Th1型和Th2型细胞因子对人中性粒细胞吞噬结核杆菌活性的影响

Objective To establish a flowcytometry method for detecting phagocysis of Mycobacterium tuberculosis(Mth) by the human peripheral blood neutrophils( PMNs), and to explore the effects of Thl and Th2 cytokine on phagocytotic activity of PMNs. Methods By using acid-fast staining the phagocytosis of Mtb by human neutrophil was observed by microscopy, and the phagocytosis of FTTC labeled Mtb by human neutrophils was detected under confocal microscope. The whole fresh peripheral blood of healthy adults was incubated with FTTC labeled Mtb and the phagocytosis were measured by flow cytometry. The altered phagocytosis of FTTC-Mtb by neutrophils pretreated with IL-2, IFN-γ, GM-CSF or IL-4 were measured. Results Human peripheral blood neutrophils activity of Mtb phagocytosis was observed by acid-fast staining and confocal microscope. The percentage of phagocytosis of Mtb was dependent on the time of incubation with Mtb. The percentages were 47% at 5 min and reached plateau about 66% ～72% at 15 min to 20 min.Pretreatment with different concentrations of IL-2 or IFN-γincreased the phagocytosis of Mtb by 76.7% and 75.2%, respectively; but pretreatment with IL-4 decreased the phagocytosis by 31.7%. Conclusion IL-2and IFN-γcan increase phagocytosis of Mth by neutrophils; while IL-4 can reduced neutrophil activity of phagocytosis of Mtb by human neutrophils, and demonstrate that Th1/Th2 type cytokins involve in regulating the acitvities of neutrophils anti-Mtb infection.     

Th1型和Th2型细胞因子对人中性粒细胞吞噬结核杆菌活性的影响

目的 建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞(PMNs)吞噬结核分枝杆菌(Mtb)的方法 ,并探讨Th1和Th2型细胞因子对PMNs吞噬Mtb活性的影响.方法 运用抗酸染色、激光共聚焦显微镜观察人PMNs吞噬Mtb,并用流式细胞术检测人PMNs对FTTC标记Mtb的吞噬活性.外周血预先分别与IL-2、IFN-γ、GM-CSF和IL-4等细胞因子孵育,再加FTTC标记Mtb后,用流式细胞术检测PMNs对Mtb吞噬率,并与对照组比较吞噬率的变化.结果 抗酸染色和激光共聚焦显微镜均能观测到人PMNs吞噬Mtb.用流式细胞术检测健康人外周血PMNs对Mtb的吞噬率在5 min时为47%,15～20 min达到平台期,为66%～72%.外周血预先加IL-2或IFN-γ作用后,PMNs对Mtb的吞噬率可分别增加76.7%和75.2%;而预先加IL-4作用后,吞噬率降低31.7%.结论 IL-2和IFN-γ对PMNs吞噬Mtb功能有增强作用,而IL-4有降低作用,表明Th1型和Th2型细胞因子参与调节PMNs抗结核杆菌感染的免疫作用.     

IL-12增强结核病患者中性粒细胞吞噬和杀伤结核杆菌的活性

目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(M.tb)吞噬和杀伤功能的影响.方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素( FTTC)标记的M.tb共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对M.tb的吞噬率;结核病患者和正常人外周血均加入2'7’二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用,同时加或者不加M.tb共同孵育不同时间后,用FCM检测PMN的活化率并计算活性氧(ROS)产生量;不同浓度IL-12预先作用外周血后,再用上述方法检测PMN对M.tb吞噬率,活化率及产生ROS的变化.结果:结核病患者和正常人PMN对M.tb吞噬率,PMN活化率和ROS产生均随时间延长而增加,但结核病患者5 min吞噬率(51.82±6.93)％高于正常人(47.20±4.26)％(P＜0.05);IL-12预先作用后,结核病患者和正常人PMN吞噬率、PMN活化率和ROS的产生均随浓度增大而显著增加,两者之间无显著性差异.结论:结核病患者外周血PMN对M.tb的吞噬功能以及ROS产生与正常人无显著性差异,仅早期吞噬率较高.IL-12略增强PMN吞噬和产生ROS的反应能力.     

pHGF对人中性粒细胞吞噬功能的影响

我们曾报道，从乳猪肝脏提取的促肝细胞生长因子（ｐＨＧＦ）能增强小鼠中性粒细胞的吞噬功能，本文进而用吞噬杀菌试验、化学发光技术和促凝血活性试验证明，ｐＨＧＦ也能显著增强人中性粒细胞的吞噬和杀菌功能。     

