含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸1826对Lewis肺癌放疗联合作用及其剂量-效应关系

目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmethylated cytosine-phosphate-guanine oligodeoxynucleotide,CpG ODN) 1826对X射线照射荷瘤小鼠Lewis肺癌的联合作用及其剂量-效应关系.方法 在C57BL/6J纯系小鼠右前腋窝接种Lewis肺癌细胞,制备荷瘤小鼠模型.将64只荷瘤小鼠按完全随机化方法随机分为对照组、X射线照射(IR)组、低剂量CpG ODN1826组(0.15 mg)、中剂量CpG ODN1826组(0.30 rag)、高剂量CpG ODN1826组(0.45 mg)、低剂量CpG ODN826+ IR组(CPG1826 0.15 mg+ IR)、中剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.30 mg+ IR)和高剂量CpG ODN1826+ IR组(CpG 0.45 mg+ IR),每组8只.实验的第1、2、9天注射CpG ODN1826.实验的第2天开始X射线照射,1次/d,2.50 Gy/次,总剂量12.50 Gy.观察各组移植瘤生长速度和各治疗组肿瘤生长延迟时间(TGD),用DNA断裂的原位末端标记法检测细胞凋亡.结果 成功建立荷瘤小鼠Lewis肺癌模型,成瘤率为100％.经治疗后,各组小鼠肿瘤体积都较对照组明显减小,CpG ODN1826 0.45 mg+ IR组移植瘤体积最小.DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡率分别为(2.40±0.55)％、(5.50±0.76)％、(7.13±0.83)％、(11.63±1.06)％、(19.13±0.83)％、(12.88±0.83)％、(20.57±2.37)％和(28.17±3.31)％.各治疗组都明显高于对照组(t=11.15、7.91、17.82、39.48、24.73、16.61和17.05,P＜0.05),不同剂量CpG ODN1826 +IR组显著高于IR组(t=13.78、15.08和17.47,P ＜0.05)和不同剂量CpG ODN1826组(t=18.53、9.66和7.51,P ＜0.05).结论 CpG ODN1826能明显地抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,且呈剂量-效应关系.     

CpG ODN联合光动力疗法对肝癌移植瘤生长及局部CD8+细胞毒性T细胞的影响

目的 探讨以CpG寡脱氧核苷酸(ODN)为免疫佐剂联合光动力疗法(PDT)的光免疫疗法(PIT)对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤及免疫效应.方法 92只ICR小鼠皮下接种肝癌Heps细胞建立荷瘤鼠模型,随机分为对照组、PDT组、CpG ODN组和PIT组,治疗后定期测量各组肿瘤体积,计算抑瘤率.免疫组化法计数肿瘤局部CD8+细胞毒性T细胞(CD8+CTLs).结果 (1)与埘照组相比,PDT组、CpG ODN组和PlT组治疗后16d肿瘤体积均明显缩小(P<0.01),抑瘤率分别为73.88%、20.09%、84.47%.PIT组肿痛体积较单纯PDT组明显缩小(P<0.05).(2)免疫组化染色结果显示,PDT组、CpG ODN组和PIT组治疗后2、24h肿瘤局部CD8+CTLs数量较对照组无明显变化(P>0.05),治疗后72h肿瘤局部CD8+CTLs数量,均明显高于对照组(P<0.05);PIT组肿瘤局部CD8+CTLs数量明显高于单纯PDT组(P<0.01).结论 CpG ODN能激活宿主免疫应答而有效增强PDT对小鼠Heps肝癌移植瘤的抗肿瘤及免疫效应.     

高迁移率族蛋白B1对小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对离体小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响及其意义.方法 分离小鼠腹腔巨噬细胞,经不同浓度(1、10、100、1 000ng/ml)的HMGB1刺激,以未加HMGB1的培养细胞为对照组,于不同时间点(6、12、24、48、72h)观察巨噬细胞摄取中性红能力,噻唑蓝法测定其对L1210细胞的杀伤作用,应用Transwell小室趋化装置观察趋化活性变化,并采用流式细胞术检测细胞表面I-Ak抗原表达的变化.结果 1、10、100ng/ml的HMGB1可使巨噬细胞的吞噬功能、杀伤活性、趋化活性及抗原呈递能力明显提高,其中100ng/ml时的作用最强,与对照组比较差异显著(P＜0.01);100ng/ml的HMGB1刺激48h后,对细胞吞噬功能、杀伤活性及趋化活性的影响达高峰(P＜0.01).结论 一定浓度的HMGB1可增强巨噬细胞的免疫功能.     

