ATP7B siRNA阳离子纳米脂质体逆转卵巢癌细胞株顺铂耐药的体内外实验研究

目的:探讨负载P型铜转运ATP酶(ATP7B)、小干扰RNA (siRNA)阳离子纳米脂质体( ATP7B/DC-Lip)逆转卵巢癌细胞株SKOV3顺铂(DDP)耐药的作用及意义.方法:通过DDP梯度诱导法构建卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP,利用细胞增殖抑制实验测定其耐药指数.薄膜分散法制备ATP7B/DC-Lip并测定其各项纳米表征.利用细胞增殖抑制实验和裸鼠体内实验分别检测ATP7B/DC-Lip的体内外抗肿瘤效果.结果:成功构建了卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP,ATP7 B/DC-Lip在体外条件下可以分别沉默75％(48小时)和78％(72小时)的ATP7B蛋白表达.在体内外抑制肿瘤生长实验的结果显示,当转染ATP7 B/DC-Lip后,体外条件下SK-OV3/DDP的IC50显著下降为3.51±0.93 μg/ml(n=6);体内DDP耐药型肿瘤模型中DDP+ATP7B/DC-Lip组的肿瘤大小较其他组明显更小(P＜0.05).结论:ATP7B/DC-Lip可以逆转卵巢癌细胞株SKOV3的DDP耐药,可能作为一种有效的纳米药物用于治疗DDP耐药性卵巢癌.     

β-连环素对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨信号分子β连环素(β-catenin)在多个卵巢癌耐药细胞系中的表达及其对顺铂耐药性的影响。方法:首先在2个卵巢癌耐药细胞系(C13K,SKOV-3),2个卵巢癌敏感细胞系(OV2008,A2780),A2780顺铂敏感株、A2780-cis顺铂耐药株,COC10顺铂敏感株、COC1-cis顺铂耐药株中检测β-catenin蛋白的水平。通过小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰技术靶向沉默细胞中β-catenin的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证β-catenin基因沉默效果。台盼蓝染色方法分析β-catenin基因沉默对细胞化疗药物顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测顺铂处理后β-catenin基因沉默细胞的凋亡率。Western blotting筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:β-catenin在2个卵巢癌耐药细胞系C13K,SKOV-3中蛋白水平较敏感细胞系明显上调。与亲本A2780和COC10细胞相比,在耐药株A2780-cis和COC1-cis中表达水平也明显增高。β-catenin si RNA能显著抑制细胞中β-catenin蛋白的水平。β-catenin基因沉默后,卵巢癌耐药细胞C13K,SKOV-3对顺铂敏感性显著增高;流式细胞术进一步分析发现β-catenin基因沉默可以促进顺铂介导的卵巢癌耐药细胞的细胞凋亡。Western blotting发现β-catenin基因沉默后,顺铂处理可以显著上调促凋亡分子p53和caspase-3蛋白水平。结论:β-catenin在卵巢癌耐药细胞系表达明显增高,β-catenin沉默可以促进卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,并同时促进了顺铂介导的细胞凋亡。     

Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞系COC1/DDP耐药的关系

目的 探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP中抗凋亡蛋白Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法:采用RT-PCR和Western Blot分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达和caspase-3的活性。并用流式细胞术测定顺铂作用后COC1和COC1/DDP细胞株的凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,Bcl-XL和Bcl-2的表达明显高于COC1细胞;顺铂作用后,在COC1/DDP细胞株中细胞色素C的表达明显减少,caspase-3活性明显降低(P<0.05);其凋亡率也明显低于COC1细胞株(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂产生耐药可能与细胞内Bcl-XL、Bcl-2过度表达抑制了线粒体细胞色素C的释放及caspase-3活性有关。     

