两种技术对不同手术标本进行检测诊断胸壁结核的价值

目的 探讨GeneXpert MTB/RIF 技术(简称“GeneXpert”)、BACTEC MGIT 960液体培养 (简称“MGIT 960”)对不同手术标本进行检测诊断胸壁结核的价值。方法 搜集2016年6月至2019年7月西安市胸科医院收治的疑似胸壁结核患者214例,通过外科手术获得病灶中的脓液152份、干酪样坏死组织128份及肉芽组织138份,同时采用GeneXpert及MGIT 960对上述标本进行检测。通过临床综合诊断、病理学检查确诊胸壁结核174例,非结核性胸壁疾病40例。以临床诊断结果为参考标准,评价GeneXpert及MGIT 960诊断胸壁结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值;对3种标本采用GeneXpert及MGIT 960的检测结果(阳性率差异)进行比较,统计学分析采用χ ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 214例疑似胸壁结核患者通过术前血液化验、影像学资料及术后病理结果临床最终诊断为胸壁结核174例,非结核性胸壁疾病40例(其中化脓性胸壁脓肿18例,胸壁囊肿并发普通细菌感染9例,软组织肿瘤8例,肋骨骨髓炎3例,胸壁放线菌病2例)。以临床诊断结果为标准,GeneXpert检测诊断胸壁结核的敏感度为82.18%(143/174),特异度为97.50%(39/40),阳性预测值为99.31%(143/144),阴性预测值为55.71%(39/70),Kappa值为0.618;MGIT 960检测诊断胸壁结核的敏感度为52.30%(91/174),特异度为100.00%(40/40),阳性预测值为100.00%(91/91),阴性预测值为32.52%(40/123),Kappa值为0.291。上述2种技术对3种类型手术标本的检测阳性率分别是:肉芽组织为81.9%(113/138),干酪样坏死组织为68.8%(88/128),脓液为44.7%(68/152);脓液与干酪样坏死组织两组之间的阳性率比较,χ ²=16.23,P<0.001;干酪样坏死组织和肉芽组织两组之间的阳性率比较,χ ²=4.19,P=0.013;肉芽组织和脓液两组之间的阳性率比较,χ ²=42.54,P<0.001。结论 GeneXpert检测诊断胸壁结核的敏感度明显高于MGIT 960,而特异度接近,可用于手术标本的快速检测。GeneXpert和MGIT 960联合检测可疑胸壁结核患者的3种类型手术标本,肉芽组织的阳性率较高。     

液基细胞学技术在肺结核诊断中的应用价值

目的 探讨液基细胞学技术(thinprep cytologic test,TCT)在肺结核诊断中的应用价值。方法 按照患者纳入标准搜集2017年11月至2019年2月河北省张家口市传染病医院诊治的248例初诊为疑似肺结核的患者,最终临床综合诊断确诊为肺结核患者181例,非肺结核患者67例。由结核科医生根据相应临床表现及体征按照每例患者选用1种类型临床标本的原则共采集248份临床标本,包括101份晨痰标本、67份胸腔积液标本、80份支气管肺泡灌洗液标本。248份标本均行TCT、萋-尼抗酸染色涂片镜检(Ziehl-Neelsen 染色涂片法镜检,简称“Z-N涂片法”)、BACTEC^TM MGIT 960液体培养法(简称“MGIT 960法”)检测分枝杆菌。采用SPSS 19.0软件进行数据的统计学分析,计数资料间的比较采用χ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 TCT检测248份标本、痰液标本、胸腔积液标本、支气管肺泡灌洗液标本的阳性率[分别为53.63%(133/248)、67.33%(68/101)、17.91%(12/67)、66.25%(53/80)]均明显高于Z-N涂片法 [分别为25.81%(64/248)、36.63%(37/101)、7.46%(5/67)、27.50%(22/80)](χ²值分别为46.788、19.736、9.449、20.833,P值分别为0.000、0.000、0.002、0.000);但TCT检测痰标本的阳性率明显低于MGIT 960法[81.19%(82/101)](χ ²=5.076,P=0.024),而检测胸腔积液及支气管灌洗液标本的阳性率与MGIT 960法[分别为25.37%(17/67)、70.00%(56/80)]差异均无统计学意义(χ ²=1.100,P=0.294;χ ²=0.377,P=0.539)。以临床诊断为参考标准,TCT、Z-N染色法、MGIT 960法检测所有临床标本的敏感度分别为72.93%(132/181)、30.39%(55/181)、85.64%(155/181),一致率分别为79.84%(198/248)、48.79%(121/248)、89.52%(222/248),特异度分别为98.51%(66/67)、98.51%(66/67)、100.00%(67/67)。 结论 TCT检测痰液、胸腔积液及支气管肺泡灌洗液标本中分枝杆菌的阳性率、敏感度均高于Z-N涂片法,对诊断肺结核具有重要临床应用价值。     

