miR-138在肝细胞癌中的表达及其对MHCC97H细胞侵袭、迁移能力的影响

目的 观察miR-138在肝细胞癌(HCC)组织、细胞中的表达变化,并探讨miR-138对MHCC97H细胞侵袭、迁移能力及上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用qRT-PCR检测HCC组织及癌旁组织、MHCC97H、MHCC97L、HepG2及正常肝细胞系L02细胞中的miR-138.转染miR-138 mimic...     

COPB2表达对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景 外被体蛋白复合物β2亚基(coatomer protein complex subunit beta 2,COPB2)可参与调节多种肿瘤细胞的恶性生物学行为,而其在胃癌中表达和临床意义仍不完全明确.目的 探究COPB2对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制.方法 采用免疫组化法观察COPB2在胃癌组织和癌旁...     

Caspase-9和Survivin在肝细胞癌患者癌组织中的表达

目的：探讨Survivin和caspase-9在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法2013年1月至2013年5月住院治疗的HCC患者53例,应用免疫组织化学方法分析Survivin和caspase-9蛋白在HCC组织中的表达,对应的癌旁正常肝组织作为对照。结果Survivin蛋白表达在HCC组织中阳性率为66．04％（35/53）,明显高于正常肝组织的7．55％（4/53）。相反,caspase-9蛋白表达在HCC组织中阳性率仅为35．85％（19/53）,显著低于正常肝组织的64．15％（51/53）,差异具有统计学意义（P＜0．05）。T期、N期、M期患者HCC组织中Survivin蛋白表达阳性率呈现不断攀升趋势,而caspase-9蛋白表达阳性率则呈逐渐下降趋势。结论Survivin在HCC组织中高表达,并有可能通过抑制caspase-9蛋白来抑制组织细胞的凋亡。     

MicroRNA-30a-5p对肝癌细胞株SMMC-7721增殖凋亡及侵袭转移的影响

目的 探讨转染miRNA-30a-5p对肝癌细胞生物学行为的影响. 方法 将miRNA-30a-5p模拟物、miRNA-30a-5p抑制物瞬时转染入肝细胞肝癌细胞株SMCC-7721,应用实时荧光定量PCR检测正常肝细胞株L02及肝癌细胞株SMCC-7721转染后的miR-30a-5p的mRNA表达情况,CCK-8法检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测集落形成情况,流式细胞术检测细胞凋亡及各组细胞周期分布的差异,Transwell小室检测各组细胞体外侵袭转移能力,建立BALB/c-nu裸小鼠肝癌模型并观察miRNA-30a-5p对肿瘤生长的影响. 结果 实时荧光定量PCR显示,与未转染组及正常肝细胞株L02相比,肝癌细胞株SMCC-7721在转染miRNA-30a-5p模拟物后,mRNA表达明显上调(P＜0.01),而转染miRNA-30a-5p抑制物的mRNA表达明显受抑(P＜0.01),差异有统计学意义.肝细胞肝癌细胞株SMCC-7721在转染miRNA-30a-5p模拟物后,细胞活性、克隆形成能力、迁移和侵袭能力与miRNA-30a-5p抑制物转染组、未转染组及正常肝细胞株L02相比,相对减弱(P＜0.05),miRNA-30a-5p模拟物转染组凋亡率,高于miRNA-30a-5p抑制物转染组、未转染组及正常肝细胞株L02 (P＜0.05),细胞周期出现S期阻滞.裸鼠肝癌模型中,实验组裸鼠瘤体质量及体积明显小于空载体对照组和空白对照组(P＜ 0.05).结论 上调miR-30a-5p表达可明显抑制肝细胞肝癌细胞株SMCC-7721的增殖,促进其凋亡,抑制其迁移、侵袭能力,并且抑制裸小鼠肝癌模型肿瘤的生长.     

骨形态发生蛋白9对肝细胞癌肿瘤干细胞干性、增殖和侵袭的影响及机制

目的 探讨骨形态发生蛋白9 (BMP9)对肝细胞癌（HCC）肿瘤干细胞（CSCs）干性、增殖和侵袭的影响及机制。方法 取对数生长期的正常肝细胞、肝癌细胞、肝癌CSCs,采用RT-qPCR法检测BMP9 mRNA表达,采用Western blotting法检测BMP9蛋白表达。采用慢病毒干扰载体转染肝细胞癌肿瘤干细胞（HepG2-CSCs）以敲低BMP9表达,并分成HepG2-CSCs组、HepG2-CSCs-BMP9敲低组。加入MAPK/ERK信号激动剂（DIPQUO）后,将细胞分为三组：HepG2-CSCs组、HepG2-CSCs敲低组及HepG2-CSCs敲低+DIPQUO组。采用RT-qPCR实验检测HepG2-CSCs干性相关分子CD44、SOX2和OCT4表达,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用蛋白印迹法检测MAPK/ERK通路关键蛋白表达。结果 与正常肝细胞比,肝癌细胞和肝癌肿瘤干细胞（HepG2-CSCs）中BMP9表达上调（P<0.05）。HepG2 CSCs细胞中BMP9 mRNA和蛋白表达高于HepG2细胞（P...     

