HSP70在大肠癌细胞的表达规律

第一军医大学细胞生物与医学遗传学教研室,广东　广州　５１０５１５　摘要目的　探讨大肠癌细胞（ＬｏＶｏ株）热休克蛋白７０（Ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ　７０,ＨＳＰ７０）热应激时表达规律,为进一步研究ＨＳＰ７０在ＴＮＦ－α诱导大肠癌细胞凋亡中的作用提供了实验依据。方法培养大肠癌细胞 （ＬｏＶｏ）,热应激（４２℃, ３０ｍｉｎ）后分别培养２、 ５、 ８、１１ ｈ,然后运用免疫组化、Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ方法分析应激后不同时间细胞内ＨＳＰ７０的表达和分布。结果热应激２ｈ后ＨＳＰ７０合成量增加,与未应激组比有显著差异（Ｐ＜０．０５）,５～８ｈ后合成量最高（Ｐ＜０．０１）,１１ｈ后明显减少,与２ｈ染色情况基本相同。并观察到热应激细胞中胞核比胞质染色深,ＨＳＰ７０有核迁移现象。少量热应激死亡细胞的特异性染色更深。结论　热应激前ＨＳＰ７０在大肠癌细胞中合成较少,热应激后合成量增加,在 ５～８ ｈ达峰值后降低。     

热应激对热休克蛋白70mRNA的诱导

用＾３２Ｐ标记的热休克蛋白７０（ｈｓｐ７０）ｃＤＮＡ为探针，检测了热应激时完整及人骨肉瘤细胞（ＨＯＳ－８６０３）的ｈｓｐ７０ ｍＲＮＡ。结果表明，大鼠体温在４２℃３０ｍｉｎ后，脑、肝、肺、脾中ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的表达明显增加，以脑最为显著。ＨＯＳ－８６０３细胞经４２℃热处理３０ｍｉｎ，置３７℃培养２～４ｈ后，ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的表达，且在整体动物上有组织特异性。     

热休克基因表达对过氧化氢所致肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析发现热休克预处理（４２℃，２ｈ）使肺泡巨噬细胞（ＰＡＭｓ）中热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ｍＲＮＡ增多，ＨＳＰ７０合成增加，且获得抵抗Ｈ２Ｏ２损伤的能力。用放线菌酮和放线菌素Ｄ分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克蛋白基因的表达，能取消热休克对Ｈ２Ｏ２所致ＰＡＭｓ损伤的保护效应。提示热休克系通过使热休克蛋白基因表达增强，ＨＳＰ７０合成增多，从而保护Ｈ２Ｏ２所致的ＰＡＭｓ损伤。     

蛋白激酶C在热休克基因表达中的作用

热休克（４２℃，２ｈ）或Ｈ２Ｏ２预处理，均能在蛋白翻译合成水平使牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中的ＨＳＰ７０增多；在基因围录水平使ＢＰＡＥＣｓ中ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ含量增加。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂－－Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）能显著减少热休克和Ｈ２Ｏ２诱导的ＨＳＰ７０合成及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录的增加。提示ＰＫＣ在热休克和Ｈ２ＯＳ诱导的热休克基因表达的信息传递中具有重要作用。     

次声作用后大鼠下丘脑HSP70的表达

研究大鼠经次声作用后下丘脑中ＨＳＰ７０的表达。方法ＳＤ大鼠先经８Ｈｚ,１２０ｄＢ次声作用２ｈ,然后分为８组,每组３只。分别于次声作用后０．５,１,２,３,４,５,６和７ｈ后取下丘脑,通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ技术检测ＳＨＰ７０的表达。结论ＨＳＰ７０参与了次声应激后机体的反应机制。     

蛋白激酶C在热休克基因表达中的作用

热休克（４２℃，２ｈ）或Ｈ＿２Ｏ＿２预处理，均能在蛋白翻译合成水平使牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中ＨＳＰ７０增多；在基因转录水平使ＢＰＡＥＣｓ中ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ含量增加。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂──Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）能显著减少热休克和Ｈ＿２Ｏ＿２诱导的ＨＳＰ７０合成及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录的增加。提示ＰＫＣ在热休克和Ｈ＿２Ｏ＿２诱导的热休克基因表达的信息传递中具有重要作用。     

