藤梨根提取物对宫颈癌的抑制作用

目的:通过一系列分子生物学方法研究藤梨根提取物对人宫颈癌Hela细胞的抑制,探索其发生抗肿瘤细胞作用可能的原理。方法:采用体外细胞培养方法,以不同浓度(1、10、100μg/mL)的藤梨提取物作用于HeLa细胞12、24 h,荧光显微镜观察细胞凋亡;荧光染色观察细胞核内变化;应用MTT法检测其对宫颈癌Hela细胞的抑制效果;流式术检测宫颈癌HeLa细胞的周期分布和凋亡率情况;琼脂糖凝胶电泳法观察HeLa细胞的DNA Aladder形成情况;免疫组化SP法观察Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况;Real time-PCR法观察宫颈癌HeLa细胞内的COX-2和PCNA mRNA含量变化。结果:低、中、高剂量组作用于HeLa细胞12、24 h后,可见明显的细胞凋亡现象,且凋亡现象明显高于对照组,其中24 h藤梨根(100μg/mL)组凋亡率最高,达38.8%;细胞的增殖逐渐减少,细胞的生长周期主要集中在G0/G1期;DNA Aladder的合成受阻,高剂量组凋亡条带明显可见;较对照组相比,Bcl-2、Cox-2、Pcna基因表达明显减少,Bax及Caspase-3 mRNA表达显著增加,高剂量组(100μg/mL)尤为明显(均P0.05)。结论:藤梨根提取物抑制宫颈癌HeLa细胞的生长效果良好,与HeLa细胞增殖减少和细胞凋亡的促进有关,而降低Bcl-2、Cox-2、Pcna基因表达、增强Bax基因表达,活化Caspase-3 mRNA也可能是其促进细胞凋亡机制之一。     

桔梗皂苷-D诱导Hela细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究桔梗皂苷-D对宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将体外培养的Hela细胞系随机分为4组,对照组常规培养,桔梗皂苷-D低、中、高剂量组(7,14,28μmol/L)分别加入相应浓度桔梗皂苷-D进行培养。各组细胞培养24 h后,收集细胞用于后续检测。采用CCK8法检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡比率,采用TUNEL染色法观察细胞核的形态变化,采用RT-PCR法检测细胞内Bax、P53、Caspase-3、Bcl-2、Hippo信号通路关键因子(MST、LATS、YAP、TAZ、C-myc、β-Catenin)mRNA表达水平,采用Western blot法检测细胞内Bax、P53、Caspase-3、Bcl-2、Hippo信号通路关键因子蛋白表达水平。结果与对照组比较,各组桔梗皂苷-D细胞活力随桔梗皂苷-D浓度增高而显著下降(P均0.05)。与对照组比较,桔梗皂苷-D各组G1期细胞比例显著增高(P均0.05),且G1期细胞占比随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐增高,桔梗皂苷-D中、高剂量组G2期及S期Hela细胞占比显著降低(P均0.05)。与对照组比较,桔梗皂苷-D各组TUNEL染色阳性细胞核的比率和早期凋亡细胞比例均显著增高(P均0.05),且随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐增高。与对照组比较,桔梗皂苷-D各组Bax、P53、Caspase-3、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐升高(P均0.05),YAP、TAZ、C-myc、β-Catenin的mRNA和蛋白表达水平随桔梗皂苷-D浓度增高而逐渐降低(P均0.05)。结论桔梗皂苷-D能显著抑制Hela细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能是通过激活Hippo信号通路,下调该通路下游YAP、TAZ的过度表达,上调促凋亡因子Bax、P53、Caspase-3表达,从而使Hela细胞发生G1期阻滞,促进Hela细胞凋亡。     

