高胆固醇对Oddi括约肌舒缩性与[Ca2+]i的影响

目的探讨高胆固醇对Odd i括约肌张力及细胞内钙离子浓度的影响。方法新西兰兔16只随机分为2组,对照组8只,实验组8只,分别对对照组及实验组兔行Odd i括约肌测压、造影、胆管括约肌(SO)细胞中钙离子浓度测定。结果对照组兔血清胆固醇浓度<3 mmol/L,实验组兔血清胆固醇浓度约30 mmol/L左右;胆管造影显示实验组造影剂排空时间延迟,Odd i括约肌狭窄;Odd i括约肌近侧段基础压力测定,对照组和实验组分别为1.56 kPa和3.41 kPa(P<0.01),Odd i括约肌高压带(HPZ)压力分别为9.24 kPa和19.27 kPa(P<0.0.1);SO细胞中钙离子浓度测定显示实验组较对照组升高。结论高胆固醇血症可引起细胞内钙离子浓度升高及Odd i括约肌张力持续升高。     

干扰素-α转染HepG2细胞内下调表达基因的筛选

目的 筛选干扰素-α真核表达质粒转染HepG2细胞后细胞内表达下调的基因,以进一步探讨干扰素-α作用的分子生物学机制.方法 将pcDNA3.1(-)-IFN-α以及pcDNA3.1(-)空载体分别转染肝母细胞瘤HepG2细胞系,用抑制性消减杂交技术筛选pcDNA3.1(-)-IFN-α转染HepG2细胞内表达下调的基因.以pcDNA3.1(-)转染组细胞作为tester,pcDNA3.1(-)-IFN-α转染组作为driver,建立消减文库,随机挑选阳性克隆,测序并进行序列比对,得到下调表达的基因.应用RT-PCR技术,进一步证明IFN-α对Hsp90的下调表达作用关系.结果 成功构建了IFN-α真核表达质粒转染HepG2细胞后表达下调的cDNA消减文库.从文库中随机挑选克隆,测序并进行生物信息学分析后,得到下调表达的基因有:铁蛋白,热休克蛋白90,S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶1,真核翻译延伸因子1β,信号序列受体β(SSR2),组织因子路径抑制子,RAD23同源物B.RT-PCR进一步表明,IFN-α真核表达质粒转染的HepG2细胞内Hsp90 mRNA表达水平下调.结论 应用SSH技术成功构建了pcDNA3.1(-)-IFN-α转染的HepG2细胞内表达下调的cDNA消减文库,并筛选出下调表达基因,半定量RT-PCR表明IFN-α对Hsp90 mRNA具有下调表达作用.为进一步阐明IFN-α作用的分子生物学机制提供了重要的理论依据.     

Aβ诱发钙失衡中蛋白激酶C作用及二苯乙烯苷干预效果研究

目的:探讨β-淀粉样蛋白(Aβ)诱发的细胞内钙失衡机制中蛋白激酶C(PKC)的作用及二苯乙烯苷(TSG)的干预效果。方法:在立体定向仪下向大鼠海马部位注射Aβ1-42建立AD模型,将大鼠随机分为对照组、手术组、模型组和TSG组各20只;免疫荧光法检测海马细胞内钙离子,在激光扫描共聚焦显微镜下观察;采用磷基转移法测定细胞膜和细胞质的PKC活性,免疫印迹法检测PKC蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组细胞内钙离子浓度、PKC活性及PKC表达均显著增高(P<0.05);与模型组比较,TSG干预后,细胞内钙离子浓度、PKC活性及PKC表达均显著下降(P<0.05)。结论:Aβ神经毒性作用引起的细胞内钙失衡涉及PKC的活化及表达上调,并以细胞膜相活化更为显著;TSG可通过纠正细胞内钙超载、抑制PKC活化抵抗Aβ神经毒性损伤。     