环状RNA hsa_circ_0091579对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA(circRNA)hsa_circ_0091579在肝细胞癌(HCC)细胞系中的表达及其对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2和人正常肝细胞系HL-7702。从细胞中提取RNA,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa_circ_0091579在HCC细胞系及人正常肝细胞系中的表达,并进行对比。针对hsa_circ_0091579的环化拼接位点设计siRNA,在体外HepG2和HuH-7细胞中转染hsa_circ_0091579 siRNA,并用qRT-PCR验证其有效性。实验分为siRNA组(hsa_circ_0091579 siRNA)和NC组(negative control siRNA),并在HepG2和HuH-7细胞中用CCK8实验、流式细胞术、划痕实验以及Transwell实验分别研究hsa_circ_0091579对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。使用双荧光素酶报告基因实验对预测的靶点进行验证。计量资料两组间比较采用t检验。结果与hsa_circ_0091579在人正常肝细胞系HL-7702中的表达水平相比,其在HCC细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2中的表达水平均明显升高(t值分别为14.27、36.34、26.70、36.16,P值均0.001)。与NC组相比,hsa_circ_0091579 siRNA可在HepG2和HuH-7细胞中有效沉默hsa_circ_0091579(t值分别为14.22、27.20,P值分别为0.005、0.001)。CCK8实验和流式细胞术结果显示,与NC组相比,siRNA组HepG2和HuH-7细胞的增殖活性明显降低,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P值均0.05);划痕实验和Transwell实验显示,与NC组相比,siRNA组HepG2和HuH-7细胞的迁移和侵袭能力明显减弱(t值分别为19.63、13.61、20.75、18.45,P值分别为0.003、0.005、0.002、0.003)。荧光素酶报告基因实验结果显示,与NC组相比,miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p均能明显降低野生型荧光素酶质粒的活性(t值分别为10.01、9.13、61.49,P值分别为0.010、0.012、0.001)。结论 hsa_circ_0091579在HCC细胞系中高表达,可能通过抑制miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p发挥其癌基因的作用。     

miR-409-3p通过调控SLBP影响肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-409-3p对茎环结合蛋白(SLBP)表达的调控作用及其对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 采用qRT-PCR、Western blotting分别检测肝癌组织、癌旁组织及细胞系中miR-409-3p、SLBP的表达水平;以表达量最低的肝癌细胞Hep3B为研究对象,分别将miR-NC、miR-40...     

DJ-1基因在肝细胞癌中的表达及其与肝癌侵袭和转移的关系

目的 探讨DJ-1基因mRNA及其蛋白在肝细胞癌中的表达规律及其与肝细胞癌侵袭和转移的关系. 方法应用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测46例肝细胞癌中DJ-1基因mRNA及蛋白的表达情况,结合患者的临床病理资料分析DJ-1基因与肝细胞癌的侵袭与转移的关系.应用χ2检验进行统计学处理.结果 肝癌组织中DJ-1基因mRNA及蛋白的表达阳性率分别为69.6%(32/46)和58.7%(27/46),明显高于癌旁肝组织的表达阳性率[分别为39.1%(18/46)和34.8%(16/46)],χ2=8.587,P<0.05;且DJ-1基因蛋白在肝癌组织中的高表达与患者肿瘤的大小、甲胎蛋白水平、HBsAg、肿瘤的分化程度以及有无肝硬化无关(P>0.05),而与肿瘤有无包膜及有无门静脉癌栓有关(χ2=7.846,P<0.05).结论 DJ-1基因在肝细胞癌的侵袭和转移过程中可能起重要作用.     

