核因子E2相关性因子2、血红加氧酶-1蛋白在6-羟基多巴胺诱导帕金森病模型大鼠脑黑质的动态表达

目的观察帕金森病(PD)模型大鼠脑黑质组织核因子E2相关性因子2(Nrf2)、血红加氧酶1(HO-1)蛋白的表达。方法雄性SD大鼠,随机分为假手术组和模型组,每组按时间分为术后6、24、48 h、1、2、4、8 w 7个亚组。采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)左侧纹状体两点注射法建立PD大鼠模型,假手术组注射0.02%抗坏血酸溶液。Western印迹法检测术后各个时间点Nrf2核蛋白、HO-1蛋白动态表达。结果假手术组术后各时间点Nrf2核蛋白、HO-1蛋白低表达,各个时间点相比差异无统计学意义(P0.05)。模型组术后各时间点相比,6 h组Nrf2核蛋白表达升高,24 h组HO-1蛋白表达升高,Nrf2核蛋白与HO-1蛋白于均术后1 w达高峰,2、4、8 w有所回落,与假手术组相应时间点比较仍表达较高(P0.01)。结论6-OHDA造模后可以激活Nrf2核蛋白,进而上调下游靶基因HO-1蛋白的表达,体内内源性抗氧化系统被激活。     

粒细胞集落刺激因子对脑出血大鼠脑水肿及星型胶质细胞可塑性的影响

目的观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠脑出血(ICH)后脑水肿和星型胶质细胞可塑性的影响。方法建立大鼠自体血ICH模型,随机将大鼠分为假手术组、ICH组、G-CSF干预组。干预组于造模1h后腹腔注射重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)60μg/kg。3组大鼠于术后6h、24h、48h、72h、7d、10d处死,干湿重法测定脑组织含水量、免疫组化检测血肿周围人基质金属蛋白酶9(MMP-9)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 ICH组各时间点脑组织含水量高于假手术组和干预组,差异有统计学意义(P<0.05);干预组各时间点MMP-9表达低于ICH组,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组脑组织含水量与MMP-9表达无线性相关(r=0.429,P>0.05),ICH组脑组织含水量与MMP-9表达呈正相关(r=0.922,P<0.05),干预组脑组织含水量与MMP-9表达呈正相关(r=0.844,P<0.05)。假手术组未见GFAP阳性细胞表达;ICH组6h出现少量GFAP阳性细胞表达,48h增多,72h大量表达,7d达高峰,10d表达减弱;干预组GFAP阳性细胞表达在24h、48h、72h、7d、10d较ICH组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 G-CSF可能通过抑制MMP-9表达、下调星形胶质细胞活化对ICH起治疗作用。     

大鼠脑出血后脑组织MMP-9、Omi的表达及意义

目的观察大鼠脑出血（1CH）后脑组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的动态变化及其与线粒体促凋亡因子（Omi）的关系。方法将120只雄性SD大鼠随机分为假手术组和ICH1组（用于检测MMP-9）、ICH2组（用于检测OmimRNA）。在脑立体定向仪下采用自体动脉血注入尾状核法制备ICH模型。于造模后3、6、12、24、48、72、120h及7d用干湿重法测量脑含水量，免疫组化法及RT—PCR法检测脑组织中MMP-9的表达，RT-PCR法检测Omi mRNA的表达。结果ICH组脑含水量各时间点明显高于假手术组（P均〈0．05），术后48h达高峰；ICH后MMP-9表达在6h开始上升，24—48h达高峰，72h时开始下降；Omi mRNA表达在3h开始上升，24—48h达高峰，72h时开始下降。两者表达呈正相关（r=0．995，P〈0．05）。结论MMP-9参与了ICH后灶周围组织神经元凋亡及组织水肿的过程，诱导或加重了神经元凋亡及脑水肿。     