化疗对卵巢癌细胞凋亡和P53、Bcl-2蛋白表达的影响

探讨卵巢癌细胞凋亡过程相关基因及其蛋白表达的变化 ,为解决卵巢癌化疗耐药提供理论依据。方法 :应用不同浓度顺铂处理HO - 8910细胞 ,HE染色观察细胞形态改变 ,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解 ,SP免疫组化染色观察细胞凋亡过程中P53、Bcl - 2蛋白表达的变化。结果 :由于使用顺铂 ,HO - 8910细胞呈凋亡改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。在细胞凋亡的同时 ,P53蛋白表达逐渐升高 ,Bcl- 2蛋白表达逐渐降低 ,二者的变化分别和凋亡细胞数呈正、负相关性。结论 :顺铂通过细胞内P53、Bcl - 2蛋白表达的变化 ,诱导人卵巢癌细胞凋亡是其抗肿瘤的机制之一。卵巢癌细胞对顺铂耐药的产生可能和P53、Bcl- 2蛋白表达有关。     

microRNA let-7e逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药及其作用机制

目的:研究人类microRNA let-7e(hsa-let-7e)在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测let-7e在卵巢癌亲本细胞株A2780及耐顺铂卵巢癌细胞A2780/CP中的表达;采用实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测A2780细胞和A2780/CP细胞中果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)mRNA和蛋白的表达。将let-7e模拟物(mimics)及阴性对照(negative control,NC)转染A2780/CP细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测EZH2 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的半数抑制浓度(IC50),台盼蓝染色实验检测经顺铂作用不同时间后的细胞存活率。结果:与A2780细胞比较A2780/CP细胞中let-7e呈低表达、EZH2mRNA和蛋白相对表达水平显著增高,差异均有统计学意义(P0.05)。A2780/CP细胞转染let-7e mimics后,EZH2 mRNA和蛋白的相对表达水平较阴性对照组明显下降(P0.05),细胞对顺铂的敏感性显著增强,其半数抑制浓度(IC50值)与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。顺铂作用于转染let-7e mimics的A2780/CP细胞后,细胞的存活率较阴性对照组明显降低(P0.05)。结论:let-7e在卵巢癌耐药细胞A2780/CP中异常低表达,上调其表达可部分逆转细胞耐药性。let-7e可能通过作用于靶蛋白EZH2参与卵巢癌细胞顺铂耐药的发生和发展。     

ERK1/2在曲普瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂耐药中的作用

目的:研究曲普瑞林在抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖的同时可否逆转顺铂耐药,并探讨MAP-ERK1/2在其中的变化及调节机制。方法:筛选建立耐顺铂的亚细胞系OVCAR3-DDP;采用MTT、流式细胞术及Western blot比较不同浓度下顺铂、曲普瑞林及两药联合对耐药卵巢癌OVCAR3-DDP细胞生长的影响,测定ERK1/2蛋白的表达。结果:卵巢癌OVCAR3-DDP细胞耐药指数为3.87;顺铂与曲普瑞林联合化疗增敏倍数为2.23;ERK1/2蛋白活性在顺铂处理组升高,在曲普瑞林处理组、顺铂与曲普瑞林联合处理组降低。结论:曲普瑞林增加了卵巢癌OVCAR3-DDP细胞对顺铂的敏感性,此作用可能与细胞内ERK1/2信号转导通路有关。     

NAC-1通过自噬介导卵巢癌细胞顺铂耐药的研究

目的:探讨NAC-1在自噬介导的卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用。方法:Western blot及流式细胞术检测顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞(SKOV3/DDP)自噬及凋亡过程中,NAC-1蛋白的表达情况。采用siRNA下调NAC-1表达,检测其对SKOV3/DDP细胞自噬及凋亡的影响,并检测其对顺铂耐药性的影响。结果:顺铂处理SKOV3/DDP细胞后,细胞自噬及凋亡水平升高,NAC-1蛋白表达升高。siRNA下调NAC-1基因后,顺铂处理SKOV3/DDP细胞的自噬水平降低,凋亡升高,细胞顺铂耐药性降低。结论:NAC-1基因可能通过调节自噬参与卵巢癌细胞顺铂耐药,降低NAC-1基因表达有助于提高顺铂对卵巢癌细胞的杀伤作用。     

