丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移

【摘要】 目的 探讨丙泊酚通过调控微小RNA-574-5P(miRNA-574-5P）/性别决定区Y框蛋白（SOX2）对胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移的影响和分子机制。 方法 以0、5、10和20 μg/mL丙泊酚处理AGS细胞48 h。筛选丙泊酚最佳使用浓度。将转染后的AGS细胞分为对照组、丙泊酚组、丙泊酚+miR-NC组、丙泊酚+miR-574-5p组、丙泊酚+si-con组、丙泊酚+si-SOX2组、丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组、丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组。采用细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测细胞中微小RNA（miR）-574-5p的表达水平;免疫印迹法检测细胞中SOX2蛋白的表达水平。采用上述方法检测AGS细胞增殖、侵袭、迁移能力。双荧光素酶报告基因实验检测miR-574-5p与SOX2的靶向关系。 结果 选择20 μg/mL丙泊酚浓度进行实验。与0μg/mL比较,5、10、20 μg/mL丙泊酚处理组细胞存活率、克隆形成率、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低（P＜0.05）,且呈浓度依赖性,miR-574-5P表达水平呈浓度依赖性降低,SOX2呈浓度依赖性升高（P＜0.05）。与对照组比较,丙泊酚组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-NC组比较,丙泊酚+miR-574-5p组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+si-con组比较,丙泊酚+si-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著升高（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。与丙泊酚+miR-574-5p+pcDNA组比较,丙泊酚+miR-574-5p+ pcDNA-SOX2组AGS细胞存活率、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数以及miR-574-5p表达显著降低（均P＜0.05）,SOX2蛋白表达显著升高（P＜0.05）。miR-574-5p直接与SOX2结合。 结论 丙泊酚通过调控miR-574-5p/SOX2表达抑制胃癌AGS细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-449a/b负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖

摘要：目的 探讨miR-449a/b在胃癌发生中的可能作用机制。方法 采用qRT-PCR方法检测了miR-449a/b和E2F1基因在胃癌细胞BGC-823和胃粘膜细胞GES-1表达情况;采用瞬时转染技术将miR-449a/b模拟物(mimic)以及mimic阴性对照分别转入胃癌细胞BGC-823中,qRT-PCR验证转染成功后,通过CCK-8法检测胃癌细胞的增殖能力,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡的变化,细胞划痕实验检测胃癌细胞的迁移能力,Western blot方法检测miR-449a/b上调后其靶基因蛋白的表达水平;并通过转染E2F1过表达质粒和空质粒对照入胃癌细胞BGC-823,Western blot确定转染效率后,分别用qRT-PCR和数字PCR检测miR-449a/b的表达水平。结果 相比于正常胃粘膜细胞株GES-1,miR-449a/b在胃癌细胞株BGC-823中表达均下调（P<0.01）;过表达miR-449a/b可抑制胃癌细胞BGC-823增殖和迁移,并促进其凋亡（P<0.05）;过表达的E2F1可上调miR-449a/b的表达（P<0.001）,而上调miR-449a/b的表达,其直接靶基因CDK4、CDK6表达下调,并可通过CDKs-pRb-E2F1信号通路,间接下调E2F1蛋白的表达（P<0.01）。结论 miR-449a/b的低表达和E2F1的高表达均参与了胃癌的发生、发展,并且miR-449a/b能负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖。     

LHFPL3-AS1靶向miR-515-5p对胃癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨LHFPL3-AS1靶向miR-515-5p对胃癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时定量聚合酶链反应分析胃黏膜上皮细胞GES-1、亲本细胞HGC-27、顺铂耐药细胞HGC-27/DDP中LHFPL3-AS1和miR-515-5p表达。将HGC-27/DDP细胞分为对照(Con)组、si-NC组、si-LHFPL3-AS1组、miR-NC组、miR-515-5p mimic组、si-LHFPL3-AS1+miR-515-5pinhibitor组。双荧光素酶报告实验确定LHFPL3-AS1和miR-515-5p的靶向关系。CCK-8法检测细胞存活率,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭数,蛋白质印迹法检测E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 随着顺铂浓度的增加,HGC-27和HGC-27/DDP细胞的存活率逐渐降低,HGC-27/DDP细胞的IC₅₀(236.20μmol/L)高于HGC-27细胞(5.83μmol/L)。与GES-1细胞比较,HGC-27和HGC-27/DDP细胞中LH...     