血液光量子疗法影响热休克蛋白表达的研究

目的 探讨血光量子疗法对细胞ＨＳＰ７０表达的影响及血液光量子半法治疗作用的机理。方法 利用不同剂量紫外线（ＵＶ）照射体外培养的小鼠巨噬细胞,进行ＨＳＰ７０表达的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析。;并用不同剂量ＵＶ照射大鼠血液后回输进行ＨＳＰ７０合成的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析。结果 小剂量ＵＶ（３０秒钟）对照后细胞内ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ稍有增多,增大剂量（１分钟）后其表达明显增多;ＵＶ照射血液回输可引起大鼠肺、     

热休克基因表达对过氧化氢所致肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析发现热休克预处理使肺泡巨噬细胞中热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ｍＲＮＡ增多，ＨＳＰ７０合成增加，且获得抵抗Ｈ２Ｏ２损伤的能力，用效放线菌酮和放线菌素Ｄ分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克蛋白基因的表达，能取消热休克对Ｈ２Ｏ２所致ＰＡＭｓ损伤的保护效应。提示热休克系通过使热休克蛋白基因表达增强，ＨＳＰ７０合成增多，从而保护Ｈ２Ｏ２所致的ＰＡＭｓ损伤 。     

人胃癌细胞热耐受性与热休克蛋白70的关系

目的观察４１℃６０ｍｉｎ温热作用后人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３热耐受性和ＨＳＰ７０表达的变化。方法４１℃６０ｍｉｎ温热作用后不同时间，测定细胞４３℃６０ｍｉｎ温热再作用的克隆形成率，并进行细胞ＨＳＰ７０免疫组化分析。结果①４１℃诱导后即时细胞已形成较高的热耐受性，４ｈ有所降低，８ｈ达到高峰（Ｐ＜０．０１），２４ｈ恢复近原有水平；②ＢＧＣ－８２３细胞常温下表达少量ＨＳＰ７０，并且主要分布于胞浆内；４１℃诱导后即时ＨＳＰ７０的表达量并未增加，但核内染色加深（Ｐ＜０．０１）；诱导后４ｈ开始增加（Ｐ＜０．０１），８～１６ｈ达到高峰，并主要在核内（Ｐ＜０．０１）；２４ｈ衰减至近原有水平（Ｐ＞０．０５）。结论４１℃温热诱导后ＢＧＣ－８２３细胞形成的热耐受性包括两部分：一部分为即时、非ＨＳＰ７０依赖的，另一部分为ＨＳＰ７０依赖的热耐受性。     

大鼠自发性高血压和心肌肥厚时热休克蛋白70基因表达的研究

本工作采用热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）核酸分子杂交方法，检测了自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）与其正常对照（ＷＫＹ）大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）受热刺激后以及大鼠腹主动脉缩窄后心肌肥厚时左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平，并对ＳＨＲ和ＷＫＹ肝组织基因组ＤＮＡ进行了限制性酶切片断长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。结果表明：ａ．３７℃培养的ＳＨＲＡＳＭＣ及整体ＳＨＲ肝组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的基础表达水平均低于ＷＫＹ大鼠，ＳＨＲＡＳＭＣ受热刺激（４２℃１５ｍｉｎ）后２ｈ，ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达增加的程度明显大于ＷＫＹ大鼠。ｂ．大鼠腹主动脉缩后造成左室压力超负荷，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ在压力超负荷４ｈ时已明显升高，１ｄ、２ｄ、１ｗ均维持在高水平，１ｗ后逐渐降低。ｃ．ＳＨＲ和ＷＫＹ鼠肝组织基因组ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ酶切后，ＳＨＲＨＳＰ７０基因缺失一条约５．６ｋｂ的片段。提示：ＳＨＲＡＳＭＣ对热敏感性增加；压力负荷增加早期，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达明显增加；ＨＳＰ７０基因结构异常可能与高血压发生有关。     