经内科胸腔镜胸膜病变活检对结核性胸膜炎的诊断价值

目的 评价经内科胸腔镜胸膜病变活检对结核性胸膜炎的诊断价值及安全性。方法 2015年6月至2018年10月,首都医科大学附属北京胸科医院、首都医科大学附属北京朝阳医院、北京积水潭医院、卫生部北京医院等4家临床中心采用前瞻性多中心诊断试验方法,对参照入组标准顺序纳入的229例不明原因胸腔积液的入院患者行内科胸腔镜检查,并对活检留取胸膜病变组织标本行结核分枝杆菌GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和BACTEC MGIT 960培养(简称“MGIT 960”)及常规病原学检测和病理学检查。结果 229例患者经内科胸腔镜取胸膜活检组织行病理学和病原学检查结果显示,临床不能明确诊断者23例(10.0%),确诊者为206例(90.0%),其中129例(56.3%)确诊为结核性胸膜炎,77例(33.6%)诊断为其他原因所致的胸腔积液。胸膜活检组织经GeneXpert或MGIT 960检测结核感染的阳性率[分别为27.9%(64/229)和17.0%(39/229)]与病理学检测阳性率[(23.1%,53/229)]比较,差异无统计学意义(χ²=1.32,P=0.251;χ²=2.67,P=0.103);但GeneXpert+MGIT 960联合检测的阳性率[32.8%(75/229)]明显高于传统病理学检测(χ²=5.25,P=0.022)。结核性胸膜炎患者的胸腔镜镜下特征性表现在纤维粘连带[70.5%(91/129)]、弥漫性粟粒结节状病灶[41.1%(53/129)]、纤维素沉积[40.3%(52/129)]等方面均明显高于其他原因胸腔积液者[分别为32.5%(25/77)、6.5%(5/77)、15.6%(12/77)],但散在多发结节状病灶[26.4%(34/129)]明显低于其他原因胸腔积液者[53.2%(41/77)](χ²=28.41、28.52、24.42、15.06,P值均=0.000)。229例患者胸腔镜术后均未出现严重不良事件,224例(97.8%)有轻中度胸痛,口服止痛药2~3 d后可缓解;134例(58.5%)活检部位有少量出血,107(46.7%)例局部皮下气肿,均未给予特殊处理,拔管后2~3 d内吸收;仅2例患者术后出现脓胸,引流管留置14 d后行胸腔镜胸膜剥离术,随访6个月后均安全拔管。结论 内科胸腔镜镜下表现、胸膜病变活检组织标本病理和病原学检测均有助于结核性胸膜炎的诊断,而且安全性高,建议临床大力推广应用。     

The diagnostic value of pleural biopsy by medical thoracoscopy in tuberculous pleural effusions

目的 评价经内科胸腔镜胸膜病变活检对结核性胸膜炎的诊断价值及安全性。方法 2015年6月至2018年10月,首都医科大学附属北京胸科医院、首都医科大学附属北京朝阳医院、北京积水潭医院、卫生部北京医院等4家临床中心采用前瞻性多中心诊断试验方法,对参照入组标准顺序纳入的229例不明原因胸腔积液的入院患者行内科胸腔镜检查,并对活检留取胸膜病变组织标本行结核分枝杆菌GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和BACTEC MGIT 960培养(简称“MGIT 960”)及常规病原学检测和病理学检查。结果 229例患者经内科胸腔镜取胸膜活检组织行病理学和病原学检查结果显示,临床不能明确诊断者23例(10.0%),确诊者为206例(90.0%),其中129例(56.3%)确诊为结核性胸膜炎,77例(33.6%)诊断为其他原因所致的胸腔积液。胸膜活检组织经GeneXpert或MGIT 960检测结核感染的阳性率[分别为27.9%(64/229)和17.0%(39/229)]与病理学检测阳性率[(23.1%,53/229)]比较,差异无统计学意义(χ²=1.32,P=0.251;χ²=2.67,P=0.103);但GeneXpert+MGIT 960联合检测的阳性率[32.8%(75/229)]明显高于传统病理学检测(χ²=5.25,P=0.022)。结核性胸膜炎患者的胸腔镜镜下特征性表现在纤维粘连带[70.5%(91/129)]、弥漫性粟粒结节状病灶[41.1%(53/129)]、纤维素沉积[40.3%(52/129)]等方面均明显高于其他原因胸腔积液者[分别为32.5%(25/77)、6.5%(5/77)、15.6%(12/77)],但散在多发结节状病灶[26.4%(34/129)]明显低于其他原因胸腔积液者[53.2%(41/77)](χ²=28.41、28.52、24.42、15.06,P值均=0.000)。229例患者胸腔镜术后均未出现严重不良事件,224例(97.8%)有轻中度胸痛,口服止痛药2~3 d后可缓解;134例(58.5%)活检部位有少量出血,107(46.7%)例局部皮下气肿,均未给予特殊处理,拔管后2~3 d内吸收;仅2例患者术后出现脓胸,引流管留置14 d后行胸腔镜胸膜剥离术,随访6个月后均安全拔管。结论 内科胸腔镜镜下表现、胸膜病变活检组织标本病理和病原学检测均有助于结核性胸膜炎的诊断,而且安全性高,建议临床大力推广应用。     

