大鼠肾结石钠/二羧基转运蛋白-1的表达变化及碳酸氢钾的干预作用

目的 研究肾组织钠／二按基转运蛋白(SDCTl)与尿构橼酸变化的关系及其在肾结石形成中的作用，并观察碳酸氢钾对SDCT1表达的影响，为制定肾结石防治措施提供新的思路。方法 雄性Wistar大鼠分为对照组、致石剂组及碳酸氢钾干预组。采用Northern blot检测大鼠肾组织SDCT1 mRNA水平的改变，免疫组化方法观察SDCTl在肾组织的分布及表达变化。常规病理观察肾结石形成情况。常规生化方法测定血、尿构橼酸等生化指标。结果 致石剂组大鼠肾组织SDCT1 mRNA水平显著高于对照组；SDCT1分布于近端肾小管刷状缘，其表达量显著高于对照组，尤以扩张的近端肾小管为甚；尿构橼酸水平及尿pH值显著低于对照组；肾结石形成率为100％。碳酸氢钾SDCT1 mRNA水平显著高于致石组；SDCT1表达也显著上调；尿构橼酸水平及尿pH值显著高于致石剂组；肾小管间质等病变明显减轻；肾结石形成率为30％，显著低于致石剂组。结论 肾组织SDCTl表达上调可能是低构橼酸尿的重要原因，与肾结石的形成有密切关系。碳酸氢钾可下调肾结石大鼠肾组织SDCTl的表达，对肾结石的形成具有明显的抑制作用。     

人钠/二羧基转运蛋白2融合蛋白载体的构建及其原核表达

目的：观测和鉴定人钠／二羧基转运蛋白2(hSDCT2)在大肠杆菌中的表达，并分离、纯化其蛋白产物。方法：应用：DNA重组技术，构建重组表达质粒pGEX-hSDCT2；IPTG诱导其表达。采用谷胱甘肽偶联的Sepharose4B亲和层析纯化GST-hSDCT2，经Factor Xa酶切和二次亲和层析后，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western Blotting进行鉴定。结果：成功构建hSDCT2基因融合蛋白载体，SDS-PAGE及Western Blotting显示GST-hSDCT2融合蛋白表达于原核细胞，蛋白产量约占菌体总蛋白量的25％。经酶切及二次纯化后，获得纯化的hSDCT2蛋白。结论：人钠／二羧基转运蛋白2可在大肠杆菌中稳定表达。     

肾小管基底侧钠/二羧基转运蛋白随增龄的表达变化

目的：观察大鼠及人类肾小管基底侧钠/二羧基转运蛋白（NaCD3）随增龄的表达变化规律,并探讨其在肾脏衰老变化中的意义。方法：采用Northern杂交、Western印迹免疫组化染色方法,从基因及蛋白质水平观察大鼠出生后1d、7d、1个月、3、12、24个月及少年、中青年、老年正常人肾组织NaDC3表达变化趋势,并利用生化方法测定大鼠血、尿枸椽酸。结果：（1）大鼠血及尿枸椽酸浓度随鼠龄增长呈现逐渐下降的趋势。（2）大鼠肾组织Northern杂交及Western印迹结果显示随鼠龄增长NaDC3mRNA及蛋白表达逐渐增强的趋势。（3）免疫组化结果显示NaDC3表达于大鼠及人肾脏近端小管基底侧,从大鼠出生后7d开始表达,后随鼠龄增长表达逐渐增强;在人类随年龄增长也呈现表达逐渐增强的趋势。结论：NaDC3可能通过枸椽酸等物质的能量代谢机制参与了机体的衰老过程。     

缺氧诱导因子-1α与葡萄糖转运蛋白-3在胶质瘤中的表达

目的 通过检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-3(glucose transporter-3,GLUT-3)在人胶质瘤中的表达情况,探索其与胶质瘤病理级别之间的关系及两者在病理条件下的表达相关性.方法 采用免疫组织化学法检测52例不同级别胶质瘤标本中HIF-1α与GLUT-3的表达情况,并进行统计学分析.结果 免疫组织化学结果示HIF-1α在正常脑组织和Ⅱ～Ⅳ级胶质瘤中的阳性表达率分别为0.0%、52.6%、83.3%、100.0%;同样,GLUT-3在各组中的阳性表达率分别为0.0%、36.8%、77.8%、100.0%,各组间差异均有统计学意义(P<0.05).结论 HIF-1α与GLUT-3在胶质瘤中的表达与胶质瘤的病理分级密切相关,随着病理级别的升高,HIF-1α与GLUT-3蛋白表达均上调,并且两者间的表达具有相关性.     