新生儿感染性疾病中性粒细胞CD64分子变化及临床意义

目的观察新生儿感染性疾病中性粒细胞CD64表达水平及其临床意义。方法将34例新生儿感染性疾病患儿根据其临床表现及实验室检查结果分为败血症12例,非败血症感染22例,以同期收治的非感染性新生儿28例为对照组。采用全血流式细胞术、放射酶联免疫吸附试验及特定蛋白分析仪比浊法分别检测三组患儿CD64指数、IL-6、CRP水平。结果败血症组CD64指数、IL-6及CRP水平均高于非败血症感染组和对照组,差异有显著性意义(P<0.05),非败血症感染组CD64指数、IL-6及CRP水平高于对照组(P<0.05);感染组CD64指数与IL-6呈显著的正相关(P<0.01);败血症组CD64指数随病情好转而逐渐降低。结论新生儿周血中性粒细胞CD64表达水平在感染性疾病时显著升高,并随病情而变化,早期检测意义较大。     

细胞因子与中性粒细胞的凋亡

中性粒细胞（ＰＭＮ）是机体防御系统的主要组成部分。多种细胞因子能调节ＰＭＮ的凋亡，如ＴＮＦ－α能加速ＰＭＮ的凋亡，ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－２，ＩＬ－６和ＩＦＮ－γ等能延缓其凋亡，这些因子对ＰＭＮ凋亡的影响是通过不同机理而实现的。ＰＷＮ以凋亡的方式被机体清除，对于控制炎症组织的损伤和正常情况下炎症的消退都有很重要的意义。     

HIV-1感染患者中性粒细胞吞噬及细胞内杀菌功能的变化

AIDS是世界性传染病,近几年其发病率呈上升趋势,死亡率很高,严重威胁着人类生命和健康.这些患者大多数不是死亡于AIDS本身,而是死亡于后期的机会致病微生物感染和其他微生物的重复感染或合并感染.     

中药对过敏性哮喘大鼠模型Th1/Th2型细胞因子的影响

目的:探讨中药治疗对哮喘大鼠IL- 4 mRNA和IFN-γ mRNA表达及IgE含量的影响.方法:24只Wistar大鼠, 随机分为中药治疗组、空白对照组和哮喘模型组, 利用卵白蛋白(OVA)及氢氧化铝制作大鼠哮喘模型, 在雾化激发期, 中药组用杏仁、甘草等中药制成的溶液雾化大鼠, 其余组用生理盐水代替.采用免疫放射法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法分别检测各组大鼠血清和肺泡灌洗液(BALF)中免疫球蛋白E(IgE)含量以及肺组织IL- 4 mRNA和IFN-γ mRNA表达.结果:与空白对照组比较, 模型组大鼠IgE含量和IL- 4 mRNA的表达明显升高(P<0.05).与模型组比较, 中药治疗血清IgE的含量和IL- 4 mRNA的表达明显降低(P<0.05), 而IFN-γ mRNA表达则升高(P<0.05).结论:IL- 4可能参与哮喘的发生, 而中药治疗可通过抑制IL- 4 mRNA和上调IFN-γ mRNA的合成, 改善哮喘炎症状态.     

肾上腺素对中性粒细胞释放PGE_2和TXB_2的影响

目的 :观察肾上腺素对体外中性粒细胞在A2 31 87刺激下对释放PGE2 和TXB2 的影响。方法 :用无菌的 1%糖元注入大鼠腹腔 ,收集腹水 ,提取PMN。将PMN分成PMN组、A2 31 87组和A2 31 87加ADR三组 ,并用RIA法分别测定上清中PGE2 和TXB2 的含量 ,上述试验过程重复 3次。结果 :PMN释放PGE2 和TXB2 的含量 ( x±s,pg/5× 10 6 细胞 ) ,各组分别为 :( 1)PMN正常对照组 :60 .3± 3 4 .5 ,5 7.4± 12 .3 ;( 2 )PMN +A2 31 87组 ;93 .3 4± 3 2 .6,10 1.9± 3 1.2 ;( 3 )PMN +A2 31 87+ADR组 :15 6.6± 2 8.5 ,169.8± 48.2。且 ( 1)组和 ( 2 )组相比 ,( 2 )组二者的含量显著高于 ( 1)组 (P <0 .0 5 ) ;( 1)组、( 2 )组和 ( 3 )组比 ,且 ( 3 )组二者的含量显著高于 ( 1)组、( 2 )组 (P <0 .0 5 )。结论 :ADR促进由A2 31 87诱导的PMN释放PGE2 和TXB2 含量的增加 ,可能是ADR直接影响了还氧酶活性 ,推测与开启Ca+ + 通道有关。     