IP3R、钙激活钾通道与气道平滑肌舒缩功能

1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP3R）是对第二信使1,4,5三磷酸肌醇（IB）应答的一种普遍存在于气道平滑肌（airwaysmoothmuscle,ASM）中的细胞内钙离子（Ca^2＋）释放通道,参与细胞内钙离子水平的调控,从而通过钙信号参与调控气道平滑肌细胞的舒缩。位于气道平滑肌细胞膜上的钙激活钾通道（Kca）将细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）和膜电位这两种细胞信号形式偶联起来,     

模拟失重对前成骨细胞MC3T3-E1内钙离子浓度的影响

目的：研究模拟失重对前成骨细胞MC3T3-E1内钙离子浓度的影响。方法：利用回转器模拟失重条件培养前成骨细胞MC3T3-E1 48h。然后将细胞用Fluo-3AM标记,使用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度。结果：模拟失重条件培养后,细胞内钙离子浓度检测显示,与对照组相比,模拟失重组细胞内钙离子浓度降低。流式细胞仪结果显示,与对照组相比,模拟失重组细胞的荧光阳性率显著降低,提示模拟失重可以抑制细胞活性。结论：模拟失重导致前成骨细胞MC3T3-E1内游离钙离子浓度降低,并可能抑制细胞活性。     

胞内钙离子浓度与咖啡因抗凋亡作用的关系

目的 :研究咖啡因对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用与细胞内钙离子浓度升高之间的关系。方法 :小脑颗粒神经元培养 ,凝胶电泳和fura 2荧光技术测胞内钙离子浓度。结果 :低钾的促凋亡作用可被咖啡因浓度依赖性地保护 ,且咖啡因的保护作用不受ryanodine敏感性钙释放的阻断剂 (ryanodine、dantrolene)的影响 ;也不被L 型钙通道阻断剂 (硝苯地平、维拉帕米和尼莫地平 )和NMDA受体阻断剂 (MK80 1)抑制。结论 :咖啡因对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用并不依赖胞内钙离子浓度的升高。     

糖尿病大鼠胃窦平滑肌细胞内钙离子的变化及意义

目的　探讨糖尿病大鼠胃窦平滑肌细胞内钙离子(Ca2 + )的改变及其意义。方法　 5 0只大鼠随机分为对照组 (n =2 0 )和糖尿病模型组 (n =30 ) ,用链尿佐菌素建立大鼠糖尿病模型 ,3个月后测定胃排空时间 ,并用流式细胞仪测定平滑肌细胞凋亡发生率 ,用激光共聚焦方法测定细胞内Ca2 + 浓度。结果　与对照组大鼠相比 ,模型组大鼠胃排空时间明显延长(P <0 0 1) ,平滑肌细胞凋亡发生率及细胞内Ca2 + 浓度明显增加 (P <0 0 1)。结论　糖尿病大鼠胃窦平滑肌细胞内Ca2 + 增加 ,从而使平滑肌细胞受损 ,平滑肌功能发生相应改变。     

脑红蛋白减轻硝普钠诱导的PC12细胞损伤

目的:探讨脑红蛋白(NGB)对硝普钠(SNP)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法:利用一氧化氮(NO)供体——硝普钠诱导制备NO损伤细胞模型,通过转染真核表达载体方式在PC12细胞中过表达NGB,采用Western印迹方法检测NGB表达水平,采用RT-PCR方法检测细胞内bcl-2基因的表达变化,并检测细胞活性(MTT法)、LDH释放量和胞内胞外NO含量.结果:过表达NGB可提高PC12细胞的存活率,增加bcl-2基因的表达,但不改变胞内、外NO的含量.结论:NGB可保护硝普钠诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与增加抗凋亡基因bcl-2的表达有关.     