局部应用重组水蛭素对脑出血大鼠的治疗作用

目的观察局部应用重组水蛭素（RH）对脑出血（ICH）大鼠的治疗作用。方法采用自体血注人大鼠尾状核方法建立ICH模型,将大鼠随机分为正常组、模型组和RH干预组。干-湿重法观察各组48h时的脑含水量,HE染色观察6、12、24、48、72h及7d时的血肿周围组织病理改变,免疫组织化学法检测各组血肿周围脑组织Bcl-2、Bax蛋白表达。结果①HE染色：对照组右侧基底节区细胞形态结构完整;模型组血肿周围神经元数目明显减少,组织水肿明显,大量炎性细胞浸润;RH干预组与模型组比较血肿周围水肿带缩小,炎症细胞浸润程度减轻。②脑水肿测定：模型组和RH干预组脑含水量均显著高于对照组（P均〈0．．05）,RH干预组与模型组比较含水量明显降低（P〈0．05）。③免疫组织化学：对照组进针点周围偶见Bcl-2表达,未见Bax表达;模型组和RH干预组Bax、Bcl-2均以出血灶周围表达为主,出血后6h可见Bax阳性细胞表达,24h达高峰,48h后逐渐减少;出血后12h可见Bcl-2明显表达,48h达高峰,7d时仍有表达。RH组Bcl-2表达在12、24、48、72,h与ICH组比较显著增强（P均〈0．01）,Bax表达显著降低（P均〈0．01）。结论凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2参与了ICH后脑损伤;局部应用RH可显著减轻ICH后脑水肿,并可下调促凋亡蛋白Bax的表达、上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,发挥脑保护作用。     

二甲双胍下调水通道蛋白4表达改善大鼠颅脑创伤早期脑水肿的研究

目的探讨二甲双胍对大鼠液压冲击伤后脑组织水通道蛋白4（AQP4）表达的影响及其与颅脑创伤（TBI）后脑水肿的关系。 方法96只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为4组，每组24只。假手术对照组（SO组）行颅骨开窗，不进行液压冲击；单纯脑损伤组（BI组）制备大鼠侧位中度液压冲击脑损伤模型；生理盐水对照组（NS组）在液压冲击伤后30 min腹腔注射0.9%氯化钠注射液；二甲双胍治疗组（MT组）大鼠液压冲击伤后30 min腹腔注射100 mg/（kg·d）的二甲双胍。4组大鼠分别于24、48和72 h进行神经功能评分，并测定脑组织含水量及AQP4蛋白和mRNA表达。 结果BI组、NS组及MT组大鼠在24、48和72 h的神经功能评分均低于SO组，差异具有统计学意义（P<0.05）。BI组大鼠在24、48和72 h脑含水量、AQP4蛋白和AQP4 mRNA表达均高于SO组、MT组，差异均具有统计学意义（P<0.05），与NS组比较差异无统计学意义（P>0.05）。MT组和SO组24 h时的脑含水量、AQP4蛋白和AQP4 mRNA表达比较，差异无统计学意义（P>0.05），48、72 h时均高于SO组，差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论二甲双胍干预可明显降低TBI后脑组织AQP4蛋白和AQP4 mRNA的表达，减轻早期脑水肿，改善大鼠神经功能障碍。     

血红素氧合酶-1在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义

目的探讨血红素氧合酶(HO)-1在糖尿病大鼠视网膜中的表达及意义。方法 30只大鼠根据随机数字法分为对照组(正常大鼠)、糖尿病组(糖尿病模型)、氯高铁血红素(hemin)组(糖尿病模型+hemin治疗)。免疫荧光染色观察视网膜HO-1、核因子相关因子(Nrf) 2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)表达,RT-PCR检测大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK mRNA表达,Western印迹测定各组大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK蛋白表达。结果免疫荧光染色显示:HO-1为绿色荧光,Nrf2、pERK为红色荧光,对照组大鼠只检测到极少量的HO-1、Nrf2、pERK阳性表达。糖尿病组大鼠HO-1、Nrf2、pERK阳性表达均增加,hemin组大鼠视网膜HO-1、Nrf2、pERK阳性表达明显增加。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜HO-1 mRNA和HO-1蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜HO-1 mRNA和HO-1蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜Nrf2mRNA和Nrf2蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。糖尿病组、hemin组大鼠视网膜pERK mRNA和pERK蛋白相对表达量均显著高于对照组(P0. 05),hemin组大鼠视网膜pERK mRNA和pERK蛋白显著高于糖尿病组(P0. 05)。结论糖尿病大鼠视网膜HO-1水平升高,HO-1水平升高可能通过Nrf2/ERK信号通路对糖尿病视网膜发挥保护作用。     

