猪软骨脱细胞基质对人脂肪干细胞增殖及分化的影响

目的 研究猪软骨脱细胞基质（pACM）对人脂肪干细胞（hADSCs）增殖及分化的影响。方法 将猪关节软骨进行脱细胞处理制备pACM并进行鉴定。分离培养hADSCs并分化鉴定。将不同浓度pACM与hADSCs共培养,以不添加pACM为对照组,通过CCK-8法检测pACM对hADSCs增殖能力的影响,通过荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测pACM对hADSCs成软骨分化的影响。结果 0.5、1.0、2.0 mg·mL ^-1 pACM组hADSCs细胞增殖速率与对照组无统计学差异,而4.0、8.0 mg·mL ^-1pACM组hADSCs细胞增殖速率低于对照组（P<0.05）。0.5、1.0、2.0 mg·mL ^-1 pACM组成软骨相关基因SOX-9、抗Ⅱ型胶原纤维α1（COL2A1）、抗蛋白聚糖（ACAN）及细胞黏附相关基因层黏连蛋白（LAMININ）的表达均高于对照组（P<0.05）,细胞干性相关基因Notch-1的表达低于对照组（P<0.05）,成脂相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAr-γ）的表达各组间均无统计学差异（P>0.05）。成软骨相关蛋白SOX-9、COL2A1及ACAN的表达高于对照组（P<0.05）。结论 适宜浓度的pACM不会影响hADSCs的增殖,并且可以在基因水平上诱导其向成软骨方向分化。     

富血小板血浆对人脂肪间充质干细胞增殖及成骨分化能力的影响

目的：探讨富血小板血浆（PRP）对人脂肪间充质干细胞（hADSCs）增殖、分化及成骨能力的影响。方法：脂肪组织体外分离获得hADSCs,2次离心制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活PRP。倒置相差显微镜观察成骨诱导实验中PRP对细胞增殖、分化状况的影响,钙-钴法检测PRP作用下hADSCs矿化结节形成,碱性磷酸酶（ALP）检测PRP对细胞活性及分化能力的影响。CCK-8法检测成骨诱导组和非成骨诱导组加PRP培养后2、4、6、8、16d细胞活性变化。结果：成骨诱导实验中50%PRP30μL组细胞密集、数量最多,且有剂量依赖性;钙-钴法检测见PRP原液组细胞染色最深,且有浓度依赖性;碱性磷酸酶显色见PRP原液组细胞活性最强,染色最深。CCK-8检测显示无论有无成骨诱导,各浓度PRP均可促进细胞增殖,且有浓度依赖性。结论：适宜浓度的PRP可明显促进hADSCs增殖,并有浓度及剂量依赖性。     

矿化液对人脂肪基质细胞(hADSCs)成骨分化的影响

目的:比较人脂肪基质细胞(human adipose-derived mesenehymal stem cells,hADSCs)在矿化条件与非矿化条件下分别培养,评价矿化液对其增殖和分化的影响。方法:酶消法原代培养人脂肪基质细胞,再以含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的矿化液进行诱导,MTT检测矿化液对细胞增殖的影响,细胞培养上清液检测碱性磷酸酶(ALP)活性及骨钙素(OCN)含量。结果:矿化液抑制细胞的增殖,提高人脂肪基质细胞ALP活性和骨钙素的含量。结论:人脂肪基质细胞在矿化条件下可以表现出成骨细胞特性。     

旋转发生器培养扩增人皮肤成纤维细胞

目的:研究旋转发生器扩增人皮肤成纤维细胞的可行性。方法:利用组织贴壁法从人皮肤中分离出人真皮成纤维细胞(hDFBs),使用DIO标记细胞后结合微载体在旋转发生器(RCCS)中培养,细胞贴附微载体的状况使用荧光显微镜、扫描电镜观测。并且检测细胞周期和分析细胞群体倍增时间,以比较微重力培养与平面培养的体外增殖能力差异。对照组细胞按常规平面培养。结果:在旋转发生器的微重力培养体系中,人成纤维细胞能快速贴附到微载体表面,在培养过程中达到很大的细胞密度,旋转发生器培养的细胞倍增时间为(2.99±0.50)d,对照组为(3.43±0.42)d(P<0.05);旋转发生器培养细胞增殖指数48.2±4.3,对照组35.2±3.4。结论:利用生物反应器和微载体悬浮培养人皮肤成纤维细胞,是大量制备皮肤组织工程种子细胞的一种有效方法。     