Evaluation of the quality of pulmonary tuberculosis diagnosis after the implementation of the newly revised WS 288-2017 Diagnosis for pulmonary tuberculosis standards

目的 了解《WS 288—2017 肺结核诊断》标准(以下简称“新标准”)实施后肺结核诊断情况,提高登记治疗的肺结核患者病原学阳性率,以及对病原学阴性肺结核患者的诊断质量。方法 以自愿接受评估为原则,青海、甘肃、新疆、贵州、湖北、广西、山东、辽宁8个省(自治区)接受现场评估,每个省1家地市级、3家县级结核病定点医疗机构。评估内容:查阅“新标准”实施前1年(2017年)、实施后1年(2018年)当地肺结核登记资料,以及结核病影像学诊断、结核病实验室相关检测情况;查阅病原学阴性肺结核病案,每个现场、每个年度从发现第一例患者开始采用整群抽样方法各查阅50例;查阅实验室登记本、留存痰涂片,累计查阅病原学阴性肺结核患者病案3532例,实验室留存痰涂片3260份。计数资料的比较采用χ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 “新标准”实施后各评估现场强化了病原学检测力度,分枝杆菌分子生物学检测率由实施前的18.2%(6/33)提高到60.0%(15/25),差异有统计学意义(χ²=9.035,P=0.003);分枝杆菌分离培养率由93.9%(31/33)提高到96.0%(24/25),差异无统计学意义(χ²=0.061,P=0.804)。实验室检测质量评估发现,2017年度痰标本不合格率为40.1%(384/957),2018年度为40.0%(922/2303),差异无统计学意义(χ²=0.000,P=0.993)。“新标准”实施后,评估地区登记肺结核患者病原学阳性率从21.6%(4806/22258)提高到24.7%(4026/16300),差异有统计学意义(χ²=51.200,P=0.000);结核抗原抗体检测率从36.5%(871/2389)提高到37.3%(426/1143),差异无统计学意义(χ²=0.186,P=0.667);结核抗原抗体检测阳性率从25.7%(224/871)提高到41.3%(176/426),差异有统计学意义(χ²=31.900,P=0.000);结核菌素试验检测率从23.0%(549/2389)提高到47.2%(539/1143),阳性率由57.9%(318/549)提高到73.3%(395/539),差异均有统计学意义(χ²值分别为210.900、27.730,P值均=0.000);γ干扰素释放试验检测率由2.3%(54/2389)提高到17.2%(197/1143),差异有统计学意义(χ²=260.400,P=0.000)。符合肺结核临床诊断要素的患者从23.8%(569/2389)提高到48.1%(550/1143),差异有统计学意义(χ²=209.800,P=0.000)。结论 “新标准”贯彻实施后提高了登记肺结核患者的病原学阳性率,改进了病原学阴性肺结核诊断质量。     

交叉引物恒温扩增技术在初诊疑似肺结核患者诊断中的应用价值

目的: 评价交叉引物恒温扩增(cross-priming amplification,CPA)技术在初诊疑似肺结核患者诊断中的应用价值。方法: 选取2020年1月至2021年5月深圳市龙华区慢性病防治中心就诊的初诊疑似肺结核患者2408例作为研究对象。收集患者痰液标本分别采用萋-尼抗酸染色(acid-fast stain,AFS)法、BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)液体培养法及CPA技术对治疗前痰液标本进行结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)检测,以MGIT 960液体培养法为参照标准,评价CPA诊断效能。结果: AFS法、MGIT 960液体培养法及CPA技术MTB阳性检出率分别为8.89%(214/2408)、27.99%(674/2408)及15.49%(373/2408),不同方法检测阳性率比较差异有统计学意义(χ²=314.619,P=0.000),其中MGIT 960液体培养法明显高于CPA技术和AFS法,而CPA技术高于AFS法,差异均有统计学意义(χ²=110.572、 292.158、 49.046,P值均=0.000)。以MGIT 960液体培养结果为参照标准,CPA检测MTB的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及符合率分别为52.37%(353/674)、98.85%(1714/1734)、94.64%(353/373)、84.23%(1714/2035)及85.84%(2067/2408),而AFS法分别为31.45%(212/674)、99.88%(1732/1734)、99.07%(212/214)、78.94%(1732/2194)及80.73%(1944/2408),其中CPA技术的敏感度[52.37%(95%CI:47.21%~59.64%)]明显高于AFS法[31.45%(95%CI:26.87%~35.72%)],差异有统计学意义(χ²=108.290, P=0.000)。CPA技术与MGIT 960液体培养法检测结果一致性较好(Kappa=0.592),而与AFS法一致性较差(Kappa=0.395)。涂阳培阴率为0.08%(2/2408),培养污染率为5.40%(130/2408),而CPA检测无效例数为0。结论: 初诊疑似肺结核分枝杆菌感染CPA技术阳性检出率和敏感度明显高于AFS法,且一致性好于AFS法,同时操作简单、快速、经济及无污染,对肺结核早期诊断具有应用价值。     