大鼠脑出血后脑红蛋白在脑组织中的表达及其对细胞凋亡的影响

目的 研究实验性大鼠脑出血后脑组织中脑红蛋白的表达及其对细胞凋亡的影响.方法 随机将86只大鼠分为正常对照组、假手术组及脑出血组,应用立体定向技术,将自体未抗凝血注入大鼠基底节区制备脑出血模型.分别在造模后6、24、48、72小时断头取脑制作标本,采用TUNEL染色检测脑组织中细胞凋亡、荧光定量RT-PCR检测脑红蛋白mRNA表达、免疫组化分析脑红蛋白的表达.结果 脑出血后6h血肿周围脑组织脑红蛋白及TUNEL染色阳性细胞表达升高,其中脑红蛋白48h达高峰,72h开始下降,而细胞凋亡72h达高峰,表达均明显高于假手术组和正常对照组,差异有统计学意义（P ＜0.05,＜0.01）;脑红蛋白的表达与细胞凋亡数呈正相关（r=0.51,P＜0.05.结论 脑出血后脑红蛋白表达上调,可能对脑出血继发神经损伤起重要的保护作用.     

β-七叶皂甙钠对大鼠缺血性脑水肿及水通道蛋白4表达的影响

目的研究β-七叶皂甙钠对大鼠脑梗死后脑水肿及水通道蛋白4（AQP4）表达的影响。方法取SD雄性大鼠150只,体质量240～300g。随机分为β-七叶皂甙钠治疗组60只,对照组60只,假手术组30只。各组大鼠又按缺血时间不同（6h和1、3、5、7d）分为5个亚组,其中治疗组和对照组每亚组各12只,假手术组每亚组6只。用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,向治疗组大鼠腹腔注射β-七叶皂甙钠（5mg·kg-1.d-1）,对照组及假手术组在相应时间点注射等量等渗盐水。于造模后6h和1、3、5、7d断头取脑。采用干湿重法观察脑水肿的动态变化,通过HE染色观察脑梗死区的病理学变化,应用免疫组化方法检测脑组织AQP4的表达。结果①脑梗死后6h,病变侧大脑半球脑含水量开始增多,至3d时达高峰,以后逐渐下降,7d时仍高于假手术组。治疗组及对照组脑含水量组内不同时间点比较差异均有统计学意义（F=30.704,F=36.703,均P〈0.01）;各时间点治疗组及对照组梗死侧大脑半球脑含水量均明显高于假手术组（均P〈0.01）,治疗组均低于对照组（P〈0.05～0.01）。②脑梗死后6h,梗死侧AQP4表达水平即增高,3d时达高峰,以后逐渐下降,7d时仍高于假手术组;治疗组和对照组各组内各时间点比较差异均有统计学意义（F=20.878,F=28.489,均P〈0.01）。治疗组及对照组各时间点AQP4的表达均高于假手术组（均P〈0.01）,治疗组AQP4的表达均明显低于对照组（P〈0.05～0.01）。AQP4表达水平与脑含水量呈正相关（r=0.972,P〈0.001）。结论β-七叶皂甙钠能明显减轻脑梗死后脑水肿及降低AQP4的表达,β-七叶皂甙钠可能通过抑制AQP4的表达而减轻脑水肿。     

地塞米松对脑出血大鼠模型脑组织AQP4表达的影响及意义

目的观察地塞米松对脑出血（ICH）大鼠模型脑组织水通道蛋白4（AQP4）表达的影响及意义。方法32只大鼠脑尾状核部位立体定向注入胶原酶建立ICH模型,随机分为观察1、2、3组和对照组各8只后单笼饲养,观察1、2、3组分别腹腔注射地塞米松1、15、30mg/kg,均为2次/d,连续3d;对照组常规饲养。检测各组脑含水量、血脑屏障通透性及脑组织AQP4蛋白及mRNA表达。结果用药3d后观察1～3组血脑屏障通透性、AQP4蛋白及AQP4 mRNA含量均低于对照组（P均〈0.05）,且AQP4蛋白及其mRNA表达与地塞米松呈剂量依赖性关系;观察1组脑含水量较对照组降低（P〈0.05）。结论地塞米松能降低ICH模型大鼠脑组织AQP4表达,此可能为其早期小量使用减轻脑水肿的机制之一。     

Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1和核因子E2相关因子2对大鼠脑缺血再灌注损伤机制

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路介导的氧化应激相关蛋白Keap1、Nrf2和血红素加氧酶1(HO-1)的表达变化。方法将80只SD大鼠随机分为假手术组和模型组,每组40只,模型组采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,假手术组以假手术代替缺血再灌注,仅分离右侧颈总动脉而不插入线栓,分别于模型建立后12h,1d,2d,3d时间点,每组处死10只大鼠。采用化学荧光法测定脑组织活性氧水平,ELISA法检测还原型谷胱甘肽(GSH)活性;分别采用qRT-PCR和Western blot方法观察Keap1、Nrf2和HO-1mRNA及其蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组各时间点脑组织GSH活力显著降低,活性氧水平,Keap1、Nrf2和HO-1表达水平显著升高(P0.05,P0.01)。与12h、3d比较,模型组再灌注1dKeap1、Nrf2和HO-1mRNA(2.82±1.10 vs 2.35±0.96和2.06±0.88,1.62±0.60 vs 1.36±0.59和1.18±0.56,2.32±1.05 vs 1.83±0.97和1.65±0.70)及其蛋白表达最高(1.35±0.14 vs 0.73±0.07和0.94±0.11,0.48±0.04 vs 0.42±0.03和0.44±0.03,0.98±0.17 vs 0.86±0.15和0.82±0.14,P0.05)。结论大鼠脑缺血再灌注损伤后激活了Keap1-Nrf2信号通路,从而发挥抗氧化应激作用。     

褪黑素对脑出血大鼠基质金属蛋白酶表达及神经功能的影响

目的观察褪黑素对脑出血大鼠神经功能缺损及血肿周围组织基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响。方法将SD雄性大鼠85只,随机分为正常组10只、假手术组25只、模型组25只、褪黑素组25只;后2组建立脑出血模型,后3组随机于12h、1、2、4和7d处理,每个时间点5只。修正神经功能缺损评分(NSS)对各组大鼠进行神经功能评估;透射电子显微镜观察出血侧皮质微血管形态;RT-PCR技术定量分析脑组织MMP-2、MMP-9mRNA表达。结果褪黑素组1⁷dNSS低于模型组(P<0.05);褪黑素组和模型组12h7dNSS低于模型组(P<0.05);褪黑素组和模型组12h⁴dMMP-2mRNA水平均逐渐升高,褪黑素组7dMMP-2mRNA明显低于模型组(P<0.05);模型组MMP-9mRNA 2d显著升高,褪黑素组MMP-9mRNA峰值1d出现,7d再次升高,并明显高于模型组(P<0.05)。结论褪黑素能够改善脑出血大鼠神经功能,对脑出血具有保护作用,其机制可能与褪黑素通过调控MMP-2和MMP-9转录,减轻血管源性脑水肿相关。     

大鼠脑出血后血肿周围基质金属蛋白酶2和9及其组织抑制剂1的表达

目的观察大鼠脑出血后血肿周围组织基质金属蛋白酶2、9（MMP-2、MMP-9）及其组织抑制剂1（TIMP-1）的表达规律,探讨它们与脑出血后脑水肿的关系。方法取成年雄性SD大鼠156只,随机分为假手术组（18只）和脑出血组（138只）,脑出血组再分为出血后1、3、6、12、24、36、48、72h和7d亚组（每组15只）。采用自体血注入法建立大鼠脑出血模型,分别用脑组织伊文思蓝（EB）含量测血-脑屏障通透性,用干-湿重法测定脑组织的含水量,用Western blot法观察血肿周围MMP-2、MMP-9和TIMP-1的表达规律。每组3只大鼠用于透射电镜观察脑组织病理学形态。结果①血肿周围脑组织的含水量和EB含量在造模后1h起开始增高,48h达到高峰,各时点（除外术后7d的脑组织含水量）与假手术组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05～0.01）。②在脑出血后1h,同侧基底核MMP-2开始表达,24h达到高峰,48h前各时点与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,术后48h恢复正常;MMP-9在脑出血后6h开始表达,48h达到高峰,7d前各时点与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,术后7d恢复正常;TIMP-1在脑出血后12～36h表达降低,与假手术组比较,差异有统计学意义（P〈0.05～0.01）。③同侧基底核脑组织含水量与EB含量（r=0.940,P〈0.01）、MMP-9表达（r=0.913,P〈0.01）、1～24h MMP-2表达（r=0.903,P〈0.05）呈正相关;与1～24hTIMP-1表达（r=-0.922,P〈0.05）呈负相关。EB含量与MMP-2表达呈正相关（r=0.930,P〈0.01）,与1～24hTIMP-1表达呈负相关（r=-0.950,P〈0.05）。④电镜观察显示,大鼠脑出血后48h,基底核区脑组织血管内皮基底膜遭到明显破坏。结论大鼠脑出血后血肿周围组织MMP-2、MMP-9的表达增加而TIMP-1表达减低,使MMPs与TIMPs之间的平衡遭到破坏,基底膜破坏增加,促进脑水肿的形成。     