芫花根总黄酮抗肿瘤活性研究

目的研究芫花根总黄酮（TFRD）抗肿瘤活性及其作用机制。方法以S180小鼠实体瘤对ICR小鼠造模。TFRD设3个剂量（25、50、75mg·kg^-1）,分别在造模的7d前、7d后和造模同时对小鼠灌胃14d。MTT法检测TFRD对体外培养的肿瘤细胞的毒性、给药后荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖和NK细胞的杀伤活性。结果3个剂量的TFRD、3种给药模式对小鼠S180肿瘤均的生长都表现出显著的抑制作用,对荷瘤小鼠的淋巴细胞增值、NK细胞的杀伤活性都有明显的提升作用,对体外培养的肿瘤细胞的细胞毒活性明显大于对正常细胞K293-T的细胞毒活性。结论TFRD具有显著的抗肿瘤活性,其抗肿瘤活性是通过对肿瘤细胞的选择毒性和提升机体免疫力实现的。     

哮喘患者特异性免疫治疗中检测NK细胞活性的临床意义

目的探讨在哮喘尘螨特异性免疫治疗中自然杀伤(NK)细胞活性的临床意义。方法分别检测尘螨过敏的哮喘患者85例,正常对照组30例成人NK细胞活性,并对哮喘患者进行尘螨特异性免疫治疗,治疗前后检测其NK细胞活性及总IgE。结果哮喘患者的NK细胞活性比正常对照组显著减少(P<0.01),总IgE显著降低(P<0.01)。结论NK细胞参与哮喘的发病过程,是一种重要的免疫调节细胞。特异性免疫疗法有助于NK细胞活性增强,降低总IgE水平,从而减少哮喘的发作。     

正海复方煎剂对小鼠NK细胞杀伤活性的调节作用

目的　研究正海复方煎剂对免疫低下小鼠NK细胞杀伤活性的调节作用 ,为其开发应用提供实验依据。方法　制备荷S180 移植肿瘤模型和环磷酰胺制备免疫低下模型 ,用阳性对照药云芝肝泰和不同剂量正海复方煎剂灌胃进行免疫治疗 ,采用LDH释放法检测小鼠NK细胞杀伤活性。结果　正海复方煎剂 5 0 0 %和 2 5 0 %剂量治疗荷瘤小鼠后 ,其NK活性分别为 2 3.5 5 %± 4.17%、和 2 2 .6 6 %± 4.5 2 % ,接近于阳性对照组的 2 3.98%± 4.0 2 % ,显著高于荷瘤对照组的 16 .31%± 5 .2 9%。 5 0 0 %正海复方煎剂治疗免疫低下小鼠后 ,其NK活性为 2 6 .0 1%± 6 .71% ,接近于阳性对照组的 2 5 .94%± 4.89% ,显著高于免疫低下对照组的 17.6 0 %± 6 .6 2 % ,并均达正常鼠水平。结论　正海复方煎剂具有提高免疫低下小鼠NK活性的免疫调节作用     

低剂量辐射对小鼠种植肿瘤的生长及红细胞免疫SOD活性的影响

目的探讨低剂量辐射对小鼠种植肿瘤的生长及红细胞免疫、SOD活性的影响.方法昆明种雄性小鼠右后肢腹股沟皮下接种S180肉瘤细胞,接种前6 h X射线全身照射75 mGy,照射后5 d观察肿瘤发生率,隔日测量肿瘤体积,绘成生长曲线.15 d后杀鼠,测量肿瘤重量,病理切片观察肿瘤坏死面积、肿瘤浸润性淋巴细胞.同时检测荷瘤小鼠红细胞免疫功能、SOD活性变化.结果与直接荷瘤组相比,低剂量照射组肿瘤发生率明显降低(P＜0.01),肿瘤坏死面积、肿瘤浸润性淋巴细胞增多.低剂量组红细胞免疫功能、SOD活性明显高于直接荷瘤组(P＜0.05).结论低剂量辐射可明显提高机体抗肿瘤的作用,提高红细胞免疫功能及SOD活性,可能具有肿瘤治疗的潜在临床意义.     