新型国产改良Middlebrook液体培养试剂对结核分枝杆菌培养效果的评价

目的: 评价新型国产改良Middlebrook液体培养试剂用于临床样本中结核分枝杆菌培养的效果。方法: 采集2021年3—4月西安市胸科医院诊治的疑似肺结核患者痰液和肺泡灌洗液标本,对其中质量合格的89份痰液标本和61份肺泡灌洗液标本进行分枝杆菌改良试剂培养(改良试剂法)和BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)培养。比较两种方法检测分枝杆菌的阳性率、报阳时间和污染率差异,并以MGIT 960培养结果为参照标准,评价改良试剂法的检测效能。结果: 改良试剂法检测痰液和肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌的总阳性率[44.7%(67/150)]和报阳时间[中位数(四分位数):13.0(8.5,17.0)d]与MGIT 960培养结果[分别为42.7%(63/150)和13.0(8.0,17.5)d]相比,差异均无统计学意义(χ²=0.571,P=0.453;Z=-1.344,P=0.179)。两种方法检测肺泡灌洗液标本均未出现污染,但改良试剂法检测痰液标本的污染率[12.4%(11/89)]明显高于MGIT 960培养[4.5%(4/89)],差异有统计学意义(χ²=4.000,P=0.039)。 改良培养试剂的成本[(49.6±10.5)元/份]仅约为MGIT 960培养试剂[(75.4±15.8)元/份]的60%。以MGIT 960培养结果为参照标准,改良试剂法检测痰液和肺泡灌洗液标本结核分枝杆菌的总敏感度为96.9%(62/64)、总特异度为94.2%(81/86),Kappa值为0.905,一致性好。结论: 分枝杆菌改良Middlebrook液体培养试剂检测痰液和肺泡灌洗液标本与MGIT 960培养诊断结核病的一致性好,但应注意痰液标本检测污染率较高的问题。     

胞内菌抗酸染色法检测体液标本结核分枝杆菌的应用价值

目的 探讨胞内菌抗酸染色法检测体液标本结核分枝杆菌的应用价值。方法 收集西安市胸科医院2013年4月至2015年4月共1236份疑似结核病患者的脑脊液(237份)、胸腹腔积液标本(999份)。通过白细胞胞内结核分枝杆菌抗酸染色(改良抗酸染色法,简称“胞内菌法”)、BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960培养”),及聚合酶链反应荧光探针法(简称“PCR法”)对上述标本进行结核分枝杆菌检测。结果 在胸腹腔积液标本检测中,MGIT 960培养法的敏感度(18.52%,160/864)和阳性率(16.02%,160/999)最高;胞内菌检测法次之(分别为13.66%,118/864;11.81%,118/999),PCR法最低(分别为6.94%,60/864;6.01%,60/999);胞内菌法阳性率与MGIT 960培养法、PCR法比较差异均有统计学意义(χ ²分别为10.26、29.00,P值均<0.01)。在脑脊液标本检测中,胞内菌法检测的敏感度(22.15%,35/158)和阳性率(14.77%,35/237)最高,MGIT 960培养法次之(分别为12.03%,19/158;8.02%,19/237),PCR法最低(分别为3.16%,5/158;2.11%,5/237);胞内菌法阳性率与MGIT 960培养法、PCR法比较差异均有统计学意义( {\chi }_{960}^2 =5.36,P=0.020; {\chi }_{\mathrm{PCR}}^2 =23.36,P=0.020)。 结论 结核分枝杆菌胞内抗酸染色对体液标本中结核分枝杆菌的检验具有重要意义,是一种经济、简单,且达到预期阳性率的检验方法。     

Application value of GeneXpert MTB/RIF system in diagnosis of pulmonary tuberculosis