AG490对大鼠脑损伤后CD40和CD45表达及神经功能的影响

目的 探讨AG490对大鼠创伤性脑损伤后脑组织CD40、CD45表达以及神经功能状态的影响.方法 取健康雄性SD大鼠180只,随机分为假手术组、创伤组和AG490干预组,每组大鼠60只;各组根据脑损伤时间再分为6、12、24及72 h亚组（各15只）.应用液压冲击法制备大鼠脑损伤模型,采用流式细胞术检测脑组织CD40、CD45的表达,采用大鼠神经功能缺损评分系统对神经功能状态进行评估.结果 ①创伤组伤后各时间点神经功能缺损评分均高于假手术组（P〈0.05或P〈0.01）,其中6 h为高峰期,后呈现逐渐下降趋势.AG490干预组大鼠神经功能缺损评分均较创伤组低,24和72 h时间点差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）.②创伤组脑组织CD40表达水平逐渐升高,24 h达高峰,然后开始降低;CD45表达持续增高,72 h最高.与假手术组比较,各时间点CD40 、CD45表达差异均有统计学意义（P〈0.01）.AG490干预组各时间点CD40 、CD45表达水平均低于创伤组,差异均有统计学意义（P〈0.01）.结论 创伤性脑损伤后,AG490可能通过降低脑组织CD40、CD45的表达促进神经功能的恢复.     

局灶性脑缺血-再灌注大鼠β-连环蛋白表达的变化

目的观察局灶性脑缺血-再灌注大鼠β-连环蛋白(β-catenin)表达的动态变化。方法取60只SD大鼠,采用改良Zea Longa线栓法栓塞大鼠的大脑中动脉,缺血30 min后再灌注3、6、12、24 h和3、7、14、28 d,按数字法随机分为模型组和假手术组。造模后各时间点每组3只大鼠,对假手术组6只大鼠不栓塞大脑中动脉,其余操作与模型组相同。对两组大鼠进行新鲜取材及用4%多聚甲醛灌注取材,每组3只。采用免疫组化法和免疫印迹法分别检测各组大鼠脑室管膜下区(SVZ)和皮质β-catenin蛋白表达情况。结果 (1)免疫印迹检测大鼠脑梗死侧皮质β-catenin表达与假手术组(0.82±0.01)相比,β-catenin表达从缺血-再灌注后3 h开始升高,12 h时下降至最低点(0.55±0.03),随后表达上升,在24 h时达到高峰(1.28±0.07),之后7 d内维持较高水平,但14 d后下降,直至28 d时(0.88±0.02)表达仍高于假手术组。与假手术组比较差异均有统计学意义(P0.01)。(2)免疫组化检测大鼠梗死侧SVZβ-catenin的表达从局灶性脑缺血-再灌注后24 h至28 d时,β-catenin阳性细胞光密度值均高于假手术组(86 581±321),其中在7 d时达到高峰(581 578±29 016),随后下降。以上各时间点与假手术组的比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论大鼠局灶性脑缺血-再灌注后,大脑皮质和SVZ区的β-catenin表达均随时间呈动态变化。提示可能激活了β-catenin参与的调节神经发生的信号通路。而造模后12 h皮质β-catenin蛋白表达的降低,可能是由于缺血急性期多条信号通路发生了负反馈调节所致。     