葡萄糖转运蛋白1在乳腺癌组织中的表达与ER表达的关系

目的 探讨乳腺癌组织中葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)的表达及其与雌激素受体(ER)表达的关系,为乳腺病变的诊断、预后及治疗提供理论基础.方法 采用免疫组织化学方法 (Envision法)检测乳腺癌组织43例中GLUT-1和雌激素受体ER的表达,并对GLUT-1与EK表达的关系进行相关性分析.结果 GLUT-1阳性产物定位于上皮细胞胞膜和细胞浆.在正常乳腺组织中无阳性表达或散在少数轻微着色,而在乳腺癌组织中有明确阳性表达,差异有显著性(P<0.001);乳腺癌组织中,ER阳性率为48%,EK阴性组GLUT-1表达显著强于EK阳性组(P<0.05).结论 GLUT-1阳性表达与肿瘤恶性转化有关,GLUT-1强阳性提示肿瘤ER受体不足或缺失,靶向GLUT-1可对乳腺肿瘤进行有价值的检测和针对性治疗.     

甲状腺良恶性病变组织中钠碘同向转运蛋白mRNA的表达变化

目的 探讨良恶性病变甲状腺组织中钠碘同向转运蛋白(NIS) mRNA的表达变化.方法 取甲状腺切除术中的新鲜组织标本,根据病理学检查结果分为结节性甲状腺肿组、甲状腺腺瘤组、甲状腺癌组和瘤周甲状腺组织对照组,采用Real-Time PCR技术测定各组甲状腺组织中NIS mRNA表达.结果 与对照组相比,结节性甲状腺肿组、甲状腺腺瘤组、甲状腺癌组甲状腺组织中NIS mRNA的相对表达量显著减少(P＜0.01).在不同病变组,甲状腺癌组NIS mRNA的相对表达量下降更为明显(P＜0.01);结节性甲状腺肿组与甲状腺腺瘤组NIS mRNA的相对表达量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 甲状腺良恶性病变均存在NIS mRNA表达的下调,且以恶性病变更为明显.提示甲状腺病变时甲状腺“碘泵”功能存在不同程度的损害.     

钠—葡萄糖共转运蛋白1在心血管疾病中作用的研究进展

钠—葡萄糖共转运蛋白1(SGLT-1)是钠—葡萄糖共转运家族的一员,主要参与机体葡萄糖的重吸收。近年来,多项研究发现,SGLT-1蛋白可在心脏中表达,且表达水平与心血管疾病的发生发展密切相关,抑制SGLT-1过度表达可能对心血管疾病有保护作用。文章主要就SGLT-1在病理性心肌肥厚、缺血性心脏病、糖尿病心肌病、心律失常和心力衰竭等疾病过程中的作用进行综述,并探讨SGLT-1作为心血管疾病新的治疗靶点的潜力。     

人肺癌组织单羧酸转运蛋白—1基因的表达及其意义

目的：研究人肺癌组织中单羧酸转运蛋白－1（MCT1）基因的表达水平，探索肿瘤治疗新策略。方法：以寡聚脱氧核苷酸为探针，用原位分子杂交法探测人肺癌组织和人正常肺组织MCT1mRNA的表达水平。结果：人 肺癌组织的MCT1mRNA的表达显强于正常肺组织，呈过表达。结论：MCT1基因的过表达可能是肺癌组织细胞的分子生物学特征之一。     

非小细胞肺癌中缺氧诱导因子1α、葡萄糖转运蛋白1和Glypican-3的表达及临床意义研究

目的 探讨肺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(Glut 1)、Glypican-3的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测52例(男35例,女17例;鳞癌32例,腺癌20例)肺癌组织中HIF-1α、Glut 1、Glypican-3的表达.结果 52例肺癌组织中HIF-1α阳性表达36例(69.2%);Glut 1阳性表达38例(73.1%);Glypican-3阳性表达7例(13.5%).肺癌组织Ⅲ～Ⅳ期与Ⅰ～Ⅱ期中高度分化与低分化组比较,HIF-1α、Glut 1阳性表达率均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).肺癌组织有淋巴结转移组与无淋巴结转移组比较,HIF-1α、Glut 1阳性表达率均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).肺癌组织中不同年龄组及不同性别组比较,HIF-1α、Glut 1阳性表达差异无统计学意义(P>0.05).Glypican-3在肺癌组织中与在癌旁组织中阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05).结论 肺癌组织中HIF-1α与Glut 1蛋白阳性表达,HIF-1α与Glut 1阳性表达与肺癌的病理分期、分化程度和淋巴结转移有关,与年龄、性别等无关.Glypican-3在肺癌中表达较低,与癌旁组织中的表达无差异.     