Distribution of Th1, Th2, and Th0 and the Th1/Th2 cell ratios in human peripheral and endometrial T cells

PROBLEM: To examine whether normal pregnancy involves type 2 T-helper (Th2) immune condition or not. METHOD OF STUDY: We measured the percentage of Th0, Th1, and Th2 and the Th1/Th2 cell ratios of human peripheral blood and endometrial T cells using flow cytometry, which can analyze both the surface marker CD3, and intracellular cytokines, interleukin 4 (IL-4) and interferon gamma (IFNgamma). RESULTS: No significant differences were found in the percentages of Th1, Th2, and Th0 and the Th1/Th2 cell ratios in the peripheral blood T cells of nonpregnant women and women in early pregnancy. On the other hand, the percentage of Th1 cells was highest during the proliferative phase of the endometrium, followed by the secretory phase and early pregnancy decidua. The percentage of Th2 cells was highest in early pregnancy decidua and lowest during the proliferative phase of the endometrium. The Th1/Th2 ratio was 147.48+/-96.68 during the proliferative phase of the endometrium, 37.74+/-21.33 during the secretory phase, and 1.31+/-0.48 in the early pregnancy decidua. CONCLUSIONS: These data indicate that Th1 cells predominate in the nonpregnant endometrium, especially during the proliferative phase, while Th2 cells predominate in early pregnancy decidua.     

初发SLE病人Th1/Th2及调控因子IL-18基因研究

目的：探讨未经药物治疗初发狼疮病人Th1/Th2细胞亚群分布及其调控细胞因子、细胞因子受体基因表达的差异，试图揭示系统性红斑狼疮发病的免疫紊乱机理。方法：运用三色荧光标记法流式细胞术检测42例未经药物治疗初发狼疮病人细胞亚群分布，并以10例正常人作对照；ABI7700 real-time PCR法同时检测 38例未经药物治疗初发狼疮病人和 28例正常人IL-18及其受体mRNA表达水平的差异。结果：①初发狼疮病人Th1较正常人明显减低（P<0．05），但Th1/Th2无显著性改变。②与正常组相比，SLE组病人IL-18 mRNA及其受体表达较正常人明显降低（P<0．05）；③面部红斑组病人Th1/Th2较正常人明显降低（P<0．05）；④关节炎组SLE病人较无关节炎病人IL-18表达降低。结论SLE是一种以Th1细胞下降，Th2细胞相对占优势的免疫介导的自身免疫性疾病，源于诱导向Th1细胞分化的IL-18及其受体减少和细胞因子间失衡所致。     

化学修饰的糖脂4′″-dh-iGb3对NKT细胞分泌Th1/Th2型细胞因子的影响

为研究两种i Gb3类似物(化学修饰的糖脂4′″-dh-i Gb3和4-HO-i Gb3)对NKT细胞Th1/Th2型细胞因子分泌的影响。采用流式细胞术检测经腹腔注射两种i Gb3类似物后C57BL/6小鼠脾脏NKT细胞数量的变化以及NKT细胞胞内IFN-γ和IL-4的表达水平;用Real-ti me PCR方法检测体外培养的脾脏淋巴细胞与i Gb3类似物共孵育后IFN-γ和IL-4的mRNA表达水平,并用ELISA方法检测孵育上清中IFN-γ和IL-4的含量。结果显示:与i Gb3组相比,经两种i Gb3类似物体内刺激后脾脏NKT细胞的数量都没有显著性变化。糖脂4-dh-i Gb3能够较i Gb3更强地诱导脾脏NKT细胞胞内IFN-γ的表达,也能够上调体外培养的脾脏淋巴细胞IFN-γ的mRNA水平及IFN-γ的分泌,而IL-4在所检测的各个水平上都没有显著性变化。提示化学修饰的糖脂4′″-dh-i Gb3能够诱导C57BL/6鼠脾脏NKT细胞Th1型细胞因子的分泌,而并不显著影响Th2型细胞因子的分泌,从而诱导Th1/Th2型细胞因子平衡向Th1方向偏移。     

