重楼醇提物对非小细胞肺癌细胞活性影响的实验研究

目的:观察中药重楼醇提物对非小细胞肺癌细胞活性的影响。方法:将人大细胞肺癌NCIH460细胞株、人肺腺癌A549细胞株悬液分别接种于96孔细胞培养板中,24 h细胞贴壁后依次加入不同浓度的含重楼醇提物培养液进行干预,并设RPMI-1640培养液为空白对照组。药物干预48 h后,采用MTT法测定不同浓度药物对NCI-H460、A549细胞增殖的影响,使用Hoechst荧光染色法检测对细胞凋亡的影响。结果:与空白对照组比较,重楼醇提物在不同浓度下对NCI-H460和A549两株肺癌细胞的生长均有抑制作用(P0.05~0.001),且呈浓度依赖性;对两种细胞的半数抑制浓度(IC_(50))分别为30μg/ml和15μg/ml。不同浓度的重楼醇提物作用于NCI-H460、A549细胞后,随着药物浓度的增加,凋亡细胞数亦明显增加,并伴随出现细胞的坏死、轮廓不清,甚至细胞解体等。结论:重楼醇提物可明显降低NCI-H460和A549细胞的活性并促进其凋亡,且呈剂量依赖性。     

大分子灵芝多糖对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用

目的:探讨超滤管截留得到的大分子量灵芝多糖(ultrafiltered macromolecular Ganoderma lucidum polysaccharide,UM-GLP)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。方法:以非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299作为研究对象,并以空白培养基和紫杉醇(PTX)处理分别作为空白对照和阳性对照。采用MTT法检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞增殖的抑制作用,划痕实验检测UM-GLP对A549和NCIH1299细胞迁移能力的抑制作用,Transwell实验检测UM-GLP对A549和NCI-H1299细胞侵袭能力的抑制作用。结果:MTT实验结果显示,随着UM-GLP和PTX药物浓度的增加,细胞增殖抑制率明显增加,UM-GLP浓度在0.5~2.0 mg/ml时,与PTX浓度在25~100 nmol/L的抑制效果相仿。A549和NCI-H1299细胞划痕实验结果显示,与空白对照组比较,UM-GLP组和PTX组的迁移距离均明显缩短(P0.05)。Transwell实验结果显示,UM-GLP(2 mg/ml)处理后,非小细胞肺癌细胞侵袭数量显著低于空白对照组(P0.05);并且UM-GLP对A549细胞侵袭能力的抑制作用与紫杉醇组(0.1μmol/L)相当,对NCI-H1299细胞侵袭能力的抑制作用小于紫杉醇组(0.1μmol/L)(P0.05)。结论:大分子量灵芝多糖可有效抑制非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299的增殖、迁移和侵袭能力。     

芹菜素对人肺癌NCI-H1299细胞的生长抑制和凋亡诱导的作用

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H1299细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用。方法体外常规培养NCI-H1299细胞,芹菜素作用终浓度分别为10、20、40、80μmol/L。MTT法测定芹菜素对细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Western blot方法检测芹菜素对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果芹菜素能够抑制NCI-H1299细胞的增殖,并随药物浓度的增加、作用时间的延长,作用更明显;Hoechst 33258染色结果显示,芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和凋亡小体产生等典型的细胞凋亡特征;不同浓度的芹菜素作用24 h,细胞凋亡率逐渐增加,呈一定浓度依赖性;Western blot结果显示,芹菜素处理组细胞Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H1299细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与调控Bax和Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax比值下降有关。     

姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTY法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h 后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h 后,流式细胞仪分析细胞周期.结果亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P＞0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h 后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57 μmol/L 和146.79 μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P＜0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).20 μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.     

干蟾皮醇提物对A549和NCI-H460肺癌细胞活性的影响

目的:观察干蟾皮醇提物抗肺癌细胞生长和促凋亡的作用。方法:将A549、NCI-H460肺癌细胞悬液分别接种于96孔培养板中,细胞贴壁后依次加入不同浓度的含干蟾皮醇提物培养液干预,并设RPMI-1640培养液空白对照组。实验结束,用MTT法测定药物对细胞增殖的影响,Hoechst荧光染色法检测对细胞凋亡的影响。结果:与空白对照组比较,干蟾皮醇提物在不同浓度下对A549和NCI-H460细胞的生长均有抑制作用(P0.05~0.001),且呈浓度依赖性;对两种细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为15μg/ml和1.5μg/ml。不同浓度的干蟾皮醇提物作用于A549、NCI-H460细胞后,随着药物浓度梯度的增加,凋亡细胞数目明显增加,伴随出现细胞的坏死,细胞轮廓不清,甚至细胞解体。结论:干蟾皮醇提物可显著降低A549和NCI-H460细胞的活性及促进其凋亡,且呈剂量依赖性。     

