中药复方对免疫介导小鼠再生障碍性贫血红系造血祖细胞的影响

目的研究中药复方地甘口服液、红霖四物口服液对免疫介导再障小鼠模型骨髓红系造血祖细胞体外增殖影响。方法选用Ｂａｌｂ／ｃ小鼠为实验对象,在注射ＤＢＡ／２小鼠胸腺、淋巴结混合细胞后,立即接受亚致死剂量射线照射,形成免疫介导再障小鼠模型,然后分组处理。结果地甘口服液、红霖四物口服液在有ＥＰＯ存在的条件下,能促进小鼠骨髓细胞体外培养ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成,其中１００％浓度的地甘口服液效果明显优于２００％地甘口服液及红霖四物口服液。结论中药复方地甘口服液、红霖四物口服液能促进免疫介导再障小鼠模型骨髓红系祖细胞的体外细胞培殖。     

不同证型慢性再生障碍性贫血患者造血祖细胞比较研究

慢性再生障碍性贫血（以下简称＂再障＂）是血液系统常见的疾病。现代医学认为其发病机制主要与造血干/祖细胞异常、造血微环境损伤以及造血调控因子分泌异常有关,中医学认为其基本病机在于肾虚。临床依据患者的不同表现分为肾阴虚、肾阳虚和肾阴阳两虚三型。本文将探讨不同肾虚型患者造血干/祖细胞数量的差异,阐释中西医发病机制的内在联系。     

四物汤对再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞增殖的影响研究

目的：研究四物汤对再生障碍性贫血（AA）小鼠骨髓细胞体外增殖的影响，探讨其治疗AA的机制。方法：采用流式细胞仪、骨髓造血祖细胞培养等技术，检测四物汤对从小鼠骨髓细胞的增殖变化。结果：四物汤能促进骨髓有核细胞进入G2／S期、增加CFU—GM、CFU—E、BFU—E集落数，且与自然恢复组有明显增强的差异（P〈0．01）。结论：四物汤在体外有促进从小鼠骨髓细胞增殖的作用，为补血药治疗从提供了实验与理论依据。     

补髓生血颗粒对再生障碍性贫血大鼠造血祖细胞的影响

目的:观察补髓生血颗粒对再生障碍性贫血模型大鼠造血祖细胞增殖的影响。方法:Wistar大鼠经60Co-γ射线8.0Gy照射造成再障模型,分别给予再障生血片及低、中、高剂量补髓生血颗粒,连续给药3周后,采用甲基纤维素半固体集落培养方法培养骨髓红细胞集落形成单位(CFU-E)、粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM),观察补髓生血颗粒对再障模型大鼠造血祖细胞集落形成的影响。结论:补髓生血颗粒可刺激造血祖细胞的增殖,促进再障大鼠骨髓CFU-E、CFU-GM集落的形成,对再障大鼠骨髓抑制状态有显著改善作用。     

人参总皂甙对正常人和再生障碍性贫血患者造血祖细胞的刺激增殖作用

为了解人参对造血祖细胞的作用,应用红系祖细胞(BFU-E、CFU-E)和粒单系祖细胞(CFU-GM)体外培养技术,观察人参总皂甙(TSPG)对正常人和29例再生障碍性贫血(再障)患者的祖细胞刺激增殖作用,并与甲基睾丸素(甲睾)相比较。TSPG在20μg/ml浓度时,可使正常BFU-E、CFU-E和CFU-GM产率分别提高37.8±2.9%、31.4±2.9%和33.4±4.0%。去除红细胞生成素,TSPG亦具有直接刺激红系祖细胞增殖作用,而甲睾对CFM-GM无作用。29例再障中雄激素反应型14例(48.1%),均同时呈现对人参的敏感性(集落数增加30%以上)。而免疫介导型及干细胞缺少型中人参的作用均不能表达。提示TSPG的作用机制可能是通过增强红细胞生成素等造血生长因子的活性间接地促进骨髓造血。     

