尖锐湿疣初发患者皮损中Livin和Caspase-3的表达

目的：检测尖锐湿疣（CA）初发患者皮损及正常包皮组织中Livin和Caspase-3的表达。方法：采用免疫组化法检测Livin和Caspase-3在30例CA初发患者皮损和20例正常包皮组织中的表达。结果：Livin和Caspase-3在CA组织的阳性表达率分别为76.67%和43.33%，在正常包皮组织表达率分别为25.00% 和70.00%。Livin 与 Caspase-3在CA组织中的表达强度之间无相关性（r=0.238，P＞0.05）。结论：在CA初发患者皮损中存在Livin高表达和Caspase-3低表达，二者可能共同参与了CA的发生与发展。     

凋亡抑制蛋白生存素在乳腺癌中的表达及其意义：临床标本47例分析

目的探讨凋亡抑制蛋白生存素在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应方法检测47例病理证实的乳腺癌组织和26例正常乳腺组织中生存素的mRNA表达。结果生存素在正常乳腺组织中无mRNA表达，而在61．7％的乳腺癌组织中（29／47）mRNA表达阳性。生存素基因mRNA表达率在病理分级为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级的乳腺癌中分别为36．4％、65％和75％，表现出随分级的升高而升高的趋势（P=0．048）。在浸润型的乳腺癌中，生存素基因的mRNA表达率为71．4％，显著高于非浸润型者（33．3％，P=0．019）。生存素基因的mRNA表达率与年龄无关（P=0．563）。结论生存素的异常表达引起细胞凋亡抑制，对乳腺癌的发生、发展起重要作用，生存素的异常表达提示乳腺癌预后不良。     

Livin和PCNA在尖锐湿疣组织中的表达和意义

目的：探讨凋亡抑制蛋白Livin和PCNA在尖锐湿疣组织中的表达和意义。方法：采用免疫组化SP法分别检测Livin和PCNA蛋白在48例尖锐湿疣组织和10例正常上皮组织中的表达。结果：尖锐湿疣组织中Livin和PCNA蛋白阳性表达率分别为81.25%、89.58%,对照组Livin和PCNA蛋白阳性表达率分别为30.00%、40.00%;尖锐湿疣组织中Livin和PCNA蛋白阳性表达强度多为（＋＋）～（＋＋＋）,对照组多在（-）～（＋＋）。两组Livin和PCNA阳性表达率及表达强度差异均具有统计学意义（P〈0.05）。尖锐湿疣组织中Livin和PCNA表达有相关性（r=0.37,P〈0.01）。结论：尖锐湿疣组织中存在Livin和PCNA高表达,Livin和PCNA的高表达可能对尖锐湿疣的发生发展有一定作用。     

Livin和Smac在基底细胞癌的表达及其意义

【摘要】 目的 探讨凋亡抑制蛋白Livin和促凋亡因子Smac在基底细胞癌中的表达。 方法 用SP法检测80例基底细胞癌组织中Livin和Smac的表达,分析二者表达的相关性。 结果 Livin在基底细胞癌组织中的阳性表达率为77.50%,在正常对照组为3.33%,二者比较,差异有统计学意义（χ2 = 49.04,P ＜ 0.001）。Livin在结节溃疡型和色素型基底细胞癌中的阳性表达率分别为75.41%和80.00%,二者比较,差异无统计学意义（χ2 = 0.001,P ＞ 0.05）。Livin在结节囊肿型和色素型基底细胞癌中的阳性表达率分别为73.58%和80.00%,二者比较,差异无统计学意义（χ2 = 0.03,P ＞ 0.05）。Smac在基底细胞癌组织中的阳性表达率为46.25%,在正常对照组为100%,二者比较,差异有统计学意义（χ2 = 26.47,P ＜ 0.001）。Smac在结节溃疡型和色素型基底细胞癌中的阳性表达率分别为47.54%和40.00%,二者比较,差异无统计学意义（χ2 = 0.28,P ＞ 0.05）。Smac在结节囊肿型和色素型基底细胞癌中的阳性表达率分别为45.28%和40.00%,二者比较,差异无统计学意义（χ2 = 0.13,P ＞ 0.05）。Livin和Smac在基底细胞癌中的表达呈负相关（r = -0.432,P ＜ 0．01）。 结论Livin的过表达和Smac的低表达可能在基底细胞癌的发生、发展中起一定作用。 【关键词】 肿瘤,基底细胞; 凋亡抑制蛋白质类; 凋亡调节蛋白质类     