葡萄糖转运蛋白1与肿瘤的关系

葡萄糖转运蛋白1是广泛存在于人体各组织的细胞控制葡萄糖转运的载体,在缺氧及缺血状态下可以出现表达增高。最近的研究发现,在细胞的分化过程其高表达与肿瘤的发生、发展甚至预后都有着一定的关系,可以为肿瘤的诊断、治疗提供新的思路。     

GLUT-1和MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究

目的:探讨葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在低氧培养条件下肺腺癌细胞株A549及非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法:分别采用免疫印迹(Western Blot)、免疫组化法测定缺氧条件下A549细胞及80例NSCLC组织和26例癌旁正常肺组织中GLUT-1和MMP-2的蛋白表达,并分析GLUT-1、MMP-2与临床病理特点之间的关系及两者相互关系。结果:随着缺氧时间的延长,肺腺癌细胞中GLUT-1和MMP-2的蛋白水平呈升高趋势(P<0.01或P<0.05)。NSCLC组织中GLUT-1和MMP-2的蛋白阳性表达率明显高于癌旁正常肺组织(P<0.01)。有淋巴结转移的表达高于无淋巴结转移者,中晚期(Ⅲ+Ⅳ期)肺癌组织中的表达高于早期(Ⅰ+Ⅱ期)(P<0.05或P<0.01)。GLUT-1与MMP-2表达呈正相关(P<0.01)。结论:氯化钴诱导缺氧可以上调GLUT-1和MMP-2在肺腺癌细胞中的表达,使之进一步耐受缺氧。HIF-1α、GLUT-1在NSCLC组织中过度表达,两者协同参与了非小细胞肺癌的侵袭转移。     

2型糖尿病大鼠心肌葡萄糖转运体4的变化及其对葡萄糖和脂肪酸代谢的影响

目的探讨2型糖尿病大鼠心肌葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达与葡萄糖及其脂肪酸氧化代谢的关系,同时观察罗格列酮使用后上述指标的变化。方法24只SD雄性大鼠随机分为实验治疗组(6只)、实验对照组(6只)、正常治疗组(6只)和正常对照组(6只)。采用高脂喂养(40%脂肪、42%碳水化合物和18%蛋白质)4周及小剂量链脲佐菌素(35mg/kg)一次性腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。实验治疗组和正常治疗组给予罗格列酮3mg·kg-1·d-1灌胃2周;各组大鼠进行30min等容离体心脏Langendorff灌注,灌注液含100μU胰岛素、5mmol/L葡萄糖、0.4mmol/L3H软脂酸,测定样本葡萄糖含量及3H2O计数,评估心肌葡萄糖和脂肪酸氧化率;Western印迹法检测心肌细胞膜GLUT4表达水平。结果与正常对照组比较,实验对照组大鼠心肌葡萄糖总氧化量明显较少[(55±6)μmol/g干重vs(69±6)μmol/g干重,P<0.01],葡萄糖氧化比例较少(18%vs25%),脂肪酸氧化率较高(82%vs75%);同时心肌细胞膜上GLUT4的表达量减少53%。与实验对照组比较,给予RSG的实验治疗组,心肌葡萄糖的氧化量较高为(64±6)μmol/g干重(P<0.05),葡萄糖和脂肪酸的氧化比例分别为24%和76%,GLUT4表达量也明显较大(92%vs47%,P<0.01)。结论心肌细胞膜上GLUT4表达减少可能是2型糖尿病心肌葡萄糖和脂肪酸氧化代谢改变的重要原因,罗格列酮通过增加GLUT4的表达,可以提高心肌葡萄糖氧化、降低脂肪酸氧化,这将有助于减轻糖尿病心肌细胞损伤,增强抗缺血的能力。     