三七总皂甙对免疫介导性再生障碍性贫血小鼠造血祖细胞的增殖作用

目的：探讨三七总皂甙(PNS)对免疫介导性再生障碍性贫血(再障)小鼠模型血细胞生成的作用。方法：采用免疫介导法进行再障造模,Balb／c小鼠经^60Coγ射线亚致死量照射后,自尾静脉输入DBA／2小鼠的淋巴细胞,随机分成4组,即模型组、PNS治疗高、中和低剂量组(每只3．2、1．6、0．8mg／d),并设正常对照组。腹腔注射给药,模型组和正常对照组注射生理盐水。治疗12天后,做血白细胞计数、骨髓病理检查和粒系、红系造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E)集落培养。结果：(1)PNS升高白细胞数,与模型组比较,PNS高、中和低剂量组的白细胞数提高率分别为(34．3±2．9)％,(29．2±1．7)％和(14．5±1．6)％(P<0．01或P<0．05)。(2)改善骨髓抑制,骨髓病理检查模型组出现大片空白区,被大量的脂肪组织代替,而PNS治疗组造血组织结构较完整,造血细胞量丰富。(3)促进造血祖细胞增殖,高、中和低剂量PNS对CFU—GM集落提高率分别为(64．4±2．8)％、(67．3±2．4)％和(21．9±1．8)％(均P<0．01);CFU—E集落的提高率分别为(31．9±3．6)％、(20．7±2．4)％和(12．8±2．6)％(P<0．01或P<0．05)。结论：免疫介导性再障小鼠在骨髓抑制、造血功能低下时,PNS通过促进骨髓粒系、红系造血祖细胞的增殖,改善骨髓造血组织增生,从而促进血细胞的生成。     

兰州方对再生障碍性贫血模型小鼠外周血细胞的影响

目的：探讨兰州方对再生障碍性贫血（AA）模型小鼠血常规和网织红细胞的影响和作用机制。方法：将BALB/C小鼠90只,体质量（20±2）g,随机分为6组：兰州方大、中、小剂量组、贞芪扶正颗粒对照组、模型组和正常对照组,每组15只,除正常对照组外,其余75只小鼠均经3.0GY直线加速器γ射线全身照射,照射4小时内由尾静脉输入取自DBA/2小鼠胸腺、淋巴结细胞悬液。照射1周后通过血象、骨髓象检测证明造模成功。用药20天、40天时分别观察各组小鼠外周血WBC、RBC、Hb、PLT变化情况。结果：兰州方能明显升高AA小鼠外周血白细胞、血小板、血红蛋白值,差异有统计学意义,红细胞升高不显著。结论：兰州方能提高AA小鼠的外周血细胞数量,对再生障碍性贫血具有肯定治疗作用。     

健脾药对免疫介导再生障碍性贫血小鼠IL-3、IFN-γ影响的实验研究

目的：检测免疫介导再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓造血细胞在含健脾药血清的液体培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度，探讨健脾药治疗再障的作用机理。方法：用健脾药灌喂SD大鼠，抽取、制备含中药血清；Balb／C小鼠经^60Co5．5Gyγ射线照射后由尾静脉输入取自DBA／2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。在含健脾药血清的液体培养体系中培养再障小鼠骨髓造血细胞，检测培养体系中IL-3、IFN-γ的浓度。结果：健脾药对再障小鼠IL-3、IFN-γ的总量无明显影响。结论：健脾药可能通过使局部IFN-γ浓度降低进而影响造血干／祖细胞增殖、分化。     

