过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPAR8)是APC/β-catenin/Tcf-4信号通路上亟待揭示的下游靶基因之一,其下游靶基因的激活可能导致大肠癌的发生.本实验采用流式细胞术及原位缺口末端标记法(TUNEL)观察PPAR8基因沉默对大肠癌细胞凋亡的影响.     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂对人肾间质成纤维细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂在抗肾间质纤维化方面的潜在作用.方法原代培养正常人肾间质成纤维细胞(HFB),PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和PPARγ激动剂TZDs(曲格列酮和齐格列酮)作用细胞24至72 h.应用台盼蓝染色进行活细胞计数,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖情况,应用流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期.结果在PPARγ激动剂作用下,HFB的活细胞数较对照组明显减少(P＜0.05).MTT检测发现PPARγ激动剂能明显抑制H邝细胞增殖(P＜0.05).流式细胞技术检测,PPARγ激动剂处理组细胞凋亡明显,与对照组比较差异有显著性意义.凋亡率分别是对照组(3.49±0.60)%,15d-PGJ2组(14.07±0.24)%,齐格列酮组(13.46±0.81)%,曲格列酮组(14.78±1.17)%,与对照组比较,各用药组P分别＜0.01,＜0.01,＜0.05.PPARγ激动剂处理48～72 h后用流式细胞仪观察到G0/G1细胞数明显增加,与对照组比较差异显著(P均＜0.01).结论PPARγ激动剂可以促进HFB细胞凋亡,通过G1期停滞抑制其增殖,提示PPARγ可能作为防止肾间质纤维化的一个潜在的治疗靶目标.     

靶向过氧化物酶体增殖活化受体-γ基因siRNA载体的构建

目的构建靶向过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)基因的siRNA载体。方法根据siRNA设计原则,在PPAR-γmRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(677-695和497-515);体外合成对应发卡样DNA片段,退火后加A处理,先将其克隆入T载体,再亚克隆入siRNA载体pRNAT-U6.2,对插入序列进行DNA序列分析。结果　发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸,退火后,电泳可见明亮靶条带;T7/SP6作为引物进行PCR扩增,筛选得到阳性克隆pGEM-T-SP- PAR-γ1和pGEM-T-SPPAR-γ2。PCR扩增鉴定得到阳性亚克隆pRNAT-U6.2-SPPAR-γ1和pRNAT- U6.2-SPPAR-γ2,测序证实插入序列与设计完全一致。结论成功构建2个PPAR-γ基因靶向性siRNA载体pRNAT-U6.2-SPPAR-γ;为PPAR-γ基因沉默的研究提供实验工具。     

过氧化物酶体增殖因子活化受体γ在胰腺癌中的表达及其意义

目的：研究过氧化物酶体增殖因子活化受体（PPAR）在胰腺癌中的表达，探讨其可能意义。方法：分别应用免疫组织（细胞）化学和逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测正常胰腺组织、24例胰腺癌组织和胰腺癌细胞株PC-3及PANC-1中PPARα、δ、γ表达。结果：RT-PCR显示正常胰腺组织PPAR各亚型mRNA均无表达，而胰腺癌组织和胰腺癌细胞株PPARγmRNA高表达，PPARα和PPARδmRNA则无表达。免疫组织（细胞）化学显示胰腺癌组织及细胞株PPAR（呈高表达，在胰腺癌组织表达总阳性率为79.17％。结论：本文初步观察到核内受体PPARγ在人胰腺癌组织及人胰腺癌细胞株中表达上调。PPARα为今后胰腺癌化学预防一个新的靶点。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ与血管钙化

正流行病学资料显示,血管钙化与慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD),尤其是维持性透析患者心血管疾病的患病率和病死率密切相关。过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)是许多生理和疾病的重要调节因子。近来有研究表明PPARγ通过调节间充质干细胞和造血干细胞在体内骨量稳态中起着双重调节作用,而CKD患者血管钙化往往     