利用荧光探针Fura—2测定淋巴细胞内游离钙的方法及临床应用

细胞内游离钙具有重要的生理功能[1]，了解其含量及其变化，意义是多方面的。无论是细胞外信号或细胞内调节物，也不论是电的或化学的刺激，凡能引起细胞内Ca2＋浓度的变化，）那么由Ca2＋介导的或依赖于钙的酶、蛋白质和有关的生理生化反应也会发生改变。因此，细胞内游离钙的变化，代表着某种细胞功能的启动、加强或抑制。通过提高或抑制细胞内的钙水平来观察相应生理应答反应的变化，有助于了解Ca2＋对正常生理反应的调节过程。有些疾病的发生、发展往往是由于细胞内钙离子超负荷所致。通过测定细胞内游离Ca2＋的含量可提供它与疾病间…     

AMPKα信号途径参与吡格列酮对人肝癌细胞的凋亡诱导作用

目的观察吡格列酮干预对体外培养的HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响,并探讨其药理作用机制。方法以不同浓度的吡格列酮干预体外培养HepG2细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期以及激活的胱天蛋白酶（Caspase）3蛋白表达,RT-PCR检测PPARγmRNA的表达,Western印迹检测PPARγ蛋白、磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPKα）蛋白和磷酸化AMPKα（p-AMPKα）蛋白的表达;并将PPARγ小干扰RNA（pGCsi-PPARγ）表达质粒转染HepG2细胞,观察PPARγ基因沉默后吡格列酮对细胞凋亡作用的影响。结果不同浓度的吡格列酮干预HepG2细胞后,诱导细胞的凋亡,在此过程中G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少,并呈一定的剂量依赖关系;但在上述过程中,PPARγmRNA和蛋白的表达没有显著变化;吡格列酮在高浓度（20μmol/L）时对pGCsi-PPARγ表达质粒转染的HepG2细胞仍表现出凋亡诱导作用。不同浓度的吡格列酮干预后未见激活的caspase 3表达峰,对NF-κB的DNA结合活性也无明显影响,但其在高浓度（20μmol/L）时明显增加对照组和pGCsi-PPARγ转染组p-AMPKα的表达,而总AMPKα则无明显变化。结论吡格列酮能够干扰细胞周期、诱导其凋亡,这种作用不是完全通过PPARγ依赖途径实现的,AMPKα信号途径参与上述过程。     

P物质对破骨细胞内血小板源性生长因子β受体及其mRNA表达的影响

目的 探讨P物质(SP)对体外破骨细胞功能影响的可能机制.方法 用机械分离法分离培养破骨细胞,根据SP的终浓度(10-10～10-6 mol/L)分为对照组(无SP)、10-10,10-8,10-6 mol/L组.在培养后第1,3,5天用免疫组化方法结合计算机图像分析技术测定血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)在破骨细胞内的表达,并进行半定量分析;用RT-PCR方法检测培养24 h后破骨细胞内PDGFR-β mRNA的表达.结果 PDGFR-β及其mRNA在破骨细胞内表达与SP浓度存在明显的剂量依赖关系,呈明显正相关(P＜0.01). 结论 SP对破骨细胞功能的调控可能是上调破骨细胞内PDGFR-β的表达来实现的,SP调节破骨细胞上生长因子受体水平是其对骨折修复和重建的网络调控的可能机制之一.     

碱性成纤维细胞生长因子对硫酸链霉素急性耳毒性影响的实验研究

采用激光共聚焦显微镜技术 ,以Fluo 3/AM负载后的豚鼠螺旋神经节细胞 (SGC)为实验对象 ,观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其钙调控的影响以及这种影响与硫酸链霉素的拮抗效应。结果表明 ,高钾细胞外液和含 1nmol/LbFGF的正常细胞外液灌流可以导致SGC[Ca2 ]i明显升高 ,钙升高的来源为细胞外钙离子的内流 ,bFGF和高钾细胞外液具有协同作用 ,硫酸链霉素可以阻断高钾细胞外液的致细胞内钙升高效应 ,bFGF可以拮抗硫酸链霉素的这种阻断作用 ,拮抗作用的大小与所用bFGF的浓度相关     