再生障碍性贫血辨证分型与体外骨髓造血祖细胞类型的关系

再生障碍性贫血(再障)可分为干细胞缺乏型、雄激素反应型及免疫抑制型。本文53例再障中医辨证分为阴虚型、阳虚型及阴阳两虚型,观察该分型与体外骨髓造血祖细胞类型的关系,结果发现阳虚型的CFU-GM、CFU-E、BFU-E值均显著高于其它两型(P<0.01及<0.05),对雄激素反应性也显著高于其他两型(P<0.005及<0.05)。而阴虚型组的免疫抑制患者数远远多于其他两型(P<0.005)。提示再障的中医分型有其客观物质基础。     

复方雷公藤颗粒对再障小鼠骨髓T细胞亚群的影响

目的:观察复方雷公藤颗粒对再生障碍性贫血(简称再障)小鼠的疗效及对骨髓CD4+,CD8+,CD4+/CD8+T淋巴细胞表达的影响.方法:建立再障小鼠模型,分为5组,正常组及模型组小鼠(给予同体积的生理盐水ig),复方雷公藤低、高剂量组(分别为生药10.63,13.29 g·kg-1,ig)、十一酸睾酮(22 mg·kg-1,ig),连续给药35 d,取骨髓单个核细胞培养24 h后,流式细胞术检测CD4+,CD8+,CD4 +/CD8+T淋巴细胞的表达水平.结果:模型组CD4+,CD8+,CD4 +/CD8+各指标均较正常组下降,其中CD4+,CD4 +/CD8+T淋巴细胞明显低于正常组(P＜0.05);十一酸睾酮组与模型组相比,CD4+,CD8+均有所下降,但CD4 +/CD8+T细胞较之上升,但统计学均无明显差异,复方雷公藤颗粒低、高剂量组与模型组相比,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+均升高,其中CD4+,CD4+/CD8+升高有统计学意义(P＜0.05),与十一酸睾酮组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:复方雷公藤颗粒能调节骨髓T细胞的异常状态,恢复T细胞及其亚群之间的平衡,促进骨髓造血功能的恢复.     

复方活血汤对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓微环境的作用研究

目的 :探讨临床上治疗再生障碍性贫血 (再障 )加用活血化瘀药物提高疗效的机制。方法 :建立免疫介导的再障小鼠模型 ,胃饲 1 0 0 %复方活血汤注射液每次 0 2ml,每天 2次 ,第 1 0天观察骨髓组织学、体外成纤维细胞集落形成单位 (CFU -F)、培养基质细胞层的粘附能力 ,骨髓氧分压 (PO2 )。结果 :复方活血汤组小鼠白细胞计数 ,骨髓有核细胞计数 ,骨髓造血组织容量、CFU -F计数 ,均较再障组有明显升高 (P <0 0 1 ) ;且基质细胞粘附功能、骨髓PO2 已恢复至正常。结论 :复方活血汤可促进再障小鼠骨髓微环境的修复及供氧 ,从而促进骨髓造血。     

补髓生血颗粒剂对慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血祖细胞c-kit、CxCR4受体表达的影响

目的 :探讨补髓生血颗粒剂对慢性再生障碍性贫血 (CAA)患者骨髓造血祖细胞c -kit、CXCR4受体表达水平的影响。方法 :采用免疫荧光法及流式细胞技术分别对使用该颗粒剂治疗前后的CAA患者骨髓造血祖细胞c-kit、CXCR4 受体表达水平进行检测 ,并与再障生血片对照组及正常组作比较研究。结果 :补髓生血颗粒剂组临床疗效与再障生血片组疗效存在显著差异(P <0 .0 5 ) ;两组疗前c -kit受体表达高于正常组 ,治疗后均表达下调 ;补髓生血颗粒剂组治疗后CXCR4 受体表达与再障生血片组存显著性差异(P <0 .0 5 )。结论 :慢性再障骨髓造血衰竭并非c -kit受体低表达所致 ;补髓生血颗粒剂在临床疗效与CXCR4 受体表达上调作用上优于再障生血片组 ,提示补髓生血颗粒剂通过提高造血祖细胞增殖分化与黏附归巢能力而刺激造血     