ERK1/2在曲普瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂耐药中的作用

目的：研究曲普瑞林在抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖的同时可否逆转顺铂耐药，并探讨MAP-ERKl／2在其中的变化及调节机制。方法：筛选建立耐顺铂的亚细胞系OVCAR3-DDP；采用M1Tr、流式细胞术及Westernblot比较不同浓度下顺铂、曲普瑞林及两药联合对耐药卵巢癌OVCAR3-DDP细胞生长的影响，测定ERKl／2蛋白的表达。结果：卵巢癌OVCAR3-DDP细胞耐药指数为3．87；顺铂与曲普瑞林联合化疗增敏倍数为2．23；ERKl／2蛋白活性在顺铂处理组升高，在曲普瑞林处理组、顺铂与曲普瑞林联合处理组降低。结论：曲普瑞林增加了卵巢癌OVCAR3-DDP细胞对顺铂的敏感性，此作用可能与细胞内ERKl／2信号转导通路有关。     

微小RNA-16逆转上皮性卵巢癌顺铂耐药的研究

目的:研究微小RNA-16(miR-16)在人上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其与顺铂耐药的关系。方法:脂质体lipofectamine2000介导miR-16成熟体模拟物(mimics)及阴性对照片段(NC)分别转染人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP。实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-16的表达;蛋白印迹法检测细胞中Bcl-2蛋白、c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度(IC50);caspase-3活性检测试剂盒检测细胞内caspase-3酶的活性;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:(1)SKOV3/DDP细胞顺铂耐药指数(RI)为5.33;(2)SKOV3/DDP细胞中miR-16表达水平明显低于SKOV3细胞,约为后者的1/10(P=0.000),转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞中miR-16水平升高约660倍(P=0.001);(3)SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量较SKOV3细胞明显升高,转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0.01);(4)SKOV3/DDP细胞转染miR-16 mim-ics后,顺铂IC50(14.19±0.06)较转染NC组(22.52±0.60)明显降低(P=0.002),且顺铂作用后caspase-3的酶活力单位也明显升高(P=0.000);(5)顺铂(20μg/ml)作用24h、48h后,SKOV3组凋亡率明显高于SKOV3/DDP组,转染miR-16 mimics的SKOV3/DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1.5倍(P<0.01)。结论:miR-16可能通过靶向下调上皮性卵巢癌细胞Bcl-2蛋白,并协同调节c-myc蛋白的表达,增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,发挥逆转耐药的作用。     

S100A4与卵巢癌细胞顺铂耐药相关性的研究

目的:探讨钙结合蛋白S100A4与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法:MTT法测定顺铂对卵巢癌顺铂敏感细胞株A2780和耐药株CP70的半效抑制浓度(IC50);分别应用免疫细胞化学、Western blot和实时荧光定量PCR检测A2780和CP70细胞株中S100A4的差异表达,观察顺铂处理CP70细胞后S100A4在蛋白水平及基因水平的动态变化。结果:顺铂对A2780和CP70的IC50分别为20.88μmol/ml和57.10μmol/ml。S100A4蛋白在二者中均以胞浆表达为主;CP70中S100A4 mRNA水平和蛋白水平的表达均显著高于A2780;经顺铂处理CP70后,S100A4的表达呈剂量-时间依赖性。结论:S100A4的高表达与卵巢癌顺铂化疗耐药有关。     

卵巢癌顺铂耐药细胞模型中14-3-3蛋白的差异表达

目的探讨卵巢癌顺铂化疗耐药模型中14-3-3蛋白的差异表达,为深入研究卵巢癌顺铂耐药机制提供理论依据。方法分别提取卵巢癌顺铂耐药和敏感细胞的蛋白质,应用差异凝胶电泳(DIGE),通过DecyderTM分析软件获得差异表达蛋白质点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析、鉴定。结果经过二维电泳技术分离,MALDI-TOF-MS成功鉴定出2个14-3-3蛋白亚型,即14-3-3σ和14-3-3ζ,在耐药细胞中表达分别上调31%和38%,t检验P值分别为0.0049和0.0032。结论差异蛋白14-3-3σ和14-3-3ζ的鉴定为探讨这类蛋白在卵巢癌顺铂耐药中的作用奠定了基础,并提供了候选治疗靶点。     