蛛网膜下腔出血大鼠大脑皮质周期蛋白依赖激酶5的表达

目的 探讨蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后大鼠大脑皮质细胞周期蛋白依赖性激酶5（cyclin-dependent kinase 5,Cdk5）的表达和细胞定位.方法 52只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组（n=12）和SAH组（n=40）,后者再随机分为SAH后6h、12 h、24 h、2d和3d组,每组8只.采用大鼠视交叉前池注血制备大鼠SAH模型.应用蛋白质印迹法、免疫组化法检测大鼠脑皮质Cdk5表达.双标记免疫荧光染色法检测Cdk5蛋白在大脑皮质的细胞定位,神经元核抗原标记神经元,胶质纤维酸性蛋白标记星形胶质细胞.结果 蛋白质印迹显示,SAH后12 h时大鼠脑皮质Cdk5蛋白表达上调（t=3.709,P=0.001）,1d时达高峰（t=3.475,P=0.002）.免疫组化显示,SAH后Cdk5阳性细胞比例也逐渐增高,且时程变化与蛋白质印迹结果一致,于1d时达高峰（=4.320,P=0.000）.双标记免疫荧光检测显示,假手术组Cdk5主要表达于神经元细胞质,而SAH组Cdk5向神经元细胞核中移位.Cdk5主要与星形胶质细胞和神经元之间存在共定位.结论 SAH可使大脑皮质Cdk5蛋白表达上调,Cdk5可能参与了SAH后早期脑损伤.     

络瘀通胶囊对大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用

目的观察并探讨络瘀通胶囊对大鼠脑缺血-再灌注后神经功能的影响及其保护机制。方法采用改良Longa法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血1.5 h后进行再灌注。选取10只大鼠作为假手术组,将40只造模成功的雄性SD大鼠按照随机数字表法分为4组,每组10只:模型组、络瘀通中剂量组(LYTM组)、络瘀通高剂量组(LYTH组)及胞磷胆碱钠组(CS组)。分别于造模后3 d及7 d采用12分评分及前肢踩空实验评价大鼠神经功能,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测造模3 d后大鼠缺血侧及假手术组同侧脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、碱性成纤维生长因子(b-FGF)及磷酸化蛋白激酶/蛋白激酶(p-AKT/AKT)的表达,及造模后7 d同侧脑组织中Caspase-12的表达并进行组间比较。结果 (1)神经功能评分:造模后3 d各组12分评分及前肢踩空实验评分差异均无统计学意义(均P0.05);造模后7 d,LYTM组、LYTH组、CS组较模型组均明显改善(均P0.05)。(2)Western blot结果显示:1模型组BDNF及b-FGF表达明显少于假手术组(均P0.05);与模型组比较,LYTM组、LYTH组、CS组均可上调BDNF和b-FGF表达,以LYTH组作用最明显(P0.01)。2与假手术组比较,模型组p-AKT/AKT表达明显减少(P0.05);与模型组比较,LYTM组、LYTH组、CS组p-AKT/AKT表达增加,以LYTH组和CS组明显,差异均有统计学意义(均P0.05)。3在Caspase-12的表达中,模型组裂解后Caspase-12表达较假手术组明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,LYTM组、LYTH组Caspase-12前体(pro Caspase-12)和裂解后Caspase-12表达有减少趋势,但差异无统计学意义(均P0.05);CS组Caspase-12前体和裂解后Caspase-12表达水平明显低于模型组(P0.05)。结论络瘀通胶囊可通过促进神经元存活及再生对大鼠脑缺血-再灌注性损伤起到保护作用,且该保护作用也可能与抑制神经细胞凋亡有关。     

脑出血大鼠脑内脑源性神经营养因子蛋白及mRNA表达变化与意义

目的观察脑出血模型大鼠脑内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白和mRNA的分布。方法取健康成年SD大鼠39只,随机分为正常对照组(3只)、假手术组(18只)、模型组(18只)。通过微量注射器向苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.4 U建立脑出血模型(模型组),用免疫组织化学方法和原位杂交法分别观察脑出血后2、6 h,1、4、7及14天共6个时间点BDNF蛋白及mRNA的表达变化,以阳性细胞计数作为观察指标。以假手术组、正常对照组作对照。结果脑出血后2 h BDNF蛋白主要表达于血肿周围的小胶质细胞,6 h表达开始增高,1天达高峰,部分表达于神经元,以后逐渐降低,到第7天基本恢复到正常水平,14天后仍可见到少量阳性反应极弱的BDNF阳性细胞;在6 h,1、4天3个时间点上,模型组与正常对照组及假手术组比较差异有显著性(P<0.05);而BDNF mRNA主要表达于神经元,1天后达高峰,7天后两者的表达水平继续下降但仍高于正常,14天后降至基础水平,在6 h,1、4天3个时间点上,模型组与正常对照组及假手术组比较差异有显著性(P<0.01)。结论脑出血后BDNF蛋白及mRNA的表达呈时段性增高。     

