海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化胰岛细胞移植治疗糖尿病的实验研究

采用Ｓｕｎ海藻酸钠－多聚赖氨酸－海藻酸钠（ＡＰＡ）微囊制作技术,分别包裹大鼠胰岛和胰岛素分泌细胞系,移植于糖尿病小鼠腹腔。结果表明ＡＰＡ微囊化大鼠胰岛或胰岛素分泌细胞移植,均可使糖尿病小鼠血糖降低至接近正常水平达３周至１１０天;移植微囊无明显的组织学反应。证明该ＡＰＡ微囊化胰岛细胞移植具有较好的治疗效果,微囊具有较好的生物相容性和免疫隔离作用。为进一步发展生物型人工胰岛奠定了基础。     

微囊化大鼠胰岛移植物的制备与异种移植

为降低胰岛移植中排斥反应，用海藻酸钠－聚赖氨酸生物膜制备微囊化大鼠胰岛，体外培养，胰岛素释放试验功能良好，胰岛素释放量与单纯胰岛差异无显著意义；异种移植可成功地纠正糖尿病小鼠的高血糖状态平均达４个月之久。表明：大鼠，胰岛微囊化可在不便用免疫抑制剂的情况下，有效地延长胰岛在糖尿病小鼠体内的生存期。     

糖尿病犬经肝动脉肝内移植微囊化猪胰岛细胞的安全性和有效性

目的评估移植于I型糖尿病犬肝脏中的微囊化新生猪胰岛细胞(NPI)的生物相容性、免疫学特性及生理学特性。方法I型糖尿病犬分为A、B两组,每组15只,A组每只犬分别经肝动脉灌注微囊化新生猪胰岛细胞40～60万个,B组每只犬分别经肝动脉灌注未微囊化新生猪胰岛细胞40～60万个,两组动物移植后均不使用免疫抑制治疗。移植前后分别测量移植受体的肝脏功能及淋巴细胞CD4 /CD8 比值。移植6个月后所有移植受体的肝脏均进行病理学检查。结果移植后A组外源性胰岛素用量从移植前的22 u逐渐降至5 u,B组所需外源性胰岛素从移植前的24 u下降至10 u。移植后2～3周B组胰岛素用量恢复到移植前的水平,而A组的部分动物的胰岛素剂量继续减至8 u。B组受体移植后血的CD4 较移植前升高,而A组的CD4 和CD8 细胞移植后无明显变化。移植后所有受体的肝功能及组织结构未见异常。结论微囊化的新生猪胰岛细胞在受体犬的肝脏中有很好的生物相容性。微囊可以延长移植物的存活,且异种移植微囊化的新生猪胰岛细胞能够纠正糖尿病犬的高血糖状态。     

APA微囊化胰岛研究进展

微囊化胰岛是从20世纪80年代发展起来的细胞移植治疗糖尿病的重要方法。海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊(APA)具有广阔的应用前景。本文综述了近年来微囊化胰岛的研究进展，重点分析了微囊材料的生物相容性，微囊的完整性，微囊的移植部位等影响APA微囊治疗效果的因素，以期为完善微囊化胰岛的治疗效果提供线索。     

大鼠胰岛分离与纯化的实验研究

为探讨胰岛移植物的制备方法，采用胰管注射胶原酶、胰腺静止消化方法，分离成年大鼠胰岛，葡聚糖离心纯化。纯化后胰岛收获量为６１０～８２０个／胰腺，纯度达９２％；胰岛形态结构完整，内分泌细胞超微结构保持良好；对葡萄糖刺激反应胰岛素释放量是基础分泌水平的８倍；异种移植可逆转实验性糖尿病小鼠的高血糖达１周。结果表明：胰管注射胶原酶胰腺静止消化可获得高产量、高纯度、功能良好的胰岛。为临床胰岛移植开辟了新的途径。     