斑蝥提取物诱导宫颈癌细胞凋亡机制的实验研究

目的研究斑蝥提取物(cantharis extract,CTE)诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡作用及其分子机制。方法体外培养人宫颈癌细胞系Hela,利用CCK-8法检测CTE对Hela细胞增殖抑制作用;光学显微镜及荧光显微镜下观察不同浓度CTE诱导细胞凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞增殖和凋亡相关蛋白表达变化。结果 CTE显著抑制Hela细胞增殖,呈浓度及时间依赖型,处理48 h的IC50为3.94μg/mL。经光学显微镜下观察可见随着药物浓度增加细胞出现明显离巢凋亡。Hoechst 33258染色后发现,随着药物浓度的增加,核固缩、核碎裂等典型凋亡改变的细胞数目逐渐增多,呈浓度依赖型。AnnexinⅤ/PI双染流式凋亡检测示,随着药物浓度的增加凋亡细胞数量逐渐增加,药物处理组(1.25、2.5、5.0μg/mL)的凋亡率分别为14.73%、29.75%、53.33%;与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot检测显示,与对照组比较,药物处理组细胞增殖相关蛋白PCNA蛋白表达降低(P0.05);促凋亡蛋白Bax、Bak、Bid表达增加,2、5、5.0μg/mL组Bax表达及1.25、2.5、5.0μg/mL组Bid表达有效期异有统计学意义(P0.05)。而抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1、Survivin表达降低(P0.05),Bcl-XL表达无显著改变;凋亡蛋白激酶Caspase-3蛋白表达下降(P0.05),而Caspase-3底物凋亡相关蛋白PARP出现明显切割带,Cleaved-PARP蛋白表达增加(P0.05)。结论 CTE显著抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡,其可能机制与下调抗凋亡蛋白、上调促凋亡相关蛋白表达相关。     

花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其机理研究

目的观察和探索花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性及其作用机理。方法结晶紫染色法检测花旗松素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测与肿瘤细胞凋亡相关基因的表达。结果花旗松素能够抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,呈剂量依赖关系;花旗松素不能诱导Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达,但能使P53和P21的mRNA表达量增加。结论花旗松素具有良好的体外抑制人宫颈癌Hela细胞增殖作用;花旗松素诱导Hela细胞死亡与细胞凋亡相关,其分子机制可能与升高P53和P21mRNA表达有关,而与Bcl-2和Bax的蛋白转录无关。     

藤梨根对宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的：研究藤梨根提取物对宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响,并初步探讨其调控机制。方法：以不同浓度藤梨根提取物作用于人宫颈癌Hela细胞,观察Hela细胞形态改变,检测细胞增殖活性、迁移能力和侵袭能力,并检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达水平,以及COX-2、PCNA的基因表达水平;同时建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型,观察藤梨根、顺铂、藤梨根联合顺铂对移植瘤的生长抑制作用,并检测移植瘤Bcl-2、Bax、Caspase-3 m RNA和Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果：细胞实验表明藤梨根提取物可抑制Hela细胞的生长、增殖和迁移,迁移、侵袭细胞数显著降低,并具有浓度和时间依赖性。与空白对照组相比,藤梨根处理组Bcl-2蛋白的表达水平显著下调;COX-2、PCNA的转录水平明显下降。动物实验结果提示藤梨根联合顺铂处理后平均瘤重小于其余各组,藤梨根组、单顺铂组次之。与模型组相比,各组Bax基因表达基本不变,Bcl-2基因的表达随抑瘤率增高而降低,Caspase-3基因的表达随抑瘤率增高而升高。各处理组中Bcl-2蛋白表达较空白组均有一定程度的下降,而Bax蛋白则有一定程度的升...     

