利用Time-lapse技术筛选早期胚胎对IVF-ET妊娠结局的影响

目的探索利用Time-lapse系统筛选早期胚胎的临床应用价值。方法回顾性分析本中心2016年7月至2017年12月,第一次新鲜或复苏周期D3卵裂期胚胎移植的患者资料,根据胚胎评估方法分为Time-lapse系统组(TLM组,n=74)和传统形态学评分组(CMA组,n=951),比较这两种不同胚胎筛选方法对临床结局的影响。结果患者的不孕年限、体重指数、基础FSH、基础LH、E2、AMH、窦卵泡数、内膜厚度和周期类型等一般情况,在TLM组和CMA组均无显著差异(P均0.05);TLM组年龄显著高于CMA组[(31.8±4.2)vs.(30.8±4.4),P0.05],而平均移植胚胎数显著少于CMA组[(1.7±0.5)vs.(1.9±0.3),P0.05];患者的临床结局,包括临床妊娠率、种植率、流产率、宫外孕率、双胎率和移植两个胚胎的双胎率等在两组间均无显著差异(P均0.05)。进一步按照年龄分层分析,在35岁患者,患者的一般情况在两组间均无显著差异(P均0.05),TML组的平均移植胚胎数显著少于CMA组[(1.7±0.5)vs.(1.9±0.3),P0.05],而患者临床结局在两组间亦无显著差异(P0.05);在≥35岁患者,TML组的平均移植胚胎数显著少于CMA组[(1.7±0.5)vs.(1.9±0.4),P0.05],而患者的一般情况和临床结局在两组间亦无显著差异(P0.05)。结论利用Time-lapse技术选择早期胚胎,可以在显著减少移植胚胎数的基础上,维持稳定的临床妊娠结局。因此,认为Time-lapse技术可以在一定程度上优选出更具发育潜能的胚胎,为早期胚胎单胚胎移植提供新方法。     

卵裂期胚胎解冻移植结局的影响因素探讨

影响冻融胚胎移植结局的因素很多,包括患者年龄、冷冻胚胎的质量、内膜准备方式和冷冻方法等。传统的程序化冷冻在临床已使用20余年,虽经不断改进,解冻存活率仍在70%左右。玻璃化冷冻不需要程序化冷冻仪,且简便、快速,仅数分钟即可完成,消耗液氮量少,正逐渐广泛应用于辅助生殖实验室。     

人卵裂期胚胎玻璃化冻融体外培养时间对妊娠结局的影响

目的研究人卵裂期胚胎玻璃化冻融体外培养时间对妊娠结局的影响。方法对我中心进行的解冻胚胎数不超过3枚,解冻胚胎全部存活并全部移植的274例患者分为当日移植组(A组)和次日移植组(B组),比较组间临床妊娠率、种植率和流产率。结果胚胎龄为第2天(D2)的共163个周期,其中A组130个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:23.08%、11.71%和6.67%,B组33个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:27.27%、11.84%和11.11%;胚胎龄为第3天(D3)的共111个周期,其中A组94个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:36.17%、19.35%和8.82%,B组17个周期,临床妊娠率、种植率和流产率分别为:35.29%、20.45%和16.67%。D2和D3胚胎当日移植组和次日移植组之间的临床妊娠率、种植率和流产率均无统计学差异。结论延长体外培养时间不显著影响玻璃化冻融卵裂期胚胎的发育潜能,可根据需要灵活安排玻璃化冷冻胚胎的解冻时间。     