胰岛淀粉样多肽对培养大鼠胰岛细胞分泌胰岛素的影响

淀粉样多肽（ＩＡＰＰ）是一种新发现的由胰岛细胞分泌的激素，在非胰岛素依赖型糖尿病的发生发展中具有重要意义。本研究旨在观察ＩＡＰＰ对培养的新生大鼠胰岛细胞单层培养物胰岛素分泌的影响。取新生大鼠胰腺，用胰蛋白酶和胶原酶（ｖ型）反复消化分散细胞，ＲＰＭＩ１６４０培养液培养，碘乙酸去除成纤维细胞。于培养后７ｄ选生长一致、形态良好的单层细胞培养物用于ＩＡＰＰ实验。结果ＩＡＰＰ与培养７ｄ的胰岛细胞单层培养物孵育１．５ｈ，与不含ＩＡＰＰ的对照组比较，ＩＡＰＰ２μｍｏｌ／Ｌ时对胰岛素分泌无明显抑制作用（Ｐ＞０．０５），ＩＡＰＰ１０μｍｏｌ／Ｌ时对胰岛素分泌有明显抑制作用（Ｐ＜０．０１）。表明ＩＡＰＰ依赖剂量抑制大鼠胰岛细胞分泌胰岛素。     

微囊化猪甲状腺组织移植治疗甲状腺功能减退大鼠的实验研究

海藻酸钠－多聚赖氨酸－海藻酸钠（ＡＰＡ）微囊化猪甲状腺组织移植治疗２８只实验性甲状腺功能减退大鼠，对照组１７只移植非微囊化猪甲状腺组织。结果显示，移植后两组受体的Ｔ３、Ｔ４水平升高，其中对照一更为显著，但９周后明显下降，甚至低于移植前水平。而实验组保持持续升高，超过４０周；移植后两组受体的ＴＳＨ水平均明显下降，但以实验组为显著，而且持续降低超过４０周。而对照组维持时间较短，移植９周后开始回升。移植     

重视微囊化人工细胞在医学中应用的研究

组织细胞移植可以治疗多种神经／内分泌及代谢疾病。异种细胞和基因工程细胞可提供来源广泛的具有特定功能的移植物。海藻酸钠－聚赖氨酸－海藻内（ＡＰＡ）微囊包裹移植物可有效的克服免疫排斥,使异种移植物得以在宿主体内长期存活并发挥效应。ＡＰＡ微化工细胞已在治疗帕金森病、疼痛、糖尿病等疾病的研究中取得了很大的进展。我国在领域的研究水平已处于国际先进行列。严格控制所用目的细胞和微囊的质量,是保证研究健康发展的必     

微囊化牛嗜铬细胞移植于脊髓蛛网膜下镇痛作用的研究

采用微囊化牛嗜铬细胞（ＢＣＣ）异种移植于大鼠和癌痛病人疹髓蛛网膜下方法,观察ＢＣＣ镇痛作用和海藻酸钠－聚赖氨酸－海藻酸钠（ＡＰＡ）微衰对异种移植物的免疫保护作用。结果显示,移植后微囊组和非微囊组织大鼠基础热痛阈和尼古丁激发热痛阈明显升高,微囊组８０％受试鼠的镇痛特续时间超过２７０天,将微囊化ＢＣＣ樾入８例癌痛疾人朱网膜下,除１例痛效果不明显外７例缓解,减少或停止使用止痛药,镇痛作用持续时间〉６０天     