生物活性皮肤替代物的超微结构观察

目的 :观察所培养的生物活性皮肤替代物的超微结构。方法 :以 5月龄胎儿的背部皮肤作为细胞来源 ,在牛I型胶原凝胶中立体培养成纤维细胞 ,3d后在凝胶表面接种表皮细胞 ,2d后将培养的皮肤替代物移至培养液气液面 ,促进上皮层的成熟和角化。观察HE染色后的人工皮肤组织学结构以及透射电镜下的超微结构。结果 :所培养的生物活性皮肤替代物同时含有表皮层和真皮层。表皮层中含有基底层、棘层、颗粒层和角质层。透射电镜观察结果显示 ,生物活性皮肤表皮层中 ,棘层细胞之间以桥粒连接 ,并具有天然皮肤中的板层体、张力纤维和脂滴等结构。结论 :生物活性皮肤替代物具有与天然皮肤类似的各种超微结构 ,为进一步的临床应用提供了实验依据     

高原护唇膏多次皮肤给药的刺激性及过敏性研究

目的:观察高原护唇膏多次接触家兔的完整皮肤和破损皮肤是否产生刺激性及过敏性.方法:家兔共8 只,分为2 组,设完整皮肤和破损皮肤2 个模型组;家兔背部左右两侧分别设高原护唇膏组和阴性组,护唇膏多次1 g/只接触完整皮肤或破损皮肤,观察有无明显的局部刺激反应.豚鼠18 只,随机分为3 组,分别设高原护唇膏组、阴性组和阳性药物组,观察其过敏情况.结果:高原护唇膏对家兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性;豚鼠皮肤正常,无任何过敏反应发生.结论:高原护唇膏在规定剂量下可安全使用.     

脂肪组织来源干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复皮肤缺损

目的:探讨脂肪组织来源干细胞(ADSC)作为皮肤组织工程种子细胞修复皮肤缺损的可能性。方法:采用胶原酶消化SD大鼠脂肪组织,经体外扩增后接种于胶原凝胶构建组织工程活性皮肤替代物。15只SD大鼠随机分成3组:ADSC复合胶原组织工程活性皮肤替代物实验组、单纯胶原移植组和空白对照组。将各组相应材料分别移植于SD大鼠背部皮肤缺损处,比较观察创面修复效果。结果:ADSC复合胶原实验组、单纯胶原移植组和空白对照组创面愈合时间分别为:(14.3±1.7),(16.9±2.5)和(21.2±4.2)d,差异有显著性意义(P<0.05)。组织学观察显示,ADSC复合胶原实验组成纤维细胞、微血管、胶原纤维均较单纯胶原移植组和空白对照组明显增多。结论:ADSC复合胶原构建的组织工程活性皮肤替代物移植后可加速新生血管形成、促进创面修复。提示以ADSCs作为种子细胞复合胶原构建的组织工程皮肤可用于皮肤缺损的修复治疗。     

油画类颜料配色的MDX4-4210硅橡胶皮肤斑贴试验

目的 :研究油画类赝复配色颜料 -硅橡胶复合体导致皮肤出现变态反应的能力。方法 :制备油画类颜料配色的MDX4-4 2 10硅橡胶试样 ,将其放于两侧前臂曲面 ,医用胶布片密封和固定试样 ,分别在 2 4h、48h、72h去除胶布和试样 ,观察、记录结果 ,并进行评价。结果 :全部皮肤测试部位在第 2 4h、48h、72h时的皮肤表面均未出现各种形式的皮肤变态反应 ,标准分级均为阴性。结论 :油画类赝复配色颜料 -硅橡胶复合体具有良好的皮肤接触安全性     

热休克蛋白47在糖尿病大鼠皮肤创口愈合过程中的表达

目的:使用糖尿病大鼠模型探讨热休克蛋白47(47kDa heat shock protein,HSP47)在糖尿病大鼠皮肤创口愈合过程中的表达水平。方法:在距正常大鼠和糖尿病大鼠头部1cm的背部做一直径1cm的圆形全层皮肤创口,糖尿病大鼠分为不注射组、注射空质粒组和注射重组质粒组,在创口愈合的第3、5、7天分别取对照组和实验组大鼠的创周皮肤,应用免疫组织化学和Western免疫印记法(Western blotting)检测HSP47在各组大鼠皮肤创口愈合过程中的表达水平。结果:正常大鼠皮肤创周组织中HSP47的表达,在愈合过程中呈明显增高的趋势。同正常大鼠相比,糖尿病大鼠皮肤创口愈合缓慢,皮肤创口组织中HSP47的表达明显减少。注射重组质粒pTracer-CMV-HSP47的糖尿病大鼠皮肤创周组织中HSP47的表达增强。结论:HSP47在糖尿病大鼠皮肤创口组织中的低表达与糖尿病大鼠皮肤创口愈合缓慢密切相关。通过体外构建HSP47的重组质粒再注入糖尿病大鼠皮肤创周组织中的方法,可以增强HSP47在体内的表达。     