薯蓣皂苷元对人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞生物学行为的影响

目的: 观察薯蓣皂苷元对人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡过程的影响并探讨其机制。方法: 采用薯蓣皂苷元处理体外培养的BGC-823和SGC-7901细胞,用MTT法、Transwell 实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力。用免疫印迹法检测BGC-823和SGC-7901细胞中凋亡相关蛋白BAX、凋亡抑制基因Bcl-2和MAPK信号通路的Erk1/2、JNK、p38三个通路中相关蛋白的表达。结果： 经薯蓣皂苷元处理后,BGC-823和SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低,凋亡相关蛋白BAX明显升高,Bcl-2的表达明显降低;p-p38表达水平明显降低,但JNK、p-JNK、Erk1/2、p-Erk1/2和p38的表达无明显变化。结论： 薯蓣皂苷元可能通过MAPK通路中的p-p38通路影响人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞的生物学行为。     

薯蓣皂苷元通过miR-145去甲基化抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖与迁移

目的探讨薯蓣皂苷元(Diosgenin)对MCF-7乳腺癌细胞的作用及可能机制。方法选取人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和人乳腺癌细胞系MCF-7进行实验,加入不同浓度的薯蓣皂苷元,MTS法检测薯蓣皂苷元对细胞增殖的影响,划痕实验测定薯蓣皂苷元对乳腺癌细胞迁移能力的影响,甲基化特异性PCR(MSP)方法明确薯蓣皂苷元对MCF-7细胞微小RNA-145(miR-145)甲基化的作用,实时荧光定量PCR(qPCR)检测MCF-7细胞miR-145 mRNA表达情况。结果薯蓣皂苷元可显著抑制乳腺癌细胞系MCF-7的增殖,且呈浓度和时间依赖性,其增殖抑制率明显高于正常乳腺上皮细胞MCF-10A(P0.05)。薯蓣皂苷元能明显减弱MCF-7细胞迁移能力,呈浓度依赖性(P0.01)。与对照组相比,经薯蓣皂苷元作用后MCF-7细胞中miR-145表现为去甲基化状态,且miR-145 mRNA表达显著升高(P0.01),其升高程度与浓度正相关。结论薯蓣皂苷元能抑制乳腺癌增殖与迁移,其机制可能与调控miR-145表达水平及甲基化状态相关。基于对miR-145的去甲基化从而发挥抑制肿瘤作用。     

薯蓣皂苷通过调控AMPK/mTOR自噬信号通路影响骨肉瘤细胞增殖及侵袭的机制研究

【】 目的 探讨薯蓣皂苷(Dioscin)通过调控AMPK/mTOR自噬信号通路对MG63细胞增殖及侵袭的影响。方法 体外培养骨肉瘤MG-63细胞,分为空白对照组、薯蓣皂苷不同剂量组(20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、100μmol/L),CCK-8法观察细胞增殖能力,划痕实验观察细胞迁移能力,通过Transwell小室观察细胞侵袭能力,丹酰尸胺法(MDC)观察细胞自噬情况,Western blot检测磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶/腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK/AMPK)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR/mTOR)、转录因子EB(TFEB)、被微管相关蛋白轻链3II(LC3-Ⅱ)、肌球蛋白样BCL2结合蛋白(beclin-1)蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,Dioscin各剂量组MG63细胞增殖率、细胞迁移及侵袭能力依次降低,呈浓度依赖性(P＜0.05) ; MDC染色显示,空白对照组中仅有少量细胞自噬泡,作用48h后Dioscin各组自噬泡依次增多;与空白对照组相比,Dioscin各组MG63细胞中p-AMPK/AMPK、TFEB、LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白水平依次升高,p-mTOR/mTOR蛋白水平依次降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05);与Dioscin组比较,Dioscin+AMPK抑制剂组p-AMPK/AMPK、TFEB、LC3-Ⅱ、beclin-1蛋白表达水平明显降低,p-mTOR /mTOR表达升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。结论 Dioscin可能通过调控AMPK/mTOR-TFEB通路抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭。     

