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抗哈维氏弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研制抗哈维氏弧菌特异性单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析。方法:以哈维氏弧菌GYC1108—1颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与Sp2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,并鉴定mAb特异性及敏感性。结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后,共获得5株抗GYC1108—1的mAb,其中187的细胞上清及腹水效价分别为1:3200和1:32000,交叉反应结果表明187除了与测试的多株哈维氏弧菌发生反应外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌等发生交叉反应。ELISA检测187腹水对GYC1108—1的敏感性达10^7/L。结论:制备的抗哈维氏弧菌mAb可为哈维氏弧菌的检测及防治等提供有用的试剂。 相似文献
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目的:制备高效、特异的抗创伤弧菌的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用创伤弧菌菌体蛋白抗原免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备抗创伤弧菌的杂交瘤细胞株。用ELISA法及Western blot等筛选、鉴定其与创伤弧菌溶血素蛋白(vvhA)及其他重要海洋细菌的交叉反应性和效价。结果:共获得5株抗创伤弧菌的mAb,鉴定结果表明,5株mAb均具有良好的特异性和免疫反应性。结论:获得5株抗创伤弧菌的特异性mAb,为建立创伤弧菌快速检测试剂盒提供了重要制剂。 相似文献
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抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析 总被引:1,自引:1,他引:1
目的: 克隆并分析抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体(mAb)VH及VL基因。方法: 从分泌抗溶藻弧菌独特型mAb的杂交瘤细胞株 (AL1 )中提取总RNA。利用RT- PCR技术,克隆抗溶藻弧菌独特型mAbVH 和VL基因, 并将其重组入PMD18 Tvector中进行测序分析。结果: VH基因序列全长为369bp, 编码 123个氨基酸; VL基因序列全长为 339bp, 编码113个氨基酸。通过国际联机检索及Kabat库分析, 二者均符合小鼠IgGV区基因的特征, 含有 4个框架区 (FR), 3个抗原互补决定区 (CDR)及两个抗体特征性的半胱氨酸残基。结论: 抗溶藻弧菌独特型mAb的VH和VL基因的克隆成功,为抗溶藻弧菌独特型mAb基因工程疫苗的构建奠定了基础。 相似文献
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抗创伤弧菌单克隆抗体细胞系的建立及其特性鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
创伤弧菌感染是海水养殖及野生海水鱼的重要疾病之一,可通过伤口和食物链感染人类,引起较严重的疾病,出现发热、寒战等症状,严重者可发生败血症,其死亡率高达 50% [1]。目前,尚缺乏对此种菌的快速检测及预防措施。我们采用杂交瘤技术,制备了抗创伤弧菌的单克隆抗体(mAb),以期为该菌的快速诊断及预防提供试剂。1材料和方法1.1材料创伤弧菌标准菌种由青岛海洋大学生命学院提供。 Balb/c小鼠(8 wk龄、雌性)由本校动物中心提供。小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0由本室保存。1.2方法1.2. 1mAb的制备将创… 相似文献
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抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体单链抗体ScFv的构建和表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:克隆抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体ScFv。方法:从分泌抗溶藻弧菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,克隆该抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),通过基因重组构建VH-VL的表达载体pTAT-ALI,转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达。结果:VH基因序列全长369碱基对,编码123个氨基酸,VL基因序列全长339碱基对,编码113个氨基酸,二者均符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有4个框架区(FRs)、3个抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的两个半胱氨酸残基。ELISA测定显示基因工程抗体ScFv与原代抗体一样,具有较高的抗原亲和力。结论:成功构建了抗溶藻弧菌独特型抗体ScFv基因并表达于细菌壁膜间隙和包涵体中,为溶藻弧菌独特型抗体单链抗体ScFv成为新一代基因工程疫苗奠定了初步基础。 相似文献
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草鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
目的:研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析.方法:制备草鱼免疫球蛋白IgM, 以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠, 3~4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 用ELISA法对杂交瘤进行筛选, 并鉴定mAb的生物学特性.结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后, 共获得5株抗草鱼IgM的mAbs, 分别命名为4B3、 2B11、 4D5、 3F2和4E6, 它们的细胞上清ELISA效价为1∶ 3 200~1∶ 6 400, 其中4D5的细胞上清及腹水效价分别为1∶ 6 400和1∶ 256 000, 经亚类鉴定结果表明5株mAb均为IgG1.交叉反应结果表明5株mAb均不与台湾甲鱼、泰国甲鱼、日本甲鱼和中华鳖的血清反应, 除mAb 4B3外, 其余4株均与草鱼、青鱼、鲢鱼、鳊鱼和花鱼骨的血清有明显的交叉反应, 而与鲫鱼、鳗鱼的血清只有微弱的反应.mAb 4B3只与草鱼和青鱼的血清有反应, 而与其他鱼类血清反应很弱.免疫印迹实验结果表明mAb 4D5能在变性条件下识别草鱼IgM的重链.ELISA检测mAb 4D5对草鱼IgM的敏感性达10 μg/L.结论:制备的抗草鱼IgM mAb可用于草鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等, 具有广阔的应用前景. 相似文献
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作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,在PEG1000作用下,与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag 14融合,共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3~6个片稳定传代,冻存于液氮中.复苏后其分泌抗体的水平末见下降。 相似文献
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本文采用绿脓杆菌国际标准产毒株PA-103株,纯化绿脓杆菌外毒素A,免疫BALB/c小鼠。免疫鼠血清效价经ELISA法检测达1:80万。取脾脏混悬细胞10^8与10^7Sp2/0细胞,用50%oPEG(MW4,000)融合。取有克隆生长孔上清液用ELISA法筛选分泌抗体阳性孔。 相似文献