低水平电离辐射单次或分割照射法的抗肿瘤效应比较

目的比较低水平电离辐射(LLIR)单次与分割照射的抗肿瘤效应。方法选用C57BL/6和ICR品系小鼠分别移植Lewis肺癌和S180肉瘤细胞,24h后再分别接受7.5cGy单次照射和分割照射(1.5cGy×5d);然后观察20d抑瘤率、脾NK细胞活性、T淋巴细胞表面CD4、CD8水平的变化以及荷瘤鼠的平均寿命。结果单次与分割照射对Lewis肺癌的抑瘤率分别为40.34%和51.19%,对S180肉瘤为34.26%和30.98%;脾NK细胞活性照后1～4d升高;CD4、CD8水平及CD4/CD8比值均有不同程度增高;荷瘤鼠的生命延长率分别为8.45%和8.84%。结论本实验采用的低水平单次或分割照射对Lewis肺癌和S180肉瘤均有明显的抑瘤效果,能显著增强荷瘤机体的免疫机能以及延长荷瘤鼠的平均寿命。经比较,两种照射方式在肿瘤生长抑制和免疫刺激作用等方面差异无显著性(P＞0.05)。     

羊栖菜多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的观察羊栖菜多糖对S-180肉瘤移植小鼠免疫功能的影响，评价其抗肿瘤作用的机制。方法采用水煮醇沉、Sevag法并结合胰酶消化去蛋白及Sephadex G200柱分离纯化获得羊栖菜多糖SFP1和SFP2，用S-180肉瘤移植小鼠作为实验模型，用羊栖菜多糖SFP2腹腔注射给药，观察羊栖菜多糖对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用。结果羊栖菜多糖能明显抑制S-180肉瘤在荷瘤小鼠上的生长，显著提高S-180荷瘤小鼠胸腺指数、脾指数及ConA诱导的脾淋巴细胞增殖，提高荷瘤小鼠NK细胞活性及腹腔巨噬细胞的吞噬活性。结论羊栖菜多糖能明显提高荷瘤小鼠机体的免疫功能，提高机体免疫功能是羊栖菜多糖抑制肿瘤生长的机制之一。     

光动力疗法对输入的NK细胞在荷Heps肝癌鼠瘤内分布的影响

目的探讨NK细胞输入后在荷Heps肝癌小鼠体内的分布规律,光动力疗法（PDT）对输入的NK细胞在肿瘤组织内分布的影响。方法 96只KM小鼠建立Heps肝癌移植瘤模型后随机分为对照组、细胞组（NK组）和光免疫组（PIT组）,每组32只。对照组小鼠尾静脉输入生理盐水,NK组小鼠尾静脉输入4,＇6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）标记的NK细胞,PIT组小鼠PDT处理后即刻输入DAPI标记的NK细胞。治疗后1、2、4、6和8 d摘取小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肿瘤组织,在荧光显微镜下观察NK细胞在上述脏器的动态分布情况;治疗后2 d观察瘤组织的病理学变化;治疗后1、2、4、6和8 d摘除小鼠眼球取血以流式细胞仪检测外周血NK细胞百分率;治疗后6 d LDH释放法检测小鼠脾细胞杀伤活性。结果 （1）各治疗组,输入后1、2、4、6和8 d,NK细胞在小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肿瘤组织中均有分布,其中以肿瘤组织内最多;NK细胞在瘤内浸润密度：以输入后2 d最高,而各时间点PIT组又显著高于NK组（P〈0.05）;（2）外周血中NK细胞含量：在治疗后1、2、4和6 d,PIT组较对照组明显增高（P〈0.01）;治疗后1、2和4 d,NK组较PIT组和对照组增高（与PIT组相比,P〈0.05;与对照组相比,P〈0.01）;（3）效靶比为10∶1、20∶1和50∶1时,NK组和PIT组脾细胞杀伤活性均显著高于对照组,其中PIT组又显著高于NK组（P〈0.01）。结论 NK细胞输入荷瘤小鼠体内后能选择性聚集于肿瘤组织内;PDT可增加输入的NK细胞在瘤内的浸润密度,增强小鼠脾细胞对Heps肝癌的杀伤活性。     

含CpG寡核苷酸抗血管生成作用的实验研究

目的观察CpGODN对裸鼠肺癌皮下种植瘤血管生成的作用。方法建立裸鼠皮下种植瘤模型,随机分为4组：A组[CpGODNl826（1μg／μ1）＋13射线（RT：8Cy）]、B组[CpGODNl826（μg／μl）]、C组[生理盐水（100μl/只）＋β射线（RT：8Gy）]、D组[生理盐水（100μl/只）]。接种肺癌细胞7d后,开始瘤内注射药物并照射5d。RT．PCR法测定瘤组织中VEGF-CmRNA、NRP-1mRNA的表达。结果4组裸鼠肿瘤组织中VEGF．CmRNA相对表达水平分别为18．34±3．19、29．62±3．14、51．13±2．81、53．46±5．67;NRP-1mRNA相对表达水平分别为23．57±5．73、34．72±5．13、59．95±4．76、62．49±6．34,A组较其他3组显著下降（P〈0．01）,B组较C组和D组也显著下降（P〈0．01）。结论CpGODNl826可显著抑制血管生成,其作用机制可能与抑制VEGF-C和NRP．1的表达有关。     

CpG Oligodeoxynucleotides Enhance the Activities of CD8+ Cytotoxic T-Lymphocytes Generated by Combined hMUC1 Vaccination and hNIS Radioiodine Gene Therapy

Purpose

The authors evaluated whether the cytotoxicity of CD8+CTLs generated by combined hMUC1 vaccination and hNIS radioiodine gene therapy was enhanced in the presence of CpG in an established tumor model.