薯蓣皂苷元体外抗肿瘤作用

探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用，采用四氮唑盐还原法观察薯蓣皂苷元对U-20S、SGC-7901、ACCM3株肿瘤细胞、HUCB和hRPE2株正常细胞体外生长的作用。结果：薯蓣皂苷元对U-20S、SGC-7901、ACCM、HUCB和hRPE等5种细胞的生长均有不同程度的抑制作用，1C250（24h）分别为45μmol／L、21．7μmol／L、15μmol／L、108．1μmol／L和78．5μmol／L。结论：薯蓣皂苷配基明显抑制肿瘤细胞生长的同时，对正常细胞也有毒性作用。     

太白楤木皂苷下调sirtuin 1表达对HEC-1B细胞侵袭和迁移的影响

目的 太白楤木皂苷(SAT)具有明显的抗肿瘤功能,本研究通过探究SAT对子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖、迁移、侵袭的影响,以期为子宫内膜癌的治疗提供理论依据。 方法 实验分为对照组(未加药物)、阳性对照组(30μmol/L环磷酰胺)、SAT 10μmol/L组、SAT 20μmol/L组、SAT 30μmol/L组。以不同浓度SAT及环磷酰胺处理HEC-1B细胞后,采用CCK8法检测HEC-1B细胞增殖情况,平板细胞克隆形成实验检测菌落形成;Transwell小室试验检测SAT对HEC-1B细胞迁移、侵袭能力的影响,实时荧光定量(qRT-PCR)法检测去沉默调控蛋白-1(sirtuin 1) mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测sirtuin 1蛋白、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)表达。 结果 与对照组相比,阳性对照组、SAT处理组细胞增殖、侵袭、迁移数量显著降低(均P<0.05),且呈剂量依赖;与阳性对照组相比,SAT 20μmol/L组、30μmol/L组细胞增殖、侵袭、迁移数量显著降低(均P<0.05);与对照组相比,阳性对照组、SAT处理组MMP-2、MMP-9、sirtuin 1 mRNA、sirtuin 1蛋白水平显著降低(均P<0.05),且随SAT浓度升高而下降;与阳性对照组相比,SAT 20μmol/L组、SAT 30μmol/L组MMP-2、MMP-9、sirtuin 1 mRNA、sirtuin 1蛋白水平显著降低(均P<0.05)。 结论 太白楤木皂苷可抑制子宫内膜癌细胞HEC-1B细胞迁移、侵袭,可能与下调sirtuin 1表达有关,能为子宫内膜癌的治疗提供新可能。      

MiR-744-5p通过靶向 CCND1 抑制肾透明细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨miR-744-5p/CCND1轴在肾透明细胞癌(ccRCC)中的作用及机制。方法 qRT-PCR检测ccRCC组织和细胞系中miR-744-5p 的表达水平。实验分组：miR-744-5p 模拟物（miR-744-5p mimic）、阴性对照（NC mimic）、CCND1 模拟物（CCND1 mimic）及其阴性对照（NC mimic）。CCK-8实验、划痕愈合实验和transwell实验验证miR-744-5p对ccRCC细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响。通过生物信息学预测miR-744-5p的下游靶分子,qRT-PCR和Western blot验证CCND1在786-O及OSRC2细胞中的表达水平,双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-744-5p和CCND1的关系,最后通过回复实验验证miR-744-5p/CCND1轴在ccRCC中的作用。结果 MiR-744-5p在ccRCC组织和细胞系中显著下调（P<0.05）,过表达miR-744-5p可以抑制ccRCC细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。生物信息学分析结果和双荧光素酶报告基因实验结果显示,CCND1是miR-744-5p的下游靶标。回复实验结果显示,上调CCND1可以部分逆转上调miR-744-5p对ccRCC细胞增殖、迁移以及侵袭的抑制作用（P<0.05）。结论 miR-744-5p通过靶向CCND1抑制ccRCC细胞的恶性表型,miR-744-5p/CCND1轴可能是ccRCC诊断和治疗的一个新的靶点。     

