大鼠原位肝移植急性排斥模型的建立

我们以Lewis大鼠作为供体,BN大鼠作为受体,建立大鼠原位肝移植急性排斥的动物模型. 一、材料和方法 1.材料:健康雄性Lewis(RTl1)大鼠体质量200～220 g,作为供体;健康雄性Brown,Norway(BN,Rt1n)大鼠体质量220～250 g,作为受体.主要试剂:大鼠白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10、干扰素(IFN)-γ和酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒均购自美国R&D公司.     

大鼠原位肝移植急性排斥模型的建立

我们以Lewis大鼠作为供体,BN大鼠作为受体,建立大鼠原位肝移植急性排斥的动物模型. 一、材料和方法 1.材料:健康雄性Lewis(RTl1)大鼠体质量200～220 g,作为供体;健康雄性Brown,Norway(BN,Rt1n)大鼠体质量220～250 g,作为受体.主要试剂:大鼠白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10、干扰素(IFN)-γ和酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒均购自美国R&D公司.     

单人直视下大鼠减体积肝移植模型的技术改进

减体积肝移植大鼠是研究减体积肝移植免疫、再生较理想的动物模型.我们改进Kamada等[1]的"二袖套法",探索并总结单人建模技巧. 一、材料与方法 1.材料:供、受体均采用雄性SD大鼠,体质量220～280 g,供体略重于受体(5～20 g).显微手术器械一套.自制胆总管支架管、肝下下腔静脉套管和门静脉套管.     

输注供体骨髓细胞诱导大鼠小肠移植基因嵌合的研究

目的 探讨经门静脉途径输注供体骨髓细胞后,大鼠小肠移植中受体基因嵌合率的改变及可能机制.方法 建立大鼠异位节段小肠移植模型(供体为雄性BN,受体为雌性Lewis,各15只),并将其随机分为三组,对照组、FK506组、PV组(喂养FK506及经门静脉注射供体骨髓细胞组).应用原位荧光杂交定位检测以及实时定量聚合酶链反应技术分析供体雄性细胞的SRY基因在移植术后受体大鼠血液、肝脏及脾脏中的嵌合情况.结果 PV组受体雌性大鼠血液(3.03±0.16)%、肝脏(0.86±0.05)%、脾脏(4.08±0.12)%中供体SRY基因嵌合率均较FK506组(1.15±0.07)%、(0.21±0.02)%、(1.23±0.05)%、对照组(1.10±0.07)%、(0.22±0.02)%、(1.17±0.06)%明显增高(P＜0.01).结论 经门静脉系统输注供体骨髓细胞可建立稳定的混和嵌合体状态.     

HO-1修饰的BMMSCs联合常温机械灌注对肝移植急性排斥反应Brown Norway大鼠肠道屏障功能的影响

目的:分析血红素加氧酶-1(HO-1)修饰的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合常温机械灌注(NMP)对肝移植急性排斥反应大鼠肠道屏障功能的影响。方法:无特定病原体4~5周龄、40~60 g雄性Brown Norway(BN)大鼠2只提取BMMSCs,通过腺病毒转导HO-1;24只7~8周龄、200~220 g雄性Le...     

Lewis型至Brown Norway型大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立

目的:建立Lewis(LEN)型到Brown Norway(BN)型大鼠肝移植急性排斥反应模型并观察其排斥反应特点.方法:采用近交系雄性LEW大鼠为供体,BN大鼠为受体,改良"二袖套"法建立模型36例,术后第3、7和10天分别随机解剖8只受体大鼠,检测血清肝功能生化指标,观察肝脏病理组织学变化,剩余受体大鼠观察生存时间.结果:受体大鼠术后第3、7和10天的血清总胆红素分别为(8.75±1.98)μmol/L、(21.12±2.03)μmol/L和(53.63±4.24)μmol/L,丙氨酸转氨酶(ALT)分别为(291.88±6.83)U/L、(462.33±16.98)U/L和(906.25±68.55)U/L,两者术后均逐渐升高;受体大鼠术后第3天光镜下汇管区见混合性炎细胞浸润和静脉内皮炎,伴部分肝实质变性,排斥活动指数(RAI)为4～5;术后第7天排斥反应加重,并出现小胆管增生,RAI为5～7;术后第10天排斥反应最严重,出现明显汇管区结构破坏,肝小叶消失,大量淋巴细胞和单核细胞浸润,静脉内皮炎明显,肝实质桥接坏死,RAI为7～9分;受体大鼠的临床表现及生存情况与病理变化一致.结论:LEW到BN大鼠组合有助于建立稳定可靠的肝移植急性排斥模型,且该模型的排斥反应特点与临床相似.     