靶向生存素的小干扰RNA抑制人黑素瘤M14细胞系生长的研究

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）对人黑素瘤M14细胞系生存素基因表达的抑制作用及对细胞凋亡、增殖和侵袭的影响。方法 构建靶向生存素的siRNA表达质粒,用脂质体法转染M14人黑素瘤细胞。RT-PCR检测M14细胞生存素mRNA的表达,Western印迹检测生存素蛋白的表达,流式细胞仪检测AnexinV标记的凋亡细胞,噻唑蓝（MTT）法分析细胞增殖,Transwell法分析侵袭能力。结果 与M14细胞和转染空载体的M14细胞比较,转染siRNA的表达质粒可以明显抑制生存素基因在转录和翻译上的表达。M14组和空载体组几乎无凋亡细胞,siRNA表达质粒组的凋亡率明显增加（χ2 ＝ 31.55,P < 0.01）。细胞增殖抑制率（63.6% ± 1.6%）也明显增加,同时Transwell细胞侵袭实验显示,siRNA表达质粒转染组抑制作用显著。结论 靶向生存素的siRNA表达质粒可以特异性抑制生存素的表达,显著抑制肿瘤细胞增殖和侵袭并诱导细胞凋亡。     

生存素mRNA和Caspase-3蛋白在尖锐湿疣组织中的表达

生存素(survivin)是近年来发现的一种凋亡抑制基因,参与肿瘤发生与发展^[1]。Caspase-3是半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中重要的凋亡执行者之一,与细胞凋亡关系密切。尖锐湿疣也存在增殖和凋亡异常^[3]。我们应用原位杂交和免疫组化法分别检测尖锐湿疣中生存素mRNA和Caspase-3蛋白表达,探讨它们与尖锐湿疣的关系。     

Livin和Smac在尖锐湿疣组织中的表达

目的 探讨凋亡抑制蛋白Livin和促凋亡因子Smac在尖锐湿疣组织中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测58例尖锐湿疣组织中Livin和Smac的表达。结果 尖锐湿疣组织中Livin和Smac阳性表达率分别为81.03%（47/58）、77.59%（45/58）,正常人对照组Livin和Smac阳性表达率分别为25.00%（5/20）、35.00%（7/20）;尖锐湿疣组织中Livin和Smac阳性表达强度多为（++） ~ （+++）,正常人对照组多在（- ） ~ （++）。两组Livin和Smac阳性表达率及表达强度差异均具有统计学意义（P < 0.05）。尖锐湿疣组织中Livin和Smac表达呈正相关（r = 0.373,P < 0.01）。结论 尖锐湿疣组织中存在Livin和Smac过表达,Livin和Smac的过表达可能对尖锐湿疣的发生发展有一定作用。     

Survivin与皮肤恶性肿瘤

生存素（survivin）是凋亡抑制蛋白（IAP）基因家族新成员。具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂及参与肿瘤血管形成等多重功能，于多种肿瘤组织中高表达而在正常成人组织中一般不表达。Survivin在皮肤恶性肿瘤中高表达，与皮肤恶性肿瘤的演主莹、复发、预后、耐药及病人生存率等有关，可作为皮肤恶性肿瘤诊断及治疗新的切入点，     

尖锐湿疣组织生存素基因外显子1甲基化的检测及意义

目的 研究尖锐湿疣（CA）组织生存素基因外显子1区CpG岛甲基化与其基因表达的关系,探讨生存素在CA组织中的表达及其调控机制。方法 采用免疫组化方法检测30例CA皮损、10例正常宫颈、10例正常包皮组织中生存素的表达;运用RT-PCR方法检测生存素的转录水平;用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测生存素外显子1 CpG岛甲基化状态。结果 生存素蛋白和mRNA在CA组的阳性表达率分别为90%、93.3%,而正常对照组分别为5%、5%,两组间差异均有统计学意义（χ2 = 35.187、38.437,P值均 < 0.01）;生存素基因外显子1 CpG岛去甲基化率在30例CA组织为86.7%,而在20例正常组织为15%,组间比较差异有统计学意义（χ2 = 10.865,P < 0.01）,且生存素外显子1 CpG岛去甲基化和mRNA表达呈显著正相关（χ2 = 13.929,P = 0.014）。 结论 生存素在CA的表达可能与其外显子1区CpG岛去甲基化有关,并可能在CA的发生过程中起一定作用。     

