三种移植策略在反复种植失败患者冻融胚胎移植周期中的应用比较

目的通过比较序贯移植、内膜机械刺激与囊胚移植三种移植方案在反复种植失败(RIF)患者冻融胚胎移植周期中的应用结果,为临床选择RIF的干预策略提供参考。方法回顾性分析2016年6月至2017年12月在我院因反复种植失败拟再次行冻融胚胎移植患者共228例,研究组按照移植方案不同分为三组:A组(序贯移植组):移植1枚卵裂期胚胎+1枚囊胚(40例);B组(内膜机械性刺激组):根据胚胎移植时间及数量的不同分为两个亚组,B1组:子宫内膜机械性刺激+1枚囊胚移植(52例);B2组:内膜机械性刺激+2枚卵裂期胚胎移植(47例);C组(囊胚移植组):移植1枚囊胚(40例)。对照组为移植2枚卵裂期胚胎(49例)。结果 A组临床妊娠率(67.52%)、种植率(41.25%)显著高于对照组(分别为36.73%、21.43%,P均0.05);B1组种植率显著高于对照组(44.23%vs 21.43%,P0.05);多胎率、早期流产率、异位妊娠率各组间无统计学差异(P0.05)。结论 RIF患者选择序贯移植、内膜机械性刺激+囊胚移植及囊胚移植三种移植策略均有改善妊娠结局的趋势;三者中序贯移植较传统卵裂期胚胎移植相比,可显著提高临床妊娠率和种植率;序贯移植可以降低因囊胚培养失败无胚胎移植的风险,但同时可能增加多胎率的风险。临床上需要根据患者的具体情况选择个体化移植策略。     

人输卵管积液对小鼠胚胎基质金属蛋白酶分泌的影响

目的探讨人输卵管积液对小鼠胚胎体外培养胚胎发育及着床能力的影响机制。方法收集人输卵管积液,小鼠促超排卵,自然受精后适时收集囊胚,并将其随机分配到含有不同浓度的输卵管积液的培养液中,进行体外培养,观察囊胚的发育,计算囊胚孵出率;采用逆转录聚合酶链反应及免疫印迹法测定囊胚和培养液中的基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)的含量。结果输卵管积液组的囊胚孵出率低于无积液组,囊胚及培养液中的MMP-9和TIMP-1低于无积液组,并呈剂量依赖性,MMP-9/TIMP-1随积液浓度增加而降低。结论输卵管积液通过降低胚胎MMP-9/TIMP-1的分泌和影响胚胎早期发育潜能,从而影响胚胎着床的能力。     

逆卵裂胚胎的染色体整倍性及移植后的妊娠结局

目的 使用时差成像培养系统记录胚胎早期逆卵裂现象，联合胚胎植入前遗传学检测技术评估逆卵裂胚胎的染色体整倍性，探讨胚胎发育早期存在逆卵裂现象的囊胚的临床应用价值。方法 选择2021年5月至2022年6月在徐州市妇幼保健院就诊的142个因高龄、反复种植失败和反复自然流产行胚胎植入前遗传学检测的周期，正常受精胚胎1 087个，其中达到活检标准的囊胚483枚，利用时差成像培养系统记录达到活检标准的来自正常卵裂(n=407)和逆卵裂(n=76)的囊胚，比较逆卵裂囊胚与正常卵裂囊胚的染色体整倍性及移植后的妊娠结局。结果 胚胎早期正常卵裂和逆卵裂形成的囊胚染色体整倍体率和临床妊娠率均无统计学差异(P<0.05)。结论 胚胎发育早期出现逆卵裂不影响其染色体整倍性，早期胚胎出现逆卵裂时可行囊胚培养后依据胚胎级别列入可利用胚胎，移植到宫腔后可以获得健康的新生儿。     

胰岛素对小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的　探讨胰岛素对小鼠体内外来源早期胚胎体外发育的影响。　方法　用添加不同浓度胰岛素和胰岛素+葡萄糖的CZB培养液对小鼠体内外来源胚胎进行体外培养 ,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化。　结果　小鼠 2 细胞胚胎体外培养 10 2h后 ,0 .0 5 μg/ml胰岛素添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率和囊胚细胞数均显著高于其他各浓度添加组。葡萄糖加入显著提高了这一效应。添加 0 .0 5 μg/ml胰岛素和葡萄糖的CZB培养液同样显著提高体外受精 (IVF)胚胎的孵化囊胚率和囊胚细胞数。　结论　添加胰岛素和葡萄糖培养液对体内或IVF小鼠胚胎发育具有相同的促进作用。     

人早期胚胎体外培养中自体子宫内膜细胞共培养与序贯培养联合系统的建立

目的:建立早期胚胎与自体子宫内膜细胞共培养与序贯培养联合系统的培养方法。方法:黄体中期获取子宫内膜,细胞培养后程序化冻存。取卵前解冻自体内膜细胞,受精后将双原核胚转移至已更换分裂期胚胎培养液的自体子宫内膜细胞行共培养,取卵后72 h更换囊胚培养液行共培养。结果:人黄体中期子宫内膜有良好的体外培养活力,程序化冷冻与快速复温后细胞存活高,自体胚胎共培养的应用比率为74.04%。种植前各时期早期胚胎联合应用序贯培养液,在自体内膜细胞上生长良好。建立联合培养系统的临床妊娠率68.83%,种植率44.23%。结论:人早期胚胎与自体子宫内膜细胞共培养联合序贯培养系统的建立,为早期胚胎体外培养的模式提供了一种新的思路,力求提高种植前胚胎的质量与发育潜能。     