双肝移植后移植物萎缩的动物实验探究

目的通过动物实验验证临床双肝移植后移植物萎缩的现象。 方法清洁级雄性SD大鼠18只,8～10周龄,体质量230～250 g,术前禁食12 h。12只SD大鼠作为供体,6只作为受体。建立大鼠双肝移植模型,通过磁共振检查观测受体大鼠术后移植物体积变化。采用成组t检验比较受体大鼠左、右侧移植物体积和重量。P<0.05为差异有统计学意义。 结果移植肝叶均为双右上叶。供肝重量和受体大鼠肝重量分别为(4.30±0.06)和(9.4±0.2)g,移植物与受体大鼠体质量、肝重量比分别为1.79%～1.88%、45.7%～46.8%。手术时间(70±4)min,冷缺血时间(30.0±1.5)min,热缺血时间(12.0±1.5)min,无肝期(20.0±2.5)min。6只受体大鼠双肝移植后1 d行磁共振检查,两侧移植物体积相同;术后15 d行磁共振检查,有3只发生单侧移植物萎缩。 结论大鼠双肝移植后部分受体一侧移植物会发生萎缩。     

MiR-155在大鼠肝移植术后排斥反应中作用机制的研究

目的探讨微小核糖核酸(miRNA,miR)-155在大鼠肝移植术后排斥反应中的作用机制。方法将大鼠分为异系移植模型组(排斥组,n=10),供体为雄性Lewis大鼠,受体为雄性BN大鼠;同系移植模型组(对照组,n=10),供、受体均为雄性Lewis大鼠;两组均按照"二袖套法"建立大鼠原位肝移植模型。术后第7日处死大鼠取血标本和肝组织。检测肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)以及细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-4、干扰素(IFN)-γ的水平;光学显微镜下观察肝组织的病理变化情况。对两组大鼠肝组织样本每组选取3例进行高通量测序,检测排斥反应相关miRNA,进行生物信息学分析,预测并分析其相关的信号通路以及基因。结果肝功能检测显示排斥组大鼠血清中ALT、TB水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P0.01)。外周血细胞因子检测显示,与对照组比较,排斥组的IL-2和IFN-γ水平升高(均为P0.01),IL-4水平下降(P0.01)。病理检查结果提示,与对照组比较,排斥组发生了明显的排斥反应。高通量检测结果示排斥组miR-155表达上调明显,为对照组5.89倍。生物信息学分析提示,miR-155的上调表达与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及T细胞受体信号通路有关,可能参与调节的基因有酵母自噬基因(ATG1)及其同源基因ULK2、胰岛素样生长因子-1(Igf-1)以及G蛋白偶联受体的调节基因(Arrb1)等。结论 miR-155可能促进了大鼠肝移植术后排斥反应的发生发展,涉及此过程的信号通路可能有m TOR、MAPK信号通路及T细胞受体信号途径,ATG1、ULK2、Igf-1以及Arrb1等基因可能参与了此过程。     

大鼠气管移植后肺移植慢性排斥反应模型的建立

闭塞性细支气管炎 (OB)是肺移植术后的主要并发症之一 ,也是导致移植后存活 3个月以上患者死亡的主要原因 ,本实验通过大鼠的气管异位移植来建立肺移植慢性排斥反应的模型 ,为国内OB的研究奠定基础。一、实验材料及方法1.实验组采BN大鼠为供体大鼠 ,Lew大鼠作为受体大鼠 ;对照组采用Lew大鼠做为供体和受体大鼠。均由哈尔滨医科大学附属二院动物实验中心提供。2 .供体气管的切取 :BN大鼠经苯巴比妥 (4 0mg/kg体重 ,腹腔注射 )麻醉 ,颈前区去毛 ,常规消毒后 ,取颈前正中线切口 ,分离皮下组织及颈前诸肌群 ,充分暴露气管 ,将气管全长切下 ,…     

一种大鼠带血管的骨髓移植模型

目的 构建一种简单可靠的带血管的骨髓移植模型.方法 将供体带血管蒂的股骨通过显微血管吻合的方式移植到受体腹股沟区,20只Lewis近交系大鼠随机分3组:同基因移植组Lewis→Lewis;排斥组Lewis→BN;免疫抑制组Lewis→BN,术后给予环孢素A.通过大体和病理学检查观察各组移植物存活情况,流式细胞计数监测外周血嵌合水平.结果 术后30 d,同基因移植组股骨存活良好,骨髓苏木素-伊红(HE)染色与正常骨髓无异,而排斥组第7天即发生显著的排斥反应,骨髓细胞明显减少、坏死,外周血嵌合水平几乎为0;和同系移植组一样,免疫抑制组术后30 d移植物存活良好,术后1、2、3、4周外周血中可检测到供体特异性嵌合,嵌合水平分别为(4.7±2.0)％、(2.2±1.2)％、(1.8±0.9)％、(1.5±0.3)％.结论 带血管蒂的股骨移植是一种简便可靠的骨髓移植模型,可作为一种新的骨髓移植方法诱导免疫耐受.     