为了解利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(GeneXpert MTB/RIF)在初诊肺结核患者诊断中的应用价值,作者收集了2015年1月至2016年12月浙江省嘉兴市第一医院就诊的初诊疑似肺结核患者361例,留取痰液标本分别进行涂片荧光金胺O染色镜检(简称“涂片镜检”)、结核分枝杆菌MGIT 320液体培养(简称“液体培养”)、GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert检测”)和固体比例法药物敏感性试验。最终临床诊断为:肺结核184例(50.97%),肺部感染162例(44.88%),非典型分枝杆菌肺部感染15例(4.15%)。361例疑似肺结核患者中,Xpert 检测的阳性率[32.41%(117/361)]明显高于涂片镜检[22.71%(82/361)](χ ²=8.49,P<0.05),与液体培养[26.32%(95/361)]比较不存在明显差异(χ ²=3.23,P=0.072),涂片镜检法与液体培养法比较差异无统计学意义(χ ²=1.26,P=0.261)。184例肺结核患者中,Xpert 检测的阳性率[63.59%(117/184)]高于涂片镜检[36.41%(67/184)]和液体培养[48.91%(90/184)](χ ²=27.17,P<0.01;χ ²=8.05,P<0.05);117例涂阴肺结核患者的Xpert检测阳性率[42.74%(50/117)]高于液体培养[24.79%(29/117)](χ ²=8.43,P=0.004)。以临床诊断为标准,Xpert检测初诊疑似肺结核患者的敏感度为63.59%(117/184),特异度为100.00%(177/177),正确指数为0.64。以固体比例法药物敏感性试验结果为金标准,Xpert 检测利福平耐药的敏感度为4/5,特异度为97.70%(85/87),正确指数为0.97。说明GeneXpert MTB/RIF在初诊疑似肺结核患者,尤其是涂阴肺结核患者中,检测结核分枝杆菌感染及对利福平耐药具有较高的效能。     

DNA实时荧光恒温扩增法在结核病临床检测中的应用价值

目的 分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称“恒温扩增法”)在结核病临床检测中的应用价值。 方法 收集2019年1—6月西安市胸科医院收治的疑似肺结核患者2421例,其中共有356例患者留取的痰液标本同时进行了BACTEC MGIT 960液体培养、利福平耐药实时荧光定量核酸检测(GeneXpert MTB/RIF法)、传统DNA实时荧光定量核酸检测(FQ-PCR法)、结核分枝杆菌RNA实时荧光恒温扩增(SAT-RNA法)、恒温扩增法检测。以MGIT 960技术检测结果为金标准,计算其他4种检测技术的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值。对恒温扩增法阳性的121份核酸样本使用熔解曲线法检测利福平ropB基因,研究恒温扩增法提取核酸应用于耐药基因检测的价值。 结果 以MGIT 960技术检测结果为金标准,恒温扩增法的敏感度(78.83%,108/137)低于GeneXpert MTB/RIF法 (95.62%,131/137),高于FQ-PCR法(74.45%,102/137)和SAT-RNA法(59.12%,81/137),差异均有统计学意义(χ ²值分别为47.437、43.654、29.467,P值均<0.001)。GeneXpert MTB/RIF法的ROC曲线下面积最大(0.910),随后依次为恒温扩增法(0.860)、FQ-PCR法(0.854)、SAT-RNA法(0.789)。恒温扩增法阳性的核酸标本用熔解曲线法检测利福平ropB耐药基因,原核酸和稀释5倍后核酸荧光检测的dt值(探测时间,detection time,1dt=1min)在26~30时,ropB基因的检出率分别为93.55%(29/31)和90.32%(28/31);dt值在15~25时,ropB基因的检出率分别为94.44%(34/36)和100.00%(36/36)。结论 通过与各种检测技术比较,恒温扩增法具有临床应用价值,并适用于基层医院的结核病诊断。     

三种检测技术诊断老年肺结核效能的比较研究

探讨结核分枝杆菌及利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(GeneXpert MTB/RIF)技术,发光二极管(light emitting diode,LED)荧光染色法和BACTEC MGIT 960系统液体培养(简称“MGIT液体培养”)诊断老年肺结核的价值。     

