来源的LCSC克隆,采用RT-PCR法鉴定干细胞标志物;将该单细胞克隆分别用成骨、软骨和脂肪诱导分化培养基培养3周后,采用Real-time PCR及特殊染色技术比较诱导前后LCSC表达成骨、软骨及脂肪细胞特异标志物的差异。结果：单细胞克隆的LCSC表达多种干细胞标志物、干细胞因子（stem cell factor,SCF）、干细胞因子受体、C-kit、巢蛋白（nestin）、CD34、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ATP-binding cassette sub-family G member 2,ABCG2）、CD133。分化诱导培养3周后,成骨方向诱导的细胞茜素红染色呈现橘红色钙结节形成,软骨方向诱导的细胞阿尔新蓝染色显示蓝色蛋白多糖沉积,脂肪方向诱导的细胞油红O染色显示大量脂滴形成。Real-time PCR结果显示,诱导后成骨细胞特异标志物骨钙素和Ⅰ型胶原、软骨细胞特异标志物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原、脂肪细胞特异标志物脂联素和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的mRNA表达均较对照组显著上调（Ⅰ型及Ⅱ型胶原间为P<0.05,其他指标间均为P<0.01）。结论：LCSC具有可塑性,在特定的微环境下具有向间充质样细胞分化的潜能。