Methods

CMNF cells (CT26 cells expressing hMUC1, hNIS and Firefly luciferase) were transplanted into BALB/c mice. Four and 10 days later, tumor-bearing mice were immunized intramuscularly with pcDNA3.1 or pcDNA-hMUC1 or pcDNA-hMUC1+CpG, and subsequently administered PBS or ¹³¹I [five groups (seven mice/group): referred to as the pcDNA3.1+PBS, phMUC1+PBS, pcDNA3.1+¹³¹I, phMUC1+¹³¹I, and phMUC1+¹³¹I+CpG groups]. The number of CD8+IFNr+ T cells of splenocytes as well as the number of CD8+IFNr+ T cells of splenocytes re-stimulated with CD11c+ cells was determined using FACS analysis. The activities of cytotoxic T cells (CTLs) from splenocytes were investigated.

Results

Marked tumor growth inhibition was observed in the phMUC1+¹³¹I and phMUC1+¹³¹I+CpG groups, but not in the other three single therapy groups. Particularly the number of CD8+IFN-γ+ T cells of splenocytes was more increased in the phMUC1+¹³¹I+CpG group than in the phMUC1+¹³¹I group. The number of CD8+IFN-γ+ T cells of splenocytes stimulated with CD11c+ cells was the most enhanced in the phMUC1+¹³¹I+CpG group among the five groups. Concurrently, the activities of hMUC1-associated CTLs obtained from splenocytes in the phMUC1+¹³¹I+CpG group were significantly greater than in the other four groups (pcDNA+PBS, phMUC1+PBS, pcDNA+¹³¹I, phMUC1+¹³¹I, and phMUC1+¹³¹I+CpG, 16 ± 2%, 20 ± 1%, 30 ± 2%, 60 ± 2%, and 87 ± 2%, respectively, P < 0.01).

Conclusion

Our data suggest that adjuvant CpG ODNs can increase the killing activities of CTLs generated by combined hMUC1 DNA vaccination and hNIS radioiodine gene therapy.     

含CpG寡脱氧核苷酸增强人肺癌细胞株A549放射敏感性的研究

目的探讨含CpG基序的寡脱氧核苷酸对人肺癌细胞株A549放射敏感性的影响。方法分别用不同浓度CpG ODN处理A549细胞,经β射线照射后,检测细胞增殖和集落形成情况,ELISA法检测细胞TNF-α、IL-12和INF-γ的分泌水平,G riess检测细胞NO的含量。结果 CpG ODN抑制A549细胞的增殖,并呈量效关系。CpG ODN（10μg/m l）联合β射线照射,抑制A549细胞的增殖作用最强,且增加了TNF-α、IL-12、INF-γ和NO的分泌。结论 CpG ODN对A549细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能与CpG ODN抑制A549细胞增殖、增强TNF-α、IL-12、INF-γ和NO的分泌有关。     

高压氧对荷S-180瘤细胞小鼠血液某些指标的影响(论著)

目的：探讨高压氧（HBO）暴露对荷瘤小鼠血液指标的影响。方法：用雄性Balb／C／小鼠20只，随机分成4组，每组5只。A组为正常对照；B组只行HBO暴露；C组只做肿瘤接种；D组行HBO暴露并接种肿瘤。B、D组经压力0．2MPa、氧浓度87％、氧分压0．174MPa的HBO暴露20次后，所有鼠摘眼球取血对其血红蛋白、白细胞总数、中性白细胞数、淋巴细胞数、中性白细胞百分比、淋巴细胞百分比作了观察。结果：（1）血红蛋白在HBO肿瘤组比单纯HBO组高（P＜0．01）；（2）白细胞总数在HBO肿瘤组分别高于对照组（P＜0．05）、单纯HBO组（P＜0．01）和单纯肿瘤组（P＜0．05）；（3）中性白细胞数在HBO肿瘤组和单纯肿瘤组，均比对照组高（P＜0．01，P＜0．05），而HBO肿瘤组分别比单纯HBO组和单纯肿瘤组高（P＜0．01，P＜0．05）；（4）淋巴细胞数各组之间均无明显差异；（5）中性白细胞百分比在HBO肿瘤组和单纯肿瘤组，均比对照组高（P＜0．01，P＜0．05），而HBO肿瘤组比单纯HBO组高（P＜0．01）；（6）淋巴细胞百分比在对照组分别比HBO肿瘤组和单纯肿瘤组高（P＜0．01，P＜0．05），而单纯HBO组比HBO肿瘤组高（P＜0．01）。结论：（1）HBO（氧分压＝0．174MPa）可使荷瘤小鼠的白细胞总数和中性白细胞数量提高，但未能改变正常     