牙胚微环境对皮肤真皮多能干细胞特性的影响

目的:研究皮肤真皮多能干细胞诱导后成牙分化的可行性,以期为组织工程再生牙齿探寻一种可靠的成体干细胞.方法:使用大鼠胚胎期发育牙胚制备条件培养基,诱导皮肤真皮多能干细胞分化,检测诱导后细胞增殖变化、矿化能力以及体外检测基因表达和细胞表型.结果:大鼠胚胎期发育牙胚细胞条件培养基诱导皮肤真皮多能干细胞后,皮肤真皮多能干细胞增殖加快、矿化能力增强,同时,诱导组细胞中可检测到ALP、OCN、BSP mRNA以及DSP和DMP-1mRNA的表达,进一步细胞表型分析显示,诱导组皮肤真皮多能干细胞表达DSP、DMP-1以及ALP阳性.结论:利用发育早期牙胚细胞分泌的信号分子在体外模拟牙胚发育的微环境,使得皮肤真皮多能干细胞实现了向牙源性间充质细胞方向的表型转化.     

螺旋藻对DMBA/巴豆油诱导小鼠皮肤肿瘤预防作用的研究

目的:评价螺旋藻在癌症发生起始和促进阶段的防癌、抗癌作用.方法:采用经典的DMBA/巴豆油诱导小鼠皮肤乳头状瘤形成的2阶段致癌模型,观察和评价螺旋藻在不同阶段的抗化学致癌作用.结果:螺旋藻对DMBA/巴豆油诱发的小鼠皮肤乳头状瘤的形成在始发阶段和促癌阶段均有明显抑制作用,并可推迟小鼠皮肤乳头状瘤的发生.结论:螺旋藻具有较强的癌症化学预防作用.     

流体剪切力作用下人脂肪基质细胞体外成骨分化的实验研究

目的:分离人体脂肪基质细胞(hADSCs)并研究流体剪切应力对其成骨分化的影响。方法:将脂肪抽吸术获取的人体脂肪进行分离,应用强度为3 dyne/cm²的流体剪切力刺激30 min后观察细胞形态;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力, 绘制细胞生长曲线;碱性磷酸酶(ALP)及茜素红染色对其成骨分化进行鉴定。结果:胶原酶消化后的脂肪基质细胞呈梭形, 经流体剪切力作用培养后,细胞体积明显增大,胞浆丰富并含有较多的细胞器,细胞排列方向与加力方向一致, 呈漩涡状生长,生长速度加快。此外,流体剪切力加载后脂肪基质细胞内碱性磷酸酶活性增高,茜素红染色表明聚集的细胞团中心能形成矿化结节。结论:脂肪基质细胞中的成体干细胞经过流体剪切力作用后可向成骨细胞分化并具有明显的成骨表型,可作为骨组织工程的种子细胞。     

皮肤软组织扩张术在颌面外科中的应用

目的:总结应用皮肤软组织扩张技术整复外伤、肿瘤及瘢痕切除所致颌面、颈部皮肤软组织缺损的经验。方法:对72例因颌面部瘢痕或洞穿性缺损需软组织修复的病例,采取病变切除前在其附近供区埋置皮肤软组织扩张器,逐次注水扩张,达到设计扩张量后,于切除病变的同期进行缺损整复。结果:72例患者术后随诊6～12月,均效果满意。术后并发症包括感染4例,局部血肿2例,扩张器外露2例,均经对症处理后痊愈。结论:皮肤软组织扩张术应用于颌面颈部皮肤软组织缺损和器官再造,其皮瓣色泽、质地、厚度基本协调、和谐,颜色匹配,有感觉,并可避免邻近组织器官受牵拉变形及供区副损伤,值得临床推广应用。     

具有免疫调节性和缓解试验性结肠炎组织破坏的人牙龈间充质干细胞

间充质干细胞具有自我更新和多向分化潜能,已陆续自骨髓、脂肪、皮肤、肌腱、肝、肺、心、胎盘等器官中分离出来。2000年以来,牙和牙周组织中也陆续地分离出牙髓干细胞、脱落乳牙干细胞、牙周干细胞和根尖牙乳头干细胞。     