薯蓣皂苷元对大鼠肝癌细胞CBRH7919的抑制及凋亡诱导作用

目的 探讨薯蓣皂苷元对大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长抑制、诱导凋亡及其对细胞周期的影响.方法 体外MTT法测生长抑制率.Hochest染色观察药物作用后的细胞核形态,流式细胞术、彗星电泳技术分析药物对细胞周期、凋亡率和细胞DNA的影响.结果 薯蓣皂苷元能抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长.药物浓度为6.25、12.5、25和50μmol/L作用72 h的抑制率分别为:5.3%、5.5%、18.6%和77.8%,IC50为37.4μmol/L;薯蓣皂苷元50μmol/L作用24、48、72和96 h的抑制率分剔为:23.2%、66.1%、80.5%和89.3%.Hochest染色后,加药组细胞有明显的凋亡形态特征.流式细胞仪检测显示,薯蓣皂苷元25、50μmol/L组细胞凋亡率分别为19.06%和29.67%,细胞周期S期和G2-M期阻滞增加,彗星电泳显示,12.5、25和50μmol/L加药组形成拖尾,平均光密度值较阴性对照组降低,彗星尾距较阴性对照组增加,且二者改变有剂量依赖关系.结论 薯蓣皂苷元能抑制大鼠肝癌细胞CBRH7919的生长和诱导其凋亡.     

薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响

目的研究薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响。方法培养人宫颈癌细胞株Hela,不同浓度的薯蓣皂苷元干预24、48、72h,采用MTF、EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,WesternBlot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1。结果薯蓣皂苷元在20μmol／L浓度时抑制Hela细胞活力（P〈0．01）,呈现量效和时效特征;薯蓣皂苷元作用后EdU阳性细胞明显减少,薯蓣皂苷元引起G0／G1期细胞阻滞,减少S期细胞,降低Cyclin D1蛋白表达,而对Cyclin B1蛋白表达没有明显影响。结论薯蓣皂苷元通过阻滞细胞G0／G1期来抑制人宫颈癌Hela细胞株的增殖。     

穿心莲内酯对胃癌AGS细胞增殖侵袭的影响

目的观察穿心莲内酯（AD）对胃癌细胞增殖侵袭以及Na＋-K＋-ATP酶活性的影响。方法体外培养胃癌细胞系AGS,分别用1.0、3.0、5.0μmol/L穿心莲内酯作用24～72 h,无机磷法检测AGS细胞Na＋-K＋-ATP酶活性改变情况;MTT和ELISA分析AGS细胞的增殖与断裂DNA含量;同时采用ELISA检测血管内皮生长因子（VEGF）和转化生长因子β1（TGF-β1）的水平;荧光共振能量转移法检测基质金属蛋白酶9（MMP-9）的活性;小室侵袭实验检测细胞侵袭。结果 1.0～5.0μmol/L穿心莲内酯能显著降低Na＋-K＋-ATP酶活性,并能在此浓度下抑制AGS细胞生长增殖以及增加断裂DNA水平。同时,穿心莲内酯也能减少VEGF和TGF-β1的水平（P〈0.05）,降低MMP-9酶的活性,并能有效减少癌细胞的侵袭（P〈0.05）。结论穿心莲内酯是一种有效的抗胃癌药物,它可能具有阻碍胃癌细胞侵袭的能力。     