脑干热休克蛋白70的表达与实验性脑损伤猝死的相关性

目的 了解脑损伤后热休克蛋白７０（Ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ７０，ＨＳＰ７０）蛋白质及ｍＲＮＡ在脑干局部的改变，及其对维持脑干生命中枢功能的作用。方法 用头颅打击器制成大鼠脑损伤猝死模型，免疫组化法分别测定损伤组损伤前和损伤后１、３、６、１２ｈ及损伤猝死组脑干ＨＳＰ７０的数量和分布变化；逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测各组相应部位ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平。结果 在脑损伤１５ｍｉｎ后脑干ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平显著升高，ＨＳＰ７０蛋白质需３～６ｈ才大量表达；损伤后猝死的鼠脑中仅见ＨＰＳ７０ｍＲＮＡ升高，ＨＳＰ７０蛋白质与对照组无差异。结论 脑损伤后ＨＳＰ７０合成迅速增加，清除损伤因素，维持自稳状态；当损伤严重时，应激蛋白质的合成障碍，抗损伤的保护机制不能发挥，脑干生命中枢的功能紊乱，生命丧失。因此，Ｈ     

脑干热休克蛋白70的表达与实验性脑损伤猝死的相关性

目的了解脑损伤后热休克蛋白 ７０（Ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ７０, ＨＳＰ７０）蛋白质及 ｍＲＮＡ在脑干局部的改变,及其对维持 脑干生命中枢功能的作用。方法用头颅打击器制成大鼠脑损伤猝死模型,免疫组化法分别测定损伤组损伤前和损伤 后 １、３、６、１２ ｈ及损伤摔死组脑于 ＨＳＰ７０的数量和分布变化;逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测各组相应部位 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ水平。结果在脑损伤 １５ ｍｉｎ后脑干 ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平显著升高, ＨＳＰ７０蛋白质需 ３～６ ｈ才大量表达;损伤后 猝死的鼠脑中仅见 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ升高,ＨＳＰ７０蛋白质与对照组无差异。结论脑损伤后 ＨＳＰ７０合成迅速增加,清除损伤 因素,维持自稳状态;当损伤严重时,应激蛋白质的合成障碍,抗损伤的保护机制不能发挥,脑干生命中枢的功能紊 乱,生命丧失。因此, ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ－蛋白质分离可作为神经细胞致死性损伤的标志。     

HSP70在缺血预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用中的表达？…

目的 探讨ＨＳＰ７０在缺血预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用。方法 除观察病理组织学变化外,用免疫组化方法检测各组中不同灌注时间的热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）表达的变化。结果 病理组织学肾小管评分ＩＰＣ组均低于ＩＰ组（Ｐ〈０．０５）,而ＩＰＣ组和ＣＯＮ组之间无显著性差异（Ｐ〉０．０５）;ＨＳＰＡ７０的表达ＩＰＣ组明显高于ＩＲ组（Ｐ〈０．０１）,并且在再灌注２ｈ和６ｈ时,其在ＩＰＣ组的表达明显高于     

局灶性脑缺血/再灌注及电针对Wistar大鼠脑组织HSP70表达的影响

应用免疫组化Ｓ－Ｐ法,探讨局灶性脑缺血／再灌注及电针双侧“合谷”穴（ＬＩ４）对Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑组织中热休克蛋白（ＨＳＰ７０）表达的影响及意义。结果局灶性脑缺血３ｈ、再灌注３ｈ及６ｈ组ＨＳＰ７０的表达较假手术组明显增加（Ｐ〈０．０１）,缺血３ｈ／再灌注６ｈ＋电针“合谷”穴组与缺血３ｈ／再灌注６ｈ组相比ＨＳＰ７０表达进一步增加（Ｐ〈０．０５）。提示电针对局灶性脑缺血／再灌注的保护作用可能与ＨＳＰ７０     

SHR和WKY大鼠主动脉hsp70mRNA水平的比较研究

本工作应用热激蛋白７０ＫＤ（ｈｓｐ７０）核酸分子杂交方法，检测了：（１）自发性高血压（ＳＨＲ）主动脉和离休培养的主动脉平滑肌细胞受热激后ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平的变化；（２）不同细胞培养时间（３个月与６周）的ＳＨＲ、ＷＫＹ主动脉ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平。结果提示ＳＨＲ主动脉ｈｓｐｍＲＮＡ水平增加，ＳＨＲ细胞培养受热激（４２℃，１５ｍｉｎ）后２ｈ，ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平明显高于ＷＫＹ鼠者，６周较３个月的ＳＨＲ细胞ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ水平高；６个月的ＳＨＲ细胞较同期和３个月的ＷＫＹ细胞ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ高。推论ＳＨＲ血管平滑肌细胞对热敏感，原癌基因ｃ－ｍｙｃ和抗癌基因Ｐ５３可能参与ｈｓｐ７０表达调控，并共同参与ＳＨＲ细胞增殖的调节。     