肌腱蛋白-C在肝移植术后早期急性排斥反应中的作用

目的 探讨肌腱蛋白-C(TNC)与肝移植术后早期急性排斥反应(AR)的关系.方法 将6只Brown Norway(BN)大鼠和16只Lewis大鼠分为AR组(Lewis→BN,供、受体各6只)和对照组(Lewis→Lewis,供、受体各5只).对两组大鼠移植肝组织进行病理学检查,采用Banff分级评估排斥活动指数(RA...     

氧化应激与糖尿病大鼠nephrin表达及足细胞凋亡的关系

本研究观察,氧化应激对糖尿病大鼠nephrin表达改变及足细胞凋亡的影响,以探讨糖尿病大鼠蛋白尿发生发展的分子机制. 一、材料与方法 1.材料:雄性SD大鼠,体质量170～220 g,由武汉大学动物试验中心提供.褪黑素溶液和链脲佐菌素STZ溶液购自美国Sigma公司.     

粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血后肿瘤坏死因子-α表达的影响及神经保护作用

本研究旨在观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对脑出血后大鼠神经功能改善和脑组织水肿及脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,现报道如下. 一、材料和方法 1.实验动物和分组:健康雄性SD大鼠72只(中山大学实验动物中心提供),体质量220g左右,鼠龄10周.将大鼠随机分为假手术组、脑出血组和G-CSF治疗组,每组24只.据术后处死大鼠的时间不同,各组再分别分为1、3、7、14 d 4个亚组.每小组6只大鼠.     

毛蕊花苷对小鼠异位心脏移植冷缺血再灌注损伤的影响：与NF-κB/NLRP3信号通路的关系

目的评价毛蕊花苷对小鼠异位心脏移植冷缺血再灌注损伤的影响及其与NF-κB/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的关系。方法动物实验:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠18只, 6～8周龄, 体质量24～28 g, 采用随机数字表法分为3组(n=6):对照组(C组)、心脏移植冷缺血再灌注组(I/R组)和心脏移植冷缺血再灌注+毛蕊花苷组(I/R+VB组)。采用cuff套管法颈部异位心脏移植的方法制备小鼠心脏移植冷缺血再灌注损伤模型, C组供体心脏取下后立即移植至受体, I/R组供体心脏于4 ℃保存液保存8 h后移植至受体, I/R+VB组供体与受体小鼠分别于术前3 d时腹腔注射毛蕊花苷20 mg/kg。于再灌注24 h时进行移植物跳动评分后取移植心脏心肌组织, 采用ELISA法检测MDA含量和SOD活性;取部分供体心肌组织, 观察病理学结果;采用Western blot法检测NF-κB、p-NF-κB、NLRP3、ACS和caspase-1的表达;RT-PCR法检测IL-1β、TNF-α及IL-6 mRNA的表达。细胞实验:建立大鼠心肌细胞H9c2冷缺氧复氧模型, 采用随机数字表法将细...     

白细胞介素-18抑制小鼠Lewis肺癌生物学活性及其机制

80年代中期形成的生物调节理论产生了第四大肿瘤疗法-肿瘤生物治疗,在抗肿瘤基础研究与临床实践上愈益显示出其独特的疗效,可望为肿瘤防治开辟一个新的局面[1].白细胞介素-18(IL-18)是新近发现的多效能免疫调节细胞因子.本实验旨在观察其对小鼠Lewis肺癌移植瘤增殖生长与转移的抑制作用,并探讨其作用机制. 一、材料与方法 1.材料:Lewis肺癌细胞株,由福建医科大学药学院惠赠.C57BL/6小鼠,6周龄,雄性,体质量(20±2)g,购自上海斯莱克实验动物有限公司.     