顺铂耐药卵巢癌细胞鼠肾包膜下动物模型的建立及其临床意义

目的 :建立顺铂耐药卵巢癌细胞鼠肾包膜下动物模型 ,探讨其临床意义。方法 :采取肾包膜下纤维蛋白细胞凝块移植法 ,用环磷酰胺免疫抑制小鼠建立顺铂耐药卵巢癌模型。结果 :移植后 7d肿瘤体积明显增大 ,顺铂耐受细胞组与非耐受细胞组体积无明显差异 (P >0 .0 5) ;移植后细胞形态学特征无改变 ;在用顺铂治疗后 ,耐药细胞组肿瘤体积较非耐药细胞组体积大 (P <0 .0 5)。结论 :该动物模型可作为短期体内实验模型 ,能保持细胞的耐药性     

CTHRC1对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探究胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及其相关机制。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞株A2780、SKOV3及顺铂耐药细胞株A2780/DDP、SKOV3/DDP中CTHRC1蛋白表达水平。慢病毒lenti-sh CTHRC1转染SKOV3/DDP细胞,下调CTHRC1表达水平。CCK-8法检测沉默CTHRC1后SKOV3/DDP细胞增殖情况及顺铂半数抑制浓度(IC_(50))的变化。Western blot法检测转染后SKOV3/DDP细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况及Akt、STAT3的磷酸化水平。结果:与A2780和SKOV3细胞相比,顺铂耐药细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP细胞中CTHRC1蛋白表达水平相对较高(P0.05)。靶向下调CTHRC1表达后,SKOV3/DDP-sh CTHRC1细胞的增殖能力无明显变化,但顺铂的IC_(50)显著降低(P0.01),Akt、STAT3磷酸化水平受到抑制,Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:CTHRC1可能通过Akt、STAT3信号通路,调节抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,继而影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

促性腺激素释放激素类似物对耐药卵巢癌细胞血管形成的抑制作用

目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)类似物曲普瑞林(triptorelin)联合顺铂(c DDP)对卵巢癌顺铂耐药细胞血管生成的抑制效果,并探讨其作用机制。方法:体外筛建卵巢癌OVCAR-3细胞系的顺铂耐药模型OVCAR-3/c DDP,并建立其裸鼠皮下荷瘤模型。实验分为对照组(NS组)、曲普瑞林组、顺铂组、曲普瑞林+顺铂组。采用实时定量PCR(real-time PCR)和Western blot法分别检测VEGF mRNA和蛋白表达。采用鸡胚尿囊膜实验(CAM)检测用药后对荷瘤组织血管生成的影响。结果:曲普瑞林+顺铂组的VEGF mRNA和蛋白表达显著低于曲普瑞林组、顺铂组及NS组(P0.05)。鸡胚尿囊膜实验结果显示,曲普瑞林和顺铂单独用药均能抑制耐药荷瘤组织的血管形成,抑制率分别为20.76%和16.66%;两药联合作用后抑制作用更显著,抑制率达36.50%。结论:GnRH类似物曲普瑞林联合顺铂可明显抑制顺铂耐药卵巢癌细胞的血管生成,其机制可能与下调VEGF表达有关。     

L型氨基酸转运蛋白抑制剂BCH联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的:探讨L型氨基酸转运蛋白抑制剂2-氨基双环-(2,2,1)-庚烷-2-羧酸(BCH)单用及联用顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞生长的影响及其可能的分子机制。方法:人卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的BCH及BCH联合顺铂处理后,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖活性;Western blot检测BCH对mTOR通路的影响。结果:单用BCH可显著抑制SKOV3细胞增殖,并呈现一定的时间-剂量依赖性。联用顺铂较之单独用药组,细胞活性明显降低(P<0.01),且BCH在顺铂之后应用时抑制作用更为明显(P<0.05)。Western blot显示BCH可抑制mTOR、p70 S6K和4E-BP1磷酸化,阻断mTOR通路。结论:L型氨基酸转运蛋白抑制剂BCH单用及联用顺铂均可显著抑制人卵巢癌SK-OV3细胞增殖,且BCH在顺铂之后应用抑制作用更明显,呈协同作用。     