过氧化物酶体增殖因子活化受体γ在直肠癌组织中的表达及其意义

目的应用组织芯片技术探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)在直肠癌中的表达状况及其意义。方法利用组织芯片技术构建直肠癌组织芯片,采用免疫组织化学SP法检测80例直肠癌组织、16例良性腺瘤组织和16例正常直肠组织中PPAR-γ蛋白的表达并分析其与分化程度等临床和病理指标以及生存率的关系。结果80例直肠癌标本中PPAR-γ表达阳性57例(71.3%),16例良性腺瘤中4例(25.0%)、16例正常直肠标本中1例(6.3%),差异有统计学意义(X~2=29.76,P<0.01)。直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的PPAR-γ表达程度差异无统计学意义(P>0.05);不同分化程度、病理分期、淋巴转移、3年生存率的PPAR-γ表达程度差异有统计学意义(P<0.05)。结论PPAR-γ蛋白在直肠癌组织中呈高表达,其表达与直肠癌临床病理特征和生物学行为有密切关系,检测PPAR-γ蛋白,对诊断直肠腺癌、判断其恶性程度及预后均有一定参考价值。     

过氧化物酶体增殖物活化的受体γ对肝星状细胞作用机制的研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)对肝星状细胞(HSC)生物学特性的影响及其作用机制。方法用MTT法和流式细胞仪检测对照组、罗格列酮组、GW9662+罗格列酮组、GW9662组大鼠肝星状细胞的增殖和凋亡情况;采用RT-PCR方法检测各组PPARγ及Ⅰ型前胶原mRNA表达;用免疫组织化学法和Western blot法检测PPARγ及Ⅰ型胶原蛋白表达;结果罗格列酮组的肝星状细胞增殖率MTY(0．49±0．06)较对照组(1．00±0．045)、GW9662组(0．89±0．043)和罗格列酮+GW9662组(0．78±0．049)明显减弱,凋亡率明显增高(P<0．05);罗格列酮组PPARγmRNA表达(1．63±0．179)显著高于对照组(0．46±0．021)、GW9662组(0．41±0．01)和罗格列酮+GW9662组(0．45±0．20)(P<0．05),罗格列酮组Ⅰ型前胶原mRNA表达(0．32±0．02)与对照组(1．61±0．09)、GW9662组(1．81±0．22)和罗格列酮+GW9662组(1．37±0．01)相比显著降低(t值分别为15．59,14．68,8．07,P<0．01);其他各组之间PPAR-γ和Ⅰ型前胶原mRNA的表达差异无统计学意义(P>0．05)。PPARγ及Ⅰ型胶原蛋白表达所得结果与RT-PCR结果相一致。结论PPARγ特异性激动剂罗格列酮可以增加PPARγ的表达。抑制HSC表达Ⅰ胶原,抑制HSC增殖,诱导HSC凋亡,PPARγ配体对于缓解肝脏纤维化具有一定的作用。     