大鼠严重创伤后腹腔巨噬细胞Toll样受体2/4基因表达及受体反应性

目的 观察大鼠创伤后腹腔巨噬细胞Toll样受体(TLR)2/4基因表达及受体反应性变化.方法 建立大鼠严重创伤(右侧胸部撞击伤复合双侧股骨闭合性骨折)模型,分别于创伤后2、6、12、24小时取腹腔巨噬细胞,以逆转录-聚合酶联反应(RT-PcR)测定TLR2/4的mRNA表达,以脂多糖(LPS)、Pam3CSK4刺激后取细胞上清液测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 创伤后2小时腹腔巨噬细胞TLR2、TLR4的mRNA表达较正常对照组降低(P<0.05),直至创伤后24小时.行不同浓度LPS、PandCSK4刺激后细胞上清液TNF-α水平较对照组降低(P<0.01).结论 严重创伤后腹腔巨噬细胞TLR2/4基因表达降低,受体反应性下降.     

钙过负荷与延迟性肌肉损伤

不习惯运动,特别是大强度离心运动结束一段时间后,运动的肌肉组织常出现一系列的炎性或退行性变化,我们将这种运动结束后出现的肌肉损伤变化定义为延迟性肌肉损伤。本文对这一类型的肌肉损伤的发生特点以及与细胞内钙不可逆增加的关系进行了研究,结果表明:细胞内钙过负荷在细胞损伤的早期即已出现,研究首次提供了延迟性肌肉损伤过程中细胞内钙过负荷的直接证据,并发现肌肉损伤过程中肌细胞变性坏死呈明显的阶段性。     

缺氧复氧后肾小管上皮细胞ICAM-1的表达及NAC对其干预研究

 目的 研究缺氧复氧后肾小管上皮细胞ICAM-1的表达及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其影响.方法 选用人肾小管上皮细胞(HK2)建立缺氧复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、不同浓度(1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L)NAC干预组.流式细胞术检测细胞内氧化应激水平,流式细胞术检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达、RT-PCR法测定细胞ICAM-1 mRNA表达.结果 缺氧复氧后HK2细胞内氧化应激水平提高,细胞ICAM-1蛋白和mRNA表达上调,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,ICAM-1蛋白和mRNA表达逐渐增强;NAC呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系抑制ICAM-1蛋白和mRNA表达的上调.结论 缺氧复氧诱导细胞内氧化应激的产生,诱导ICAM-1表达上调;NAC可以通过抑制细胞内氧化应激抑制ICAM-1的上调.     

机械应力刺激对细胞内钙离子浓度影响的研究进展

细胞作为生物体最基本的结构和功能单位,在生物体内处于各种复杂的力学环境中.研究力学刺激对细胞内信号转导机制的影响对于理解细胞正常以及特殊力学环境下的生理功能有着重要的作用.细胞内自由钙离子作为一种重要的第二信使,其浓度的变化是细胞对机械应力刺激最早的反应之一.本文综述了机械应力刺激对细胞内自由钙离子浓度的影响以及可能的影响机制.     

BAPTA-AM指质体通过恢复胞质钙稳态抑制D-GalN致HepG-2细胞凋亡

目的探讨1,2-二（2-氨基苯氧基）乙烷-N,N,N＇,N＇-四乙酸四乙酰氧甲基酯（BAPTA-AM）恢复胞质钙离子稳态后对D-GalN诱导HepG-2细胞凋亡的影响。方法建立D-GalN诱导HepG-2细胞凋亡模型,采用MTT比色法、台盼蓝染色及AnnexinⅤ-EGFP、Hoechst-33258荧光染色等考察HepG-2细胞活性及细胞凋亡情况;通过Fura-2/AM钙离子荧光探针法测定不同处理组细胞内游离钙浓度,初步评价钙离子稳态与细胞凋亡的关系。结果 BAPTA-AM脂质体能显著抑制D-GalN致胞质钙离子浓度的升高,恢复胞质钙稳态,维持细胞形态,减少D-GalN诱导细胞凋亡。在一定范围内,细胞内钙离子浓度的增加与细胞活性的提高呈负相关,且钙离子载体A23187能够拮抗BAPTA-AM脂质体对HepG-2细胞的保护作用。结论BAPTA-AM脂质体通过减轻钙超载,抑制D-GalN诱导HepG-2细胞凋亡。     