细胞外泛素对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的通过体外细胞实验,探讨细胞外泛素对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法利用不同浓度的细胞外泛素(200、400、800 ng/ml),分别干预肝癌细胞(HepG2),采用CCK8法检测细胞的增殖情况;利用Transwell法检测不同浓度泛素对肝癌细胞侵袭能力的影响;利用划痕实验和蛋白免疫印迹检测细胞外泛素对肝癌细胞迁移能力的作用。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 CCK8法检测结果显示,细胞外泛素干预后能明显促进肝癌细胞的增殖能力,并具有明显的浓度依赖性,且泛素干预浓度在400 ng/ml时作用最显著,在48、72、96 h相对吸光度值均明显高于对照组(P值均0. 05)。Transwell实验结果显示,与对照组相比,不同浓度的细胞外泛素均可明显促进肝癌细胞的侵袭,且在400 ng/ml泛素干预组最显著[(134. 00±8. 18)个vs (347. 33±18. 90)个,t=17. 94,P 0. 001]。划痕实验和蛋白免疫印迹结果显示,400 ng/ml泛素能显著增加HepG2肝癌细胞的迁移能力。结论细胞外泛素在体外能明显促进HepG2肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,且具有浓度依赖性。     

沉默TSPAN13对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨TSPAN13对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将PC3细胞、22Rv1细胞、LNCAP细胞、DU145细胞用含10%胎牛血清和1%青链霉素双抗的RPMI1640培养基培养,BPH-1细胞用含10%胎牛血清和1%青链霉素双抗的DMEM培养基培养,培养环境均为37℃、5%CO2、饱和湿度。采用RT-PCR和Western blotting实验检测TSPAN13表达;通过si-RNA沉默TSPAN13检测TSPAN13功能;通过CCK-8实验和集落形成实验检测细胞的增殖和克隆形成能力;通过划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 TSPAN13蛋白在前列腺癌中高表达(P<0.01);TSPAN13 mRNA和蛋白在PC3和DU145细胞中的表达高于BPH-1细胞(P均<0.01);沉默TSPAN13,PC3和DU145细胞中TSPAN13 mRNA和蛋白表达降低;CCK-8和集落形成实验显示,PC3和DU145细胞增殖能力和克隆生成能力下降(P均<0.01);划痕实验和Transwell实验显示,PC3和DU145细胞的迁移和侵袭...     

肝细胞生长因子对肝细胞癌侵袭和转移的影响

目的:研究HGF对肝细胞癌SMMC-7721的上皮-间叶转化的作用,并对其机制进行探讨.方法:HGF处理SMMC-7721后,应用细胞培养、Transwell、划痕实验、WB技术研究HGF对肝癌细胞SMMC-7721上皮-间叶转化的作用.并应用P13 kinase抑制物LY294002 10umol/L顸处理细胞,观察SMMC-7721的变化,研究P13 kinase对于HGF作用机制的影响.结果:Transwell和划痕实验显示HGF处理的细胞侵袭和转移能力增强,蛋白印迹结果显示HGF处理的细胞的N-cad、MMP-2、MMP-9和Vimentin的表达增加,E-cad的表达减少.LY294002预处理后,细胞不再受HGF的影响,细胞的形态没有明显变化.Transwell和划痕实验结果与未经处理的SMMC-7721相同.蛋白印迹结果显示:细胞的N-cad、MMP.2、MMP-9、Vimacntin和E-cad的表达变化不明显.结论:HGF能够促进SMMC-7721的上皮间叶转化,这种作用通过PD Kinase实现.     

HBX蛋白、骨桥蛋白、基质金属蛋白酶-9在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨乙肝病毒X（HBX）蛋白、骨桥蛋白（OPN）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达在肝癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法检测49份原发性肝细胞癌（HCC）组织及癌旁组织与10份正常肝组织中HBX蛋白、OPN、MMP-9的表达。结果三者在癌组织、癌旁组织中阳性率均明显高于正常肝组织（P均〈0.05）,均呈线性相关,癌组织转移者高于无转移者（P〈0.05）。结论HBX蛋白、OPN、MMP-9高表达可促进HCC的发生、发展与转移。     

全反式维甲酸对肝癌细胞HepG2的分化、侵袭迁移的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对肝癌细胞HepG2的诱导分化作用及侵袭迁移的影响.方法:MTT法测定ATRA对肝癌细胞HepG2的抑制作用;平皿集落形成法检测ATRA对HepG2细胞锚定依赖性生长作用;ELISA法检测ATRA作用前后HepG2 AFP分泌量的变化;RT-PCR检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog的mRNA表达的影响;Western blot检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog蛋白表达的影响;Transwell及划痕实验检测其对侵袭及迁移能力的影响.结果:MTT法显示ATRA抑制体外培养人肝癌细胞HepG2细胞生长,呈剂量和时间依赖性;ELISA显示ATRA诱导HepG2细胞分化和凋亡,使代表肝细胞恶变的AFP分泌量明显下降(P<0.05);平皿克隆形成实验结果表明未经ATRA处理的HepG2可形成克隆,但经ATRA刺激后,其形成克隆变小且数目明显减少;ATRA呈时间及浓度依赖性下调Nanog mRNA及蛋白的表达,并在24h呈浓度依赖性下调MMP-9 mRNA及蛋白表达;Transwell实验和划痕实验结果显示ATRA能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移能力.结论...     