周氏克金岩方提取部位抗A549细胞增殖的研究

目的 观察周氏克金岩方提取部位对肺癌A549细胞生长和凋亡的影响.方法 MTT法观察不同浓度的克金岩方提取部位对肺癌A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞HFL-I生长增殖的影响.Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察A549细胞凋亡的形态变化,同时用流式细胞仪进行细胞周期检测分析.结果 不同浓度提取部位E对A549细胞有不同程度的生长抑制作用;作用48 h后,荧光显微镜下可见A549细胞核固缩,染色质凝聚等凋亡形态学特征;流式检测显示Go/G1期细胞增多,并有凋亡细胞出现.结论 周氏克金岩方提取部位E能够显著抑制肺癌细胞的生长,并对人体正常细胞(胚肺成纤维细胞)无显著影响.     

百草枯半数致死量测定

目的测定百草枯对小鼠的半数致死量(half lethal dose,LD50)。方法60只小鼠随机分为6组,每组10只,雌雄各半。给小鼠灌服不同浓度的百草枯溶液,观察小鼠的中毒症状;采用概率单位法计算百草枯的LD50值及其95%的可信限。结果给药后不同时间内,小鼠出现自由活动减少,濒死时呼吸频率增快、张口呼吸、鼻翼扇动等中毒症状。百草枯的LD50为104.72 mg.kg-1,LD50的95%平均可信限为94.26~116.32 mg.kg-1。结论百草枯属于中等毒性农药。     

miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-424对非小细胞肺癌细胞株A549迁移及侵袭的影响。方法 RT-PCR法检测肺癌细胞NCI-H460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157及人胚肺成纤维细胞MRC-5中miR-424表达,脂质体LipofectamineTM2000将miR-424 inhibitor和miR-424 NC转入A549细胞中,48 h后,RT-PCR法检测miR-424表达,CCK-8法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、转化生长因子-β1(TGF-β1)及p-Smad3的表达。结果 miR-424在肺癌细胞NCIH460、NCI-H1975、NCI-H446、A549、NCI-H1299、NCI-H157中的[(1.78±0.13),(1.69±0.10),(1.89±0.18),(2.88±0.27),(2.52±0.20),(2.49±0.23)]表达量显著高于miR-424在人胚肺成纤维细胞MRC-5中的(0.58±0.05)表达量(P0.01)。与miR-424 NC组比较,miR-424 inhibitor组miR-424表达量显著降低(P0.01),细胞活力下降(P0.01),细胞迁移及侵袭能力降低(P0.01),MMP2,MMP9,TGF-β1及p-Smad3表达量均显著下调(P0.01)。结论 miR-424表达量下调后能通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路进而抑制A549细胞的迁移及侵袭。     

曲古霉素A对肺腺癌细胞NCI-H1299增殖抑制作用及机制

目的观察组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase）抑制剂曲古霉素A（trichostatin A,TSA）对体外培养肺腺癌NCI-H1299细胞生长情况及相关基因表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法MTT法检测不同浓度（0.1、0.2、0.4、2.0μmol/L）的TSA对人肺腺癌NCI-H1299生长的影响,流式细胞术检测处理后NCI-H1299细胞周期分布及凋亡率的变化;Western印迹法检测处理后人肺腺癌NCI-H1299组蛋白H4乙酰化水平的变化;Real-TimePCR检测处理后人肺腺癌NCI-H1299、p21、cyclin B1、Bcl-2和Bax的表达。结果TSA体外能明显抑制NCI-H1299细胞生长,且抑制作用呈明显的剂量、时间依赖性。0.4μmol/L TSA诱导后,流式细胞术检测示细胞阻滞于G2/M期;TSA可明显提高NCI-H1299组蛋白乙酰化水平,并诱导p21和Bax的mRNA表达和抑制Bcl-2和cyclin B1的mRNA表达。结论TSA可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞而发挥体外抗肺腺癌细胞株作用,其作用机制可能涉及组蛋白乙酰化水平以及诱导调控相关基因p21、Bax、Bcl-2和cyclin B1。     

槲皮素对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的 观察槲皮素对肺腺癌A549细胞生长及对hTERT基因表达的影响. 方法以台盼蓝拒染法计数肺腺癌细胞的生长抑制率,透射电镜和DNA Ladder实验了解A549细胞凋亡的发生;PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT mRNA表达.结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈剂量和时间依赖性,槲皮素处理48 h后的IC50为22.5 μmol/L.DNA Ladder实验和透射电镜形态学检测显示出细胞凋亡的特征性变化,细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现.经槲皮素处理后肺腺癌A549细胞hTERT mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制. 结论槲皮素能抑制肺腺癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导A549细胞凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT 基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关.     