小鼠致密化前胚胎卵裂球体外培养体系的研究

目的探索改善小鼠致密化前胚胎卵裂球体外发育能力。方法用酶消化与机械法结合分离小鼠2-、4-、8-细胞胚胎卵裂球为单个卵裂球及2/4、4/8多卵裂球胚胎,并将其装入空透明带后于兽用人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射后138 h,观察透明带包裹、胚胎密度及胰岛素(Ins)、葡萄糖(Glu)添加对各卵裂球、囊胚形成率及囊胚细胞数目的影响。结果透明带包裹提高了2-细胞胚胎卵裂球来源的单腔囊胚的发育率。25/50μl胚胎密度及培养基添加Ins、Glu能显著提高2-细胞胚胎卵裂球囊胚发育率和囊胚细胞数;且对4-和8-细胞胚胎卵裂球发育具有同样的促进作用。结论采用透明带包裹、卵裂球密集培养、培养基添加Ins、Glu的方法成功建立了一种维持致密化前胚胎卵裂球体外高效发育的培养体系。其中,透明带在卵裂球发育中具维持囊胚正常形态作用,避免了多腔囊胚的形成;卵裂球密集培养和培养基添加Ins、Glu均提高囊胚形成率和(或)囊胚细胞数目。该体系有效改善了致密化前胚胎卵裂球体外发育质量。     

应用Time-lapse优选胚胎观察胚胎发育速度对单胚胎移植妊娠结局的影响

目的应用时差成像系统(Time-Lapse Imaging,TLI)基于分层筛选模型优选胚胎行Day3单胚胎移植,探讨移植胚胎发育速度对妊娠结局的影响。方法选取2014年4月至2017年5月在南京鼓楼医院生殖中心行Day3单分裂胚胎移植的234例患者的胚胎进行动态观察,对符合挑选参数的移植胚胎进一步分析,根据细胞发育速度分为8～9细胞组(n=168)、10～11细胞组(n=36)、12～16细胞组(n=30)三组;根据移植胚胎的卵裂球数目奇偶数分为奇数组(n=52)和偶数组(n=182)两组;将卵裂球数目为偶数的胚胎根据其胚胎发育速度分为8细胞组(n=137)、10细胞组(n=22)、12～16细胞组(n=23)三组。回顾性分析胚胎的发育速度对妊娠结局的影响。结果 8～9细胞组、10～11细胞组、12～16细胞组三组的种植率依次是61.90%、53.80%和53.33%,活产率依次是58.33%、50.00%和50.00%,流产率分别为5.76%,5.26%和6.25%,各项数据均无统计学差异(P>0.05)。奇数组与偶数组相比,种植率(38.46%vs.65.38%)、流产率(10.00%vs.5.04%)、活产率(34.62%vs.62.08%)三个方面均较差,且在种植率与活产率方面具有显著性差异(P<0.05)。移植胚胎卵裂球数目为偶数的胚胎中,8细胞组、10细胞组、12～16细胞组在种植率、流产率、活产率方面均无统计学差异(P>0.05)。结论通过Time-lapse挑选发育速度较快的胚胎移植仍可获得较好的妊娠结局,此结果为移植当日无正常发育速度胚胎患者的胚胎选择提供了新思路。     

不同年龄女性D3卵裂期胚胎细胞数对囊胚发育潜能的影响

目的 探讨不同年龄女性D3卵裂期胚胎细胞数对囊胚发育潜能的影响,为临床优选胚胎提供参考。方法 回顾性分析行囊胚培养的29 314枚D3卵裂期胚胎情况,按照女方年龄分为<35岁组和≥35岁组,再按照卵裂期胚胎细胞数分为4细胞～11⁺细胞和融合期胚胎9个亚组,比较不同年龄组中不同细胞数亚组的囊胚形成率。行单囊胚冻融移植的共2 402个周期,其中<35岁组和≥35岁组中又根据囊胚来源的D3胚胎细胞数分为4～6细胞、7～9细胞和≥10细胞+融合期3个亚组,比较不同年龄不同细胞数胚胎来源的囊胚冻融移植临床结局。同时分析1 069个行胚胎植入前非整倍体检测(PGT-A)囊胚中<35岁组和≥35岁组4～6细胞、7～9细胞和≥10细胞+融合期3个亚组的整倍体率情况。结果 (1)<35岁组和≥35岁组中,8细胞亚组发育成囊胚的潜能最高,融合期胚胎次之,而6细胞以下亚组明显劣于其他细胞数目亚组(P<0.05)。(2)<35岁组中,各细胞数D3胚胎发育潜能层次明显,按照可利用囊胚形成率从高到低依次排序为：8细胞>融合期>11^+<...     