IncRNA LINC02418通过调控miR-940表达对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

背景 lncRNALINC02418在非小细胞肺癌、肺腺癌和结直肠癌等肿瘤中表达上调,促进肿瘤的发展进程.但是,LINC02418对肝癌发生发展的影响和机制还未知.LncBase Predicted v.2靶基因预测显示,LINC02418可能靶向结合miR-940.本研究假设LINC02418可靶向调控miR-940...     

谷丙转氨酶2在食管鳞癌组织中表达变化及对癌细胞增殖迁移侵袭能力影响

目的 观察谷丙转氨酶2(GPT2)在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达变化,分析GPT2与患者临床病理特征、预后的关系以及对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以探讨其与ESCC进展的关系。方法 选取80例ESCC患者癌组织及癌旁正常组织,将其中3例份样本通过转录组测序筛选出差异表达基因GPT2,并在TCGA数据库中进行验证。采用Western blotting及免疫组化法检测ESCC组织中GPT2蛋白,分析癌组织中GPT2表达与患者临床病理特征的关系。采用多因素Cox比例风险分析影响ESCC患者生存的风险因素,Kaplan-Meier法对GPT2高、低表达的ESCC患者进行生存分析。构建p IRES2/GPT2(GPT2过表达)质粒,然后将空载质粒（p IRES2）及p IRES2/GPT2转染至人食管鳞癌细胞系KYSE150、KYSE30（转染的细胞分别命名为p IRES2、p IRES2/GPT2组）,培养48 h后,采用CCK-8及Transwell实验观察ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 转录组测序结果及基于TCGA数据库数据分析结果显示,与癌旁正常组织相比,ESC...     

LINC01615表达下调对膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨下调LINC01615表达对膀胱癌细胞（T24细胞）增殖、侵袭、迁移的影响。方法 常规培养T24细胞，取对数生长期细胞随机分为si-LINC01615组、si-NC组，分别转染si-LINC01615、si-NC，继续培养48 h。用实时荧光定量PCR法检测细胞中LINC01615表达，用MTT实验检测细胞增殖能力（OD值），用Transwell实验检测细胞侵袭能力，用划痕实验检测细胞迁移能力（24 h愈合度）。结果 转染后si-LINC01615组、si-NC组T24细胞LINC01615相对表达量分别为0.60±0.03、1.08±0.02，比较差异有统计学意义（P<0.05），表明转染成功。培养0、24 h，两组细胞活力差异均无统计学意义（P均>0.05）；培养48、72 h,si-LINC01615组细胞活力均低于si-NC组（P均<0.05）。si-NC组侵袭细胞数为（148.30±1.76）个，si-LINC01615组为（74.33±3.18）个，比较差异有统计学意义（P<0.05）。si-NC组24 h愈合度为（98.33±0.88）%...     

SEPT9基因在人肝细胞癌侵袭转移中的作用

目的研究SEPT9基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响。方法通过westernblot法筛选SEPT9蛋白高表达肝癌细胞系,慢病毒转染沉默后检测细胞SEPT9蛋白表达量,通过EdU染色检测sh-SEPT9对肝癌细胞增殖的影响;Transwell和划痕实验检测沉默SEPT9表达后肝癌细胞的侵袭能力和迁移能力;westernblot分析沉默SEPT9表达对肝癌细胞HIF-1α、Ki67、PCNA、MMP-9、VEGF、Vimentin, N-cadherin、E-cadherin蛋白表达影响。结果 westernblot显示SEPT9蛋白在肝癌HepG2细胞存在高表达,慢病毒转然能够获得稳定遗传的HepG2-SEPT9-shRNA细胞系,sh-SEPT9转然后,EdU染色显示HepG2细胞增殖受到明显抑制(P0.05),细胞的侵袭能力和迁移能力显著降低(P0.05);HepG2细胞Ki67、PCNA、Vimentin、N-cadherin、HIF-1α、MMP-9及VEGF表达量明显降低,E-cadherin的蛋白水平明显上升(P0.05)。结论 SEPT9基因通过增强肝癌HepG2细胞的EMT机制,促进肝癌HepG2细胞的侵袭转移。