伏立诺他衍生物N2E的合成、鉴定及体外抗肿瘤活性研究

目的 合成伏立诺他衍生物N2E并评价其体外抗肿瘤活性. 方法 以辛二酸为原料,先在乙酸酐中回流,使分子内脱水生成辛二酸酐,然后与2-乙氧基苯胺在二氯甲烷中于0 ℃开环胺化得2-乙氧基辛二酸单酰苯胺,再经甲醇酯化和盐酸羟胺胺解得到伏立诺他衍生物N2E;采用质谱、1H NMR、13C NMR等对合成的目标物N2E进行结构鉴定.以人肺癌细胞NCI-H1299、NCI-H460、A549和胶质瘤细胞U251、MGR2为研究对象,采用MTT法考察N2E对这些肿瘤细胞株的抑制效果,同时观察N2E对人正常肝细胞LO-2的细胞毒作用. 结果 目标物经确证为伏立诺他衍生物N2E[N-(2-乙氧基苯)-N′-羟基辛二酰胺],经归一化法测得纯度约为99.1%;N2E对人肺癌细胞NCI-H1299、A549和胶质瘤细胞U251、MGR2的抑制效果强于伏立诺他(P<0.001),而对人正常肝细胞LO-2的细胞毒作用较伏立诺他弱(P<0.001). 结论 通过混合酸酐法成功合成了N2E,N2E体外对多种肿瘤细胞株呈现出显著抗增殖作用.     

白藜芦醇诱导肺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞系A549和H1299细胞增殖与细胞周期阻滞及细胞凋亡之间的联系。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549和H1299细胞增殖的影响;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后A549和H1299中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2、CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达情况;通过流式细胞仪技术检测白藜芦醇诱导A549和H1299细胞凋亡率以及细胞周期阻滞的影响。结果白藜芦醇对A549和H1299的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性;经白藜芦醇处理后,A549和H1299的周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平上调,而周期蛋白CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平下调;A549和H1299的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平上调;流式细胞仪检测A549和H1299的细胞凋亡率随白藜芦醇的浓度上升而增加,流式细胞仪检测细胞周期即可观察到随白藜芦醇的浓度的增加,细胞周期明显阻滞于G1/S期。结论白藜芦醇可能是通过促进caspases通路的活化,从而促进细胞凋亡;周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平的上调和CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平的下调可能是白藜芦醇诱导人肺癌细胞发生G1/S期阻滞的关键机制。     

雷帕霉素对人肺癌细胞株增殖抑制的研究

目的：探讨雷帕霉素对人肺癌细胞株的生长影响及磷酸化核糖体蛋白S6激酶（P-S6K1）的表达在雷帕霉素抑制肺癌细胞增长中的意义。方法：用不同浓度（0、0.1、1.0、10.0、100.0 nmol/L）的雷帕霉素处理人肺癌细胞株,药物敏感试验判断雷帕霉素的敏感株和不敏感株,MTT法检测其对人肺癌细胞增殖的影响。Western blotting观察人肺癌细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路上下游蛋白分子及其磷酸化蛋白的表达,比较P-S6K1在用药前后的表达。结果：4个浓度（0.1、1.0、10.0、100.0 nmol/L）的雷帕霉素持续作用72 h,除H1299细胞株外,对HLAMP、A549和PAa细胞株的抑制率相应增加（P〈0.05）,100.0 nmol/L时的抑制率达到最大（P〈0.05）,A值的变化与抑制率一致。位于mTOR上下游的AKT、S6K1、4E-BP1、eIF4E蛋白在所有细胞株中均有表达,P-S6K1在敏感株中呈高表达,在不敏感株中未检测到。在HLAMP和A549中P-S6K1用药后6、12、18和24 h较用药前有所降低。结论：雷帕霉素能抑制人肺癌细胞生长,P-S6K1在一定程度上可代表肺癌细胞株对雷帕霉素的敏感性。     

肺癌细胞株E - cadherin的表达状态及其与启动子甲基化的关系

[目的]研究肺癌细胞株上皮钙粘蛋白(E - cadherin)的表达与基因启动子甲基化状态的关系.[方法]采用免疫细胞化学法检测肺癌细胞株NCI - H460、SPCA和A549的E- cadherin蛋白表达;半巢式甲基化特异性PCR法(MSP)和微流控芯片技术检测E- cadherin基因启动子甲基化状态.[结果]...     