正常成人外周血Th1/Th2细胞亚群体外活化的研究

目的:探讨CD4⁺T细胞在体外活化的条件下向Th1或Th2极化的规律。方法:用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人抗凝外周血单个核细胞(PBMC)和血浆,将PBMC置于含或不含有自身血浆环境中,并在植物血凝素(PHA,20mg/L)的刺激下进行培养,培养24、48、72h后收获细胞,分别用双色免疫荧光标记,以流式细胞术对CD4⁺T细胞表达表面分子CCR3、CCR5进行分析。结果:CD4⁺T细胞受自身血浆和PHA刺激后向Th1/Th2两个方向极化,24、48、72h后极化率分别达到(13.28±1.59)%/(12.70±1.65)%、(17.19±1.03)%/(17.50±1.30)%、(19.49±2.87)%/(18.58±1.49)%;而只有PHA刺激的极化率很低,两组有显著性差异(P＜0.01);Th1∶Th2之比约等于1。结论:正常成人外周血CD4⁺T细胞可以在体外自身血浆和PHA的条件下明显极化,而且Th1/Th2细胞处于等值的平衡状态。     

扩张型心肌病小鼠Th1/Th2细胞亚群及其相关细胞因子的分析

目的:探讨体液免疫在扩张型心肌病发病机制中的重要性。方法:以线粒体腺苷酸转位酶(adeninenucleotidetranslocator,ANT)合成肽免疫液免疫小鼠建立扩张型心肌病动物模型(DCM组) ,运用三色荧光标记流式细胞术检测其脾淋巴细胞中Th细胞亚群分布,ELISA法检测其血清细胞因子IFN γ、IL 4、IL 2、IL 6、TNF α的表达及其抗ANT自身抗体的产生。以不含肽的免疫液免疫小鼠为对照组。结果:DCM组小鼠Th1及Th2细胞亚群较对照组均有增多,以Th2更为显著,且Th1/Th2比值明显低于对照组(P均<0 0 1) ;IL 4、IL 6和TNF α表达明显增高,而IFN γ和IL 2却较对照组明显降低(P均<0 0 1) ;抗ANT自身抗体均为阳性,对照组为阴性。结论:ANT合成肽诱导扩张型心肌病时Th细胞均被激活,Th2细胞介导的体液免疫应答在该病发病机理中起着优势作用。     

合并HBV感染的晚期血吸虫病患者外周血Th1/Th2类细胞因子的表达及临床意义

目的 研究合并HBV感染的晚期血吸虫病患者外周血Th1/Th2类细胞因子的表达及临床意义.方法 选择合并HBV感染的晚期血吸虫病患者、乙型肝炎后肝硬化患者、单纯晚期血吸虫病患者各30例,分别设为A、B和C组,分别采用日立7600全自动生化分析仪检测肝功能,lightcycle基因荧光定量分析仪检测HBV DNA,流式细胞检测技术检测外周血Th1和Th2类细胞因子,并进行比较.结果 A组丙氨酸转氨酶水平、天冬氨酸氨基转移酶水平、总胆红素水平高于B组、C组,差异均有统计学意义,(A组与B组比较t=4.725、3.292、3.012;A组与C组比较t=4.568、3.126、3.217,P均＜0.05);A组HBV DNA水平低于B组,差异有统计学意义(t =3.916,P＜0.05).A组外周血IFN-γ、TFN-α表达水平较B组、C组增加,A组与C组之间差异有统计学意义(t =3.652、3.413,P均＜0.05).A组外周血IL-4、IL-13表达水平高于B组,低于C组,但与B组和C组之间结果比较差异均无统计学意义(A组与B组比较t=0.721、0.452、A组与C组比较t=0.625、0.632,P均＞0.05).结论 合并HBV感染的晚期血吸虫病患者,在疾病的发生发展中Th1类细胞因子可能起了重要作用.     

华支睾吸虫感染患者血清Th1/Th2细胞因子水平检测及意义

目的研究华支睾吸虫病患者血清中Th1/Th2细胞因子IL-2和IL-4的水平变化,并探讨其在肝吸虫致病机制中的作用。方法分别采集华支睾吸虫病人和健康人的血清,用ELISA方法检测血清中Th1/Th2细胞因子IL-2和IL-4的水平。结果华支睾吸虫病人血清IL-2的水平与正常对照组相比(P<0.01)显著降低,IL-4的水平与正常对照组相比显著升高(P<0.05)。结论华支睾吸虫感染病人血清细胞因子水平异常,表现为Th1型细胞因子水平下降,Th2型细胞因子水平升高,病人细胞免疫功能下降,体液免疫功能增强升高,本研究结果表明肝吸虫感染后引起的细胞因子紊乱参与肝吸虫致病过程。