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目的构建溶藻弧菌抗独特型抗体的单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母分泌型表达载体,并对其表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法从分泌溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆该抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因(GenBank accession No:DQ011530和DQ011531),并通过基因重组为scFv基因。然后将其克隆入毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K中,经序列测定后,电转化入毕赤酵母菌SMD1168中,将经表型筛选和G418抗性筛选的重组酵母菌株进行PCR鉴定。以甲醇进行诱导表达,表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定。结果获得毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K-scFv,经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株,ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有与溶藻弧菌一样的免疫原性。结论构建溶藻弧菌抗独特型抗体的scFv基因的真核表达载体并成功表达,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。 相似文献
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目的 构建溶藻弧菌抗独特型单链抗体(scFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行免疫原性鉴定.方法从分泌溶藻弧菌抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中已获得的该抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),通过基因重组构建scFv及原核表达载体pET32a-AL,转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达.表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定.结果 scFv基因序列全长747碱基对,编码249个氨基酸,符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有框架区(FRs)、抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的半胱氨酸残基.ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有藻弧菌一样的免疫原性.结论 成功构建了抗溶藻弧菌独特型抗体scFv原核表达载体并表达于包涵体中,表达的融合蛋白具有与溶藻弧菌一样的免疫原性,为溶藻弧菌抗独特型单链抗体scFv成为鱼用基因工程疫苗奠定了初步基础. 相似文献
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抗人白细胞单克隆抗体的特异性及其特性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的制备抗人白细胞单克隆抗体(mAb),并对其识别抗原及组织的特异性进行鉴定。方法采用分离的人全白细胞悬液免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0细胞常规融合,用间接ELISA筛选mAb,流式细胞仪及免疫组化染色SP法鉴定其组织特异性。 结果成功地制备1株抗人白细胞 mAb,命名为SZ-105。ELISA法测定其腹水效价为1×10-5。琼脂糖双扩散鉴定为IgG1类。流式细胞仪间接免疫荧光技术及免疫组化SP法测定表明,mAb SZ-105可选择性地与外周血液的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞呈强阳性反应,而与红细胞及血小板不出现反应。该mAb还可与正常人骨髓的白细胞前体起反应。另外,在肝、肺、脾、胸腺及淋巴结正常组织中的巨噬细胞表面,也有SZ-105抗原表达。SZ-105抗原经亲和层析纯化,再经SDS-PAGE 和Western blot证实,mAb SZ-105识别的抗原是相对分子质量(Mr)为75 000左右的单链蛋白多肽。结论 获得1株具有高度免疫学活性和组织特异性的抗人白细胞mAb SZ-105,其对研究白细胞的分化、免疫功能,以及隐匿性急、慢性炎症疾病的放免显像诊断都具有一定的临床意义。 相似文献
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目的:制备肝癌候选标志物HCCR蛋白的单克隆抗体(mAb).方法:重组表达HCCR-1167-360蛋白用于动物免疫,用含有HCCR蛋白抗原表位YLGTRR的重组蛋白(Ep-HCCR)检测血清抗体效价及筛选阳性克隆.通过ELISA、Western blot、免疫荧光和免疫组化方法鉴定制备的HCCR抗体的性质.结果:获得1株分泌HCCR抗体杂交瘤细胞株,通过ELISA方法测定抗体的亲和力常数为5.4×106L/mol;Western blot结果显示,该抗体能特异识别肝癌HepG2细胞中HCCR-1和HCCR-2蛋白;免疫荧光检测显示,HCCR蛋白主要分布在细胞质和细胞膜中;免疫组化检测到肝癌组织中有HCCR蛋白表达但在正常组织中没有.结论:成功制备了1株抗HCCR特异性mAb,为建立基于HCCR的肝癌检测方法奠定了基础. 相似文献
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制备抗双链DNA(dsDNA)单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究。以活化淋巴细胞的DNA为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体;用体内诱生法制备腹水,以间接酶链反应吸附试验(ELISA)法分析抗体的亚类、特异性和亲和力;用免疫荧光法检测抗体的荧光核型;用考马斯亮蓝法检测注入杂交瘤细胞的小鼠的尿蛋白含量。结果显示,成功获得了1株持续稳定分泌抗dsDNA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6C2;该细胞株所分泌的抗体亚类为小鼠IgG2a,能特异性结合dsDNA,亲和力常数为2.67×10~8mol/L,免疫荧光核型为均质型;将6C2细胞注入正常BALB/c小鼠腹腔后,小鼠的尿蛋白含量较对照组明显增高。结果表明,抗dsDNA单克隆抗体6C2是致病性抗体,对于进一步研究抗dsDNA抗体的致病机制具有重要的价值。 相似文献
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目的: 制备抗醛糖还原酶相似蛋白(aldosereductaselikeprotein, ARL- 1)的单克隆抗体 (mAb)并进行初步应用。方法: 用纯化的ARL- GST蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb。间接ELISA法、Westernblot及免疫组织化学染色法, 对mAb进行鉴定及初步应用。结果: 获得 1株可稳定分泌抗ARL -1蛋白mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类为IgG2b, 轻链属于κ型。腹水mAb的效价为: 1∶4. 096×105。Westernblot的结果表明, ARL 1蛋白在被检测的肝癌组织中呈高表达, 而在相应的癌旁组织中不表达。免疫组织化学染色的结果表明, ARL -1蛋白在肝癌组织中呈高表达且主要定位在胞质内。结论: 成功地制备 1株抗ARL -1蛋白的mAb。初步应用的结果表明, ARL- 1蛋白在肝癌组织中呈高表达, 为进一步研究ARL -1蛋白的功能, 以及其与肝癌的确切关系奠定了基础。 相似文献