生血丸1号对免疫介导的再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖的影响

目的 :探讨生血丸 1号对免疫介导的再生障碍性贫血 (再障 )小鼠骨髓增殖的影响。方法 :建立免疫介导的再障小鼠模型 ,胃饲生血丸 1号水提液 ,0 1ml 10g体重 次 ,2次 d ,连续 9d ,并以康力隆为对照。实验第 10天处死动物 ,检测外周血白细胞数及股骨骨髓有核细胞数 (BMNC) ,股骨中段骨髓切片HE染色行病理形态学观察。结果 :生血丸 1号组白细胞数 ,股骨BMNC及骨髓造血组织容量均显著高于模型对照组 (P <0 .0 1) ,生血丸大剂量组与康力隆组比较无显著差异 (P>0 .0 5 )。结论 :生血丸 1号能促进再障小鼠骨髓增殖 ,其作用与康力隆相似     

补髓生血汤对慢性再生障碍性贫血患者骨髓基质细胞相关细胞因子的影响

目的:观察补髓生血汤对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者的疗效,并探讨其骨髓基质细胞相关细胞因子的机制。方法:随机将2012年3月—2015年10月收治的112例CAA患者分为两组患者,各56例,对照组采用康力龙联合环孢素治疗,观察组基于对照组采用补髓生血汤治疗,观察两组患者疗效,比较治疗前后的临床证候评分,血红蛋白(Hb),白细胞计数(WBC),血小板计数(PLT),骨髓像,碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和b FGF受体(b FGFR)mRNA表达量。结果:观察组总有效率(87.50%)高于对照组(67.86%)(χ~2=6.231,P0.05);两组患者治疗后的临床证候评分均下降,且观察组低于对照组(P0.05);观察组治疗后WBC,PLT,Hb升高,且高于对照组(P0.05);治疗后,观察组骨髓增生程度改善,且优于对照组(P0.05),观察组的非造血细胞比率(41.68±7.85)%,明显低于对照组的(53.45±8.78)%(P0.05);两组患者治疗后b FGF,b FGFR表达升高,且观察组高于对照组(P0.05)。结论:补髓生血汤治疗CAA患者的效果较好,对血象、骨髓象,骨髓造血功能具有改善作用,可能与调节细胞因子b FGF和b FGFR mRNA表达有关。     

补髓生血颗粒对CAA患者骨髓单个核细胞HGF受体mRNA表达水平的影响

目的 通过观察慢性再生障碍性贫血(CAA)患者治疗前后骨髓单个核细胞HGF mRNA含量的变化,探讨补髓生血颗粒治疗CAA的疗效作用机理.方法 60例CAA患者随机分为治疗组和对照组,治疗组给予补髓生血颗粒,对照组给予再障生血片,采用逆转录-聚合酶链法( RT - PCR)检测CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞HGF受体mRNA表达水平的变化.结果 两组基本治愈、缓解率分别为73.33％和57.14％,明显高于对照组57.14％,(P＜0.05).各组治疗前CAA患者骨髓单个核细胞HGF受体mRNA表达水平明显升高,高于正常对照组,经治疗后各组均有不同程度下降,并且以补髓生血颗粒组表达水平的下调程度优于再障生血片组(P＜0.05).结论 CAA患者骨髓单个核细胞HGF mRNA的表达存在异常,补髓生血颗粒剂可能通过调节骨髓造血细胞HGF受体mRNA的表达来改善CAA患者的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复.     