常用实验室技术诊断结核性脑膜炎效能的比较研究

目的 对常用实验室技术诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的效能进行比较研究,以提高临床早期诊断TBM的水平。方法 采用BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)、改良抗酸染色(简称“MZN法”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert法”)、荧光探针法聚合酶链式反应(简称“PCR-荧光探针法”)和结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)等5种实验室检测技术对西安市胸科医院2017年1月至2018年4月期间收治的244例成年疑似结核性脑膜炎患者脑脊液进行检测。包括71例TBM组患者(确诊组36例,很有可能组23例,可能组12例)及33例非TBM组患者。评价上述5种实验室技术诊断TBM的效能,并探讨细菌学方法组(MGIT 960和MZN法)、分子生物学方法组(GeneXpert和PCR-荧光探针法)、免疫学方法组(T-SPOT.TB),以及上述5种技术联合诊断组(简称“联合诊断组”)在TBM早期诊断中的价值,并比较5种实验室技术之间、4种方法组之间诊断TBM敏感度的差异。结果 以临床诊断为标准,5种检测技术诊断TBM的特异度和阳性预测值均为100.0%;MGIT 960法、MZN法、GeneXpert 法、PCR-荧光探针法和T-SPOT.TB检测技术诊断TBM的敏感度分别为19.7%(14/71)、26.8%(19/71)、42.3%(30/71)、35.2%(25/71)、29.6%(21/71);GeneXpert法和PCR-荧光探针法的敏感度均高于MGIT 960法,差异均有统计学意义(χ ²=8.43,P=0.004;χ ²=4.28,P=0.039)。细菌学方法组、分子生物学方法组、免疫学方法组及联合诊断组的敏感度分别为31.0%(22/71)、50.7%(36/71)、29.6%(21/71)、73.2%(52/71);分子生物学方法组和联合诊断组的敏感度高于细菌学方法组,差异均有统计学意义(χ ²=5.71,P=0.017;χ ²=73.20,P=0.000)。 结论 在TBM的早期诊断中,GeneXpert法与PCR-荧光探针法的敏感度高于MGIT 960法;各实验方法联合检测有助于提高诊断TBM的敏感度,并且与细菌学方法组相比,分子生物学方法组以及联合诊断组的敏感度更高。     

新型胶颗粒芯片技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的 评估一种新型胶颗粒芯片技术[TruArray胶颗粒芯片(Gel element arrays),简称为“TruArray芯片”]用于痰标本中结核分枝杆菌及利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的检测效能。 方法 选取2016年8月在首都医科大学附属北京胸科医院就诊的149例疑似肺结核患者痰标本,分别进行涂片镜检、BACTEC MGIT 960快速液体培养系统(简称“MGIT 960”)、TruArray芯片和GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)检测,对液体培养阳性菌株进行测序菌种鉴定、MGIT 960药物敏感性试验(简称“药敏试验”)和耐药相关基因测序,分析TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的检测效能。 结果 液体培养、GeneXpert和TruArray芯片对结核分枝杆菌的检出率分别为32.2%(48/149),53.7%(80/149)和57.0%(85/149),TruArray芯片和GeneXpert两种方法检出率差异无统计学意义(χ ²=0.34,P=0.560),但TruArray芯片检测阳性率高于液体培养(χ ²=18.59,P<0.01)。以MGIT 960试验结果为标准,TruArray芯片检测痰标本中结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.9%(47/48)和61.4%(62/101);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为97.5%(78/80)和88.4%(61/69)。以MGIT 960药敏试验结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为91.7%(11/12)和96.8%(30/31);以GeneXpert检测结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度为85.0%(17/20)和97.9%(47/48);以耐药基因测序结果为标准,TruArray芯片检测RFP耐药的敏感度和特异度分别为92.3%(12/13)和100.0%(30/30)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,TruArray芯片技术检测INH耐药的敏感度和特异度分别为78.6%(11/14)和93.8%(30/32);以耐药基因测序结果为判断标准,TruArray芯片检测INH耐药的敏感度和特异度分别为100.0%(11/11)和94.3%(33/35)。 结论 TruArray芯片检测技术快速、可靠,在结核病及耐多药结核病快速诊断方面具有非常好的应用前景。     

结核感染T细胞斑点试验对使用免疫抑制剂患者并发肺结核的诊断价值

目的 探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)对使用免疫抑制剂患者并发肺结核的诊断价值。方法 收集2013年7月至2015年12月广州市胸科医院收治的197例使用免疫抑制剂并发肺结核患者(简称“观察组”),及同期住院的200例未使用免疫抑制剂的肺结核患者(简称“对照组”)作为研究对象。所有患者均通过痰液或支气管灌洗液(BALF)的涂片或培养查找抗酸杆菌,对阳性菌株行菌种鉴定以排除非结核分枝杆菌,结合胸部X线摄影检查符合活动性肺结核表现,肺结核诊断均符合《肺结核诊断和治疗指南》标准。比较两组患者血T-SPOT.TB、抗酸杆菌金胺O荧光染色涂片镜检(简称“金胺O涂片镜检”)、BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960”),以及结核菌素纯蛋白衍生物试验(PPD试验)检测阳性率的差异。采用SPSS 19.0软件对计数资料进行χ ²检验,以P<0.05为差异有统计学意义。 结果 观察组与对照组患者的血T-SPOT.TB检测阳性率[分别为85.28%(168/197)、96.00%(192/200)]均明显高于金胺O涂片镜检[36.55%(72/197)、35.50%(71/200)](χ ²值分别为98.24、162.53,P值均=0.000),MGIT 960 [53.81%(106/197),57.50%(115/200)](χ ²值分别为46.06、83.06,P值均=0.000),PPD试验[34.52%(68/197),63.50%(127/200)](χ ²值分别为105.66、65.40,P值均=0.000)。观察组患者T-SPOT.TB、PPD试验检测阳性率均明显低于对照组(χ ²值分别为13.50、33.36,P值均=0.000)。 结论 在使用免疫抑制剂患者并发肺结核时采用血T-SPOT.TB技术进行检测仍具有较高的阳性率,较传统的检测方法具有更高的辅助诊断价值。     