含CpG和CTB的HIV多表位基因真核表达载体的构建及表达

目的构建含非甲基化的CpG ODN序列及霍乱毒素B亚单位（CTB）的HIV复合多表位基因的真核表达载体,并在体外进行表达。方法设计并合成含CpG ODN序列和linker序列的CTB基因引物,用PCR方法扩增CpG-CTB基因（CC）,定向连接到真核表达载体pVL上,然后在CC基因下游插入HIV复合多表位基因MEGNp24,构建重组质粒pVL-CC-MEGNp24,酶切鉴定。纯化重组质粒,转染293T细胞,RT-PCR和细胞免疫染色方法分别检测CTB和p24基因的转录及表达,同时设质粒pVL及空白对照。结果构建了重组质粒pVL-CC-MEGNp24,该质粒转染293T细胞后,CTB和复合多表位基因在293T细胞中得到稳定表达。结论成功构建了含免疫佐剂的HIV复合多表位真核表达载体,为后期疫苗的研究奠定了基础。     

卡拉胶寡糖对放射损伤的防护作用

目的 探讨卡拉胶寡糖对受6．0Gy X射线照射小鼠的辐射防护作用。方法采用6MV X直线加速器一次全身照射BALB／c小鼠，3个卡拉胶寡糖组照射前连续14d和照射后继续给药7d。观察小鼠30d存活率、外周血白细胞总数、胸腺指数和脾脏指数、脾脏NK细胞活性和腹腔巨噬细胞吞噬功能。结果卡拉胶寡糖组小鼠30d存活率比照射对照组提高75％～90％；而且卡拉胶寡糖能加速小鼠外周血白细胞的恢复，明显提高胸腺指数和脾脏指数，激活脾脏NK细胞的杀伤活性，增强巨噬细胞吞噬功能。结论卡拉胶寡糖对受照射小鼠有明显的辐射防护作用。     

太空环境对黑色素瘤B16细胞成瘤性的影响

目的观察空间诱变小鼠黑色素瘤B16细胞株的成瘤性，寻找免疫原性发生变异的细胞株。方法将B16细胞株应用细胞低温长期生存系统，搭载于我国第20颗返回式卫星，返地后进行单克隆化，从得到的110株单克隆太空诱变B16细胞株中随机选取4株，常规培养后和对照细胞株同时分别接种C57BL／6J小鼠，腹腔接种组观察生存期，皮下接种组14d后取血、处死，记录瘤重，脾脏重，胸腺重，并进行血清细胞因子检测和瘤体的病理学检测。结果初步确定了适合太空诱变肿瘤细胞株体内筛选实验的方法和筛选指标，并筛选出了1株出瘤时间延迟、瘤重缩小，生存期延长，荷瘤小鼠血清IL-2浓度升高，免疫原性可能发生变异的B16细胞株。结论空间环境可使体外培养肿瘤细胞产生变异，能否通过太空诱变的方法增强肿瘤细胞株的免疫原性需进一步实验验证。     

CpG ODN作为黏膜免疫佐剂的研究进展

经黏膜免疫因其简便易行、可同时激发黏膜免疫和系统免疫应答等优点受到极大关注。但由于存在黏膜屏障,能有效介导黏膜免疫应答的佐剂已成为研究热点。在诸多在研佐剂中,CpG ODN具有极强的黏膜免疫激活作用,诱导以Th1型为主的免疫应答,具有广阔的应用前景,本文综述了CpG ODN作为黏膜免疫佐剂的研究进展。     

CpG寡脱氧核苷酸为佐剂的丙型肝炎生物治疗研究进展

丙型肝炎严重威胁人类健康,并在全球范围内流行,目前尚无有效办法预防和治疗丙型肝炎病毒感染,胞苷酸鸟苷（CpG）寡脱氧核苷酸（CpGODN）作为一类较强的免疫调节佐剂,能够广泛诱导交叉中和性抗体和细胞免疫反应,对丙型肝炎病毒感染具有治疗作用。本文对以CpGODN为佐剂的丙型肝炎生物治疗研究进展予以综述。