川芎嗪对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞CD34抗原表达的影响

目的：探讨川芎嗪对免疫再生障碍性贫血（再障）小鼠骨髓细胞ＣＤ３４抗原分子表达的影响。方法：建立免疫介导的再障小鼠模型，６．０Ｇｙ＾６０Ｃｏγ－射线照射和尾静脉输注淋巴细胞造成小鼠再障。分为正常组、再障组（对照组）、川芎嗪组，除正常组外均胃饲川芎嗪注射液４ｍｇ／次，１天２次，第１０天用流式细胞仪检测各组小鼠骨髓细胞膜上ＣＤ３４抗原表达量。结果：川芎嗪ＣＤ３４抗原表达量的荧光强度（７７．６±．６．５）     

生血合剂干预下免疫介导再障小鼠骨髓核因子κB表达变化

目的:进一步探讨获得性再生障碍性贫血(AA)发病机制及健脾补肾活血方生血合剂治疗AA的疗效机制。方法:以环孢素为对照,免疫介导AA小鼠为研究对象,采用定量PCR(Q-PCR)、免疫组织化学等方法分析生血合剂干预前后AA小鼠骨髓核因子κB(NF-κB)mRNA水平、蛋白表达及活性变化。结果:AA小鼠骨髓单个核细胞NF-κBmRNA水平未见明显改变,与正常对照比无显著差异(P>0.05);骨髓细胞NF-κB/p65蛋白表达较正常组增加,p-IκBα表达明显下降,生血合剂干预后NF-κB/p65蛋白表达减少,而p-IκBα表达明显提高;与之相比,环孢素作用后NF-κB/p65蛋白及p-IκBα均急剧下降。结论:NF-κB蛋白表达异常及活性改变可能参与了免疫介导AA小鼠模型的形成;生血合剂可能通过调节NF-κB的表达及活性发挥改善免疫介导AA小鼠造血功能的作用。     

当归补血汤对再障小鼠骨髓单个核细胞线粒体膜电位与自噬相关蛋白的作用研究

目的:观察当归补血汤含药血清对调节再障小鼠骨髓单个核细胞线粒体膜电位及自噬相关蛋白的作用。方法:利用皮下注射苯油及腹腔注射环磷酰胺溶液50 mg/kg的方法制备再障小鼠模型,提取、分离骨髓单个核细胞,分别置于当归补血汤含药血清0.5%、2.5%、10%的培养基中进行体外培养,观察其对再障小鼠骨髓单个核细胞线粒体膜电位及线粒体自噬标志物PINK1和泛素结合蛋白P62表达的影响。结果:与正常对照组相比较,模型对照组骨髓粒细胞线粒体膜电位明显降低,P62的蛋白表达明显下调(P<0.05),自噬泡的数量明显增高,PINK1蛋白表达明显上调(P<0.05);而与模型对照组比较,不同浓度当归补血汤20 g/kg含药血清使线粒体膜电位明显增加,P62的蛋白表达明显上调(P<0.05),自噬泡的数量明显降低,PINK1的蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:当归补血汤能够调节再障小鼠线粒体膜电位和自噬相关蛋白的表达,从而调节其线粒体自噬,影响造血细胞的凋亡。     

生血丸1号对免疫介导的再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及细胞周期蛋白D_3表达的影响

目的:探讨生血丸1号(简称生血丸)对免疫介导的再生障碍性贫血(简称再障)小鼠骨髓增殖及细胞周期蛋白 D_3(Cyclin D_3)表达的影响。方法:建立免疫介导的再障模型,胃饲生血丸1号水提液,每次0.1ml/10g 体重,每天2次,连续9天,并以康力隆为对照。第10天处死动物,采用流式细胞仪检测小鼠骨髓有核细胞(BMNC)G_0/G_1期百分率,免疫组织化学超敏 S-AP 法检测股骨中段骨髓 Cyclin D_3表达水平。结果:生血丸组 G_0/G_1期细胞百分率较再障模型组显著降低(P<0.05),而 Cyclin D_3表达水平明显高于再障模型组(P<0.01),两项指标之间呈显著负相关(r=-0.8219,P<0.05)。结论:生血丸1号能提高免疫介导的再障小鼠骨髓 Cyclin D_3的表达水平,从而促进造血细胞由 G_0/G_1期进入增殖期。