miR-34a通过靶向FOXM1对鼻咽癌细胞增殖和上皮间质转化的影响

  目的  研究miR-34a通过靶向FOXM1对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并从上皮间质转化方向研究侵袭和迁移的机制。  方法  体外培养人鼻咽癌细胞HNE-1、CNE-2Z,每株细胞分3组,即空白对照组(control组)、阴性对照组(miR-34a nc组)和过表达miR-34a组(miR-34a mimics组)。荧光定量PCR检测转染后各组细胞miR-34a表达水平。生物信息软件预测miR-34a和FOXM1的靶向关系,荧光定量PCR和Western blotting分析靶向关系。上调miR-34a后,CCK-8法测细胞增殖能力,Transwell、实验测细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法测上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、Vimentin相对表达水平。  结果  生物信息软件预测miR-34a和FOXM1可能存在靶向关系。在HNE-1、CNE-2Z细胞中,与control组和miR-34a nc组比较,miR-34a mimics组FOXM1的表达下调(HNE-1:0.570±0.041、1.127±0.129、1.125±0.145,F=23.672, P=0.001;CNE-2Z:0.689±0.114、1.966±0.164、1.924±0.087,F=99.599, P＜0.001),增殖、迁移和侵袭能力被显著抑制(P < 0.01),E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调(P < 0.01)。Control组和miR-34a nc组差异无统计学意义(P>0.05)。  结论  miR-34q通过靶向FOXM1抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制与抑制上皮间质转化有关。      

甘珀酸增强RSL3对耐顺铂睾丸癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用

目的 探讨铁死亡诱导剂RSL3对耐顺铂睾丸癌细胞（I-10/DDP）增殖、侵袭和迁移能力的影响以及甘珀酸对RSL3抗耐药睾丸癌活性的作用。方法 MTT法检测不同浓度RSL3（0、1、2、4、8、16、32 μmol/L）及合用甘珀酸（100 μmol/L）作用后I-10/DDP细胞的存活率、铁死亡抑制剂Fer-1（2 μmol/L）的作用下RSL3（4 μmol/L）及甘珀酸（100 μmol/L）合用RSL3（4 μmol/L）处理后I-10/DDP细胞的存活率。后续实验分为Control组、甘珀酸（100 μmol/L）组、RSL3（2 μmol/L）组、甘珀酸（100 μmol/L）合用RSL3（2 μmol/L）组,采用集落克隆实验检测细胞增殖能力、划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力。Western blot检测GPX4水平、C11 BODIPY 581/591荧光探针检测lipid 活性氧（ROS）水平、FerroOrange荧光探针检测Fe2+水平。结果 RSL3呈浓度依赖性降低I-10/DDP细胞存活率,且在RSL3浓度2、4、8 μmol/L 时,合用甘珀酸后细胞存活率显著降低（P<0.05）;与Control组相比,RSL3处理后I-10/DDP细胞的集落形成数减少、划痕愈合率减小（P=0.012）、侵袭和迁移细胞数减少（P<0.001）;与单用RSL3相比,甘珀酸合用RSL3处理后I-10/DDP细胞的集落形成数显著减少、划痕愈合率显著减小（P=0.005）、侵袭和迁移细胞数显著减少（P=0.001,P=0.002）。Fer-1降低单用RSL3、甘珀酸合用RSL3对I-10/DDP细胞增殖的抑制率（P<0.01）;与Control组相比,RSL3作用后细胞内GPX4水平降低（P=0.001）、lipid ROS 水平（P=0.001）和Fe2+水平升高;且与单用RSL3相比,甘珀酸合用RSL3处理后细胞内GPX4水平明显降低（P=0.01）、lipid ROS 水平（P=0.001）和Fe2+水平明显升高。结论 RSL3可诱导耐顺铂睾丸癌细胞发生铁死亡,并能抑制细胞增殖、侵袭和迁移能力;甘珀酸通过促进RSL3诱导的铁死亡从而增强RSL3的抑制作用。     