过氧化物酶体增殖活化受体γ激动剂罗格列酮对MG63细胞抑制生长及促进凋亡的作用

目的 观察过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对骨肉瘤细胞株MG63的生长抑制及诱导凋亡作用.方法 取人骨肉瘤MG63细胞,用终质量浓度为0.5、5.0、50.0、100.0 μmol/L罗格列酮分别处理细胞,对照组不给予药物,噻唑蓝(MTT)比色法测定药物作用24、48、72 h对细胞生长的抑制率;流式细胞术(FCM)检测终质量浓度0、0.5、5.0、50.0 μmol/L罗格列酮处理24、48 h细胞周期分布;TUNEL法检测终质量浓度0.5μmol/L罗格列酮处理48 h的细胞凋亡,并计算凋亡指数(AJ).结果 细胞生长抑制率:(1)罗格列酮各浓度作用24、48、72 h,2个时间点抑制率两两比较的差异均有统计学意义(P＜0.01),有随时间增长而增加的趋势,其中0.5μmol/L对细胞的抑制率(％)分别为30.10±0.01、46.70±0.01和48.80±0.02;(2)在各时间点,各浓度组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01),在0.5～50.0 μmol/L浓度组区间,相同时间点的抑制率有随浓度升高而降低的趋势.细胞周期:(1)不同浓度的各细胞周期分布差异有统计学意义(P＜0.01).在24、48h时间点均表现为用药组G0/G1期细胞比例高于对照组,0.5mol/L组细胞比例最高,但随用药浓度增加,G0/G1期比例有下降趋势;用药组S期细胞比例均低于对照组,随用药浓度增加,S期比例有增高趋势;即用药可将细胞周期阻滞在G0/G1期的作用;(2)不同时间点间细胞周期分布变化的差异无统计学意义(F=0.36,P＞0.05).细胞凋亡:0.5 μmol/L组凋亡率(14.33±3.35)％明显高于对照组(2.82±0.63)％(P＜0.01),光镜下可见药物组细胞核固缩及散在的凋亡小体.结论 PPARγ激动剂罗格列酮能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的增殖,诱导该细胞G1期阻滞和细胞凋亡.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对人肝癌细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的 检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在人肝癌、癌旁和正常肝组织的表达,探讨激活或抑制PPARγ在肝癌细胞株生长和凋亡中的作用及其机制.方法 应用免疫组织化学方法检测20例肝癌、癌旁和正常肝组织中PPARγ的表达,Western blot检测2种肝癌和1种正常肝细胞株中PPARγ表达;PPARγ激动剂15dPGJ2和拮抗剂T0070907分别干预培养的2种肝癌细胞株,噻唑蓝(MTT)检测细胞生存率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性变化.结果 肝癌组织中PPARγ表达高于癌旁和正常肝组织(P＜0.05),PPARγ主要在肝癌细胞质中表达;肝癌细胞株PPARγ表达比正常肝细胞株高(P＜0.05);15dPG-J2抑制肝细胞增殖而T0070907则促进肝癌细胞增殖(P＜0.05).15dPG-J2可使肝癌HepG2和SMMC7721细胞G0/G1期细胞比例由(42.5±0.9)%和(49.0±3.8)%增高至(61.0±2.0)%和(67.5±2.2)%,(P＜0.05),S期由(30.5±0.3)%和(43.0±2.5)%降低至(6.6±1.1)%和(25.1±2.0)%(P＜0.05).而且,15dPG-J2可明显促进两种肝癌细胞凋亡,凋亡率分别增加约24.4%和22.4%,并可增强细胞Caspase-3活性(P＜0.05);Caspase抑制剂Z-VAD-FMK则可逆转15dPG-J2对肝癌细胞的促凋亡作用.结论 PPARγ在肝癌细胞中表达升高,其表达主要位于细胞质中,为无活性状态.PPARγ激动剂可活化PPARγ和Caspase通路,抑制肝癌细胞生长,促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) in human liver cancer tissue and cells, and to explore the effects and mechanisms of PPARγ on growth and apoptosis in human hepatocellular carcinoma cells. Methods The expression of PPARγ in 20 cases of liver cancer, tumor adjacent tissue, normal liver, one liver cell line and two liver cancer cell lines were detected by immunohistochemistry or Western blotting. Two incubated malignant cell lines were exposed to PPARγ agonist 15dPGJ2 or antagonist T0070907, cell viability was determined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay and cell cycle distribution and apoptosis were examined by flow cytometry (FCM). Consequently, the activity of caspase-3 following treatments of 15dPGJ2 or T0070907 was observed by the commercial Caspase-3 Activity Kit. Results The expression of PPARγin liver cancer was higher than that in adjacent and normal liver tissue ( P ＜ 0. 05) and PPART was predominantly expressed in the cytoplasm. Further,the expression of PPARγwas higher in hepatoma cell line than that in normal liver cell line (P＜ 0.05 ). PPARγ agonist 15dPG-J2 inhibited the proliferation while the antagonist T0070907 induced the growth of hepatoma cells (P ＜ 0. 05). G0/G1 phase of HepG2 and SMMC772 cells was blocked by 15dPG-J2, and the ratio were raised from (42.5 ±0.9)% and (49.0 ±3.8)% to (61.0 ±2. 0)% and (67.5 ±2. 2)% ,respectively. Meantime,S phase ratio were decreased from (30. 5 ± 0. 3 ) % and (43.0 ± 2. 5 ) % to ( 6. 6 ± 1. 1 ) % and ( 25. 1 ± 2. 0 ) %. Further, 15 dPG-J2 facilitated significant apoptosis in those cell lines and the increased apoptosis ratio were 24. 4% and 22. 4% respectively.Accordingly,the activity of Caspase-3 induced by 15dPGJ2 were 21-and 23-fold higher than those in control groups (P ＜ 0. 05 ). The Caspase inhibitor Z-VAD-fmk expectedly reversed the apoptosis induced by 15dPGJ2 in HepG2 and SMMC772 cells. Conclusion The expression of PPARγ increases in human hepatoma predominantly in cytoplasm with its inactivated form. 15dPG-J2 ,an agonist of PPART inhibits growth and induces apoptotic in hepatoma cells through activation of PPARγ pathway and the consequent Caspase3 signal.     