脑出血大鼠脑内转化生长因子β_1表达的研究

目的探讨脑出血大鼠脑内转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白和mRNA表达的规律,从而为脑出血后神经功能的修复提供理论依据。方法将75只SD大鼠随机分为3组:正常对照组(5只),假手术组(35只),模型组(35只),通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶,以建立大鼠脑出血模型,用免疫组织化学及原位杂交法检测脑出血后大鼠脑内的TGF-β1表达变化。结果TGF-β1在脑出血3 h已明显表达,6 h表达进一步明显增强,但在12h表达下降,而在1天后第2次升高达到高峰,4~7天减少,14天后消失。在脑出血6 h,TGF-β1主要在神经元表达,部分在小胶质细胞,但没有发现在星形胶质细胞表达。TGF-β1在脑出血早期是全脑普遍性表达,以海马CA1和CA3及3~5层的皮质锥体细胞明显,后期则主要是在血肿周围表达。结论脑出血后大鼠脑内TGF-β1蛋白和mRNA表达的增强,这可能是神经功能修复的主要机制之一。     

小鼠局灶性脑缺血后乙酰肝素酶的表达

目的检测乙酰肝素酶（Hpa）在实验小鼠局灶性脑缺血后的表达,探讨其表达时间和表达位置变化的规律及其意义。方法用结扎大脑中动脉皮质支的方法制作小鼠局灶性脑缺血模型;碰用实时荧光定啦PCR方法检测缺血后Hpa、血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素2（Ang-2）基因的表达;应用免疫荧光双染（Hpa／CD105、Hpa／GFAP、Hpa／BrdU）的方法进一步观察Hpa蛋白表达的情况。结果实验组小鼠脑缺血后,与假手术组比较,HpamRNA于缺血后3d开始在缺血区的表达明显增高（P〈0．05）,14d达到相对高峰（与1、3、7d和假手术组比较,P〈0．05—0．01）。VEGFmRNA和Ang-2mRNA在脑缺血后3d的表达亦明鼹增高（与假手术组比较,P〈0．01）,其中VEGF的表达水平持续增高,而Ang-2则随后降低：免疫荧光双染显示,Hpa在脑缺血后7d时主要表达于新生的微血管,14d时主要与星形胶质细胞共表达：结论Hpa表达时间和表达位置的变化提示,Hpa参与了脑缺血后血管新生和组织修复的过程,推测Hpa可能通过促进VEGF的表达以及星形胶质细胞的增生而发挥其作用．     

脑出血微创血肿清除术后内源性神经干细胞激活的实验观察

目的:观察大鼠脑出血后内源性神经干细胞的激活、增殖状况。方法:采用大鼠尾状核注射自体动脉血建立脑出血模型,将大鼠分为假手术组、脑出血组、微创术干预脑出血组(微创组)3组,在3.0 T磁共振下扫描观察血肿变化及鉴定建模成功,在第1、7、14、21天测评大鼠神经功能评分,检测Nestin与BrdU共表达的内源性神经干细胞激活和增殖及灶周小胶质细胞的活化情况。结果:MRI扫描发现微创术组于7~21 d脑出血后灶周水肿减轻;第7、14天时免疫组化检测发现小胶质细胞激活受抑制,神经功能评分明显高于脑出血组和假手术组(均P0.01);微创组内源性神经干细胞表达于7~21 d呈逐渐增多的趋势,但与脑出血组及假手术组无统计学差异(P0.05)。结论:应用MRI仪器可成功观察大鼠微创血肿清除术和脑出血灶周水肿变化。微创术可减轻脑出血后灶周水肿、减轻神经功能缺损,其机制可能通过促进内源性神经干细胞激活增殖,抑制小胶质细胞活化,提高神经保护作用。