褪黑素对人卵裂期胚胎发育的影响及机制研究

目的探讨褪黑素对人第3天(D3)卵裂期胚胎发育成囊胚的影响及其作用机制。方法收集2012年10月至2014年10月在本中心行IVF-ET助孕治疗患者捐赠的D3玻璃化冷冻胚胎,复苏后存活率100%且未发生卵裂球溶解的胚胎纳入研究(n=143),随机分为褪黑素组(培养液中加入1×10-7 mol/L褪黑素,n=71)和对照组(不添加褪黑素,n=72)。两组胚胎均放于37℃、5%CO2培养箱中培养72h,统计囊胚及优质囊胚形成率;采用鲁米诺化学发光法检测培养液中总活性氧(ROS)水平;实时荧光定量PCR法分析抗氧化酶类基因CAT、GPx、SOD1、SOD2及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达。结果褪黑素组的囊胚形成率(42.25%)显著高于对照组(26.38%)(P0.05),优质囊胚形成率(30.00%)略高于对照组(26.32%),但无显著性差异(P0.05)。培养72h后两组胚胎培养液中的ROS水平比较(513.33vs.556.67RLUs)无显著性差异(P0.05)。褪黑素处理后,胚胎内过氧化氢酶基因CAT的相对表达量(1.68±0.43)较对照组(1.00±0.03)显著上调(P0.05),其他基因包括Bax、Bcl-2、SOD1、SOD2、GPx的表达则没有显著性差异(P0.05)。结论褪黑素能够促进人卵裂期胚胎继续发育形成囊胚,其机制可能与上调胚胎中过氧化氢酶基因CAT的表达有关。     

精子DNA损伤对胚胎卵裂模式及胚胎发育的影响

目的 探讨精子DNA损伤对胚胎早期卵裂模式及胚胎发育的影响.方法 回顾性分析2020年1月至2021年6月于重庆市妇幼保健院生殖医学中心接受不孕不育症治疗的432对不孕不育夫妇的临床资料,共432个取卵周期(其中224个周期行鲜胚移植).将纳入患者根据授精方式不同分为IVF组和ICSI组,每组又按照精子DNA碎片指数(...     

姐妹胚胎囊胚形成率与卵裂期胚胎移植临床结局的相关性

目的探讨卵裂胚移植后剩余的姐妹(sibling)胚胎囊胚形成率对IVF-ET临床结局的预测价值及胚胎移植策略的选择。方法回顾性分析2013年1月至2014年7月在我院生殖中心实施IVF/ICSI-ET的454个移植周期的临床资料,其中,有188个周期为受精后第3天(D3)行卵裂胚移植,设为A组,有266个周期行全囊胚培养并移植优质囊胚,设为B组。A组再分为优质囊胚形成组(A1组,127个周期),无优质囊胚形成组(A2组,61个周期)。比较各组的基本资料和临床结局,直线回归分析囊胚形成率与临床妊娠率的相关性。结果 3组间年龄、不孕年限、HCG日子宫内膜厚度、平均获卵数、成熟卵数、正常受精率、卵裂率、D3优质胚胎数,优质胚胎率,移植胚胎数、异位妊娠率,流产率和周期取消率均无统计学差异(P0.05),B组临床妊娠率(69.7%,)和种植率(40.1%)均显著高于A2组(52.5%、28.2%)(P0.05),A1组与B组间无显著性差异(P0.05);回归分析显示总囊胚形成率及优质囊胚形成率与临床妊娠率呈显著正相关(分别为r=0.844和r=0.867,P0.05)。结论卵裂胚移植后姐妹胚胎囊胚形成率对IVF-ET的临床结局有预测价值,优质卵裂期胚胎移植后剩余姐妹胚胎培养形成优质囊胚可获得与移植优质囊胚相似的临床结局。     