Analysis of drug-resistance of 1719 mycobacterium strains in Nanjing from 2017 to 2019

目的 分析南京市分枝杆菌感染患者的人口学特征、疾病特征,以及临床分离株耐药性检测结果。方法 选取2017年1月至2019年12月南京市第二医院收治的1719例经分枝杆菌培养阳性患者作为研究对象,收集其年龄、性别、治疗史及是否并发艾滋病等信息。共分离1719株分枝杆菌,采用PCR-反向斑点杂交法进行菌种鉴定,其中,308株(17.92%)为非结核分枝杆菌(NTM),1411株(82.08%)为结核分枝杆菌(MTB)。采用绝对浓度间接法对菌株进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(Sm)、乙胺丁醇(EMB)、卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)、对氨基水杨酸(PAS)、卷曲霉素(Cm)和左氧氟沙星(Lfx)等9种抗结核药品的药物敏感性试验(简称“药敏试验”);采用荧光PCR熔解曲线法进行MTB耐药基因突变分析。结果 308株NTM分离株除对EMB耐药率为40.58%(125/308)外,对其他8种药品的耐药率均达到90.00%以上。MTB感染者中,35~<65岁年龄组耐药率(36.01%,233/647)和耐多药率(16.07%,104/647)均最高;复治患者分离株的耐药率(34.17%,312/913)、耐多药率(14.13%,129/913)和广泛耐药率(2.63%,24/913)均高于初治者分离株[分别为28.31%(141/498)、9.23%(46/498)和0.40%(2/498)],差异均有统计学意义(χ²值分别为5.076、7.099、8.836,P值分别为0.024、0.008、0.003)。1411株MTB分离株对9种抗结核药品的耐药顺位依次为:INH(17.65%,249/1411)>Sm(17.15%,242/1411)>RFP(13.39%,189/1411)>Lfx(10.70%,151/1411)>EMB(6.45%,91/1411)>Am(4.39%,62/1411)>Km(2.41%,34/1411)>PAS(1.84%,26/1411)>Cm(1.20%,17/1411);复治患者分离株对INH(19.39%,177/913)、Sm(18.51%,169/913)、RFP(14.90%,136/913)、EMB(8.00%,73/913)和Km(3.18%,29/913)的耐药率均明显高于初治患者分离株[分别为14.46%(72/498)、14.26%(71/498)、10.64%(53/498)、3.61%(18/498)、1.00%(5/498)],差异均有统计学意义(χ²值分别为5.386、4.130、6.455、10.252、6.466,P值分别为0.020、0.042、0.024、0.001、0.011)。检测耐药MTB对INH、RFP、Sm、EMB、氟喹诺酮类和二线抗结核注射类药品的耐药基因显示,耐药突变分别以katG 315(65.44%,142/217)、rpoB 529~533(66.67%,124/186)、rpsL 43(69.23%,18/26)、embB 306(66.28%,57/86)、gyrA 88~94(100.00%,91/91)和rrs 1401(100.00%,26/26)等位点突变为主,基因型突变与培养得到的表型耐药符合率分别为87.15%(217/249)、98.41%(186/189)、86.67%(26/30)、94.51%(86/91)、100.00%(91/91)、86.67%(26/30)。结论 南京市分枝杆菌感染者以中老年人群为主,耐药情况严重,应普及分枝杆菌菌种鉴定和基线耐药检测,重视耐药患者的分子生物学检查,加强治疗过程中的耐药监测,关注异烟肼和氟喹诺酮类药品的耐药性。     

Value of DNA real-time fluorescence isothermal amplification method in clinical detection of tuberculosis