抑癌基因SPARCL1低表达对卵巢癌耐药和临床预后的影响

目的:探讨SPARCL1表达对卵巢癌顺铂耐药的影响,阐明SPARCL1表达与耐药及预后的相关性。方法:RT-qPCR和Western blot法检测卵巢癌细胞中SPARCL1表达,免疫组化法(IHC)检测卵巢癌组织中SPARCL1表达,Kaplan-Meier生存曲线分析基因表达与无疾病生存期(DFS)和总生存期(OS)的关系。慢病毒转染过表达或干扰基因在顺铂耐药细胞SKOV3/DDP中的表达,CCK-8法检测细胞增殖并计算IC_(50)。转录组测序研究SPARCL1表达对卵巢癌细胞分子水平的影响。结果:与卵巢癌敏感组织相比,SPARCL1蛋白在耐药组织中显著低表达(P=0.001),且该蛋白低表达能预测卵巢癌不良DFS(P=0.001)和OS(P=0.021)。SPARCL1在顺铂耐药细胞SKOV3/DDP中显著下调表达,其过表达能减缓耐药细胞增殖速度并提高对顺铂的敏感性,而干扰其表达则能加快细胞增殖并降低细胞对顺铂的敏感性。转录组测序结果发现,SPARCL1过表达可能影响p53及细胞黏附分子等经典卵巢癌耐药调控通路。结论:SPARCL1低表达促进耐药且与不良OS和DFS显著相关,有望作为卵巢癌治疗靶标和潜在预后标记物应用于临床。     

调节细胞自噬增强卵巢癌顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨细胞自噬与上皮性卵巢癌顺铂耐药的关系及调节细胞自噬对卵巢癌顺铂耐药的影响。方法:应用MTT法、MDC荧光染色法及激光共聚焦显微镜技术,观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株自噬现象;通过自噬特异性抑制剂3-MA作用,了解3-MA对卵巢癌细胞胞浆内自噬体的抑制作用及抑制细胞自噬对卵巢癌顺铂敏感性的影响。结果:SKOV3细胞株顺铂IC50值为3.330μg/ml,SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为14.152μg/ml。3-MA联合顺铂作用后SKOV3细胞株的顺铂IC50值为3.312μg/ml,其对顺铂的敏感性无明显影响(P=0.221),SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为6.386μg/ml,提示3-MA可提高上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性(P=0.000)。MDC荧光染色及激光共聚焦显微镜观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株胞浆自噬体的形成情况,顺铂能够诱导自噬体的生成,在3-MA作用下,SKOV3/DDP细胞株顺铂诱导的自噬体荧光强度变小,而SKOV3细胞株自噬体的荧光强度变化不大。结论:细胞自噬活性增强与上皮性卵巢癌顺铂耐药有关,抑制细胞自噬活性可以部分逆转上皮性卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药,但不改变顺铂敏感型细胞SKOV3对顺铂的敏感性。     

白细胞介素6诱导卵巢上皮性癌细胞对化疗药物产生耐药的机制研究

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)诱导卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞对化疗药物产生耐药的机制及相关信号传导通路.方法 应用外源性重组IL-6短期处理或将正义IL-6基因(ssIL-6)稳定转染至A2780细胞(不表达IL-6但表达其受体、对顺铂和紫杉醇敏感),同时将反义IL-6基因(asIL-6)稳定转染至SKOV3细胞(高表达IL-6及其受体、对顺铂和紫杉醇耐药),应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、逆转录PCR(RT-PCR)技术及蛋白印迹法(western blot)观察IL-6是否影响卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性,并对可能的信号传导通路进行研究.结果 (1)外源性重组IL-6处理A2780细胞后,对顺铂和紫杉醇的耐药倍数分别为6.25和7.31倍;ssIL-6转染A2780细胞后(内源性过表达IL-6),IL-6低、中、高表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为7.13、7.47和8.34倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为7.61、8.27和10.70倍;而asIL-6转染SKOV3细胞后(抑制内源性IL-6表达),IL-6中、高抑制表达细胞对顺铂的耐药倍数分别为0.15和0.10倍,对紫杉醇的耐药倍数分别为0.10和0.08倍,可恢复SKOV3细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性.(2)外源性IL-6作用后,上调了A2780细胞中耐药相关基因MDR1和GST-π以及凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL和XIAP mRNA和蛋白的表达;与此相一致,ssIL-6转染的A2780细胞中MDR1、GST-π及bcl-2、bcl-xL、XIAP mRNA和蛋白的表达水平增加,而asIL-6转染的SKOV3细胞则明显降低.(3)有丝分裂原活化的蛋白激酶-细胞外信号调节激酶(MEK)抑制剂--PD98059和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂--wortmannin能分别阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞细胞外信号调节激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)的活化作用,且两者均能阻断IL-6诱导的卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇产生的耐药,细胞生长明显减少.结论 IL-6诱导的卵巢癌细胞化疗耐药很可能与其上调卵巢癌细胞耐药相关基因MDR1、GST-π和凋亡抑制基因bcl-2、bcl-xL、XIAP的表达以及活化MEK/ERK和PI3K/Akt信号传导通路有关.     