脂肪干细胞和纤维蛋白胶快速构建人工皮肤修复创面的研究

目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠脂肪组织来源干细胞(ADSCs)与纤维蛋白胶复合快速成型构建组织工程皮肤替代物修复皮肤缺损的可行性.方法:采用胶原酶消化GFP小鼠脂肪组织,获得GFP小鼠脂肪干细胞(ADSCs),并证明其具有成骨和成脂的多向分化能力,经体外扩增后复合纤维蛋白胶快速成型构建组织工程活性皮肤替代物.15 只C57鼠随机分成3组:ADSCs复合纤维蛋白胶组织工程活性皮肤替代物实验组、单纯纤维蛋白胶移植组和空白对照组.将各组相应材料分别移植于C57BL小鼠背部皮肤缺损处,比较观察创面修复效果.结果:分离的细胞具有不断的增殖能力,并具有多向分化潜能.同种异体移植后,免疫荧光检测创面有大量GFP小鼠脂肪干细胞存活.ADSCs复合纤维蛋白胶可以缩短创面愈合时间.组织学观察显示,ADSCs复合纤维蛋白胶实验组上皮形成较厚,真皮层胶原纤维排列有序,成纤维细胞数量较单纯纤维蛋白胶移植组和空白对照组明显增多.结论:GFP-ADSCs复合纤维蛋白胶构建的组织工程皮肤替代物移植后可加速小鼠皮肤创面愈合,提示以ADSCs作为种子细胞复合纤维蛋白胶快速成型构建的组织工程皮肤可用于皮肤缺损的修复治疗.     

两种新型医用钛合金的皮肤致敏试验

目的:评价TLE、TLM2种新型β型钛合金对皮肤潜在的致敏性。方法:以ISO10993-10:1995标准,采用最大剂量法,将白化豚鼠分为TLE、TLM、阳性对照(2,4-二硝基氯苯)、阴性对照(生理盐水)4组,先行预试验确定主试验各阶段的浓度,然后行主试验。在激发阶段的敷贴物去除后24、48、72h,观察记录各组动物激发部位的皮肤情况,按标准进行评分,并算出致敏率。结果:TLE、TLM新型钛合金的皮肤反应记分为0,致敏率为0。结论:在试验条件下TLE、TLM新型钛合金无潜在的皮肤致敏性。     

口腔黏膜上皮细胞纤维蛋白复合物修复裸鼠皮肤缺损的实验研究

目的:探讨利用纤维蛋白为载体携带人口腔黏膜上皮细胞修复皮肤缺损的可行性.方法:取第二代口腔黏膜上皮细胞与纤维蛋白混匀注射于裸鼠背部皮肤缺损,术后2、4周进行组织学和免疫组化观察.结果:术后2、4周移植的人黏膜上皮细胞在缺损处生长成复层上皮.结论:纤维蛋白是一种上皮细胞移植的良好载体.     

热压铸入型玻璃陶瓷材料的初步研制Ⅱ.材料的生物安全性评估

目的 :评估新型热压铸入型玻璃陶瓷材料的生物安全性。方法 :根据ISO标准 ,采用急性全身毒性试验、溶血试验、细胞毒性试验、皮肤刺激试验和口腔粘膜刺激试验对玻璃陶瓷进行评估。结果 :玻璃陶瓷对实验小鼠无全身急性毒性作用 ,溶血指数 1.38% ,细胞生长无明显抑制现象 ,细胞毒性评分为Ⅰ级 ,对皮肤和口腔粘膜无刺激作用。结论 :新型热压铸入型玻璃陶瓷材料具有良好的生物安全性 ,符合临床应用标准。     

PRF促进小鼠全层皮肤损伤修复的实验研究

目的:探讨富血小板纤维蛋白(PRF)对小鼠皮肤损伤的修复作用。方法:采用8~10周的Balb/C小鼠21只,将其分为3组,分别为皮肤缺损空白对照组,上市产品对照组(AD甲壳素),冻干异种PRF颗粒组,在背部制备1个1.5 cm圆形全层皮肤损伤创面。通过大体观察,测定伤口愈合时间和愈合率,并在第21天,取皮肤组织做病理切片,观察组织愈合情况。结果:伤后21 d,各组创面逐渐缩小,冻干异种PRF颗粒组创面面积明显小于其余各组(P＜0.01),并且愈合时间较其余各组短。结论:PRF可以明显促进创面愈合速度,提高愈合质量,为临床皮肤损伤修复提供新的治疗方法。     

小鼠创伤/感染皮肤中组织蛋白酶C的表达变化

目的:研究小鼠创伤/感染皮肤中组织蛋白酶C的表达及意义。方法:15只C57BL/6J小鼠随机分为健康对照组、单纯创伤组和创伤合并感染组(n=5);除对照组外,其他两组均在各小鼠的脚掌皮肤表面制备创伤及感染模型,采用苏木精-伊红染色技术、免疫组化染色观察小鼠皮肤中组织蛋白酶C的表达情况;所得结果用SPSS 20.0统计软件进行统计分析。结果:在小鼠创伤或感染的皮肤中组织蛋白酶C的表达量明显上调,主要表达于炎性免疫细胞、上皮细胞以及血管内皮细胞,对照组上皮内无阳性表达,仅结缔组织内有少量阳性细胞;半定量分析显示:单纯创伤组和创伤合并感染组的组织蛋白酶C表达强度相似(P>0.05),且均明显高于对照组(P<0.05)。结论:组织蛋白酶C与上皮局部的炎症或免疫防御有着密切的联系。