逆卵裂胚胎的染色体整倍性及移植后的妊娠结局

目的 使用时差成像培养系统记录胚胎早期逆卵裂现象,联合胚胎植入前遗传学检测技术评估逆卵裂胚胎的染色体整倍性,探讨胚胎发育早期存在逆卵裂现象的囊胚的临床应用价值。方法 选择2021年5月至2022年6月在徐州市妇幼保健院就诊的142个因高龄、反复种植失败和反复自然流产行胚胎植入前遗传学检测的周期,正常受精胚胎1 087个,其中达到活检标准的囊胚483枚,利用时差成像培养系统记录达到活检标准的来自正常卵裂(n=407)和逆卵裂(n=76)的囊胚,比较逆卵裂囊胚与正常卵裂囊胚的染色体整倍性及移植后的妊娠结局。结果 胚胎早期正常卵裂和逆卵裂形成的囊胚染色体整倍体率和临床妊娠率均无统计学差异(P<0.05)。结论 胚胎发育早期出现逆卵裂不影响其染色体整倍性,早期胚胎出现逆卵裂时可行囊胚培养后依据胚胎级别列入可利用胚胎,移植到宫腔后可以获得健康的新生儿。     

人类卵裂早期胚胎多核现象研究进展

移植日胚胎的选择在辅助生殖技术(ART)治疗过程中至关重要,如何挑选高质量胚胎进行移植与ART治疗结局息息相关。目前辅助生殖实验室常用胚胎形态学特征来评估胚胎的发育潜能,但其中暂未纳入早期胚胎的卵裂球多核现象。近年来,随着ART及医学遗传学诊断方法的飞速发展,生殖医学研究者逐渐认识到胚胎早期发育过程中的卵裂球多核现象可能与胚胎后续发育潜能之间有一定的相关性,并对其进行了深入研究。本文就胚胎早期发育过程中多核卵裂球的形成原因及其与胚胎后续发育潜能和临床结局之间的相关性展开综述。     

Development of the human male urethra: A histochemical study on human embryos

Purpose

Controversy persists regarding the formation of human penile urethra. The classic fusion theory for the development of the spongy urethra and ectodermal ingrowth or endodermal transformation theories for the development of the glanular urethra do not explain the wide spectrum of anomalies seen in patients with hypospadias. This histological study was made to clarify the mechanism of urethral development.

Materials & Methods

15 human male embryos ranging from 6 to 14 weeks were studied. The phalluses were examined microscopically and photographed. Tissues were prepared as serial histological sections and stained with haematoxylin and eosin and with special immuno-histochemical stains.

Results

1) The penile urethra: At 6 weeks of gestation, the urethral plate which is solid distally and partially grooved proximally becomes grooved distally and has fused proximally by 8 weeks. At 14 weeks of gestation; the urethral opening migrates only to the middle of the shaft.2) The glanular urethra: At the 6th week of gestation, a solid epithelial plate reached the tip of the genital tubercle, and a glans cannot be identified. At the 7th week, a central vacuolation appears and the penile urethral groove does not reach the tip of the phallus. At the 8th week; coronal sulcus starts to appear, and a well defined blind central canal was evident in the 13th week. During the 14th week, the floor of the glanular canal degenerated to form a glanular groove.

Conclusions

Our observations suggest that the spongy urethra passes through 3 stages of development: a solid epithelial plate, deep urethral groove, and fused urethra. The glanular urethra passes through 4 developmental stages: a solid epithelial plate, a blind central canal, a deep glanular groove, and the floor from the preputial lamella. There was no evidence of ectodermal ingrowth. These observations raise serious questions to the current theories for human urethra development. Further studies on fresh human embryos are needed.     