microRNA-212对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭能力的影响

目的：研究人microRNA-212（miR-212）对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭能力的影响。方法：通过化学方法合成人成熟型miR-212抑制基因i-miR-212,分别以25、50、75、100 nmol/L浓度通过脂质体转染方法转染SGC7901细胞,同时设空白组和无序列对照组。采用Real-time PCR、细胞计数和Transwell小室等实验方法,分别检测各组细胞miR-212的表达、miR-212对细胞增殖的影响及miR-212对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果：各浓度i-miR-212转染SGC7901细胞后,miR-212表达均降低,以50 nmol/L i-miR-212转染组最佳,较无序列对照组降低约94.60%;50 nmol/L i-miR-212转染组与无序列对照组在细胞计数上差异有统计学意义（P＜0.01）。在细胞侵袭实验中50 nmol/L i-miR-212转染组透膜细胞明显多于无序列对照组（P＜0.01）,在迁移实验中i-miR-212转染组（50 nmol/L）的透膜细胞明显多于无序列对照组（P＜0.01）。结论：转染成熟型人i-miR-212能使胃癌细胞系SGC7901细胞中miR-212的表达明显下降,并能显著促进胃癌细胞系SGC7901的增殖、迁移及侵袭能力,表明miR-212与胃癌肿瘤细胞的转移具有相关性。     

miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响

目的 探究miR-21靶向E2F1对三阴性乳腺癌细胞恶性生物学活性及裸鼠肿瘤抑制率的影响。方法将MDA-MB-231细胞分为5组,即MDA-MB-231组、miR-21 inhibitor组、miR-NC inhibitor组、siRNA-E2F1组和siRNA-NC组。检测细胞中miR-21表达（RT-PCR法）;分别检测细胞增殖（MTT法）、侵袭（Transwell法）、迁移（划痕实验）和凋亡能力（流式细胞仪）;检测细胞中E2F1蛋白表达;检测miR-21与E2F1的靶向关系（双荧光素酶实验报告）。结果MDA-MB-231细胞中miR-21表达明显高于MCF10A细胞（P<0.05）;miR-21 inhibitor组细胞细胞中miR-21表达明显低于MDA-MB-231组（P<0.05）。与MDA-MB-231组相比,miR-21 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭能力、迁移能力和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显升高（P<0.05）;MDA-MB-231组细胞吸光度值、侵袭、迁移、凋亡能力和细胞中E2F1蛋白表达与miR-NC inhibitor组相比差异无统计学意义（P>0.05）。预测软件显示E2F1的3′UTR端与miR-21有碱基互补结合点位。通过向MDA-MB-231细胞中转染野生型E2F1（E2F1-WT）时,miR-21组荧光素酶活性明显低于miR-NC组（P<0.05）;miR-21组和miR-NC组突变体荧光素酶活性相比差异无统计学意义（P>0.05）。与siRNA-NC组相比,siRNA-E2F1组细胞增殖、侵袭、迁移和细胞中E2F1蛋白表达均明显降低,细胞凋亡能力明显增加（P<0.05）。与miR-NC inhibitor组裸鼠移植肿瘤第8天时相比,miR-21 inhibitor组裸鼠肿瘤体积明显降低,肿瘤抑制率为45.3%（P<0.05）。结论低表达miR-21可抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭,促进凋亡,且抑制裸鼠移植瘤体积,其作用机制可能与抑制E2F1表达有关。     

阿托伐他汀抑制脑胶质瘤细胞的增殖和促进凋亡：基于上调miR-146a表达与抑制PI3K/Akt信号通路

目的 探究阿托伐他汀（AVT）对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及其对miR-146a/PI3K/Akt信号通路的作用。方法 将人脑胶质瘤细胞U251分为4组：对照组（Conrtrol）、AVT组、AVT+转染miR-146a无关片段组（AVT+miR-146a NC）、AVT+转染miR-146a干扰组（AVT+miR-146a inhibitor）。Control组不加任何药物,AVT组加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a NC组转染miR-146a NC后加入8.0 μmol/L 的AVT,AVT+miR-146a inhibitor组转染miR-146a inhibitor后加入8.0 μmol/L 的AVT。RT-PCR检测miR-146a表达,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移情况,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果 药物干预48 h,与Control组相比,AVT组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K和p-Akt蛋白表达均明显降低（P<0.01）。与AVT组相比,AVT+miR-146a inhibitor组细胞miR-146a表达、细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,细胞增殖率、侵袭指数、迁移指数、p-PI3K 和p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,AVT+miR-146a NC组上述指标无显著性差异（P>0.05）。结论 AVT能够抑制人脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡,其机制与上调miR-146a表达,抑制PI3K/Akt信号通路相关。