金荞麦提取物对人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导凋亡的影响

目的:探讨金荞麦提取物对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡作用及可能机制。方法:经不同浓度金荞麦提取物(0.4、2、10、50、250 g/ml)处理体外培养的人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性;经6 g/ml金荞麦提取物处理的Hela细胞,相差显微镜和荧光显微镜观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA碎片,ELISA法检测Caspase-1、3、8、9活性,Western blot法检测PARP、细胞色素C含量、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与空白对照组比较,金荞麦提取物浓度为0.2 g/ml开始起效,24h内明显抑制Hela细胞增殖,并呈时间和剂量依赖性;与空白对照组比较,6 g/ml金荞麦提取物处理的Hela细胞出现明显的核固缩、核碎裂,细胞凋亡率、DNA碎片明显增加;与金荞麦提取物组比较,金荞麦提取物与caspase抑制剂混合组DNA碎片明显减少,细胞成活率明显升高;与作用0h组比较,6 g/ml金荞麦提取物处理的Hela细胞PARP裂片、细胞色素C、Bax和Caspase-3、8、9明显增加,Bcl-2明显减少。结论:金荞麦提取物可抑制Hela细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与通过促进诱导凋亡蛋白Bax表达和抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,从而增加细胞色素C和Caspases有关。     

银杏叶提取物对皮肤鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及作用机制研究北大核心

目的:探讨银杏叶提取物对皮肤鳞状细胞癌增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:采用0、80、160、320、400、500 mg/L银杏叶提取物处理人表皮癌细胞株A431,CCK-8检测细胞存活率;EDU检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达;实时荧光定量PCR检测Caspase-3 mRNA表达。结果:A431细胞增殖率随银杏叶提取物浓度的升高而降低,当银杏叶提取物浓度为160~500 mg/L时,A431细胞增殖率及Bcl-2蛋白表达显著低于对照组;当银杏叶提取物浓度为80~500 mg/L时,A431细胞凋亡率显著高于对照组;银杏叶提取物浓度为400、500 mg/L时,A431细胞中Caspase-3 mRNA及Bax蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:银杏叶提取物可通过活化Caspase-3,上调细胞促凋亡因子Bax表达,下调细胞抗凋亡因子Bcl-2表达,从而抑制人表皮鳞状细胞增殖,促进细胞凋亡。     

苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡及Survivin基因表达的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制.方法:应用不同浓度的苦参碱作用于人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;RT-PCR和Western blotting分析Survivin基因表达.结果:苦参碱对Hela细胞的体外增殖具有抑制作用,量效关系显著,与对照组比较有统计学差异(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为2.60 g·L-1.经流式细胞仪检测表明,苦参碱能使Hela细胞G0-G1期逐渐增加,G2-M期和S期逐渐减少,并且随着剂量的增加,Hela细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).苦参碱对Hela细胞Survivin 基因表达有一定的抑制作用(P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论:苦参碱能有效抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Survivin基因的表达有关.     

越橘花色苷对宫颈癌Hela细胞凋亡及抗氧化能力的影响

目的探讨越橘花色苷对宫颈癌Hela细胞的作用机制。方法以不同浓度的越橘花色苷作用于宫颈癌Hela细胞48h后,通过Gimsa染色观察越橘花色苷抑制Hela细胞的形态学改变,通过流式双染观察Hela细胞凋亡情况,通过RT．PCR观察Hela内P53的表达,并测定Hela细胞内的SOD、GSH、MDA值。结果Gimsa染色可见越橘花色苷可使Hela细胞光泽度下降,细胞数减少,稀疏,细胞变小、核固缩。流式双染可见,随着橘花色苷浓度升高,凋亡率升高。与对照组比较,越橘花色苷浓度达到30mg／ml时,P53的表达量最高,差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较,30mg／ml和40mg／ml的越橘花色苷组SOD和GSH含量升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论越橘花色苷可通过上调抑癌基因P53的表达,增强细胞凋亡,并提高Hela细胞的抗氧化能力,从而达到抑制宫颈癌Hela细胞的作用。     