蛋白酶体抑制剂MG132逆转子宫颈癌细胞HCE1多细胞球体对顺铂耐药的研究

目的 构建宫颈鳞癌细胞系HCE1的多细胞球体模型,研究蛋白酶体抑制剂MG132对其顺铂天然耐药的影响,探讨MG132是否可以逆转HCE1多细胞球体的天然耐药及其可能的机制.方法 (1)采用液体重叠法和旋转法建立HCE1多细胞球体模型;(2)用MG132、顺铂分别干预HCE1单层细胞及多细胞球体,分为MG132组、顺铂组、MG132+顺铂组、对照组,锥虫蓝拒染法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率;(3)用蛋白印迹法和免疫组化方法分别检测HCE1单层细胞及药物干预前后多细胞球体中核因子kB(NF-kB)和B细胞淋巴瘤/白血病2蛋白(bcl-2)的表达.结果 (1)成功建立了HCE1多细胞球体模型.(2)HCE1单层细胞和多细胞球体的细胞抑制率:MG132组分别为(11.67±2.34)%和(10.78±1.17)%,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);MG132+顺铂组分别为(92.67±2.52)%和(91.33±2.18)%,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05);顺铂组分别为(45.01±7.44)%和(9.45±5.98)%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)HCE1单层细胞和多细胞球体的凋亡率:MG132组两者凋亡率分别为8.14%和5.97%,MG132+顺铂组两者凋亡率分别为99.01%和95.22%;顺铂组两者凋亡率分别为33.61%和0.88%.(4)NF-kB的相对表达量和bcl-2的高表达率:HCE1多细胞球体对照组分别为0.67、60%,顺铂组分别为0.85、83%,MG132组分别为0.39、20%,MG132+顺铂组分别为0.47、33%.结论 (1)HCE1多细胞球体模型对顺铂可产生天然耐药,是体外研究宫颈癌对顺铂耐药的良好模型.(2)MG132对HCE1多细胞球体有抑制增殖、诱导凋亡的作用,可部分逆转HCE1多细胞球体对顺铂的天然耐药性,其机制可能与NF-kB、bcl-2表达下调有关.     

肝素结合表皮生长因子在顺铂耐药卵巢癌中的表达及相关性研究

目的检测肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）在顺铂耐药卵巢癌中的表达水平并探讨HB-EGF与卵巢癌对顺铂耐药性的关系。方法①体外实验：蛋白印迹法检测卵巢癌亲本细胞株A2780和顺铂耐药株A2780/CDDP中HB-EGF蛋白的表达。分别予以HB-EGF抑制剂CRM197治疗,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞的增殖能力,酶标仪检测加药前后caspase-3蛋白的活性;②体内实验：建立A2780组和A2780/CDDP组卵巢癌裸鼠移植瘤模型,免疫组化法检测2组移植瘤中HB-EGF蛋白的表达。分别予以CRM197治疗观察移植瘤的生长情况并计算CRM197抑瘤率。结果体内外实验结果表明,与A2780组相比,HB-EGF在A2780/CDDP组中高表达。CRM197可有效地降低A2780/CDDP细胞的增殖能力和caspase-3的表达,抑制A2780/CDDP组裸鼠移植瘤的生长（P〈0.001）。结论 HB-EGF在顺铂耐药卵巢癌中高表达,并与卵巢癌对顺铂的耐药性相关。