目的 分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称“恒温扩增法”)在结核病临床检测中的应用价值。 方法 收集2019年1—6月西安市胸科医院收治的疑似肺结核患者2421例,其中共有356例患者留取的痰液标本同时进行了BACTEC MGIT 960液体培养、利福平耐药实时荧光定量核酸检测(GeneXpert MTB/RIF法)、传统DNA实时荧光定量核酸检测(FQ-PCR法)、结核分枝杆菌RNA实时荧光恒温扩增(SAT-RNA法)、恒温扩增法检测。以MGIT 960技术检测结果为金标准,计算其他4种检测技术的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值。对恒温扩增法阳性的121份核酸样本使用熔解曲线法检测利福平ropB基因,研究恒温扩增法提取核酸应用于耐药基因检测的价值。 结果 以MGIT 960技术检测结果为金标准,恒温扩增法的敏感度(78.83%,108/137)低于GeneXpert MTB/RIF法 (95.62%,131/137),高于FQ-PCR法(74.45%,102/137)和SAT-RNA法(59.12%,81/137),差异均有统计学意义(χ ²值分别为47.437、43.654、29.467,P值均<0.001)。GeneXpert MTB/RIF法的ROC曲线下面积最大(0.910),随后依次为恒温扩增法(0.860)、FQ-PCR法(0.854)、SAT-RNA法(0.789)。恒温扩增法阳性的核酸标本用熔解曲线法检测利福平ropB耐药基因,原核酸和稀释5倍后核酸荧光检测的dt值(探测时间,detection time,1dt=1min)在26~30时,ropB基因的检出率分别为93.55%(29/31)和90.32%(28/31);dt值在15~25时,ropB基因的检出率分别为94.44%(34/36)和100.00%(36/36)。结论 通过与各种检测技术比较,恒温扩增法具有临床应用价值,并适用于基层医院的结核病诊断。     

2017—2019年南京市1719株分枝杆菌耐药情况分析

目的 分析南京市分枝杆菌感染患者的人口学特征、疾病特征,以及临床分离株耐药性检测结果。方法 选取2017年1月至2019年12月南京市第二医院收治的1719例经分枝杆菌培养阳性患者作为研究对象,收集其年龄、性别、治疗史及是否并发艾滋病等信息。共分离1719株分枝杆菌,采用PCR-反向斑点杂交法进行菌种鉴定,其中,308株(17.92%)为非结核分枝杆菌(NTM),1411株(82.08%)为结核分枝杆菌(MTB)。采用绝对浓度间接法对菌株进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(Sm)、乙胺丁醇(EMB)、卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)、对氨基水杨酸(PAS)、卷曲霉素(Cm)和左氧氟沙星(Lfx)等9种抗结核药品的药物敏感性试验(简称“药敏试验”);采用荧光PCR熔解曲线法进行MTB耐药基因突变分析。结果 308株NTM分离株除对EMB耐药率为40.58%(125/308)外,对其他8种药品的耐药率均达到90.00%以上。MTB感染者中,35~<65岁年龄组耐药率(36.01%,233/647)和耐多药率(16.07%,104/647)均最高;复治患者分离株的耐药率(34.17%,312/913)、耐多药率(14.13%,129/913)和广泛耐药率(2.63%,24/913)均高于初治者分离株[分别为28.31%(141/498)、9.23%(46/498)和0.40%(2/498)],差异均有统计学意义(χ²值分别为5.076、7.099、8.836,P值分别为0.024、0.008、0.003)。1411株MTB分离株对9种抗结核药品的耐药顺位依次为:INH(17.65%,249/1411)>Sm(17.15%,242/1411)>RFP(13.39%,189/1411)>Lfx(10.70%,151/1411)>EMB(6.45%,91/1411)>Am(4.39%,62/1411)>Km(2.41%,34/1411)>PAS(1.84%,26/1411)>Cm(1.20%,17/1411);复治患者分离株对INH(19.39%,177/913)、Sm(18.51%,169/913)、RFP(14.90%,136/913)、EMB(8.00%,73/913)和Km(3.18%,29/913)的耐药率均明显高于初治患者分离株[分别为14.46%(72/498)、14.26%(71/498)、10.64%(53/498)、3.61%(18/498)、1.00%(5/498)],差异均有统计学意义(χ²值分别为5.386、4.130、6.455、10.252、6.466,P值分别为0.020、0.042、0.024、0.001、0.011)。检测耐药MTB对INH、RFP、Sm、EMB、氟喹诺酮类和二线抗结核注射类药品的耐药基因显示,耐药突变分别以katG 315(65.44%,142/217)、rpoB 529~533(66.67%,124/186)、rpsL 43(69.23%,18/26)、embB 306(66.28%,57/86)、gyrA 88~94(100.00%,91/91)和rrs 1401(100.00%,26/26)等位点突变为主,基因型突变与培养得到的表型耐药符合率分别为87.15%(217/249)、98.41%(186/189)、86.67%(26/30)、94.51%(86/91)、100.00%(91/91)、86.67%(26/30)。结论 南京市分枝杆菌感染者以中老年人群为主,耐药情况严重,应普及分枝杆菌菌种鉴定和基线耐药检测,重视耐药患者的分子生物学检查,加强治疗过程中的耐药监测,关注异烟肼和氟喹诺酮类药品的耐药性。