Effect of lumiracoxib on proliferation and apoptosis of human nonsmall cell lung cancer cells in vitro

Background Lumiracoxib is a highly selective cyclooxygenase-2 （COX-2） inhibitor with antiinflammatory, analgesic and antipyretic activities comparable with class specific drugs, but with much improved gastrointestinal safety. No studies have examined lumiracoxib for antitumorigenic activity on human nonsmall cell lung cancer cell lines in vitro or its possible molecular mechanisms. Methods The antiproliferative effect of lumiracoxib alone or combined with docetaxol on A549 and NCI-H460 lines was assessed by 3-（4, 5-dimethylthiazol-2-yl）-2, 5-diphenyltetrazolium bromide （MTT） assay. Drug-drug interactions were analyzed using the coefficient of drug interaction （CDI） to characterize the interactions as synergism, additivity or antagonism. Morphological changes were observed by acridine orange fluorescent staining. Extent of apoptosis was determined by flow cytometry. Results Lumiracoxib （15-240 pmol/L） has an inhibitory effect on the proliferation of A549 and NCI-H460 cell lines in concentration- and time-dependent manners with the ICso values of 2597 pmol/L and 833 pmol/L, respectively. The synergistic effect was prominent when lumiracoxib （15-240 pmoVL） was combined with docetaxol （0.2-2 pmol/L） （CDI 〈1）. Fluorescent staining showed that lumiracoxib could induce apoptosis in A549 and NCI-H460 cells. Lumiracoxib treatment also caused an increase of the sub-G1 fraction in each cell line and resulted in an increase of G0/Gl-phase cells and a decrease of S-phase cells. Conclusions Lumiracoxib had antiproliferative effect on the human nonsmall cell lung cancer cell lines A549 and NCI-H460 and had a significant synergy with docetaxol, which may be related to apoptotic induction and cell cycle arrest.     

~（99）Tc~m-REG的制备及其在正常小鼠体内分布和药代动力学研究

目的研究99Tc^m-精氨酸-符氨酸-片氨酸（99Tc^m-REG）与肺癌细胞结合及其在正常小鼠体内分布和约代动力学。方法采用99Tc^m直接法标记REG,行99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的结合实验。正常小鼠尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间处死,取主要脏器或组织,测定其每克组织百分注射剂照牢（％ID／g）。另取尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间小鼠血液,测量放射性计数并计算药代动力学参数。尾静脉注射99Tc^m-REG后,测定不同时间荷H1299细胞肿瘤裸鼠肿瘤％ID／g及肿瘤／肌肉比值。结果 99Tc^m直接标记REG的标记率为（92．90±2．86）％。99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的最高结合率分别为（1．29±0．16）％和（2．324-0．31）％。体内分布提示99Tc^m-REG在小鼠血液中清除迅速,2h时放射性仪为注射5min时的20．26％,肝脏内放射性浓聚较多,且旱缓慢下降．肾脏、心、肺放射性摄取随时间逐渐下降,其余组织放射性警低水平。2h肿瘤％ID／g为2．02±0．67,肿瘤／肌肉比值为3．50±1．27。结论99Tc^m-REG具有亲肺癌细胞的特性,有可能成为一种亲肺癌肿瘤显像剂。     

20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的研究20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响,并在裸小鼠人肺癌模型上观察20(S)-原人参二醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)-原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,并且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,24小时凋亡率分别为32.47%、32.75%、33.51%。荷瘤裸小鼠动物实验表明,20(S)-原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为18.78%、34.37%、50.02%。结论20(S)-原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。     

不同放射敏感性肺腺癌细胞株中DNA-PKcs蛋白的表达情况比较

目的 通过检测DNA-PKcs在肺腺癌细胞中的表达情况,探讨其与放射敏感性的关系.方法 成克隆实验分别测定肺腺癌细胞株A549、H1299照射后的剂量.存活曲线,Western blotting及DNA-PK活性分析法检测两株细胞中DNA-Pkcs的含量与活性.分析放射敏感性与DNA-PKcs的关系.结果 成克隆实验结果显示:肺腺癌细胞H1299较A549放射更敏感,SF2分别为A549:0.7412,H1299:0.2473.Western-blot显示A549和H1299积分光密度比值分别为:3.29±0.44、0.50±0.17,A549中DNA-PKcs的表达更高(t=10.37,P<0.001).DNA-PKcs活性检测结果为A549:8.29±1.37.H1299:2.47±1.09(t=5.76,P=0.005).结论 放射敏感性不同的肺腺癌细胞株中DNA-Pkcs的表达不同.提示DNA-PKcs可能是影响肺腺癌细胞放射敏感性的重要因素.