免疫印迹法检测高温作业工人血清中热应激蛋白70ku抗原和抗…

热应激蛋白７０ｋｕ（ＨＳＰ７０）是主要的热应激蛋白。用已纯化的ＨＳＰ７０抗原和已制备好的ＨＳＰ７０抗体，采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨率和抗原抗体反应的特异性相结合的免疫印迹法检测１７名高温作业工人和１７名对照组人群血清中ＨＳＰ７０抗原和抗体。结果，与对照组相比，高温作业工人血清中ＨＡＰ７０含量增加，ＨＳＰ７０抗体阳性率为２３．５％。结果表明ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法用于检测工人血清     

热疗联合DDP诱导大肠癌细胞凋亡和bcl—2表达的实验 …

目的：研究热化疗诱导大肠癌（ＬｏＶｏ）细胞凋亡及其与ｂｃｌ－２基因表达的关系，探讨热化疗治疗大肠癌的机制。方法：应用热疗联合顺铂（ＤＤＰ）在不同药物浓度、时间和温度条件下诱导ＬｏＶｏ细胞凋亡，以流式细胞仪检测其凋亡率及ｂｃｌ－２基因的表达。结果：随着药物浓度的升高、作用时间的延长，细胞凋亡率增加；热疗联合ＤＤＰ所致凋亡率大于单纯化疗组和单纯热疗组之和；随着药物浓度的升高，ｂｃｌ－２的表达下凋；各处     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Hsp70的表达及与细胞凋亡的关系

目的：研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后热休克蛋白（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｔｅｉｎ,Ｈｓｐ）７０的表达及与细胞凋亡的关系。方法：用线栓法制备ＭＣＡＯ模型,用免疫组化法测定Ｈｓｐ７０阳性细胞及用ＴＵＮＥＬ法测定凋亡细胞。结果：缺血２ｈ即有Ｈｓｐ７０阳性细胞,６～２４ｈ明显,４８ｈ减弱,３ｄ消失。ＴＵＮＥＬ阳性细胞于再灌注后２ｈ出现,２４～４８ｈ达高峰,７２ｈ减弱。结论：脑缺血再灌注后早期即有Ｈｓｐ７０表达及细胞凋亡发生。     

连续部分肝切除对大鼠肝磷酸酶,热休克蛋白和增殖细 …

以连续三次（间隔４ｈ）部分肝切除（ＣＰＨ）大鼠为模型，分析了ＣＰＨ对肝脏酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性和对构成性热休克蛋白７０／诱导性热休克蛋白６８（ＨＳＣ７０／ＨＳＰ６８）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）含量的影响。结果表明：第１次切除肝左叶后４ｈ，ＡＣＰ和ＡＫＰ活性及ＨＳＣ７０／ＨＳＰ６８和ＰＣＮＡ表达量均增加；第２、３次分别切除肝中叶、右叶后，ＡＣＰ活性和ＰＣＮＡ含量与ＡＫＰ活性     

高温高湿环境犬肢体火器伤后HSP70含量变化的实验研究

目的探讨高温高湿环境下肢体火器伤后热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）含量变化的规律。方法将１８只犬随机分为高温 高湿组、常温常湿组、热适应组,分别在致伤前及火器伤后ｌ、３、４、６、８、１０、１４、１８、２４ｈ检测外周血淋巴细胞和伤道骨骼 肌中ＨＳＰ７０含量。结果淋巴细胞中ＨＳＰ７０含量在高温高湿组的两个高峰分别为伤后４ｈ和ｌ４～ｌ８ｈ;热适应组３ｈ达 到高峰,持续至６ｈ;常温常湿组６ｈ达到高峰。常温常湿组伤道骨骼肌ＨＳＰ７０含量在伤后ｌ４～１８ｈ也出现一个增幅不 明显的高峰期。结论　高温高湿环境下肢体火器伤后ＨＳＰ７０含量的变化有其独特的规律。