模拟微重力条件下大鼠胰岛培养及体内移植的实验研究

目的研究经模拟微重力条件培养的胰岛是否能够降低胰岛移植过程中引发的免疫排斥反应，进而延长胰岛的体内存活时间。方法分离新鲜胰岛，应用培养皿对胰岛进行静态培养，同时应用旋转式生物反应器对胰岛进行三维立体培养。应用吖啶橙一碘化丙啶（AO-PI）染色和葡萄糖刺激实验对3种条件下培养得到的胰岛进行生物学活性研究。2000当量胰岛在旋转式生物反应器中培养5d后，将其移植入经链脲佐菌素（STZ）处理的糖尿病模型SD大鼠。肾被膜下作为实验组，以新鲜分离的胰岛和静态培养5d的胰岛移植入经STZ处理的糖尿病模型SD大鼠肾被膜下作为对照组。在不同时间点上，检测各组SD大鼠血糖变化情况；对各移植组中大鼠进行糖耐受实验。切除。肾被膜下的移植物组织作为标本，进行苏木精一伊红（HE）染色及胰岛素组织化学染色检测。结果体外检测结果表明，与新鲜分离的胰岛和静态培养的胰岛相比，微重力条件下培养的胰岛仍保持良好的胰岛素合成及分泌功能。体内实验表明，微重力条件下培养的胰岛体内移植组的血糖保持正常的时间明显高于接受静态培养的胰岛和新鲜分离的胰岛移植组。将微重力培养条件下胰岛移植大鼠后，取。肾被膜下移植区组织标本进行HE染色，未见明显淋巴细胞浸润，胰岛素免疫组织化学均可见阳性细胞。而新分离的胰岛以及静态培养的胰岛移植后，大鼠。肾被膜下移植物组织标本可见淋巴细胞浸润，移植物的厚度明显变小。结论胰岛在微重力条件下培养可降低移植引起的免疫排斥反应，进而延长移植物体内存活时间。     

微囊技术在生物医学中应用的研究进展

微囊技术（encapsulation）是指用半透膜包被生物活性物质以形成微囊的技术，形成的微囊可以阻遏免疫细胞以及大分子抗体通过半透膜，同时允许氧气、营养物质和一些具有生物活性的小分子物质自由出入，因此，微囊技术是目前细胞治疗、组织和器官替代治疗的主要方法之一。微囊技术的应用可以追溯到1933年，Bisceglie运用复合膜包被肿瘤细胞移植到猪的腹腔，结果发现移植的细胞并没有受到免疫系统的破坏。1964年，Chang再次引用微囊技术进行细胞移植，并首次提出“人工细胞”的概念。随后的20年问，人们不断尝试用这种方法包埋胰岛细胞来控制糖尿病小动物模型的高血糖。1980年，Lim等首次成功地用微囊化胰岛细胞移植纠正糖尿病动物高血糖。1986年，0’Shea等在已有基础上对成囊物质进行了革新，制成了海藻酸钠多聚赖氨酸海藻酸钠（APA）微囊。近几年来，许多实验室探索采用其他方法和材料研制新型微囊，试图改善微囊的一些生物学和化学特性，以使其能够在代谢性疾病的治疗、药物缓释控制、体内和体外细胞培养等领域得到广泛应用。本文仅就微囊技术在生物医学领域中的应用进行综述。     

干细胞移植治疗1型糖尿病研究进展

糖尿病是以慢性高血糖为特征的代谢紊乱,高血糖是由于胰岛素分泌不足或作用缺陷,或两者同时存在而引起。目前,糖尿病的治疗以口服药物和注射胰岛素为主,曾有学者应用胰岛移植的方法治疗糖尿病,但因组织来源匮乏制约了胰岛移植研究的开展。随着分子细胞学技术的发展,干细胞定向分化成胰岛素分泌细胞已成为现实,并有学者将其应用于临床取得了一定的成果,现将干细胞移植治疗糖尿病及其并发症的进展做一综述。     