Abstract：

Objective To investigate DNA-dependent protein kinase catalytic subunit (DNA-PKcs) content and activity in lung adenocarcinoma cell lines and its correlation with radiosensitivity. Methods The content and activity of DNA-PKcs were analyzed in two lung adenocarcinoma cell lines A549 and H1299 by Western blotting and the Signa TECT DNA-PK assay kit. The dose-survival relationship for two cell lines was analyzed using clonogenic formation assay. Results A549 was more radiosensitive than H1299. The survival fractions at 2 Gy (SF2) were 0.7412 in A549 cell line and 0.2473 in H1299 cell line. The content of DNA-PKcs was significantly higher in A549 cells than in H1299 cells (t=10.37, P<0.001). The integrated optical densities were 3.29±0.44 in A549 cells and 0.50±0.17 in H1299 cells. DNA-PKcs activities in A549 and H1299 cells were 8.29±1.37 and 2.47±1.09, respectively, showing a significant difference between them (t=5.76, P=0.005). Conclusion DNA-PKcs is an important factor to affect the radiosensitivity of lung adenocarcinoma cell lines.     

TRAIL-Mu3蛋白的体内外抗肿瘤活性及其机制研究

  目的  TRAIL-Mu3是通过将野生型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL)的N端突变为8个连续的精氨酸(第114～122位氨基酸)得到的可溶性蛋白突变体。本研究在前期药物构建和制备已经完成的基础上进一步对TRAIL-Mu3蛋白的体内外药效和机理进行初步探索。  方法  采用CCK-8法检测TRAIL-Mu3对肺癌细胞株NCI-H460、A549、NCI-H1299、calu-1的增殖抑制作用,通过流式细胞术（FCM）检测TRAIL-Mu3对A549和NCI-H460细胞凋亡诱导作用,并通过Western blot法检测体外凋亡相关蛋白死亡受体4（death receptor 4, DR4）、死亡受体5（death receptor 5, DR5）、Caspase-3、Caspase-8、X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP）的表达情况。建立肺癌细胞株NCI-H460荷瘤小鼠移植瘤模型,TRAIL-Mu3给药方式为尾静脉注射,给药频率分为每日注射1次、隔日注射1次、每周注射3次,观察不同给药频率对移植瘤模型的治疗效果,并进行免疫组织化学法检测肿瘤组织凋亡相关蛋白DR4、DR5、Caspase-3、Caspase-8、XIAP的体内表达情况。  结果  通过细胞增殖及凋亡检测等体外实验证实TRAIL-Mu3较野生型TRAIL表现出更强的体外肿瘤细胞毒性和凋亡诱导能力,并可在体外上调DR4、Caspase-3、Caspase-8的表达或活化（P<0.05）。动物实验结果显示,TRAIL-Mu3隔日给药与每周3次给药抑制作用相近,优于每日给药（P<0.05）,但3种给药方案均可显著抑制荷瘤小鼠移植瘤的生长。免疫组化结果表明其可在体内上调DR4、Caspase-3的表达或活化,下调XIAP的活化（P<0.05）。  结论  突变体TRAIL-Mu3通过上调死亡受体DR4的表达、增加凋亡相关蛋白Caspase-3/-8的活化、减少XIAP的活化而展现出良好的体内外抑瘤效果。     

5-Aza-dC在肺癌细胞系中去甲基化作用机制

目的：研究5-Aza-dC对肺癌细胞系中的去甲基化的作用。方法对正常肺细胞以及5-Aza-dC分组处理的A 549、NCI-H 520甲基化特异性PCR和RT-PCR定量检测。结果未处理的A 549和NCI-H 520细胞中TFPI-2表现出完全甲基化特异性。而经过5-Aza-dC处理过的肺癌细胞系细胞则表现出不完全甲基化状态,并呈现出量效关系。A 549和NCI-H 520细胞在经5-Aza-dC处理后TFPI-2基因mRNA表达均明显高于未处理组,差异具有统计学意义（P<0.05）;并呈现出量效关系。结论5-Aza-dC对肺癌细胞中的TFPI-2基因具有去甲基化作用,并具有量效关系。