The effect of fluorescent light on the cleavage of two-cell mouse embryos

Two-cell mouse embryos were subjected to fluorescent light, 2900 lux, for 30 minutes, and the cleavage compared with that in a control group. There was no statistically significant difference in the results. In both groups 90% of two-cell embryos reached the expected level of cleavage. The possible effect of fluorescent light on the oocyte is discussed.     

慢速冷冻卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局分析

目的分析早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局。方法选取2013年1月至2016年12月深圳中山泌尿外科医院生殖中心D3卵裂期胚胎慢速冷冻复苏周期为研究对象,同一患者复苏的胚胎来自于同一取卵周期。根据移植胚胎策略不同分为:(1)卵裂期移植组,即慢速冷冻复苏后直接行卵裂期胚胎移植,共55个复苏周期。(2)囊胚移植组,即复苏后继续培养至囊胚移植,共57个复苏周期。分析囊胚移植组胚胎复苏后继续培养的囊胚形成率,两组患者移植后的种植率、临床妊娠率、异位妊娠率、多胎妊娠率、早期流产率及抱婴率等临床结局。结果早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏存活率为72.57%,继续培养后的囊胚形成率为29.50%。移植时卵裂期移植组平均移植胚胎数显著高于囊胚移植组[(2.64±0.53)vs.(1.39±0.54)枚,P0.05],移植胚胎中优质胚胎占比无显著性差异(58.82%vs.47.37%,P0.05)。移植后的临床结局显示,两组临床妊娠率(44.44%vs.39.02%)、异位妊娠率(5.00%vs.0%)、多胎妊娠率(20.00%vs.25.00%)、早期流产率(20.00%vs.18.75%)、抱婴率(26.19%vs.28.21%)比较均无显著性差异(P0.05)。卵裂期移植组的种植率略低于囊胚移植组(22.69%vs.33.33%),但无显著性差异(P0.05)。结论两组临床结局差异不大,培养至囊胚移植显著减少平均移植胚胎数,但是增加无可移植胚胎的风险,各中心需要综合考虑患者意愿及具体情况,选择合适的慢速冷冻胚胎复苏后移植策略。     

In vivo study of flow pattern at human carotid bifurcation with regard to aneurysm development

Summary In order to investigate the developmental mechanism of cerebral aneurysms, the in vivo flow pattern around human cervical carotid bifurcations was studied by flow visualization using digital subtraction angiography with an isotonic contrast medium.The blood stream containing the medium impinged on the apex, then proceeded along the walls of the branches. After opacification of the whole lumen around the apex, most of the medium was carried away, while some remained for a few seconds at the carotid sinus. In the internal carotid artery, the blood struck the wall at an oblique angle near the tops of the arterial curvatures. In cases with atheromatous plaque or kinking of the branch, the blood passed through the stenosed segment and moved upstream, indicating turbulence.The study suggests that haemodynamic forces around the apex consist mainly of impingement on the apex and shear stress to the wall at and around the apex. In branches, high shear stress seems to exist. It might be possible that high shear stress causes degenerative changes in the endothelial layer, initiating the formation of saccular and fusiform cerebral aneurysms.Supported by grant from the Alexander von Humboldt Foundation.     

Relationship of the diaphragm to the inferior vena cava in human embryos and fetuses

The attachment of the inferior vena cava to the diaphragm is compared with that of the oesophagus and the aorta. The development of this attachment is described in human embryos and fetuses. In older fetuses the attached border of the diaphragm splits into several layers at its junction with the inferior vena cava. The insertion of the right crus of the diaphragm into the posterior wall of the inferior vena cava is thought to have physiological significance. The left phrenic nerve supplies the left half of the diaphragm and the left component of the right crus. The right phrenic nerve supplies the right half of the diaphragm including the right component of the right crus.