甘油保存的供体皮肤的免疫原性

临床观察到甘油保存异体皮的真皮主要部分保留在创面上的时间较活的异体皮肤更长。为测定其效应,本研究用大鼠模型建立混合淋巴细胞培养(MLC)以测定细胞免疫反应。选择组织高度不相容的近交系大鼠:Lewis(受体)、DA(供体)和BN鼠(对照),均为雄性。动物重250～300克。背部剃毛,切取全厚皮,用解剖刀刮下皮下组织和真皮深层。这些断层皮块平衡在98％甘油中,并在4℃条件下至少保存6个月。实验分四组,每组15只动物。(a)自体     

非协同性异种肝移植模型的探索

我们参照Ｋａｍａｄａ等的方法在成功建立大鼠同种原位肝移植模型的基础上 ,对豚鼠到大鼠的异种原位肝移植模型进行了探索。其主要操作过程与同种相似。由于豚鼠解剖结构的特殊性 ,在某些方面与同种又有所不同 ,主要表现在供肝手术过程方面。一、材料与方法ｌ.实验动物 :供体 :雄性豚鼠 2 0 0～2 50 ｇ ,由第二军医大学动物中心提供 ;受体 :雄性ＳＤ大鼠 2 50～ 30 0 ｇ,由上海寄生虫研究所提供。术前禁食 1 2～ 2 4ｈ ,不禁水。2 .手术 :(1 )麻醉 :供受体均用乙醚麻醉 ,术中给氧 ,术前半小时肌注阿托品0 .2ｍｇ。 (2 )供体手术 :麻醉稳定后…     

大鼠胃旁路术动物模型的建立

胃旁路术治疗2型糖尿病具有很高的治愈率和缓解率,其治疗机制已成为糖尿病研究的热点[1].本研究旨在探讨构建大鼠胃旁路术模型的手术技巧. 一、材料和方法 1.材料:清洁级雄性SD大鼠30只,体质量200-220 g,由中山大学实验动物中心提供.许可证号:SCXK(粤)2009-0011.参照文献[2]经高脂饮食加STZ诱导为2型糖尿病模型.     

大鼠改良式原位肝移植手术技巧探讨

目的 探讨建立稳定大鼠原位肝移植模型的手术操作技巧. 方法成年雄性SD大鼠200只,体重200～250 g;成年雄性Wistar大鼠60只,体重230～280 g,供体体重小于受体约30 g.其中SD大鼠为供、受体的同基因肝移植70只(SD-SD组),SD、Wistar分别为供、受体的同种异体肝移植60只(SD.Wistar组).采用改良二袖套法行大鼠原位肝移植,充分暴露第一肝门,不翻动肝脏先行门静脉灌注;在体一步法离断肝上下腔静脉,不带膈肌环;吻合肝上下腔静脉采用单线连续缝合;双线牵引法安装门静脉袖套.术后充分补液维持大鼠血液动力学稳定. 结果 供体手术时间(38.2 ±2.5)min,受体手术时间(45.6±3.5)min,无肝期(15.1±2.2)min,手术成功率93%,1周存活率92%,与传统二袖套法比较差异有统计学意义(P＜0.05).SD-SD组手术成功64只,受体存活时间2～9个月,平均145 d;术后约3 d 肝功能恢复正常,肝组织病理无明显变化.SD-Wistar组手术成功57只,受体存活时间8～20 d,平均10.5 d;大鼠于术后3～5 d出现急性排斥反应,未经处理后均死亡. 结论 改良式肝移植操作简便,成功率高,可为大鼠原位肝移植实验提供稳定可靠的动物模型.     

多次输注供体脾细胞诱导心脏移植免疫耐受的实验研究

目的　探讨供体脾细胞诱导心脏移植免疫耐受的作用。方法　将 5 0只行腹部心脏移植的纯系雄性Lewis大鼠 ,随机分为未处理组、一次脾细胞组、环磷酰胺组、一次脾细胞 环磷酰胺组、多次脾细胞 环磷酰胺组 ,每组 10只大鼠 ,以 5 0只纯系雄性DA大鼠为供体。观察移植心脏平均存活时间 (MST) ,移植后第 6天观察供体心脏病理学改变 ,供受体间的混合淋巴细胞反应 (MLR)、外源性白细胞介素 2 (IL 2 )对MLR的影响及体外过继转移实验。结果　多次脾细胞 环磷酰胺组供体心脏MST为 (85 3± 7 5 )d ,较未处理组 (7 3± 1 0 )d、一次脾细胞组 (7 9± 0 9)d、环磷酰胺组(8 1± 1 2 )d、一次脾细胞 环磷酰胺组 (2 5 8± 3 5 )d显著延长 (t=0 ,P <0 0 1) ;供体心脏仅见少量炎性细胞浸润 ;供受体间MLR较DA Lewis对照组显著降低 ,差异有显著意义 (P <0 0 1) ;外源性IL 2可以部分逆转DA Lewis耐受组MLR的低反应性 ;其免疫耐受状态可过继转移给正常的同系大鼠。结论　多次输注供体脾细胞联合应用环磷酰胺 ,可成功诱导同种大鼠心脏移植的免疫耐受。