胰腺发育相关基因PDX-1诱导小鼠胎肝基质细胞向胰腺细胞分化

目的：利用胰腺发育相关基因PDX-J诱导小鼠胎肝基质细胞向胰腺细胞分化，探讨糖尿病治疗新方法。方法：构建含有胰腺发育相关基因胰腺-十二指肠同源框1（pancreatic duodenal homeoboxl，PDX-1）的真核细胞表达载体pmPDX-J，瞬时转染小鼠胎肝基质细胞，通过RT-PCR的方法，检测转染pmPDX-J质粒的小鼠永生化胎肝基质细胞的胰岛素、胰高血糖素、胰多肽和肝细胞生长因子受体c-met的表达。结果：在mRNA水平上能够检测到胰岛β细胞所分泌的胰岛素、胰岛α细胞所分泌的胰高血糖素和胰腺PP细胞所分泌的胰多肽，表明转染了pmPDX-J质粒的小鼠胎肝基质细胞在向胰腺细胞分化的过程中，具备了转录表达胰腺的内外分泌因子的能力。对肝细胞生长因子受体c-met的检测，提示分化的细胞没有完全失去肝细胞的特性。结论：通过导入PDX-J基因可以诱导小鼠胎肝基质细胞向胰腺细胞分化。     

胰岛淀粉样多肽对培养大鼠胰岛细胞分泌胰岛素的影响

胰岛淀粉样多肽（ＩＡＰＰ）是一种新发现的由胰岛β细胞分泌的激素，在非胰岛素依赖型糖尿病的发生发展中具有重要意义。本研究旨在观察ＩＡＰＰ对培养的新生大鼠胰岛细胞单层培养物胰岛素分泌的影响。取新生大鼠胰腺，用胰蛋白酶和胶原酶（Ⅴ型）反复消化分散细胞，ＲＰＭＩ１６４０培养液培养，碘乙酰去除成纤维细胞。于培养后７ｄ选生长一致、形态良好的单层细胞培养物用于ＩＡＰＰ实验。结果ＩＡＰＰ与培养７ｄ的胰岛细胞单层培     

力竭性游泳对大鼠胰岛 A、B 细胞形态学变化的影响——免疫组化及原位分子杂交结果分析

采用免疫组化及原位分子杂交技术，本文研究了负重力竭性游泳对大鼠胰岛Ａ、Ｂ细胞分泌功能的影响。主要结果发现：力竭状态下，①大鼠胰岛Ｉｎｓ－ＩＲ细胞呈色反应强度增加，而Ｇｌｕ－ＩＲ细胞呈色反应强度降低，说明Ｂ细胞Ｉｎｓ释放被抑制，Ａ细胞Ｇｌｕ释放增多。②大鼠胰岛Ｂ细胞内Ｐｒｏ－ＩｎｓｍＲＮＡ杂交信号明显减弱，说明Ｐｒｏ－Ｉｎｓ－ｍＲＮＡ转录受到抑制，Ｉｎｓ合成受抑。③Ｉｎｓ－ＩＲ和ＩＡＰＰ－ＩＲ细胞未呈现相同程度的呈色反应变化，提示Ｂ细胞内存在着含ＩＡＰＰ／Ｉｎｓ不同比率的分泌颗粒，可随机体的机能状态需要而分别释放。     

2型糖尿病的干细胞治疗研究现状

2型糖尿病的发生、发展与胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能缺陷密切相关,免疫介导的炎症在其中发挥重要作用,但目前尚缺乏针对2型糖尿病病因的治疗。近年来,干细胞治疗2型糖尿病成为新的研究热点。干细胞具有多向分化潜能,可分化为胰岛样细胞,内皮细胞;同时,干细胞还具有旁分泌作用和免疫调节特性。干细胞移植可能会通过上述作用修复胰岛β细胞,改善胰岛素抵抗。本文就干细胞治疗2型糖尿病的现状及可能机制作一简单综述,为今后的基础和临床研究提供方向,为2型糖尿病的治疗提供新思路。     