生存素小分子干扰RNA对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及生物学功能的影响

目的 探讨生存素小分子干扰RNA（siRNA）对皮肤鳞状细胞癌A431细胞生存素基因表达及细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响。方法 培养的A431细胞分为3组：生存素siRNA组、阴性对照组和空白对照组,分别用50.0 nmol/L脂质体包裹的生存素基因序列特异性siRNA、无关序列siRNA阴性脂质体及预制囊泡转染。实时定量反转录-聚合酶链反应（RT?PCR）、Western印迹法分别检测A431细胞生存素mRNA及蛋白的表达。采用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭双染法检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭力,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 转染后48 h,生存素siRNA组、阴性对照组、空白对照组A431细胞中生存素mRNA水平分别为0.56 ± 0.15、0.88 ± 0.37、0.90 ± 0.43,蛋白表达水平分别为0.59 ± 0.04、0.86 ± 0.05、0.91 ± 0.07,差异均有统计学意义（F = 276.67、243.61,均P < 0.001）,且生存素siRNA组生存素mRNA和蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义（P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（均P > 0.05）。重复测量方差分析显示,转染生存素siRNA能抑制A431细胞增殖（F = 13.19,P = 0.004）,且生存素siRNA组A431细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组（均P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后24 h, 3组间A431细胞凋亡率差异有统计学意义（F = 83.97,P = 0.002）,且生存素siRNA组A431细胞凋亡率显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05）,而阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（P > 0.05）。转染后48 h,生存素siRNA组G2/M期细胞比例显著高于阴性对照组（P < 0.05）和空白对照组（P < 0.05）,而生存素siRNA组A431细胞迁移数及侵袭数均显著低于空白对照组（均P < 0.05）和阴性对照组（均P < 0.05）。结论 生存素序列特异性siRNA能抑制A431细胞生存素基因表达和细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,提示生存素可成为皮肤鳞状细胞癌基因治疗的靶点。     

治疗剂量窄谱中波紫外线对B1OBR黑素细胞增殖、凋亡及黑皮素受体-1表达的影响

目的 通过观察311 nm窄谱中波紫外线(NB-UVB)对黑素细胞增殖、凋亡及黑素合成的影响,探讨NB-UVB在白癜风复色中的可能机制.方法 永生化B10BR黑素细胞,采用400、800、1200 mJ/cm2的311 nm NB-UVB照射,MTT法及流式细胞仪测定细胞增殖及凋亡变化,NaOH法测定黑素含量变化,RT-PCR方法测定B细胞淋巴瘤-2(BCL-2)表达变化,免疫细胞化学方法及Western印迹测定黑皮素受体-1(MC-1R)表达.结果 用不同剂量NB-UVB照射B10BR后,黑素细胞的增殖和凋亡没有显著变化.但随着NB-UVB照射剂量增加,黑素合成呈剂量依赖性增加,分别为正常对照组的1.42倍、1.78倍、2.05倍.BCL-2的表达显著增加,分别为正常对照组的1.75倍、2.32倍、3.28倍.黑素细胞MC-1R蛋白表达也显著增加,分别为对照组的1.68倍、2.35倍、3.01倍.结论 治疗剂量的311 nm NB-UVB不会导致黑素细胞凋亡,并且可以通过上调BCL-2及MC-1R的表达,增强黑素细胞的抗氧化应激能力,促进黑素合成.     

Livin和Caspase-3在皮肤基底细胞癌和皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及相关性分析

目的了解皮肤基底细胞癌和皮肤鳞状细胞癌组织中Livin和Caspase-3的表达情况及二者的关系。方法采用免疫组化法检测25例基底细胞癌、18例鳞状细胞癌组织中Livin和Caspase-3的表达情况。结果①Livin蛋白在正常皮肤组织中不表达,基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中Livin蛋白的阳性表达率分别为64.00%和72.22%。②Caspase-3在正常皮肤组织中表达,且明显高于基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中Caspase-3的表达。③Caspase-3的表达与Livin的表达呈显著负相关。结论Livin在基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中高表达,Caspase-3蛋白在基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中低表达,且与Livn的表达呈负相关,提示二者可能共同参与基底细胞癌和鳞状细胞癌发病过程。     

Radiosensitization of human melanoma cells by ribozyme-mediated inhibition of survivin expression

Survivin is a structurally unique member of the inhibitors of apoptosis protein family and is involved in the control of cell division and inhibition of apoptosis. The notion that survivin is overexpressed in most human tumors but absent in normal adult tissues with only a few exceptions has led to the proposal of survivin as a promising therapeutic target for novel anticancer therapies. In this context, we generated a hammerhead ribozyme targeting the 3' end of the CUA110 triplet in the survivin mRNA. Two human melanoma cell lines (JR8 and M14) overexpressing survivin were stably transfected with the pRc/CMV vector carrying the ribozyme sequence. Two polyclonal cell populations proven to endogenously express ribozyme and characterized by a markedly lower survivin protein level (-60% and -50%, respectively) than JR8 and M14 parental cells were selected for the study. Ribozyme-expressing cells showed a significantly (p<0.01) increased sensitivity to gamma-irradiation (as detected by clonogenic cell survival) compared to JR8 and M14 cells. Moreover, in the JR8 cell line, the extent of radiation-induced apoptosis (in terms of percentage of apoptotic nuclei in cells stained with propidium iodide and level of caspase-3 catalytic activity) was markedly greater in ribozyme-expressing cells than in parental cells. These results demonstrate for the first time that attenuation of survivin expression renders human melanoma cells more susceptible to gamma-irradiation.     