TNF-α对体外培养人牙囊细胞表达RANKL、OPG的影响

目的研究不同浓度的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养人牙囊细胞中核因子-κB受体活化子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,探讨牙齿萌出过程中TNF-α对破骨细胞形成的作用。方法原代培养人牙囊细胞,取生长状态良好的第5代人牙囊细胞分别与浓度为0(对照)、5、10、25、50、100ng/ml的TNF-α共同孵育6h,提取细胞RNA,RT-PCR检测RANKL、OPG的mRNA表达。以β-actin作内参物,比较各组PCR产物的光密度比值。结果与对照组(TNF-α 0ng/ml)比较,5ng/ml TNF-α可降低人牙囊细胞中OPG的表达(P<0.05),其他不同浓度TNF-α作用后OPG的表达与对照组比较无显著性差异。TNF-α浓度为25、50、100ng/ml时RANKL的表达增强,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论TNF-α可增强人牙囊细胞RANKL的表达,降低OPG的表达,提高RANKL/OPG的比值,提示TNF-α在牙齿萌出过程中对破骨细胞的形成有重要作用。     

血啉甲醚630 nm LED光动力疗法对VEGF及其受体表达的影响

目的:探索血啉甲醚630 nm LED光动力疗法对VEGF及其受体表达的影响。方法:以人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为研究对象,以不同浓度的血啉甲醚孵育细胞后,采用波长630 nm的LED光源进行照射,观察细胞形态变化,CCK-8法检测细胞增殖率,RT-PCR法检测VEGF及其受体的mRNA表达,并对各组数据进行统计学差异分析。结果:光动力疗法治疗后各实验组细胞数量减少,细胞增殖率显著低于对照组,VEGF-A及其受体mRNA的表达下调。结论:血啉甲醚630 nm光动力疗法可抑制HUVEC细胞增殖,并在转录水平抑制VEGF及其受体mRNA的表达;在一定范围内,随着光敏剂的浓度提高,抑制作用越显著。     

醛固酮自分泌环在高糖致人系膜细胞损伤中的作用

目的研究高糖环境下人系膜细胞(HMC)中醛固酮自分泌环及活性氧(ROS)、癌胚纤连蛋白(FN)表达水平的变化,进一步探讨醛固酮自分泌环与ROS、癌胚FN mRNA表达的关系。方法常规培养HMC,取对数生长期细胞分为5组:正糖组(5mmol/L D-葡萄糖),渗透压对照组(5mmol/L D-葡萄糖+20mmol/L L-葡萄糖),正糖+依普利酮组(5mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮),高糖组(25mmol/L D-葡萄糖),高糖+依普利酮组(25mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮)。采用RT-PCR法检测醛固酮合酶(CYP11B2)、11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ(11βHSD2)、癌胚FN mRNA表达水平,Western blotting检测CYP11B2蛋白表达水平,放射免疫法分析细胞培养液中醛固酮水平,通过激光共聚焦显微镜观察盐皮质激素受体(MR)蛋白表达及转位情况,荧光显微镜和荧光酶标仪检测细胞内ROS水平。结果与正糖组比较,高糖组HMC细胞CYP11B2 mRNA及蛋白表达上调,ROS和癌胚FN mRNA表达亦上调,培养液中醛固酮浓度升高(P<0.05)。高糖可促进MR蛋白发生核转位,定量分析显示高糖组胞质/胞核荧光强度比值较正糖组降低30%(P<0.05)。与高糖组比较,高糖+依普利酮组ROS及癌胚FN mRNA表达下调(P<0.05)。结论高糖负荷可通过激活HMC局部醛固酮自分泌环而导致HMC损伤。