肉桂醛诱导食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞凋亡作用及机制研究

目的探究肉桂醛对食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖活性及凋亡的作用,并探讨其机制。方法 MTS实验检测不同质量浓度(1.88、3.75、7.50、15.00、30.00μg/m L)肉桂醛对Eca109细胞增殖活性的影响;倒置相差显微镜观察Eca109细胞形态学变化;流式细胞术检测不同质量浓度肉桂醛对Eca109细胞周期分布和凋亡的影响;Westernblotting检测不同质量浓度肉桂醛作用24h对Eca109细胞凋亡相关蛋白Caspase-3/Caspase-9、促凋亡蛋白Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平的影响。结果质量浓度为15.00、30.00μg/m L的肉桂醛作用Eca109细胞24 h后,与对照组相比,肉桂醛组细胞增殖活性显著降低(P0.05);经肉桂醛作用后,Eca109细胞呈现明显的凋亡形态学变化;经不同质量浓度肉桂醛处理Eca109细胞24 h后,G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),而G2/M期细胞比例明显增加(P0.05);肉桂醛处理Eca109细胞24h后,细胞凋亡率明显上升(P0.05);与对照组相比,经不同质量浓度肉桂醛处理24 h后,Eca109细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9出现明显的裂解片段(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达水平显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显上调(P0.05)。结论肉桂醛可抑制食管癌鳞状细胞癌Eca109细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与上调凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、促凋亡蛋白Bax表达,以及下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1表达有关。     

南赤瓟对Caski细胞的影响以及Survivin与Bcl-2蛋白家族基因表达关系研究

目的:研究南赤瓟醇提物对Caski细胞抑制作用及可能的作用机制。方法:用不同浓度的南赤瓟醇提物(0.0625、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00mg/ml)作用Caski细胞24h后,采用MTT法检测不同浓度的南赤瓟醇提物对Caski细胞增殖率的影响;用0.25、0.50和1.00mg/ml的南赤瓟醇提物和紫杉醇4×10-5mg/ml作用Caski细胞24h后,MTT法检测其对细胞活力的影响,流式细胞术和Hoechst 33258染色检测其对细胞凋亡的影响,实时定量PCR和Western blot检测Survivin、Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果:南赤瓟醇提物对Caski细胞的生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物(0.25、0.50和1.00mg/ml)和紫杉醇(4×10-5mg/ml)处理能显著抑制Caski细胞增殖,促进其凋亡;上调Bax mRNA和蛋白表达,下调Survivin、Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-2与Bax的比值。结论:南赤瓟醇提物可显著抑制Caski细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Caski细胞Bax mRNA和蛋白表达,下调Survivin、Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-2与Bax的比值有关。     

苦参碱对宫颈癌细胞中Bcl-2/Bax表达水平及生物学行为的影响

目的:探讨苦参碱对宫颈癌细胞中Bcl-2/Bax表达水平及生物学行为的影响。方法:将宫颈癌Hela细胞分为宫颈癌组和药物组,宫颈癌组无药物干预,药物组采用三种1.0、1.5、2.0 g/L浓度干预,采用MTT法、Transwell法、流式细胞仪及免疫印迹分别检测Hela细胞活性抑制率、细胞侵袭数目、细胞凋亡及细胞中Bcl-2/Bax蛋白表达。结果:MTT结果显示,宫颈癌组Hela细胞活性抑制率低于药物组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞活性抑制率高于1、1.5 g/L药物组(P<0.05),同一组中,72 h Hela细胞活性抑制率高于24、48 h(P<0.05),随着药物浓度及时间延长Hela细胞活性抑制率逐渐升高; 1 g/L药物组Hela细胞侵袭数目低于宫颈癌组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞侵袭数目低于1、2 g/L药物组(P<0.05),四组细胞侵袭数目比较,差异有统计学意义(P<0.05); G₀-G₁期宫颈癌组细胞凋亡与药物组比较,具有统计学差异(P<0.05),G₀-G₁期、G₂-M期各组相差较小(P>0.05),2 g/L药物组Hela细胞凋亡率最高,宫颈癌组细胞凋亡率最低,四组Hela细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05); 1 g/L药物组Hela细胞下Bcl-2蛋白水平低于宫颈癌组(P<0.05),2 g/L药物组Hela细胞下Bcl-2蛋白水平低于1、1.5 g/L药物组(P<0.05),Bax表达与Bcl-2相反。结论:苦参碱抑制宫颈癌Hela细胞活性,加快Hela凋亡,减少Hela细胞侵袭,并具有浓度依赖性,其作用机制可能与抑制Bcl-2表达,增加Bax水平相关。     