Stat3与过氧化物酶体增殖因子激活受体δ信号转导通路间交互作用对结肠癌细胞增殖的调控影响

目的观察选择性环氧合酶（COX）-2抑制剂NS-398对结肠癌细胞系SW480中Star3与过氧化物酶体增殖因子激活受体（PPAR）δ信号转导通路的影响，探讨不同信号转导通路间交互作用调控结肠癌细胞增殖的分子机制。方法应用逆转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测结肠癌细胞系SW480中COX-2 mRNA表达水平，用选择性COX-2抑制剂NS-398处理结肠癌细胞系SW480，Western blot检测Star3与PPARδ信号转导通路成员表达，噻唑蓝（MTT）比色试验检测细胞增殖状态，流式细胞技术检测细胞周期与凋亡。结果结肠癌细胞系SW480中未检测到COX-2 mRNA表达，NS-398（75μmol／L）作用于SW480细胞72h后，G1期细胞比率由37．9％上升至48．6％，S期细胞比率分别由58，1％，下降至44．9％，细胞增殖受抑制。Stat3、PPARδ、Cyclin D1与bcl-x L表达水平随NS-398作用时间延长而下降。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过非COX-2依赖途径影响结肠癌细胞的增殖。     

过氧化物酶体增殖激活物受体γ配体诱导肾癌细胞的凋亡

目的 观察过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)配体对肾癌细胞凋亡的影响.方法 通过ELISA方法 观察0～100 μmol/L浓度的吡格列酮和曲格列酮(TZDs)对肾癌细胞786-0、A498及正常肾细胞HK-2、HMCC凋亡的影响,Heochst 33342荧光染色、DNA片段化分析检测70.00 μmol/L吡格列酮或80.00 μmol/L曲格列酮处理后肾癌细胞的凋亡,Western blot观察TZDs处理后肾癌细胞凋亡调控蛋白bcl-2/bax的表达变化及Caspase-3活性的改变.结果 超过50.00 μmol/L的TZDs可诱导肾癌细胞出现凋亡,LC_(50)值分别为65.11 μmol/L(曲格列酮/786-O)、67.73 μmol/L(吡格列酮J/786.0)、63.91 μmol/L(曲格列酮/A498)和78.12 μmol/L(吡格列酮/A498),但对正常肾细胞没有影响.荧光染色显示80.00 μmol/L的吡格列酮及70.00 μmol/L的曲格列酮处理后肾癌细胞明显凋亡,伴随bcl-2蛋白的表达水平降低和bax蛋白的增加,Caspase-3的活性明显增强,在48 h可达到基础值的3.5-4.5倍.结论 激活PPARγ可以诱导肾癌细胞的凋亡,PPARγ有可能成为肾细胞癌新的治疗靶点.