扁平苔藓皮损中Caspase-9和Apaf-1的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨扁平苔藓皮损中Caspase-9、Apaf-1的表达及其与细胞凋亡的关系。方法 采用DNA末端转移酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL法）和免疫组化的方法检测30例扁平苔藓皮损和30例正常人皮肤组织中细胞凋亡和Caspase-9、Apaf-1的表达情况,采用RT-PCR检测10例扁平苔藓皮损和8例正常人皮肤组织中Caspase-9 mRNA的表达情况。结果 扁平苔藓组表皮层角质形成细胞的凋亡指数（AI）为75.67 ± 9.4,正常人对照组为38.15 ± 9.6,两组比较,差异有统计学意义（P ＜ 0.05）;Caspase-9和Apaf-1表达的阳性单位分别为14.45 ± 2.72和11.93 ± 3.14,明显高于正常人对照组（P ＜ 0.01）;而且Caspase-9 mRNA的表达量（2.304 ± 0.417）与正常人对照组（1.605 ± 0.381）比较,差异有统计学意义（P ＜ 0.01）。扁平苔藓皮损中Caspase-9、Apaf-1阳性表达强度均与其自身角质形成细胞的AI呈正相关（r = 0.96和0.94,P ＜ 0.01）。结论 扁平苔藓皮损中角质形成细胞凋亡亢进可能与扁平苔藓的发生有关,Caspase-9、Apaf-1与角质形成细胞的凋亡关系密切。     

尖锐湿疣组织生存素基因外显子1甲基化的检测及意义

目的研究尖锐湿疣(CA)组织生存素基因外显子1区CpG岛甲基化与其基因表达的关系,探讨生存素在CA组织中的表达及其调控机制.方法采用免疫组化方法检测30例CA皮损、10例正常宫颈、10例正常包皮组织中生存素的表达;运用RT-PCR方法检测生存素的转录水平;用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测生存素外显子1 CpG岛甲基化状态.结果生存素蛋白和mRNA在CA组的阳性表达率分别为90%、93.3%,而正常对照组分别为5%、5%,两组间差异均有统计学意义(x2=35.187、38.437,P值均<0.01);生存素基因外显子1 CpG岛去甲基化率在30例CA组织为86.7%.而在20例正常组织为15%,组间比较差异有统计学意义(x2=10.865,P<0.01),且生存素外显子1 CpG岛去甲基化和mRNA表达呈显著正相关(x2=13.929,P=0.014).结论生存素在CA的表达可能与其外显子1区CpG岛去甲基化有关,并可能在CA的发生过程中起一定作用.     

尖锐湿疣组织生存素基因外显子1甲基化的检测及意义

目的研究尖锐湿疣(CA)组织生存素基因外显子1区CpG岛甲基化与其基因表达的关系,探讨生存素在CA组织中的表达及其调控机制.方法采用免疫组化方法检测30例CA皮损、10例正常宫颈、10例正常包皮组织中生存素的表达;运用RT-PCR方法检测生存素的转录水平;用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测生存素外显子1 CpG岛甲基化状态.结果生存素蛋白和mRNA在CA组的阳性表达率分别为90%、93.3%,而正常对照组分别为5%、5%,两组间差异均有统计学意义(x2=35.187、38.437,P值均<0.01);生存素基因外显子1 CpG岛去甲基化率在30例CA组织为86.7%.而在20例正常组织为15%,组间比较差异有统计学意义(x2=10.865,P<0.01),且生存素外显子1 CpG岛去甲基化和mRNA表达呈显著正相关(x2=13.929,P=0.014).结论生存素在CA的表达可能与其外显子1区CpG岛去甲基化有关,并可能在CA的发生过程中起一定作用.     

尖锐湿疣组织生存素基因外显子1甲基化的检测及意义

目的研究尖锐湿疣(CA)组织生存素基因外显子1区CpG岛甲基化与其基因表达的关系,探讨生存素在CA组织中的表达及其调控机制.方法采用免疫组化方法检测30例CA皮损、10例正常宫颈、10例正常包皮组织中生存素的表达;运用RT-PCR方法检测生存素的转录水平;用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测生存素外显子1 CpG岛甲基化状态.结果生存素蛋白和mRNA在CA组的阳性表达率分别为90%、93.3%,而正常对照组分别为5%、5%,两组间差异均有统计学意义(x2=35.187、38.437,P值均<0.01);生存素基因外显子1 CpG岛去甲基化率在30例CA组织为86.7%.而在20例正常组织为15%,组间比较差异有统计学意义(x2=10.865,P<0.01),且生存素外显子1 CpG岛去甲基化和mRNA表达呈显著正相关(x2=13.929,P=0.014).结论生存素在CA的表达可能与其外显子1区CpG岛去甲基化有关,并可能在CA的发生过程中起一定作用.