吉祥草中甾体皂苷RCE-4激活p53-ROS通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制研究

目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4对Hep G2的抑制作用及分子机制。方法:用RCE-4(1.62、3.13、6.25、12.5、25.0、50.0μM)处理Hep G2细胞24h后,采用MTT法检测不同浓度RCE-4对Hep G2细胞增殖的影响;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)分别处理Hep G2细胞12、24和48h后,MTT法检测其对细胞增殖的影响;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)处理Hep G2细胞24h后用DCFH-DA荧光探针标记进行细胞内的活性氧水平检测,Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,PI标记测定细胞周期,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测Hep G2细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,Western blot检测Bcl-2、Bax和p53蛋白表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果:RCE-4在16.2~50.0μM浓度范围内对Hep G2细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性,当药物浓度达到12.5μM时,抑制率达到最大到54.2%,并且经IC50分析软件进行计算其IC50值为12.03μM;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)处理Hep G2细胞12、24和48h均能显著抑制Hep G2细胞增殖,促进其凋亡(P0.05或P0.01);当药物浓度为25.0μM,作用时间24h时,其抑制率高达93.4%。RCE-4(6.25、1.25和25.0μM)处理Hep G2细胞24h后可显著增加Hep G2细胞内ROS水平,抑制细胞凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期,降低线粒体膜电位,上调Bax和p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达和Bcl-2与Bax的比值,增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P0.05或P0.01)。结论:RCE-4可显著的抑制Hep G2细胞增殖和诱导凋亡,其作用机制可能与其增加细胞内ROS水平,促进p53及下游靶基因Bax表达,增强Caspase-9和Caspase-3活性,抑制Bcl-2表达,降低Bcl-2和Bax比值及线粒体膜电位,阻滞细胞于G2/M期有关。     

桑皮素对人宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨桑皮素对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及其凋亡诱导作用。方法用10、15、20μmol/L桑皮素作用Hela细胞24 h后,在扫描电镜、透射电镜及倒置显微镜下观察细胞形态学变化;利用MTT法检测桑皮素对Hela细胞的增殖的影响;应用Hoechst单染实验检测Hela细胞的凋亡情况;采用qRT⁃PCR和Western blot检测Bax、Bcl⁃2 mRNA及蛋白的表达。结果桑皮素(2.5、5、7.5、10、15、20、25μmol/L)处理Hela细胞24、48 h,能明显的抑制Hela细胞增殖(P<0.05),且呈浓度依赖性。桑皮素(10、15、20μmol/L)处理Hela细胞24 h,细胞呈现早期凋亡。与0μmol/L桑皮素组比较,桑皮素(10、15、20μmol/L)能显著上调Bax mRNA及蛋白表达(P<0.05),下调Bcl⁃2 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论桑皮素通过上调Bax表达和下调Bcl⁃2表达,从而诱导Hela细胞发生凋亡。     