Pim-1在非小细胞肺癌中的表达及其与c-M yc的相关性

目的：研究原癌基因Pim‐1在非小细胞肺癌及癌旁正常组织中的表达情况及其与c‐M yc的相关性。方法收集该院胸外科手术切除的非小细胞肺癌患者的肺癌及癌旁正常肺组织标本各30例,统计临床病例资料及跟踪后期病理结果,利用RT‐PCR、qRT‐PCR及免疫组织化学方法检测肺癌及癌旁正常组织中 Pim‐1 mRNA、c‐Myc及 Pim‐1蛋白的表达,分析Pim‐1表达与临床病理特征及c‐Myc表达的相关性。结果在非小细胞肺癌中Pim‐1阳性率、mRNA及蛋白表达量明显高于癌旁组织, mRNA表达量分别为0．798±0．083和0．394±0．107（P＜0．01）,蛋白阳性例数分别为18例及6例（P＝0．002）。Pim‐1蛋白的表达与非小细胞肺癌患者的年龄差距、性别差异、有无吸烟史、肿瘤病理类型及分化程度无关（P＞0．05）,但与有无淋巴结转移及肿瘤的TNM分期有关（P＜0．05）,有淋巴结转移及TNM分期升高,其表达量也随之上调。Pim‐1与c‐Myc蛋白表达呈正相关,相关系数（r）为0．433（P＝0．017）。结论 Pim‐1在非小细胞肺癌组织中呈高表达趋势,且随着存在淋巴结的转移及 TNM 分期的升高,其表达也随之增加。     

人肺癌组织Na+/H+交换蛋白-1 mRNA的表达

目的　通过对人肺癌组织Na /H 交换蛋白 - 1(NHE - 1)mRNA表达的检测 ,探讨肿瘤治疗新的特异靶点。　方法　采用RNA原位分子杂交法 (RNA -IMH)检测了 16例人肺癌组织NHE - 1mRNA的表达。　结果　人肺癌组织NHE - 1mRNA的表达与正常肺组织相比显著增强 ,呈现过表达 ,而各病理类型间无显著差异。　结论　人肺癌组织NHE - 1mRNA的过表达 ,这一有别于正常肺组织细胞的分子生物学特征可能为肿瘤治疗学提供良好的特异靶点     

cIA P与Caspase-7在子宫内膜腺癌组织中的表达及其与预后的关系研究

目的：探索细胞凋亡抑制蛋白cIAP和凋亡蛋白Caspase‐7在子宫内膜癌组织中的表达及与预后的关系。方法选取2009～2010年在河南科技大学第一附属医院行子宫内膜癌根治且术后病理证实为子宫内膜腺癌患者55例,统计发病时组织学分类、病理分期、淋巴结转移、年龄等参数,电话随访无瘤生存期及总生存期,取病理标本石蜡切片行免疫组化,观察cIAP与Caspase‐7的表达,并分析其与各参数的关系。结果cIAP与Caspase‐7的表达水平与子宫内膜癌组织学分类、病理分期、淋巴结转移相关（P＜0．05）,而与肌层浸润、年龄无关（P＞0．05）。cIAP与Caspase‐7阳性表达和阴性表达的患者总生存期之间差异有统计学意义（P＜0．05）。结论子宫内膜腺癌患者cIAP与Caspase‐7的表达水平与肿瘤分级、总生存期具有相关性,或可作为子宫内膜腺癌预后检测指标。     

葡萄糖转运蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨葡萄糖转运蛋白（Glucose transporter，Glut）的两种异构体Glutl、Glut3及缺氧诱导因子-1（Hypoxia induciblefactor-1，HIF-1）的亚基HIF—1α，在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。方法：选取34例手术切除非小细胞肺癌（包括癌组织和癌旁组织）和17例肺良性病变标本，用免疫组织化学法测定Glutl、Glut3及HIF-1α在肺组织中的表达；用RT—PCR半定量检测Glutl、Glut3及HIF-1α的mRNA表达；用Western Blot检测Glutl、Glut3及HIF-1α蛋白的表达，并测两者相关性。结果：Glutl、Glut3及HIF-1α在肺癌组织中mRNA相对含量为0．689&#177;0．245、0．506&#177;0．246、0．693&#177;0．248，对应癌旁组织为0．338&#177;0．157、0．482&#177;0．238、0．351&#177;0．184，Glutl和HIF-1α在肺癌组织中显著升高（P〈0．001），而Glut3差别无显著性（P〉0．05）。Glutl、Glut3、HIF—1α在癌组织中蛋白相对含量为0．582&#177;0．247、0．551&#177;0．251、0．525&#177;0．246，癌旁组织为0．288&#177;0．151、0．436&#177;0．224、0．261&#177;0．135，在肺良性病变中为0．291&#177;0．142、0．402&#177;0．206、0．271&#177;0．176，Glutl和HIF-1α在癌组织中的表达均明显高于癌旁组织（P〈0．001）和肺良性病变组织（P〈0．001）；而Glut3差别无显著性（P〉0．05）。Glutl和HIF-1α在低分化组明显高于中高分化组（P〈0．05），Ⅲ期明显高于Ⅰ和Ⅱ期（P〈0．05），且HIF-1α的表达与Glutl明显相关（r=0．854，P〈0．01）。结论：在非小细胞肺癌中，Glutl和HIF-1a存在高表达，其表达与细胞分化程度、TNM分期密切相关，且Glutl和HIF-1α具有相关性。     