微囊化件肾上腺髓质嗜铬细胞脑内移植治疗偏侧帕金森病样大 …

以右侧帕金森病样大鼠和猴为模型,分别将微囊化和非微囊化牛肾上腺嗜铬细胞（ＢＣＣ）及空微囊定向植入右侧脑纹状体内,观察动物行为、脑组织生化和组织变化。结果表明,植入的ＢＣＣ能够在异种脑内存活,分泌多巴胺等单胺类物质并纠正帕金森病样大鼠及猴的异常行为。海藻酸钠－聚赖氨酸－海藻酸钠微囊具有免疫保护作用,可明显地延长ＢＣＣ在异种宿主脑内的顾活时间,作用超过１０个月。微囊化ＢＣＣ脑内移植有望成为治疗帕金森病     

微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞脑内移植治疗偏侧帕金森病样大鼠及猴的实验研究

以右侧帕金森病样大鼠和猴为模型,分别将微囊化和非微囊化牛肾上腺嗜铬细胞（ＢＣＣ）及空微囊定向植入右侧脑纹状体内,观察动物行为、脑组织生化和组织学变化。结果表明：植入的ＢＣＣ能够在异种脑内存活、分泌多巴胺等单胺类物质并纠正帕金森病样大鼠及猴的异常行为。海藻酸钠－聚赖氨酸－海藻酸钠微囊具有免疫保护作用,可明显地延长ＢＣＣ在异种宿主脑内的存活时间,作用超过１０个月。微囊化ＢＣＣ脑内移植有望成为治疗帕金森病的一种有效方法。     

hGLP-1类似物基因转染对糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响

目的 研究尾静脉注射人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val~2-hGLP-1)重组表达质粒对糖尿病模型大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响.方法 建立链脲佐黹素(STZ)诱导SD糖尿病大鼠模型,随机分为含有hGLP-1类似物基因的重组质粒(plRFLS2-FGFP/Val~2-hGLP-1)转染组、空质粒(pIRES2-EGFP)转染组、糖尿病模型对照组,每组8只.另取8只未经处理的SD大鼠作为正常对照组.重组质粒转染组和空质粒转染组分别通过尾静脉注射含相应质粒(110μg/只)的溶液,糖尿病模型对照组和正常对照组给予等量的生理盐水.实验动物共干预30d,实验结束后,观察各组大鼠血糖及血清胰岛素水半的变化,采用糖耐量及胰岛素耐量实验检测大鼠胰岛素敏感性然后处死动物,HE染色观察胰岛细胞病变情况,免疫组化法分析胰岛素分泌情况.结果 与正常对照组、糖尿病模型对照组和空质粒转染组比较,重组质粒转染组血糖水平明显降低(P<0.01),血清胰岛素水平显著升高(P<0.01).基因治疗改善了糖尿病大鼠的糖耐量,降低了胰岛素抵抗,提高了机体对胰岛素的敏感性(P<0.01).空质粒转染组与糖尿病模型对照组比较,以上指标的差异均无统计学意义(P>0.05).同时,重组质粒转染组的胰岛素分泌水平提高,与糖尿病模型对照组比较,胰岛细胞病变程度明显改善.结论 hGLP-1类似物基因转染可促进胰岛细胞增殖,提高胰岛素敏感性,从而显著降低糖尿病大鼠的血糖水平,并改善胰岛组织病变程度.     

第五届全军内分泌学术会议论文综述

会议收到论文216篇，其中内容涉及糖尿病类146篇，眼和甲状腺疾病43篇，其它27篇。现将各部分主要内容综述如下。1糖尿病解放军总医院探讨了弥可保（甲基维生素B12）在形态学和功能学两个方面对糖尿病大白鼠周围神经病变的治疗作用，结果表明，弥可保对周围神经形态改善和感觉神经损害有较好疗效。广州军区总医院报告，应用甲基维生素B12治疗糖尿病性周围神经病变20例，症状改善率达95％，无不良反应。济南军区总医院应用海藻酸钠和氯化钡微囊包被新生猪胰岛行腹腔移植，治疗实验性糖尿病小鼠，可使胰岛素用量减少，血糖下降，2周后停用胰…