三棱散对人胃癌SGC-7901细胞增殖作用的影响

目的:探讨三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡影响及其可能机制。方法:制备三棱散水提物,培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法观察不同时间(24 h,72 h)不同浓度三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。用流式细胞仪检测三棱散水提物对细胞周期阻滞及其凋亡的影响。RT-PCR法检测不同浓度三棱散水提物作用人胃癌SGC-7901细胞72 h后细胞NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA及p16 mRNA表达情况。结果:随着三棱散水提物浓度增高和作用时间的延长,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐增高(P0.05),同一浓度不同时间的细胞增殖抑制率相比,有显著性差异(P0.05)。人胃癌SGC-7901细胞在G0/G1期表现出明显的增加,S期细胞明显的减少,各浓度组均明显诱导细胞凋亡(P0.05),其凋亡率随三棱散浓度增加而提高。RT-PCR法检测显示,随着三棱散水提物浓度的增加,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA表达逐渐减少,p16 mRNA表达逐渐增加。三棱散水提物浓度5.0 mg/m L,10.0 mg/m L时,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA及p16 mRNA表达存在显著性差异(P0.05或P0.01)。结论:三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞有抑制增殖和促凋亡作用,呈时间和浓度依赖性,且G0/G1期细胞数量增多,S期细胞数量减少。RT-PCR法检测显示,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA呈现低表达,p16 mRNA呈现高表达,由此推测,NF-κBp65表达下调会直接影响Cyclin D1表达,发挥细胞周期的正反馈调节,p16表达上调可启动细胞周期的负反馈调节,共同作用产生细胞增殖抑制及促进凋亡的作用。     

洋椿苦素对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用研究

目的:研究洋椿苦素(cedrelone)体外对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用,并探讨其诱导细胞凋亡的作用机制。方法:采用CCK-8法计算不同浓度的洋椿苦素作用人宫颈癌Hela细胞后的IC50及增殖抑制率;Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测洋椿苦素对Hela细胞凋亡的诱导作用;流式细胞术PI单染法检测洋椿苦素对Hela细胞生长周期的影响;Real-time PCR法测定CDK2、cyclinA mRNA表达。结果:不同浓度的洋椿苦素作用Hela细胞48小时后均能抑制其生长,其IC50值为1.4μg/ml。洋椿苦素作用24小时后,Hela细胞呈典型的凋亡形态学改变,细胞体积缩小,胞核致密浓染,呈半月状或呈碎块状。0.21μg/ml、0.42μg/ml、1.05μg/ml、1.47μg/ml、1.89μg/ml、4.22μg/ml的洋椿苦素作用Hela细胞24小时后的凋亡率分别为3%、4.1%、6.2%、7%、8.4%、58.5%。洋椿苦素作用于Hela细胞24小时后,可使细胞生长停滞在S期,即DNA合成期,并剂量依赖性地下调CDK2、cyclinA mRNA表达水平。结论:洋椿苦素对人宫颈癌Hela细胞增殖具有良好抑制作用,作用发挥与下调CDK2、cyclin A mRNA表达从而抑制Hela细胞S期DNA合成,诱导其凋亡有关。     

珍珠梅提取物抑制肝癌HepG-2细胞增殖的实验研究

目的:观察珍珠梅提取物对肝癌HepG-2细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法观察珍珠梅提取物抑制肝癌HepG-2细胞增殖;采用流式细胞仪检测其对HepG-2细胞周期分布的影响,同时结合倒置显微镜、HE染色、透射电镜及免疫细胞化学方法检测凋亡相关基因bcl-2、p53的蛋白表达,观察其诱导肝癌HepG-2细胞凋亡的作用。结果:珍珠梅提取物可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,其作用具有时间和浓度依赖性;珍珠梅提取物可诱导细胞凋亡;同时改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于G2/M期,与对照组比较,细胞凋亡率差异有显著性(P<0.01);用药前后凋亡相关基因bcl-2、p53蛋白表达均有显著性改变(P<0.01)。结论:珍珠梅提取物可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,改变细胞周期分布,从而抑制细胞增殖。     

基于线粒体凋亡通路探讨仙鹤草促HepG_2细胞凋亡的机制

目的:研究仙鹤草水提物对人肝癌HepG_2细胞增殖、凋亡的影响,并初步分析其作用机制。方法:MTT法检测仙鹤草不同浓度(1、0.75、0.5、0.25 mg/mL)及不同作用时间(24、48、72 h)对HepG_2的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Realtime-PCR和Western blotting检测线粒体凋亡信号通路中Bax、Caspase-3表达情况。结果:仙鹤草水提物对HepG_2的增殖具有显著抑制作用,并呈浓度及时间依赖性(P0.05);同时其能显著促进HepG_2凋亡。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示仙鹤草水提物1、0.75、0.5 mg/mL可显著上调HepG_2细胞Bax、Caspase-3 mRNA与蛋白表达(P0.01)。结论:仙鹤草水提物能显著抑制HepG_2增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过上调线粒体凋亡通路中的Bax、Caspase-3表达从而诱导细胞凋亡。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的机制研究