Klotho在急性缺血再灌注性肾损伤中的变化及其与凋亡的关系

目的 观察Klotho蛋白在缺血再灌注急性肾损伤中的表达变化,探讨其在肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法 10只BALB/c小鼠随机分为肾脏缺血再灌注组（I/R组, n=5）和假手术组（Sham组, n=5）,采用双侧肾蒂夹闭术建立肾缺血再灌注模型,于造模后24 h留取小鼠的血清及肾组织。应用酶法分别测定血清尿素氮和肌酐,ELISA法检测血清Klotho蛋白水平,TUNEL染色法检测肾脏细胞凋亡水平,Real-Time PCR及Western blotting技术分别检测肾组织Klotho、Bax、Bcl-2和Caspase-3的基因及蛋白表达,应用Pearson直线相关法分析急性肾损伤时小鼠全身及局部的Klotho水平和肾脏凋亡的关系。结果 与Sham组相比,I/R组小鼠术后24 h肾小管上皮细胞明显变性、坏死,肾脏凋亡细胞明显增加,肾组织cleaved Caspase-3蛋白水平、Bax/Bcl-2 mRNA及蛋白表达比值均显著升高。I/R组小鼠血清Klotho蛋白水平较Sham组小鼠显著降低[（669.89±136.51） pg/mL vs. （2 107.92±549.22） pg/mL,P〈0.01],肾组织Klotho mRNA及蛋白表达分别较Sham组下调约9/10 （P〈0.001）及1/5 （P〈0.05）。相关性分析显示肾组织bax/bcl-2 mRNA比值与血清Klotho蛋白及肾组织klotho mRNA均呈显著负相关（r=-0.833,P〈0.01;r=-0.916,P〈0.001）,肾组织Bax/Bcl-2蛋白比值和肾组织Klotho蛋白也呈显著负相关（r=-0.637,P〈0.05）。结论 缺血再灌注急性肾损伤后小鼠全身及肾组织局部Klotho表达均显著下调,Klotho水平的下降可能与凋亡诱导的肾损害密切相关。     

Fra-1在肝癌中的表达及其与sAFP、血管侵犯的关系

目的 检测Fra-1在肝细胞性肝癌(简称肝癌)及癌旁组织中的表达情况,探讨其与肝癌病理特征间的关系.方法 采用免疫组化法检测Fra-1在60例肝癌及癌旁组织中的表达情况;采用Western blot、实时定量PCR(qRT-PCR)法检测Fra-1在20对冰冻肝癌及癌旁组织中的相对表达量.结果 免疫组化示Fra-1在肝癌组织细胞核中阳性表达率为57%(34/60),细胞质中未见明显表达;而Fra-1在癌旁组织细胞质阳性表达率为23%(14/60),细胞核中未见明显表达.Fra-1在肝癌组织中的表达和血清甲胎蛋白(sAFP)、肿瘤血管侵犯相关(X2=4.538、9.086,P<0.05),而与肝癌患者的肿瘤包膜、肝癌TNM分期、Edmondson分级等其他临床病理特征无明显相关性;Western blot及qRT-PCR检测结果示肝癌组织中Fra-1的相对表达量高于癌旁组织(P<0.01).结论 Fra-1与sAFP及肿瘤血管侵犯相关,提示Fra-1可能参与调控肝癌甲胎蛋白(AFP)的生成并影响肝癌的发展;为肝癌的诊治提供一些新的思路及理论基础.