一步法和二步法培养系统对小鼠核移植胚胎体外发育的影响

目的 比较一步法和二步法两种培养系统对小鼠体细胞核移植胚胎体外发育的影响,确立一种有效的培养系统.方法 构建小鼠核移植胚胎,在一步法和二步法2种培养系统中培养,观察核移植胚胎体外发育情况.结果 GlyGln-KSOMg~(AA)/GlyGln-KSOMg~(AA)组核移植胚胎发育的囊胚率(3.9%)和囊胚细胞计数(34.00±2.29)与GlyGln-KSOMg~(AA)组差异无统计学意义(P＞0.05).卵裂培养基(9.8%;46.05 ±2.62)组和卵裂培养基/囊胚培养基(10.3%;51.15±2.37)组核移植胚胎的囊胚率和囊胚细胞计数差异也无统计学意义(P＞0.05);牛磺酸加入GlyGln-KSOM-g~(AA)后能有效改善早期核移植胚胎体外发育能力.结论 一步法和两步法培养体系均符合小鼠体细胞核移植胚胎不同发育阶段的代谢特征和营养需求,是适宜的小鼠体细胞核移植胚胎培养方法 .     

细菌污染对小鼠胚胎发育的影响

目的了解细菌污染和更换含不同体系抗生素的培养液对胚胎发育结局的影响,探讨细菌污染胚胎的解决办法。方法小鼠胚胎随机分成3组,A组为对照组,B、C两组为庆大霉素耐药大肠杆菌污染组,对C组中途换液终止污染,观察细菌生长以及各组胚胎发育情况。结果培养第1天B组和C组的存活率(分别为70.0%和73.3%)均显著低于A组(100%)(P0.001);第3天C组成囊率(20.0%)显著低于A组(100%)(P0.001),而B组胚胎全部死亡。A组囊胚以IV期和V期的优质囊胚为主,C组部分为未完全扩张囊胚,无优质囊胚存在。结论细菌污染严重影响了胚胎发育,甚至导致胚胎死亡;更换含有新的抗生素体系的培养液可以终止胚胎污染,可部分改善胚胎培养的结局。     

不同年龄女性D3卵裂期胚胎细胞数对囊胚发育潜能的影响

目的 探讨不同年龄女性D3卵裂期胚胎细胞数对囊胚发育潜能的影响,为临床优选胚胎提供参考。方法 回顾性分析行囊胚培养的29 314枚D3卵裂期胚胎情况,按照女方年龄分为<35岁组和≥35岁组,再按照卵裂期胚胎细胞数分为4细胞～11⁺细胞和融合期胚胎9个亚组,比较不同年龄组中不同细胞数亚组的囊胚形成率。行单囊胚冻融移植的共2 402个周期,其中<35岁组和≥35岁组中又根据囊胚来源的D3胚胎细胞数分为4～6细胞、7～9细胞和≥10细胞+融合期3个亚组,比较不同年龄不同细胞数胚胎来源的囊胚冻融移植临床结局。同时分析1 069个行胚胎植入前非整倍体检测(PGT-A)囊胚中<35岁组和≥35岁组4～6细胞、7～9细胞和≥10细胞+融合期3个亚组的整倍体率情况。结果 (1)<35岁组和≥35岁组中,8细胞亚组发育成囊胚的潜能最高,融合期胚胎次之,而6细胞以下亚组明显劣于其他细胞数目亚组(P<0.05)。(2)<35岁组中,各细胞数D3胚胎发育潜能层次明显,按照可利用囊胚形成率从高到低依次排序为：8细胞>融合期>11^+<...     

IVM培养液中添加半胱胺、胱氨酸改善人卵母细胞胚胎发育潜能的研究

目的探讨半胱胺和胱氨酸对卵母细胞体外成熟(IVM)和胚胎发育潜能的影响。方法收集超促排卵周期中未成熟卵母细胞584枚,随机分为添加组(IVM培养液中添加半胱胺和胱氨酸)和不添加组(单纯使用IVM培养液),在卵母细胞培养成熟后行显微授精,观察两组的成熟率、受精率、卵裂率、第3天(D3)优胚率和优质囊胚形成率。结果无论MⅠ期还是GV期卵母细胞,IVM培养液中半胱胺和胱氨酸的添加均能显著提高D3优胚率和优质囊胚形成率(P<0.05),但成熟率、受精率和卵裂率两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IVM培养液中半胱胺和胱氨酸的添加能显著提高人未成熟卵母细胞的胚胎发育潜能,但其机理仍有待于进一步研究。     

人输卵管上皮细胞共培养系统对小鼠胚胎体外发育的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外分裂与生长的影响，将２１０个小鼠２细胞期胚胎与传代的人输卵管上皮细胞进行共培养，另以１４５个胚胎培养在单纯的培养液中作为对照。共培养的胚胎有８９．０％发育到桑椹胚，８７．１％形成囊胚，而对照组仅为６３．４％和４９．０％（Ｐ＜０．０１）。共培养胚胎发育速度也较对照组快，且发育过程中，共培养胚胎出现碎片及不规则分裂率明显低于对照组。提示人输卵管上皮细胞共培养系统可以促进胚胎体外发育，能在体外获得数量较多的高质量胚胎。