目的研究冬凌草甲素对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖抑制和凋亡诱导效应的分子机制。方法以流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测CyclinD1、P21以及凋亡相关蛋白Survivin、Bcl-2和Bax表达的变化;TRAP-PCR-ELISA方法检测MG-63细胞端粒酶活性的变化;Z-IETD-fmk阻断试验检测Caspase-8阻断前后,冬凌草甲素对MG-63细胞凋亡影响的变化。结果冬凌草甲素增加G0/G1期MG-63细胞百分率,降低S期MG-63细胞百分率;浓度依赖性抑制MG-63细胞的CyclinD1、Survivin和Bcl-2蛋白表达,上调P21和Bax蛋白表达;浓度依赖性抑制MG-63细胞端粒酶的活性;Z-IETD-fmk阻断Caspase-8活性后,能部分逆转和减弱冬凌草甲素对MG-63细胞的凋亡诱导作用。结论冬凌草甲素通过影响细胞周期调节蛋白、阻断细胞周期G1/S期"稽查点";抑制Survivin、Bcl-2,上调Bax;抑制端粒酶活性以及活化Caspase-8等途径抑制MG-63细胞增殖及诱导MG-63细胞凋亡。     

大蒜素抗人肝癌HepG-2细胞的实验研究

目的:研究大蒜素对人肝癌细胞HepG-2生长的影响,探讨其抗人肝癌HepG-2细胞作用以及相关机制。方法:选用人肝癌HepG-2细胞为研究对象。通过倒置显微镜及hoechst染色荧光显微镜观察大蒜素作用后细胞形态的变化。MTT法检测不同浓度大蒜素作用后细胞增殖活性改变并计算抑制率(IR)。流式细胞术(FCM)检测大蒜素对细胞周期及凋亡率的影响。免疫细胞化学染色了解大蒜素作用后HepG-2细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的变化。结果:大蒜素作用24 h后人肝癌HepG-2细胞形态发生改变,表现为细胞缩小变圆,突起消失,分部稀疏,细胞核浓缩,边缘化,且随着大蒜素浓度增加,上述改变逐步明显。Hoechst染色荧光倒置显微镜观察对照组细胞核呈均匀一致的荧光,而实验组可观察到细胞凋亡形态变化,表现为细胞核固缩,染色质凝聚,边缘化,部分碎裂,呈致密的颗粒状强荧光。MTT法检测结果显示不同浓度的大蒜素(12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)在不同时间(24 h、48 h、72 h)作用于HepG-2细胞后细胞增殖活性受到抑制,与阴性对照组及阳性对照组相比大部分组别差异有统计学意义。流式细胞仪检测结果提示与阴性对照组相比大蒜素组G0-G1期比例明显增加,细胞凋亡率明显上升。免疫细胞化学染色表明大蒜素作用后细胞Bax表达水平上升,Bcl-2/Bax比例下降,Caspase-3表达上升。结论:大蒜素对人肝癌HepG-2细胞的增殖有抑制作用,并能诱导HepG-2细胞凋亡。在一定范围内随着大蒜素浓度的增高,时间的延长,细胞增殖活性逐步降低,凋亡率逐步上升,呈时间-剂量依赖性。大蒜素抑制肝癌细胞增值诱导其凋亡与G0-G1期阻滞有关,经大蒜素作用后G0-G1期细胞比例明显高于对照组,其分子机制涉及上调Bax、Caspase-3表达。